早期干预对宫内感染脑损伤仔鼠脑组织neuritin表达的影响

目的:本研究旨在探讨早期干预及康复训练对宫内感染致脑损伤仔鼠脑组织神经突起生长因子neuritin表达的影响。方法:30只Wistar大鼠在受孕后第17天和18天连续2天腹腔注射脂多糖(LPS)420ug/kg.d作为模型组,10只受孕大鼠在相同日龄注射等量无菌生理盐水作为对照组,随机选取模型组仔鼠100只,分为干预组(T)50只,非干预组(NT)50只;随机选取对照组仔鼠50只为NS组。干预组进行早期干预(触摸和丰富环境)和康复训练,非干预组和NS组不给任何干预。在仔鼠出生后24小时内随机选取模型组和对照组各5只行胎盘HE染色,观察胎盘病理变化情况,3组分别在1天、7天、14天、21天、28天随机选取10只取仔鼠脑组织行HE染色观察脑组织病理变化和免疫组化染色观察脑组织neuritin的表达情况。分别于14天、21天、28天行改良BBB评定和悬吊实验测定评分。结果:LPS组较NS组悬吊实验和改良BBB得分及neuritin表达均显著降低(p<0.05),其中T组显著高于NT组(p<0.05)。结论:早期干预后可提高脑neuritin的表达并能改善其运动功能。     

丰富康复训练对先天性脑损伤仔鼠脑神经髓鞘发育和修复的影响

目的:观察和探讨宫内感染致脑损伤仔鼠脑神经髓鞘改变及丰富康复训练的影响和机制。方法:连续2天对孕第17天的脂多糖(LPS)组孕鼠腹腔注射LPS(450μg/kg.d),制备脑损伤模型;对照组孕鼠腹腔注射等量无菌生理盐水。LPS组仔鼠随机分为非干预组和丰富康复训练组,丰富康复训练组于第2天开始进行干预,用电子显微镜观察d14、d28各组仔鼠脑神经髓鞘厚度情况,并应用体视学技术测量和计算脑神经髓鞘厚度平均值,同时用免疫组化方法检测仔鼠脑皮质区BDNF表达情况。结果:非干预组、丰富康复训练组仔鼠脑神经髓鞘厚度平均值均明显低于对照组,差异有显著性(P<0.01),丰富康复训练组仔鼠脑神经髓鞘厚度平均值高于非干预组,差异有统计学意义(P<0.01);丰富康复训练组仔鼠脑的皮质区BDNF阳性细胞计数明显高于对照组和非干预组,差异有显著性(P<0.01)。结论:(1)宫内感染可致脑损伤仔鼠脑神经髓鞘厚度平均值降低。(2)丰富康复训练可提高脑损伤仔鼠脑神经髓鞘厚度平均值。(3)丰富康复训练可增强脑损伤仔鼠脑组织BDNF阳性表达。     

电针对先天性脑损伤仔鼠脑白质神经髓鞘修复的影响

目的观察和探讨电针对宫内感染致脑损伤仔鼠脑白质神经髓鞘修复的影响和机制。方法连续两天对孕第17天的孕鼠腹腔注射脂多糖（LPS）[450μg/（kg.d）],制备先天性脑损伤仔鼠模型;对照组孕鼠腹腔注射等量无菌生理盐水,随机选取对照组仔鼠22只;随机选取LPS组仔鼠40只,随机分为非干预组22只和电针组18只,电针组电针组于第7天开始进行干预,分别于第14天、第28天用电子显微镜观察各组仔鼠脑白质神经髓鞘,并应用体视学技术测量和计算出脑白质神经髓鞘厚度平均值。结果非干预组、电针组仔鼠脑白质神经髓鞘厚度平均值均明显低于对照组（P﹤0.01）,电针组仔鼠脑白质神经髓鞘厚度平均值高于非干预组（P﹤0.01）。结论电针干预可促进脑损伤仔鼠脑白质神经髓鞘修复。     

康复训练对脑损伤仔鼠脑组织中slit表达的影响

目的:本研究向孕鼠腹腔注射内毒素(LPS)造成仔鼠脑损伤模型,研究康复训练对脑损伤仔鼠脑组织中slit表达的影响。方法:将脑损伤仔鼠30只,随机分为3组:生理盐水组(NS)、康复训练组(N)与非康复训练组(NT),每组10只。康复训练组:将7日龄至4周龄仔鼠进行康复训练,每天1次。训练方法(1)滚筒训练:采用自制滚筒式网状训练器材训练,训练器长100cm,直径60cm,中间分成4格,同时训练4只大鼠,底座有一固定架,一端有一手摇柄,转动训练可训练仔鼠的抓握、旋转、行走等运动,5r/min,10min/次。(2)转棒训练:一根长150cm,直径4.5cm的转棒;中点固定于3r/min转动器上,顺、逆时针交替转动,10min/次。(3)平衡木训练:平衡木长170cm,宽2cm,平放距地面7cm处,让老鼠在上面行走,主要评估及训练平衡功能,10min/次。生理盐水组、非康复训练组不进行康复训练。第7天、14天、21天、28天对仔鼠进行运动功能评定,并取脑组织进行免疫组织化学染色观察脑皮质及海马区slit表达的变化。结果:康复训练组仔鼠运动功能明显改善,脑皮质及海马区slit表达较非康复训练组增多。结论:康复训练可以提高脑损伤仔鼠的运动功能,并可促进脑损伤仔鼠脑组织中slit的表达。     

孕期补充DHA对脂多糖所致宫内感染仔鼠脑组织TLR4表达的影响

目的探讨宫内感染的孕鼠经二十二碳六烯酸(DHA)干预后,对围产期炎症暴露的仔鼠脑组织炎症状态的影响。方法将孕鼠随机分为3组,①实验组(LPS+DHA组):孕期第1天开始给予DHA 130 mg/kg灌胃至分娩。于孕第17、18天连续2次腹腔注射LPS,剂量为350μg/kg;②模型组(LPS组):无菌生理盐水灌胃,同期连续2次腹腔注射LPS,剂量同上;③对照组(NS组):无菌生理盐水灌胃,同期腹腔注射无菌生理盐水0.6 mL。取各组孕21天,生后第1、7、14天(G21,P1,P7,P14)的胎鼠及幼鼠脑组织,用苏木精-伊红染色法观察不同时间点脑组织的病理改变。Realtime-PCR法检测脑组织Toll样受体4(TLR4)、IL-1βmRNA转录水平,Western blot法检测脑组织TLR4、IL-1β蛋白表达水平。结果模型组新生鼠平均出生体重较实验组及对照组减低(均P<0.05)。模型组脑组织苏木精-伊红染色见细胞水肿,组织疏松,细胞数减少。实验组脑细胞水肿较模型组减轻,细胞数减少不明显,而对照组脑组织炎性改变不明显。模型组及实验组IL-1βmRNA、IL-1β蛋白表达较对照组高(均P<0.05),但实验组表达较模型组减低(均P<0.05)。模型组及实验组TLR4mRNA、TLR4蛋白表达较对照组升高(均P<0.05),实验组表达较模型组减少(均P<0.05)。结论孕期LPS腹腔注射可引起孕鼠胎盘和胎儿的炎症反应,导致子代的脑损伤。孕期补充DHA能减少仔鼠脑内致炎细胞因子的表达,因此可能会降低宫内炎症暴露仔鼠脑损伤的发生率。     

宫内感染中TNF-α的作用及对新生鼠脑髓鞘碱性蛋白表达变化的影响

目的:研究妊娠18 d孕鼠腹腔注射脂多糖(LPS)致胎鼠损伤中肿瘤坏死因子α(TNF-α)作用及新生鼠脑髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的变化.方法:孕18 d大鼠随机分为盐水对照组、LPS组,观察孕鼠腹腔注射LPS(0.1,0.2,0.3,0.4 mg/kg)后胎盘病理变化,免疫组化技术检测胎盘TNF-α表达并统计胎鼠死亡率;免疫组化技术检测孕鼠注射LPS0.2 mg/kg后两组新生鼠生后1,3,7,14 d脑组织MBP表达的变化.结果:LPS组胎盘组织炎性病理改变及TNF-α表达明显增强.LPS组药物剂量越大,胎鼠死亡率越高.新生鼠生后7 d有MBP表达,14 dMBP表达增多.LPS组脑组织内MBP表达与同日龄对照组比较减弱,灰度值明显高于对照组(P＜0.01).结论:TNF-α可能是致胎鼠损伤的关键细胞因子;母体注射LPS可对新生鼠髓鞘发育产生重要影晌,导致新生鼠脑损伤.     

骨化三醇对脂多糖炎性大鼠神经保护作用的研究

目的:观察骨化三醇对脂多糖(LPS)炎性大鼠脑组织的保护效应及作用机制。方法:健康雄性成年SD大鼠52只,随机分为三组:空白对照组6只、骨化三醇干预组23只[4μg/(kg.d)×14d]、脂肪乳剂(安慰剂)组23只[4ml/(kg.d)×14d],在第14d给药结束后1h,腹腔注射LPS 10mg/kg制造大鼠全身炎症模型,用凝胶电泳迁移率分析(EMSA)方法检测造模后3、6和9h脑组织核因子-κB(NF-κB),用ELISA方法测肿瘤坏死因子α(TN-α)、白细胞介素-10(IL-10),用苏木精-伊红(H-E)染色观察脑组织神经细胞损伤情况。结果:LPS腹腔注射使大鼠脑组织NF-κB活化、TNF-α表达增加,并随时间的延长而增高,伴有散在的大脑皮质浅表区神经元损害。骨化三醇干预能下调各时间点NFκ-B活性,降低TNF-α含量,并促进IL-10表达。骨化三醇干预减轻了神经细胞损伤程度。结论:大鼠腹腔注射LPS诱导的全身炎症状态能引发脑损伤,骨化三醇干预可能通过调节脑内炎性-抗炎因子的平衡而发挥神经保护作用。     

孕期炎症暴露致子代大鼠肾脏组织中甲基化转移酶表达异常的研究

目的 探讨肾脏DNA甲基转移酶(DNMTs)在孕期脂多糖(LPS)刺激仔鼠高血压发生的作用.方法 将孕鼠分为4组,分别为对照组(孕期的8～14 d注射生理盐水)、LPS组(孕期第8、10、12天注射LPS,在9、11、13、14天注射生理盐水)、核转录因子κB(NF-κB)抑制剂PDTC组(孕期的8～14 d每天注射PDTC)、LPS+ PDTC组(LPS在孕期第8、10、12天注射,PDTC注射时间及剂量同PDTC组).用尾动脉无创血压测定仪测仔鼠血压,电子天平称体质量,RT-PCR检测仔鼠肾皮质白细胞介素-6(IL-6)、Fli-1及DNMTs的表达水平.结果 LPS组仔鼠血压明显高于对照组(P＜0.05),体质量较对照组高,肾皮质IL-6、Fli-1、DNMT1、DNMT3b表达较对照组升高(P＜0.05).而LPS+ PDTC组仔鼠体质量、血压及IL-6、Fli-1、DNMT1、DNMT3b表达均较LPS组降低.结论 孕期LPS刺激会引起仔鼠肾皮质DNA甲基酶变化,提示一些关键基因的甲基化可能是孕期LPS刺激引起子代高血压的原因之一.     

戊乙奎醚预处理对内毒素性脑损伤大鼠CD14和TLR4mRNA的影响

【摘要】 目的 探讨盐酸戊乙奎醚预处理对内毒素性脑损伤大鼠CD14和TLR4mRNA的影响。方法 将40只Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组（NS组）,内毒素性脑损伤模型组（LPS组）,低剂量戊乙奎醚干预组（PL组）,高剂量戊乙奎醚干预组（PH组）4组,每组各10只,实验大鼠注射内毒素4h后处死,留取脑组织标本。光镜下观察脑组织病理变化,RT PCR法检测CD 14和TLR4 mRNA表达,ELISA法测定TNF a的含量。结果 光镜下LPS组脑细胞损伤严重,PL组、PH组与LPS组对比脑损伤减轻。与NS组相比较,LPS组、PL组及PL组脑组织TLR4和CD14 mRNA表达水平均升高（P＜005）;与LPS组比较,PL组和PH组脑组织TLR4和CD14 mRNA表达水平均降低（P＜005）;与PL组比较,PH组TLR4和CD14 mRNA表达水平降低（P＜005）。与NS组相比较,TNF α含量升高（P＜005）;与LPS组比较,PL组和PH组脑组织TNF α含量降低（P＜005）;与PL组比较,PH组TNF α降低（P＜005）。结论 盐酸戊乙奎醚预处理可减轻大鼠内毒素的脑损伤,机制可能与降低CD14及TLR4mRNA的表达,阻断炎症信号传导通路,减轻炎症介质的释放有关。     

大鼠脑水肿模型中脑组织巨噬细胞炎症蛋白-2、IL-10含量测定

目的:探讨巨噬细胞炎症蛋白2(MIP-2)、白介素10(IL-10)在脂多糖(LPS)致大鼠脑水肿发病过程中的表达及意义.方法:SD大鼠56只,随机分为2组.对照组(NS组)28 只,0.2 ml生理盐水颈内动脉注射;脂多糖组(LPS组)28只,颈内动脉注射LPS 200 μg.于注射后4 h、6 h、12 h、24 h分别测定2组大鼠脑组织含水量、MIP-2、IL-10、伊文思蓝(EB)的含量.结果:LPS组不同时间点脑组织含水量、EB含量、MIP-2和IL-10的含量显著高于NS组(P＜0.05).LPS组脑组织含水量和EB含量、IL-10含量呈正相关(r=0.743,0.467, P＜0.05),IL-10含量与MIP-2含量呈正相关(r=0.619,P＜0.05).结论:在内毒素致中枢神经系统炎症中,MIP-2、IL-10表达量增高,2者参与脑水肿的发生发展.     

肝细胞生长因子在肺纤维化模型中的表达及意义

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)在大鼠肺纤维化模型中的表达及意义,探讨肺纤维化可能的发病机制。方法:40只Wistar大鼠随机分成模型组及对照组。前者经气管内灌注博莱霉素诱导肺纤维化,后者灌注生理盐水。两组于气管内灌注后第7,14,28,42d各处死5只,原位杂交法检测HGFmRNA在肺内的表达,酶联免疫吸附法检测HGF蛋白在肺组织及血清中的表达。结果:模型组肺组织HGFmRNA表达及蛋白含量在第7d达高峰,之后下降,第28,42d时低于正常对照(P<0.05,P<0.01)。模型组血清HGF在第7d开始升高达峰,后降低,但仍高于正常对照(P<0.05)。结论:HGF在肺纤维化组织中的表达早期升高,中晚期降低,而血清中的含量始终高于正常组。HGF参与了肺纤维化的发病过程。     

氯沙坦对大鼠实验性肺纤维化的治疗作用及其机制

目的:研究血管紧张素Ⅱ的1型受体拮抗剂氯沙坦对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的治疗作用及其可能机制。方法:45只大鼠随机分为3组,每组15只。①氯沙坦组,经气管插管灌注博莱霉素诱导肺纤维化,随后每日用氯沙坦10 mg/kg灌胃进行干预;②模型组,气管内灌注用博莱霉素,灌胃用生理盐水;③对照组,气管内灌注和灌胃均用生理盐水。各组动物于气管内灌注后第7,14,28天分别处死5只。取肺组织用Masson胶原染色法及检测羟脯氨酸来评价治疗效果。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子β(TGF-β)蛋白表达水平。结果:模型组肺纤维化程度和肺组织羟脯氨酸含量在各时间点均高于对照组,氯沙坦组肺纤维化程度在各时间点均低于同期模型组,其肺组织羟脯氨酸含量在第14和28天均低于同期模型组,差异有统计学意义(P均<0.05);模型组肺组织TGF-β蛋白水平在各时间点均高于对照组,该组HGF蛋白水平在第7天高于对照组,而第14和28天低于对照组,氯沙坦组在第14和28天肺组织TGF-β蛋白水平均低于同期模型组,而HGF蛋白水平均高于同期模型组(P均<0.05)。结论:氯沙坦对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化有治疗作用,可能与抑制肺组织TGF-β表达和促进HGF表达有关。     

实验性矽肺模型大鼠血清TGF-β1和TNF-α的变化

目的:研究实验性矽肺大鼠在染尘后不同时期血清转化生长因子-β1(TGF-β1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化。方法:将30只健康雄性SD大鼠随机分为模型组和对照组,模型组20只,对照组10只。模型组以非暴露方式气管内一次性注入1 ml二氧化硅悬液(40 mg/ml)建立大鼠矽肺模型,对照组气管内注入等量的灭菌生理盐水。分别在染尘后第1、7、14、21、28天各处死4只模型组和2只对照组大鼠,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清TGF-β1和TNF-α的蛋白浓度。结果:模型组TGF-β1在染尘后第1、7天均显著低于对照组(P0.01),而第14～28天均显著高于对照组(P0.01)。模型组TNF-α在染矽尘后第1～14天均显著高于对照组(P0.01),而在第21、28天均显著低于对照组(P0.01)。结论:矽尘可导致血清TGF-β1和TNF-α的变化,TGF-β1的异常表达可能参与了矽肺肺纤维化的发生和发展。     

早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤新生鼠海马GAP-43表达的影响

目的 探讨早期丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain injury, HIBI)新生大鼠海马生长相关蛋白(Growth-associated protein-43, GAP-43)表达的影响.方法 按Rice法制备SD大鼠HIBI模型,随机分为干预组和非干预组,假手术大鼠作为对照组.干预组大鼠于HIBI后第2天开始丰富环境干预,分别于术后第3、7、14、21、28天取各组大鼠脑组织进行免疫组织化学染色和RT-PCR检测,观察不同时间点各组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达的差异.结果 非干预组大鼠海马GAP-43及其mRNA表达强于对照组(P＜0.01),干预组海马GAP-43表达于术后第14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05),GAP-43mRNA表达于术后第7、14、21、28天强于非干预组,差异显著(P＜0.05). 结论 早期丰富环境干预可以增强HIBI新生大鼠海马GAP-43及其mRNA的表达,提示GAP-43表达的增多可能参与了丰富环境影响HIBI新生大鼠损伤修复的机制.     

促红细胞生成素对新型支气管肺发育不良早产鼠模型TGF－β1表达的影响

目的：观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对新型支气管肺发育不良（BPD）早产鼠模型肺组织病理变化及转化生长因子－β1（TGF－β1）表达的影响。方法40只定期受孕SD大鼠于孕第15天孕囊内注射脂多糖（ LPS）或磷酸盐缓冲液（ PBS）,孕第21天剖宫娩出早产鼠,早产鼠于生后6 h内分为5组：PBS＋空气组、PBS＋高氧组、LPS＋高氧组、PBS＋高氧＋rhEPO组、LPS＋高氧＋rhEPO组。 PBS＋高氧＋rhEPO组、LPS＋高氧＋rhEPO组于高氧暴露6 h后开始第1次背部皮下注射rhEPO 1200 IU／kg,隔天1次,共7次。分别在高氧暴露第1、7、14天处死早产鼠,观察肺组织病理变化及辐射状肺泡计数（RAC）,采用ELISA 法检测肺泡灌洗液（BALF）及肺组织TGF－β1的表达量。结果与PBS＋空气组比较,经高氧干预后其病理损伤加重、RAC降低、BALF及肺组织TGF－β1表达量升高（P＜0.01）,并且以LPS＋高氧组更显著（P＜0.05,P＜0.01）,上述指标在高氧暴露后第14天与第7和（或）第1天差异有统计学意义（P＜0.05）;rhEPO干预后与相应对照组比较上述指标得到相应改善（P＜0.05, P＜0.01）;BALF中TGF－β1水平与RAC呈高度负相关,与肺组织TGF－β1水平呈高度正相关（ P＜0.05或P＜0.01）。结论 rhEPO可能通过参与调解TGF－β1相关通路,改善BPD模型大鼠肺组织损伤,从而对BPD起到一定的干预和治疗作用。     

阿司匹林对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的抑制作用及其机制

 目的  观察阿司匹林对博莱霉素所致大鼠肺间质纤维化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法  取体质量250 g左右的健康清洁级雄性SD大鼠60只,随机分为生理盐水对照组、博莱霉素模型组、甲基强的松治疗组、阿司匹林治疗组,每组15只。生理盐水对照组经气管插管注入生理盐水0.2 mL,其他各组注入博莱霉素 5 mg/kg制备成模型。甲基强的松治疗组和阿司匹林治疗组每天灌胃给药分别予甲基泼尼松龙6 mg/kg、阿司匹林10 mg/kg,于第7、14、28天每组各处死5只,取其肺组织作以下测试:HE染色病理学观察;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测羟脯氨酸、IL-4、TNF-α、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF β)和角化细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)水平;Real Time PCR检测TGF β的mRNA表达。结果  博莱霉素模型组大鼠肺组织在第7天时出现明显的出血渗出性炎症反应,在第28天时出现明显的肺组织纤维化;其肺组织的羟脯氨酸、IL-4和TNF-α水平较生理盐水对照组有明显升高(P<0.05),TGF-β蛋白和TGF β mRNA的表达也明显高于生理盐水对照组(P<0.01)。阿司匹林治疗组肺组织病理与博莱霉素模型组比较,第7天时大鼠肺组织的炎性渗出有明显减轻,第28天时肺组织纤维化程度较轻。阿司匹林治疗组大鼠肺组织的羟脯氨酸、IL-4、TNF-α含量较博莱霉素模型组有明显下降(P<0.01),其肺组织TGF-β蛋白含量和mRNA表达明显低于博莱霉素模型组(P<0.05)。阿司匹林治疗组与甲基强的松治疗组相比较,在第28天时肺组织羟脯氨酸含量低于甲基强的松治疗组(P<0.01),而IL-4、TNF-α、TGF-β、TGF-β mRNA的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论  阿司匹林可抑制炎症细胞分泌TGF-β、IL-4和TNF-α,减轻博莱霉素导致的肺间质纤维化反应,其作用机制可能与下调TGF β mRNA和蛋白的表达有关。