釉基质蛋白和骨形成蛋白对牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的:通过检测釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)、骨形成蛋白-2(BMP-2)作用下对促进牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响,探讨EMPs、BMP-2促进牙周组织再生的作用机制及其之间的相互影响.方法:酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Haman periodontal ligament cells,HPDLC)用不同浓度的因子进行诱导,在3d、7d两个时间点,利用MTT法检测和分析诱导后细胞增殖活性的变化.结果:BMP-2、EMPs单独应用均可促进人PDLCs增殖,BMP-2作用强于EMPs.而联合组与100～200μg/L BMP-2、200 mg/L EMPs无明显差异,与100 mg/L EMPs差异显著.结论:BMP-2、EMPs单独或联合应用均可促进人PDLCs增殖,BMP-2作用强于EMPs.联合组中起主要作用的是BMP-2,EMPs未能增加BMP-2的作用.     

釉基质蛋白和骨形成蛋白对牙周膜成纤维细胞矿化能力的影响

目的:通过检测釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)、骨形成蛋白-2(Bone morphogenetic protein 2,BMP-2)作用下,牙周膜成纤维细胞矿化能力,探讨EMPs、BMP-2促进牙周组织再生的作用机制.方法:酶消化法获得人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament cells,HPDLC)用不同因子进行诱导,在3d、7d两个时间点,利用ALP法检测诱导后细胞成骨活性的变化,同时进行体外矿化诱导实验.结果:BMP-2促进了PDLCs的矿化能力;EMPs作用不明显;同时,在BMP-2和EMPs作用下,PDLCs形成矿化结节,但EMPs结节细小,进展慢.结论:BMP-2是一种骨诱导因子;EMPs是一种成骨促进因子.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对肝癌细胞增殖的抑制作用研究

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 采用不同浓度(0、25、50、100、200、400mg/L)EGCG作用于HepG2细胞,于24、48h后采用MTT方法检测细胞增殖抑制率.以不同浓度(0、50、100、200mg/L)EGCG作用于HepG2细胞,24h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞周期、细胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)及Smad3蛋白的表达,RT-PCR检测CDC25A和Smad3 mRNA的表达.结果 MTT检测结果显示,不同浓度EGCG对HepG2细胞均有生长抑制作用,且具有时间和剂量依赖性(P＜0.01).随着EGCG浓度升高,细胞增殖指数(PI)明显降低(P＜0.01),细胞凋亡率明显增高(p＜0.01),CDC25A蛋白和mRNA表达水平下降(p＜0.05),Smad3蛋白和mRNA表达水平上升(p＜0.05).结论 EGCG可能通过下调CDC25A、上调Smad3的表达,抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,从而对肝癌细胞起到生长抑制作用.     

地骨皮提取物CL-5拮抗内毒素的实验研究

目的 观察地骨皮提取物(CL-5)对内毒素(LPS)的体内外拮抗活性.方法 应用生物传感器技术检测CL-5与LPS的活性中心类脂A(Lipid A)的结合活性,ELISA法检测不同浓度CL-5(50、100、200mg/L)对LPS(100μg/L)刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,进一步观察不同剂量(30、60、90mg/kg)的CL-5对致死剂量热灭活大肠杆菌(E.coil)攻击小鼠的72小时存活率.结果 10～640mg/L的CL-5,特异性结合值(RU)为36.5～481.2arc/s,随CL-5浓度递增而升高;单纯LPS刺激RAW264.7细胞(对照组)释放的TNF-α为(2479.03±61.43)ng/L,给予50、100、200mg/L CL-5预处理后TNF-α浓度依次为(2 210.29±70.95)、(1 998.27±111.24)、(1 423.28±86.35)ng/L,随CL-5剂量递增而减少,均显著低于对照组(P<0.05);以1.30×1011CFU/kg热灭活E.coil攻击小鼠(对照组)72小时动物死亡率为100%,而以30、60、90mg/kg CL-5处理后,小鼠72小时存活率分别为50%、60%和80%,随CL-5注射剂量的增加而升高,均显著高于对照组(P<0.05).结论 CL-5与Lipid A有一定的结合活性,可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞活化,并对致死剂量热灭活E.coil攻击的小鼠具有保护作用.     

模拟失重环境碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨在模拟失重环境下碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLF)增殖的影响. 方法 试验分对照组、模拟失重组和模拟失重加hPDLF组3组.采用酶消化组织块培养法分离、培养原代hPDLF.应用噻唑蓝比色法,检测模拟失重条件下,不同时间和不同浓度的bFGF对hPDLF增殖的影响. 结果 在模拟失重12h、24h组hPDLF增殖较对照组没有显著差别,在48h、72h模拟失重组较对照组显著降低,差异有统计学意义(t=7.303、8.668,P<0.01).模拟失重48 h时bFGF浓度在50～100μg/L范围内加bFGF组hPDLF增殖高于模拟失重组,差异有统计学意义(P<0.05),而bFGF浓度为1～10μg/L时,两组没有显著差别. 结论 模拟失重在48 h、72 h对hPDLF的增殖有抑制作用,模拟失重环境bFGF浓度在50～100μg/L范围内具有促进hPDLF增殖的效应.     

枸杞子粗提物对小鼠T淋巴细胞的免疫增强作用

枸杞子粗提物(简称LBP)5～50mg/kg/天×7天,ip,显著增加正常小鼠的脾重和提高外周血T淋巴细胞百分数。LBP5和10mg/kg对胸腺重量无明显影响,增加剂量到25～50mg/kg可使胸腺重量降低。LBP50～200mg/kg增强~3H-TdR掺入胸腺细胞的数量,在5～100mg/kg时,又可增强由ConA诱导的淋巴细胞增殖反应。在ConA一般浓度(5～40μg/ml)时,LBP25、50和100mg/kg对胸腺淋巴细胞增殖均有增强作用;在高浓度GonA60μg/ml时,大剂量LBP比低剂量对胸腺淋巴细胞增殖反应具有更强的作用。这些结果说明,在适宜剂量范围,LBP可以增强T淋巴细胞的增殖和作为一种免疫增强剂。     

EGB761对VH-64尤文肉瘤细胞的促凋亡作用

 目的 研究银杏叶提取物EGB761对VH-64尤文肉瘤细胞的促凋亡作用。方法 EGB761干预VH-64尤文肉瘤细胞后,CCK- 8 观察 50、100 和200 mg/L不同浓度EGB761作用下VH-64尤文肉瘤细胞的增殖状况,流式细胞仪分析用AnnexinV-FITC和PI双染检测不同浓度EGB761对VH-64尤文肉瘤细胞凋亡的影响。结果 EGB761可抑制VH-64尤文肉瘤细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性反应;EGB761 100 mg/L、200 mg/L干预VH-64尤文肉瘤细胞后,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率分别为6.85%±0.36%和14.36%±0.23%,明显高于对照组(P<0.01)。结论 EGB761可诱导VH-64尤文肉瘤细胞凋亡。     

神经肽P物质对肉芽组织成纤维细胞增殖及表皮生长因子基因表达的作用

目的：探讨感觉神经肽P物质（SP）对离体培养的肉芽组织成纤维细胞的促增殖作用及其对表皮生长因子（EGF）基因表达的调控作用。方法：采用MTT法测定SP对肉芽组织成纤维细胞的促增殖作用；采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）方法检测SP对成纤维细胞EGF基因表达的调控作用，观察时间及剂量－效应关系。结果：10^-9～10^-5mol/L的SP在体外对肉芽组织成纤维细胞均具有明显的促增殖作用（P＜0．01），且具有明显的剂量依赖性（γ=0.594,P＜0．01），EGF抗体只能部分抑制这一作用（与对照组比较，P＜0．01；与10^-7mol/L SP组比较，P＜0．05）。10^-7mol/L SP可诱导成纤维细胞EGF mRNA的表达，在作用后6h与对照组比较，差异有非常显著性意义（P＜0．01）；SP在10^-8～10^-6mol/L范围内可以显著促进成纤维细胞EGF mRNA表达，在10^-7mol/L达到峰值，当浓度＞10^-7mol/L时，其促EGF mRNA表达的效应强度随浓度升高而有所降低，至10^-5mol/L时与对照组比较，差异无显著性意义。结论：SP对肉芽组织成纤维细胞具有明显的促增殖作用，这种作用与其诱导成纤维细胞EGF表达有关。     

银杏叶提取物对大鼠肝星状细胞增殖的影响及机制研究

目的：研究肝纤维化过程中银杏叶提取物（GbE）抑制肝星状细胞（HSC）增殖的机制。方法用不同浓度 GbE （0、50、100、200、300 mg/ L）处理 HSC 24 h 后,MTT 法检测 GbE 对 HSC-T6增殖的影响,Western blotting 和 RT-PCR 法测定 GbE对 P21/ P27蛋白和 mRNA 表达的影响。结果 MTT 检测结果显示,GbE 在100 mg/ L 时,抑制 HSC-T6的增殖（P ﹤0.05）,浓度为200和300 mg/ L 时,抑制增殖作用明显增强（P ﹤0.01）;Western blotting 检测结果显示,GbE 明显增加 P21/ P27蛋白的表达,且促进 P27蛋白表达的作强于 P21;进一步用 RT-PCR 检测发现,GbE 也能增加 P21/ P27 mRNA 的表达。结论 GbE 能够抑制 HSC-T6的增殖,这种增殖抑制作用主要是通过增加 P21/ P27蛋白和 mRNA 的表达实现的。     

不同浓度胡桃醌对HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度胡桃醌对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响,探讨胡桃醌的抗肿瘤作用.方法 常规体外培养人宫颈癌HeLa细胞24h,加入10、20、50、100、200μmol/L浓度的胡桃醌再培养24h.通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡情况,分光光度计检测细胞Caspase-3蛋白活性.结果 细胞形态学观察显示,不同浓度胡桃醌均可导致细胞形态学发生改变;MTT实验表明,胡桃醌对HeLa细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度的增加而增强(P＜0.05或P＜0.01);流式细胞仪检测结果表明,加入胡桃醌培养24h后HeLa细胞出现G2/M期阻滞,10、20、50、100、200μmol/L胡桃醌处理后,HeLa细胞G2/M期的比例分别增加至12.92％、16.23％、23.64％、34.22％、52.64％.Caspase-3活性检测结果显示,不同浓度胡桃醌均可使Caspase-3蛋白活性增加,且具有剂量依赖性.结论 胡桃醌可抑制HeLa细胞的增殖,且具有剂量依赖性,有望用于抗肿瘤治疗.     

应用RNAi技术沉默survivin基因对肺腺癌A549细胞的影响

目的 探讨RNA干扰(RNAi)沉默survivin基因对肺腺癌A549细胞的影响.方法 应用RNAi技术,以化学合成的survivin小干扰RNA(siRNA)体外转染A549细胞,采用MTT法及流式细胞仪检测转染前后A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的变化,通过RT-PCR及Western blot分析survivin mRNA和蛋白的表达情况.结果 survivin siRNA对A549的生长抑制作用呈浓度依赖性(P＜0.05),并能引起G1期细胞比率的增加和S期细胞相应的减少,诱导一定数量的细胞凋亡,转染后36、60、84、108、132h的IC50值分别为152.4、151.2、136.0、144.0、150.4nmol/L.100～200nmol/L siRNA转染组细胞的survivin表达在蛋白及RNA水平都显著低于对照组(P＜0.01),但空白对照组与空质粒组间无明显差异(P＞0.05).结论 应用siRNA沉默survivin基因可以下调肺腺癌A549细胞survivin的表达,进而抑制细胞生长、增殖并诱导细胞凋亡.RNAi的抑制效果具有特异、高效和持久的特点.     

葛根素对支气管上皮细胞和中性粒细胞共培养体系中黏附分子表达的影响

目的 探讨葛根素抑制支气管上皮细胞(BEAS-2B)与中性粒细胞(NEU)的相互作用进而调控气道炎症反应的机制.方法 实验分为BEAS-2B单独培养组、NEU单独培养组、BEAS-2B+NEU共培养组、BEAS-2B+NEU+50μg/ml葛根素共培养组、BEAS-2B+NEU+100μg/ml葛根素共培养组、BEAS-2B+NEU+200μg/ml葛根素共培养组,应用流式细胞术检测BEAS-2B和NEU两种细胞中胞间黏附分子ICAM-1、ICAM-3蛋白的表达,Real-time PCR检测两种细胞中ICAM-1、ICAM-3 mRNA的表达.结果 与单独培养组相比,BEAS-2B+NEU共培养组中BEAS-2B细胞ICAM-1、ICAM-3及NEU细胞ICAM-1蛋白和mRNA表达均明显增强(P＜0.05,P＜0.01),而NEU细胞ICAM-3蛋白和mRNA表达无明显改变(P＞0.05).在BEAS-2B+NEU共培养体系中分别加入50、100、200μg/ml葛根素干预后,流式细胞术检测显示仅葛根素浓度为200μg/ml时BEAS-2B细胞ICAM-1蛋白表达显著低于BEAS-2B+NEU共培养组(P＜0.05),余与BEAS-2B+NEU共培养组比较差异均无统计学意义,而Real-time PCR检测显示,除NEU细胞的ICAM-3 mRNA与BEAS-2B+NEU共培养组比较差异无统计学意义外,余均显著低于BEAS-2B+NEU共培养组(P＜0.05,P＜0.01).结论 葛根素可有效抑制BEAS-2B与NEU共同培养诱导的BEAS-2B及NEU细胞ICAM-1、ICAM-3基因和蛋白的表达.     

不同处理的人血清白蛋白对人牙龈上皮细胞粘附作用的影响

目的：探讨人血清白蛋白（human serum albumin,HSA)对人牙龈上皮细胞（human gingival epithelial cells,HGE)粘附作用的影响。方法：使用角化细胞无血清培养基、分离酶原代培养HGE并用广谱细胞角蛋白单抗作细胞鉴定,细胞接种24h内MTT法连续观测HSA聚苯乙烯表面预孵育组、培养基含HSA组HGE的粘附,在含HSA培养基中观察HGE的生长曲线。结果：HGE免疫组化染色阳性。HSA预孵育组,8h以内粘附的细胞数量显著少于培养基含HSA组及对照组,10h至24h两实验组与对照组无显著性差异;生长曲线中各时间点细胞的数量,实验组与对照组相比无显著性差异。结论：HSA预孵育于聚苯乙烯表面,对HGE的粘附在早期产生抑作用。     

地塞米松对培养的人视网膜色素上皮细胞生长的调控

目的检测地塞米松(dexamethasone,DEX)对培养的人视网膜色素上皮细胞(retinalpigmentepithelia,RPE)的调控。方法用四唑盐(MTT)实验,氚标胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine,3H-TdR)掺入和流式细胞仪检测不同浓度DEX对RPE的作用。结果通过MTT及3H-TdR法,DEX浓度从32mg/L-320mg/L可增加培养的RPE的存活率和DNA合成,相反1000mg/L-3200mg/L为抑制作用,并呈剂量和时间依赖性。当DEX浓度为320mg/L时,S期和G2/M期细胞数增加28.3%,而1000mg/LDEX使其减少41.8%(P<0.05)。结论32mg/L-320mg/L的DEX促进培养的RPE的增殖,当DEX浓度>320mg/L时,则抑制增殖。DEX的抑制作用可能发生在S期和G2/M期。     

脂联素对人脐静脉内皮细胞MCP-1和IL-8表达的影响

目的 探讨脂联素对肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌白细胞介素-8(IL-8)、单核细胞趋化因子-I(MCP-1)的影响.方法收集新生儿脐静脉并分离培养HUVECs,采用标记链霉素抗生物素-生物素法(LSAB法)荧光染色检测内皮细胞特有的Ⅷ因子相关抗原.将HUVECs随机分为对照组、TNF-α刺激组(分别以5、10、20、50μg/L TNF-α刺激)和脂联素干预组(以5、30、50mg/L脂联素进行干预,然后加入终浓度20μg/L的TNF-α).分别采用PCR及ELISA法检测各组IL-8及MCP-1的mRNA和蛋白表达水平.结果 荧光染色结果显示HUVECs胞质中Ⅷ因子相关抗原阳性,证实是血管内皮细胞.HUVECs经TNF-α刺激后,TNF-α刺激组IL-8及MCP-1的蛋白和mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.01),且随着TNF-α浓度的增加,MCP-1和IL-8的蛋白表达量也呈增加趋势.与20μg/L TNF-α刺激组相比,5mg/L的脂联素干预组IL-8及MCP-1的蛋白、mRNA表达均无显著差异;但30、50mg/L脂联素干预组IL-8及MCP-1的蛋白、mRNA表达明显减弱(P<0.01).结论 脂联素可能通过抑制血管内皮细胞趋化因子IL-8及MCP-1的表达来调节血管内皮细胞的炎症反应,从而发挥其抗炎、抗动脉粥样硬化的作用.     

Oxygen stress effects on proliferation rates and heat shock proteins in lymphocytes

INTRODUCTION: High-oxygen conditions produce oxidants and cause some pathognomonic signs and symptoms in human hosts. However, the biological effects at the cellular level are still unclear. To investigate the cellular response against oxygen stress, we measured the proliferative activity and heat shock protein (HSP) expression of human lymphocytes. METHODS: Hydrogen peroxide (H2O2) was used as a source of reactive oxygen species. The time course of the proliferative/apoptotic response was evaluated from DNA histogram analysis. HSP response was measured by Western blot analysis. RESULTS: Suppression of lymphocyte cluster formation by oxygen stress was observed to be dose-dependent. Induction of apoptotic cell death and retardation of entering the S-phase were also affected according to the extent of oxygen stress. Oxygen stress equivalent to 500 micromol x L(-1) H2O2 or more showed a severe impairment of the cell cycle and that equivalent to 50-100 micromol x L(-1) H2O2 revealed an intermediate effect. Although an increased expression of HSP72/73 was observed in each group 6 h after oxygen stress, only 100 micromol x L(-1) H2O2-treated cells remained at a high expression level after 24 h. CONCLUSION: It is likely that when cells encounter oxygen stress, an increased expression of HSP72/73 and subsequent repair of damaged proteins cause the retardation of cell cycle progression and prevent damaged cells from entering the S phase. But if the damage is too strong, the cells may go into apoptotic cell death. From our results of the HSP72/73 experiment, the threshold that determines the fate of the lymphocytes may be around 100 micromol x L(-1) H2O2.     

纤溶酶对兔动脉血体外溶凝最佳时间与浓度研究

目的探讨纤溶酶溶解血凝块的最佳时间及浓度。方法采集日本白兔股动脉血,应用模拟脑出血微创穿刺体外实验模型,采用5×5拉丁方设计,分析纤溶酶浓度(25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml、200 U/ml及300 U/ml)、用药时机(抽血后2、4、6、8、16 h)和溶凝时间(给予纤溶酶后2、4、6、8、10 h)对体外血肿溶凝的时效和量效的影响。抽取兔股动脉血5 ml制备血凝块,实验管加相应浓度的纤溶酶0.2 ml,对照管加0.2 ml生理盐水,在各个时间点测定血凝块质量。结果兔动脉血实验数据结果显示,25 U/ml组(=8.496 mg)的溶凝质量明显低于50 U/ml组(=28.770 mg)、100 U/ml组(=38.904 mg)、200 U/ml组(=34.080 mg)、300 U/ml组(=28.324 mg),组间比较,差异有统计学意义[(B、C、D、E)>LSR_(0.05),P<0.05],而后4组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。用药时机和溶凝时间对溶凝质量的影响,组间比较,差异均无统计学意义(F=0.62,P>0.05;F=1.44,P>0.05)。结论纤溶酶溶凝的最佳有效浓度为50 U/ml,延迟16 h用药不影响溶凝效果,溶凝2 h足以发挥作用。