视网膜母细胞瘤细胞系SO—Rb50瘤细胞Rb基因突变动态变化研究

目的：研究SO－Rb50细胞系瘤细胞Rb基因突变的动态变化。方法：1．用Southern blot杂交法分析SO－Rb50细胞系第327代瘤细胞DNA。2．用PCR－SSCP法对SO－Rb50细胞系第415代及第713代瘤细胞的Rb基因27个外显子和1个启动子逐个筛查。3．将SO－Rb50细胞系的第775代克隆出3个细胞株：MC2、MC3及MC4。用PCR－SSCP－HA法对MC2、MC3及MC4第11代细胞和MC3第138代细胞的Rb基因的27个外显子逐个筛查。结果：SO－Rb50细胞系第327代细胞DNA缺失3．5Kb、2.9Kb及1.0Kb的三条带,证明SO－Rb50细胞系瘤细胞Rb基因缺失。第415代瘤细胞Rb基因第23外显子少一条单链;第713代第25外显子发生新的突变。SO－Rb50细胞系第775代的3个克隆株MC2、MC3及MC4的第11代细胞,只有MC4第24外显子突变;而MC3第138代第24外显子突变,提示MC3经多次传代后第24外显子发生新突变。结论：SO－Rb50细胞系在长期培养传代过程中,瘤细胞的Rb基因突变有动态变化。     

SO-Rb 50克隆株生物学及分子生物学特性动态观察

目的 研究SO-Rb50细胞系三个克隆株MC 2、MC 3、MC 4第11代和MC 3 -138代染色体畸变的差异及Rb-1基因突变的情况。 方法 对SO-Rb50建立的三个克隆细胞株第11代进行G-显带核型分析;用常规方法抽提三个细胞株的第11代和MC 138代基因组DNA,用PCR联合SSCP法,逐个外显子筛查其Rb1基因编码区及启动子。 结果 1. 三个克隆株细胞的染色体数目和结构均有异常,出现不同类型的染色体畸变,13号染色体畸变仅见于个别核型且在三个克隆株中畸变情况不同。发现5个标记染色体M1,M2,M3,M4和M5,其中标记染色体M1出现频率最高,是由1号染色体长臂部分重复构成［t(1;１)qter-p35∷124-ter］。M4和M5为2号染色体的变化,是在该细胞系染色体变化动态研究中首次发现。2. 外显子24的SSCP电泳结果显示,MC4-11代细胞第2条单链泳动率比正常对照标本增快,单链数相同;MC4-138代细胞比对照多一条链。 结论 SO-Rb50细胞系至少存在两个不同克隆株,同一克隆株不同代数的细胞生物学特性有动态变化。13号染色体的畸变不是RB发生的唯一原因;1号染色体的变化与本细胞系的永生关系密切,其与RB发生、发展的关系值得深入研究。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 146-148)     

视网膜母细胞瘤细胞系HXO—Rb44的建立及其生物学特性的检测

对２２例眼球摘除的视网膜母细胞瘤取材进行本外培养，从中建成一个连续细胞系（ＨＸＯ－Ｒｂ４４），在体外已生存近２１个月，传至１８０代，生物学特性显示其在外悬浮生长，排列成团状或链状，群体倍增时间为４４小时，细胞形态，免疫组化与原实体瘤相似，染色体为非整倍体，为数为６０条，在双层软琼脂上可形成克隆，具有较强的异体致瘤性。     

视网膜母细胞瘤细胞系HXO—Rb44抑癌基因的表达

目的检测视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞系ＨＸＯＲｂ４４中抑癌基因Ｒｂ的表达状况,为进一步研究ＲＢ的发病机制,利用抑癌基因Ｒｂ进行ＲＢ的基因治疗提供实验依据。方法用ＳＰ免疫组织化学（ＩＨＣ）及流式细胞术（ＦＣＭ）间接免疫荧光法对Ｒｂ基因的表达进行定性、形态学定位及定量检测。结果ＩＨＣ法检测显示：正常视网膜组织中Ｒｂ蛋白呈阳性反应,位于细胞核呈棕黄色;ＨＸＯＲｂ４４中Ｒｂ蛋白表达阴性。ＦＣＭ检测显示：正常人淋巴细胞Ｒｂ蛋白表达量是ＨＸＯＲｂ４４细胞的３．７１倍,ＨＸＯＲｂ４４中Ｒｂ蛋白表达量极低。结论ＲＢ细胞系ＨＸＯＲｂ４４中存在野生型Ｒｂ基因的功能失活,Ｒｂ基因的突变失活与ＲＢ的发生密切相关。     

人视网膜母细胞瘤SO-Rb_(50)细胞系单克隆方法探索

目的:为了使培养细胞的遗传性状、生物学特性相似,利于多种实验研究,而对视网膜母细胞瘤SO-Rb_(50)细胞系进行克隆。方法:用多孔塑料板克隆细胞法,对SO-Rb_(50)细胞进行克隆及分离培养。结果:没有菊花团形成的Rb细胞克隆成功,而有菊花团的Rb细胞、连续三次克隆均不能成功。结论:提示分化好的Rb细胞难以克隆成功。眼科学报 1996;12:79—82。     

视网膜母细胞瘤细胞系HXO—Rb44化疗敏感性及多药耐药性研究

对视网膜细胞瘤细胞系ＨＸＯ－Ｒｂ４４进行１１种不同类抗癌药物的敏感性测试，显示该细胞系存在多药耐药现象，该细胞系在手术取材前及培养过程中，未接触过任何抗癌药物，提示这种多药耐药现象为该肿瘤细胞固有的。本研究为进一步探索视网膜母细胞瘤的化疗抗性，寻找新的抗癌靶点提供了理论依据。     

视网膜母细胞瘤细胞株SO—RB50中生存素的表达

目的研究凋亡抑制因子生存素（survivin）在视网膜母细胞瘤细胞株SO-RB50中的表达。方法收集培养的SO-RB50细胞,通过RT—PCR、Western blot和免疫组织化学法检测SO-RB50细胞中survivin mRNA和蛋白的表达情况。免疫组织化学法检测survivin在正常视网膜组织中的表达。结果SO-RB50细胞中可检测到survivin mRNA和蛋白的表达,免疫组织化学检测显示survivin在SO-RB50细胞核和细胞浆中均有表达。正常视网膜组织中未见survivin表达。结论Survivin参与了视网膜母细胞瘤的发病。     

108例视网膜母细胞瘤Rb基因突变的特征

目的；研究RB患者肿瘤及体细胞内Rb基因的存在状态、细微结构、Rb基因突变的特征、起源与传递。 方法；DNA分子杂交、SSCP分析、DNA序列测定。结果：108例RB肿瘤标本中80例(?4％)存在Rb基因点突变，其中44例为纯合型，20例有二个独立发生的杂合型点突变，16例只检出一个杂合型点突变。通过对比分析RB患者肿瘤与白细胞DNA、RB患者家庭成员白细胞DNARlo基因的结构，揭示了Rb基因点突变的起源与遗传特征。 结论：Rb基因是与RB肿瘤形成关系最为密切的基因。RB肿瘤发生需二次突变事件导致Rb基因的二个等位基因失活，第一次突变事件突出表现为点突变；第二次突变事件主要是LOH，其次是点突变。 （中华眼底病杂志，1997，13：12-16）     

Dynamic Investigation on Chromosome Aberration of a Human Retinoblastoma Cell Line SO-Rb_(50)

G-banding and karyotype analyses of cells in seventeen passages of SO-Rb_(50) during a long period of culture for about four years were performed. Three chromosome markers 13q14~-, 1p36~+ and 12p13~+ were found. Cells possessed 13q14~- reduced to zero after the 200th passage while 1p~+ and 12p~+ cells increased to 100% after 30 and 200 passages respectively. Abnormal chromosomes, ring chromosomes, chromosome radiuses and double minutes were also observed. These chromosomal changes were more often seen before the 200th passage. The significance of these changes are discussed.     

MTT法检测骆驼蓬总碱对视网膜母细胞瘤细胞株细胞毒性作用

目的:利用我室建立的视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb_(50)和SO-Rb_(70)探索MTT法用于悬浮生长的RB细胞的有关因素,及骆驼蓬总碱对这两个瘤细胞株体外抑制作用。方法:分别测试瘤细胞数与OD值(光密度值)的关系,MTT作用时间与OD值的关系,及结晶物经DMSO(二甲基亚砜)溶解后的稳定时间,并用MTT法检测了骆驼蓬总碱对这两个瘤细胞株体外抑制效果。结果:这两个瘤细胞株活细胞数量与OD值成正比,MTT作用时间在12小时内OD值渐增加,结晶物经DMSO溶解后的稳定时间为11小时。骆驼蓬总碱作用于SO-Rb_(50)瘤细胞48和72小时的IC50值(μg/ml)分别为10.66和4.82;作用于SO-Rb_(70)瘤细胞48和72小时的IC50值(μg/ml)分别为6.37和4.2。结论:MTT法可用于悬浮生长的Rb细胞,骆驼蓬总碱对SO-Rb_(50)和SO-Rb_(70)瘤细胞有明显的抑制作用。眼科学报 1996;12:83—87。     

Detection of Tumor Suppressor Gene and Oncogene in SO-Rb_(50) Human Retinoblastoma Cell Line

Retinoblastoma (Rb) is the most common malignant‘cancer of eye. So-Rb_(50) is the first Rb cell line established in China in 1988. It has passed to the 387th passage now. We collected cells of the 327th passage of SO-Rb_(50), purified its genomic DNA and detected it with Rb and c-myc cDNA probes respectively (normal human white blood cells DNA was the control). We found the Rb gene was deleted while c-myc gene was amplified three times. This provides a basis for further study of the regulation of tumor ...     

视网膜母细胞瘤SO—Rb70细胞系的建立及液氮冻存和复苏

目的:建立新的人视网膜母细胞瘤细胞株,对其进行冻存和复苏,为临床、科研提供Rb细胞库。方法:用精确优化的取材,不经离心,直接通过洗涤吹打细胞后接种,并根据慢冻速融的细胞冻存原则,定期收集建株的Rb_(70)细胞作液氮冻存及复苏。结果:成功建立SO-Rb_(70)细胞株,共冻存8批细胞,进行了6次复苏实验,4次获成功。结论:经液氮冻存的人Rb_(70)细胞,复苏后生长良好,保持了细胞原有的生物活性及细胞特征,为Rb的深入研究提供了丰富的实验研究材料。眼科学报1998;14:80—82。     

Characteristics of an Established Retinoblastoma Cell Line HXO—Rb44

Purpose: To study the retinoblastoma cell culture and to establish a new retinoblastoma cell line.Methods: 22 retinoblastomas were cultured by using the method of single cell suspension. Characteristics of the cultured cells were studied in the following programs: tumor cell morphology in vitro, electron microscopic, growth curve, cloning in soft agar,immunohistochemistry,karyotype and tumorigenicity. Results: 22 retinoblastomas were cultured successfully in vitro,only a continued cell line HXO-Rb44 was established (more than 3 years). The characteristics of this cell line are that it grew as a suspension of round cell in graps like clusters in vitro, its population doubling time was 44 hours,and it could be cloned in soft a-gar. Histopathologic and ultrastructured pictures showed the characteristics of Rb. HXO-Rb44 cell was positive to NSE and negative to GFAP in immunohis-tochemical staining. A subcutaneous injection of HXO-Rb44 cells produced a retinoblastoma in BALB/C athumic nude mice.Conclusions:     

Clinical Presentation and Outcome of Retinoblastoma among Children Treated at the National Cancer Institute (NCI) in Gezira,Sudan: A single institution experience

Background: Retinoblastoma (RB) is a rare and unique cancer that affects the eyes of very young children. There are few reports on RB in Sudan.

Materials and Methods: We performed a retrospective study of data from patients diagnosed with retinoblastoma between January 1999 and December 2009 at the National Cancer Institute in Gezira (NCI-Gezira).

Results: Of the 519 cases of childhood cancer treated at NCI-Gezira during the study period, 25 (4.8%) were retinoblastoma. Of these 25 patients with retinoblastoma, there were 13 boys and 19 cases were unilateral. The median age at diagnosis was 36 months (range, 8–60 months). The disease was localized in 9 patients, regional in 5 patients, and metastatic in 11 patients. The most frequent symptoms were enlarged eye (n?=?14) and leukocoria (n?=?8). Nine patients (36%) have been lost to follow-up; 9 were alive at last follow-up (7 in remission, 2 progressed); and 7 have died (5 from disease and 2 from unrelated causes). Twenty-two eyes were enucleated in 16 patients (6 bilateral and 10 unilateral). Pathologic examination of the enucleated eyes could only be completed in 11 patients. Diagnostic imaging in the form of computerized tomography scans or ultrasonography of the brain and orbit was done for 10 patients (40%).

Conclusions: Although these findings are not surprising, and similar to reports from other developing countries, we hope our work will provide a foundation for strategies to improve outcome for retinoblastoma in our center such as proper training, public awareness, team approach, and twinning.     

视网膜母细胞瘤增殖细胞核抗原表达的研究

目的 :探讨增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)在视网膜母细胞瘤 (retinoblastoma ,Rb)中的表达及其与Rb病理类型和侵犯视神经情况的关系。方法 :用免疫组化技术检测PCNA在 3 7例Rb组织标本中的表达 ,并应用多功能真彩色病理图像分析系统 (CMIAS系列 )来分析PCNA染色的阳性细胞个数 ,采用积分光密度值定量分析其增殖指数 ,并将各指标进行SPSS统计软件相关性分析。结果 :本组 3 7例Rb标本中PCNA的阳性表达为 97 3 0 % ,而在 2例正常视网膜组织内 (对照组 )的表达均为阴性。PCNA的表达水平与Rb不同的分化、增殖程度有显著的统计学差异 (P <0 0 1) ,Rb侵犯视神经情况越严重、分化程度越差 ,PCNA的表达越强。结论 :Rb中PCNA的高表达可作为判断Rb恶性及其程度的新型标记物。PCNA与Rb分化类型、视神经侵犯情况密切相关 ,为PCNA表达水平反映Rb分化程度和增殖能力提供理论依据     

三硝基甲苯眼部中毒的调查分析

调查了137名从事TNT作业工人,查出TNT性白内障64人,合并有外眼异常改变者19人,未见明显的全身中毒及与TNT有关的眼底病变.文中还通过对不同工龄、年龄、工种、性别和作业环境中TNT浓度,分析了TNT性白内障的发病率、发病机制,在预防方面提出了建议.同时对国家标准中三期白内障在诊断重度TNT中毒的问题提出了自己的看法.