阴离子交换蛋白2在人正常绒毛细胞和绒癌JAR细胞中的差异表达

目的 探讨阴离子交换蛋白2在人正常绒毛细胞和绒癌JAR细胞中的表达差异,以及该通道蛋白的表达改变与绒癌发生的关系.方法 人正常绒毛滋养细胞的原代培齐、纯化及鉴定;人绒毛膜癌JAR细胞株的培养.将原代纯化培养的人正常绒毛细胞设为正常组,人绒毛膜癌JAR细胞株设为绒癌组.以免疫组织化学法检测人正常绒毛滋养细胞和绒毛膜癌细胞株JAR细胞膜上AE2的表达.以RT-PCR技术检测人正常绒毛滋养细胞及绒癌JAR细胞中AE2 mRNA的表达水平.结果 在正常组中,原代培养的人正常绒毛滋养细胞上仅能从显微镜中肉眼观察到AE2的极低表达,以致摄影效果不佳.而在绒癌组中,绒癌JAR细胞膜上AE2的阳性细胞率为(91.59±12.10)%,远高于正常组.在正常人绒毛滋养细胞与人绒癌JAK细胞株中,均检测到AE2 mRNA的表达.绒癌组AE2的OD值为(0.85±0.21);正常组AE2的OD值分别为(0.19±0.01).绒癌组AE2的OD值明显高于正常组(P＜0.05).结论 AE2表达异常上调,滋养细胞内、外的水电解质平衡将被破坏,可能是导致绒癌发生的原因之一.     

F10基因沉默及过表达对绒癌细胞系JAR细胞周期的影响

目的探讨F10基因功能与部分细胞周期蛋白表达的关系。方法选择已建立并筛选的F10基因沉默、稳定过表达绒癌细 胞系JAR,以未处理JAR细胞为对照组,采用流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting及免疫荧光细胞化学技术检测细胞周 期蛋白（cyclin）和细胞周期蛋白依赖激酶（CDKs）的表达水平差异。结果流式细胞仪检测细胞周期显示,F10过表达组的JAR 细胞细胞周期较沉默组及未处理组缩短。Western blotting检测结果显示,在F10沉默组、未处理组及F10过表达组的JAR细胞 中cyclinA2、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK6、CDK7表达递增,过表达组及沉默组的蛋白表达水平与未处理组相比较 差异有统计学意义（P<0.05）,CDK4除外。免疫荧光细胞技术实验结果与Western-Blot检测结果基本一致。结论F10基因通过 上调细胞周期蛋白cyclinA2、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK6、CDK7的表达,加快细胞周期进程,促进细胞增殖,从而 参与调节绒癌细胞的侵袭与转移。     

F10基因过表达及沉默对绒癌细胞系JAR侵袭相关蛋白酶表达的影响

目的 F10基因是本研究前期发现在葡萄胎中高表达的新基因,本文为明确F10过表达和沉默对绒癌细胞系JAR侵袭性的影响,探讨F10基因与部分侵袭相关蛋白的关系。方法通过细胞转染技术及RNA干扰技术,分别建立和筛选出F10基因稳定过表达及沉默的绒癌细胞系JAR。取SPF级裸鼠30只,随机均分为F10过表达组、未处理组、F10沉默组,每组10只,依次接种F10基因过表达的JAR细胞、未处理的JAR细胞和F10基因沉默的JAR细胞株,于接种5周后处死裸鼠收获皮下肿瘤,采用免疫组织化学及Western blot检测方法,比较不同组瘤体组织中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)及金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1),血浆纤溶酶原激活物抑制因子(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)等侵袭相关蛋白酶的表达差异。结果免疫组化法检测结果显示:F10、MMP-2、8、11、16、19在F10过表达组、未处理组、F10沉默组中间的表达依次递减,差异有统计学意义(P<0.05),TIMP-1、PAI-1在F10过表达组中分别为0.118±0.029、0.174±0.005,在未处理组中分别为0.214±0.028、0.289±0.009,在F10沉默组中分别为0.430±0.017、0.517±0.074,3组间的表达差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,F10、MMP-2、8、11、16、19蛋白在F10沉默组、未处理组、F10过表达组依次递增(P<0.001),而TIMP-1及PAI-1蛋白表达水平依次递减(P<0.001)。结论 F10通过上调MMP-2、8、11、16、19的表达,下调TIMP-1、PAI-1表达,参与调节绒癌细胞的增殖,从而可能参与调节绒癌的侵袭和转移。     

人原发性肝细胞癌细胞和组织中SOX2mRNA的表达

原发性肝细胞癌( hepatocellular carcinoma，HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，发病率位居恶性肿瘤第5位，缺乏有效的治疗措施且易复发[1]。我国年死于HCC的人数占全世界HCC年死亡总数的55％[2]。HCC的发生和发展是一个多因素、多阶段累积的复杂过程，例如病毒的感染、基因的异常表达等，但具体的分子作用机制尚未明确。研究[1]发现，经典Wnt信号通路在HCC中被异常激活。     

人癌细胞系中CDKN2基因表达异常的研究

人癌细胞系中ＣＤＫＮ２基因表达异常的研究陶江川方伟岗吴秉铨钟镐镐衡万杰由江峰ＣＤＫＮ２是从人染色体９ｐ２１区分离克隆得到的肿瘤抑制基因，该基因编码一个１６０００的细胞周期调控蛋白，称为Ｐ１６蛋白。Ｐ１６蛋白可与ＣＤＫ４或ＣＤＫ４／Ｃｙ－ｃｌｉｎＤ复合...     

Fas和FasL在人绒癌细胞中的表达及其生物学意义

目的 观察Fas/FasL在绒毛膜癌细胞JEG-3、BeWo和Jurkat中的表达情况,探讨Fas/FasL与人绒癌细胞免疫逃逸的机制.方法 免疫荧光染色法、RT-PCR、免疫印迹检测fas/fasl的表达.台盼蓝细胞拒染、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测、流式细胞计数法检测绒癌细胞与Jurkat细胞共培养后对Jurkat细胞的抑制情况.结果 ①发现绒癌细胞上均有Fas及FasL表达;②与Jurkat细胞相比,在基因和蛋白水平,绒癌细胞中Fas表达低下,而FasL表达升高.③绒癌细胞与Jurkat细胞共培养可诱导Jurkat细胞存活率下降(P＜0.05),随共培养时间延长Jurkat细胞凋亡率升高(P＜0.05);④用中和抗体NOK-2封闭细胞表面FasL后,Jurkat细胞的凋亡率从(17.86±5.59)%下降到(6.88±1.05)%.结论 与Jurkat细胞相比绒癌细胞Fas表达下调而FasL的表达升高,证实Fas/FasL系统表达异常后可以使绒癌细胞逃离免疫监视.     

AQP8在正常人绒毛滋养层细胞与绒癌JAR细胞株中的表达

目的:探讨AQP8在正常人绒毛滋养细胞和绒癌 JAR细胞株中的表达差异,及其表达改变与绒癌发生的关系.方法:正常人绒毛滋养细胞(正常组)的原代培养、纯化及鉴定;人绒癌JAR细胞株(绒癌组)的培养.以免疫组织化学法、免疫荧光激光共聚焦和RT-PCR技术检测AQP8蛋白和AQP8 mRNA在正常人绒毛滋养细胞和绒癌JAR细胞株细胞膜上的表达.结果:(1)应用免疫组化方法,在正常组中,仅能从显微镜中肉眼看到AQP8的极低表达,摄影效果不佳,而在绒癌组中AQP8的阳性细胞率为93.27%±14.45%,远高于正常组.(2)应用免疫荧光染色后行激光共聚焦成像技术发现,在相同的条件及激发强度下,可见AQP8在绒癌组呈绿色阳性表达,而在正常组中未见绿光,但当加强激发强度后,仍可探及AQP8在正常组的表达.(3)应用RT-PCR技术,在正常组与绒癌组中,均检测到AQP8 mRNA的表达.绒癌组AQP8的OD值(0.98±0.35)明显高于正常组AQP8的OD值(0.32 ±0.04)(P＜0.05).结论:AQP8表达异常上调,滋养细胞内、外水、电解质平衡将被破坏,可能是导致绒癌发生的原因之一.     

TGF-β1作用下Smad3蛋白在绒癌细胞中的表达

目的：观察不同浓度的转化生长因子β1（transforming growthfactor-β1,TGF-β1）对绒癌细胞系JEG-3细胞Smad3蛋白表达的影响,探讨TGF—D／Smads信号通路在绒癌中的功能状况。方法：以绒癌细胞系JEG-3为研究对象,分别用0ng／ml、100ng／ml及200ng／ml浓度的TGF-β1处理48h后,采用蛋白印迹法检测JEG-3细胞Smad3蛋白的表达。结果：随着TGF-β1浓度的升高,Smad3蛋白的表达水平逐渐升高,呈一定的量效关系。结论：绒癌细胞系JEG-3中不存在Smad3的缺失,且其对外源性TGF-β1刺激具有良好的反应性。     

绝经期和围绝经期绒毛膜上皮癌2例误诊分析

<正>绒毛膜上皮癌(Chorionic epithelioma)是起源于胚胎性绒毛膜的恶性肿瘤,临床常表现为阴道持续不规则出血,血量多少不定,有时亦可先出现一时性闭经,然后突然阴道出血。笔者将绝经期和围绝经期绒癌2例的误诊原因及治疗进行分析,现报告如下。     

马鞭草C部位使人绒癌JAR细胞阻滞于G2/M期并诱导细胞凋亡

目的：观察马鞭草C部位(Verbena officinalis C)对人绒癌JAR细胞周期分布和凋亡的影响．探讨其诱导凋亡机制。方法：采用MTT比色法测定马鞭草C部位对JAR细胞增殖的影响；流式细胞仪检测其对JAR细胞周期分布和细胞凋广的影响：RT—PCR检测药物作用前后Bax和Bcl—2 mRNA表达变化。结果：马鞭草C部位抑制绒癌JAR细胞增殖，并呈明显时间和剂量效应关系。流式细胞仪结果显示，与对照组比较．40g/L马鞭草C部位处理48h后，使JAR细胞G2／M期增加154.3％，S期比例降低41．6％；JAR细胞凋亡率增加6．74倍。不同剂量马鞭草C部位处理JAR细胞48h后．BaX表达水平增加，Bcl—2表达水平下降．并呈剂量依赖性。结论：马鞭草C部位阻滞绒癌JAR细胞于G2／M期．通过改变Bax和Bcl—2表达，诱导JAR细胞凋亡。     

4＇-甲醚-黄芩素诱导绒毛膜癌JAR细胞凋亡的实验研究

目的探讨4′-甲醚-黄芩素(4-MS)对人绒毛膜癌JAR细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制。方法应用MTT法、激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞术和实时定量PCR法,体外观察4-MS对JAR细胞的影响。结果不同质量浓度(10、20、40mg/L)的4-MS对JAR细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖,作用72h后其增殖抑制率分别为(14.14±0.75)%、(34.34±2.99)%、(61.11±2.99)%(P<0.01);4-MS作用72h后细胞内Ca2 浓度分别为81.3±6.7、103.3±5.9、120.7±11.0,与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。40mg/L4-MS作用12、24、36h后其早期凋亡率分别为(2.36±0.19)%、(4.22±2.44)%、(7.34±0.56)%,明显高于对照组(P<0.01)。20、40mg/L4-MS作用48h后hTERT mRNA的表达量为0.05±0.01和0.02±0.01,明显低于对照组(P<0.01)。结论4-MS能抑制人绒毛膜癌JAR细胞的增殖,诱导凋亡,其机制与提高细胞内Ca2 浓度、降低hTERT mRNA的表达有关。     

乌苯美司对JAR,SKOV3和3AO细胞体外生长的抑制作用

目的：观察乌苯美司对人绒毛膜癌和卵巢癌细胞体外生长的抑制作用。方法：应用MTT比色法观察不同浓度的乌苯美司(0．5g／L、1g／L、5g／L、10g／L、15g／L、20g／L)对人绒毛膜癌JAR细胞、卵巢癌3AO细胞和SKOV3细胞的生长抑制作用,溴乙啶和丫啶橙荧光染色荧光显微镜观察凋亡细胞DNA结构改变。结果：乌苯美司能抑制JAR细胞、3AO细胞和SKOV3细胞的生长,且对JAR和SKOV3细胞的抑制作用呈时效(r=0．412,r=0．339．P均=0.000)和量效(r=0.704,r=0．753,P均=0．000)关系、5g／L乌苯美司作用48h后荧光显微镜下见细胞染色质边聚,细胞核碎裂等凋亡改变。结论：乌苯美司通过细胞凋亡途径可抑制绒毛膜癌和卵巢癌细胞的生长。     

雷公藤内酯醇对人绒毛膜癌细胞株JAR增殖凋亡及凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对人绒癌细胞株JAR增殖、凋亡及凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达的影响。方法:以体外培养的人绒癌细胞株JAR为研究对象,MTT法检测TP对细胞增殖的抑制情况;TUNEL法观察TP作用于细胞后引起细胞凋亡情况,PCR和Western blot检测TP对凋亡调控蛋白BCL-2/BAX mRNA和蛋白表达的影响。结果:随着作用浓度的增加及时间延长,TP能明显抑制JAR细胞增殖并诱导其凋亡(P<0.05);并能下调凋亡抑制蛋白BCL-2的mRNA和蛋白的表达,上调凋亡促进蛋白BAX的mRNA和蛋白表达(P均<0.05)。结论:雷公藤内酯醇在体外能抑制人绒癌细胞株JAR增殖,诱导其凋亡;凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达水平的变化可能是TP诱导JAR细胞凋亡的重要机制。     

紫草素逆转绒癌细胞JAR/MTX耐药与survivin和Bcl-2表达关系研究

目的 探讨紫草素逆转绒癌细胞耐药效应在凋亡方面的机制.方法 体外培养细胞并将其分为4组,各组加药后观察每组细胞24、48、72 h生长情况并计算细胞贴壁率,电化学发光法检测β-HCG值,S-P免疫组织化学及RT-PCR法检测survivin、Bcl-2基因表达.结果 MTX对细胞JAR/MTX毒性作用、细胞贴壁率、β-HCG下降程度与对照相比差异无统计学意义(P＞0.05);紫草素作用细胞后与对照相比差异有统计学意义(P＜0.05);二者合用作用于JAR/MTX细胞与对照相比差异显著(P＜0.01),survivin基因的mRNA和蛋白表达与对照相比差异显著(P＜0.01),Bcl-2基因的mRNA表达与对照相比差异显著(P＜0.01),蛋白表达与对照相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 紫草素可逆转JAR/MTX细胞对MTX耐药是通过下调survivin、Bcl-2基因表达增加细胞凋亡实现的;紫草素有可能成为绒癌化疗的新型增敏剂.     

MMP-2在妊娠滋养细胞中的表达及其临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP-2)与滋养细胞恶变及侵袭的关系。方法用免疫组化SP法检测20例正常早孕(<12周)绒毛组织,20例葡萄胎,17例侵蚀性葡萄胎,6例绒癌中MMP-2的表达情况。并结合临床特征做比较。结果(1)MMP-2在正常绒毛组织、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌中均有表达,但随着滋养细胞恶性程度的增加其表达显著升高(χ2=18.367,P<0.001);(2)侵蚀性葡萄胎、绒癌低危组MMP-2表达的定量评分明显低于高危组(P<0.05)。结论MMP-2与滋养细胞的恶变及预后有关,检测MMP-2对临床早期预测滋养细胞疾病恶变及预防性化疗有一定的参考价值。     

泛素结合酶E2-EPF高表达质粒的构建及对绒癌细胞JEG-3生长功能的初步探讨

目的：构建泛素结合酶E2-EPF高表达质粒,初步探讨E2-EPF在绒癌细胞增殖中的作用。方法：基因克隆技术构建pcDNA（3.1＋）-E2-EPF高表达质粒,通过瞬时转染将质粒导入绒癌细胞JEG-3中,使E2-EPF高表达;流式细胞仪检测及细胞增殖实验初步研究E2-EPF高表达对绒癌细胞生长速率的影响。结果：E2-EPF高表达质粒构建成功,瞬时转染后细胞E2-EPFmRNA升高约8.4倍,JEG-3细胞的生长速率显著高于对照组（P〈0.05）,处于G2-M期和S期细胞显著增加。结论：E2-EPF参与细胞的生长调控,促进E2-EPF表达可以加速绒癌细胞JEG-3的生长速率。     

去甲基化酶腺病毒载体构建及其在人颌下腺细胞中的表达

目的 构建去甲基化酶(methyl-CpG binding domain 2,MBD2)基因腺病毒载体,并观测其在人颌下腺(human submandibular gland,HSG)细胞中的表达.方法 以HSG细胞总RNA为模板,RT-PCR法扩增MBD2基因全长编码序列,克隆入载体pMD18-T后,亚克隆入pAdT...     

姜黄素诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡及对细胞生长周期的影响

目的研究中药姜黄素在体外诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡的机制及对细胞生长周期的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,用不同浓度的姜黄素（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0μmol/L）刺激人肝癌HepG2细胞24、36和48h,MTT法及台盼蓝拒染法检测姜黄素对人肝癌HepG2细胞生长增值的影响并绘制生长曲线图,流式细胞术（FCM）检测其对细胞生长周期的影响。结果MTT法结果表明姜黄素对人肝癌细胞HepG2的生长具有抑制作用,2.0μmol/L浓度组在24h与对照组比较便具有统计学意义（P〈0.05）,16μmol/L浓度组与HepG2细胞作用48h后对HepG2细胞的生长抑制作用最强（54.78±2.35）%,台盼蓝拒染法发现细胞存活率与姜黄素浓度间具有剂量和时间效应;流式细胞仪检测结果表明8.0μmol/L姜黄素诱导了人肝癌HepG2细胞发生凋亡,并对细胞生长的S期有明显的阻滞作用。结论姜黄素在体外能阻滞HepG2细胞的生长增值,诱导了人肝癌HepG2细胞发生凋亡。