非小细胞肺癌p16基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）ｐ１６基因突变的情况,本研究应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织中ｐ１６基因外显子２的突变情况,现将结果报告如下。１　材料与方法２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织及同一病例非肿瘤肺组织均为住院病例手术切除标本,并经病理证实。按常规方法提取ＤＮＡ。ＰＣＲ反应在ＰＥ９６００热循环仪中进行,扩增ｐ１６基因第２外显子,引物序列：　　ＰＳ１：５′－ＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＴＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣ－３′ＰＳ２：５′－ＴＣＴＧＡＧＣＴＴＴＧＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＧ－３′循…     

bcl-2反义基因调控对人宫颈癌裸鼠移植瘤体内治疗的探讨

ｂｃｌ－２基因与宫颈癌关系密切，本研究采用回体转移法（Ｅｘ ｖｉｖｏ）和活体直接转移法（Ｉｎ ｖｉｖｏ）观察反义ＯＤＮ及反义ＲＮＡ作用于移植瘤的治疗效果。１材料与方法１．１一般资料 硫代磷酸修饰ｂｃｌ－２脱氧寡核苷酸（上海生工生物工程有限公司），反义链（ＡＯＤＮ）５＇－ＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴＣＣＴＴＣＣＣ—３＇；无义链（ＮＯＤＮ）５＇－ＴＣＧＣＣＡＣＴＣＧＡＴＣＣＴＧＣＣＣＧ—３＇。含反义 ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ部分序列（６２２ｂｐ）的质粒ｐＤＯＲ－ＡＢ（７．１２ｋｂ）由第四军医大学王成济教授惠赠…     

小鼠Egr-1基因启动子的克隆及其辐射诱导基因表达

目的：研究克隆小鼠Ｅｇｒ－１基因启动子及其辐射诱导基因表达特征。方法：用合成的一对引物,以ＢＡＬＢ／ｃ小鼠基因组为模板,扩增出４４９ｂｐ大小含６个ＣＣ（Ａ／Ｔ）６ＧＧ基序的序列,通过亚克隆技术分别将其插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡ测序载体和ｐＨＧＦＰ－Ｓ６５Ｔ报告载体中,利用测序载体对克隆的ＤＮＡ序列进行分析。报告质粒载体经Ｌｉ－ｐｏｆｅｃＴＡＭＩＮＥ脂质体介导转染ＣＯＳ－７细胞后给予γ射线照射或Ｈ     

绿茶儿素对于人肝癌细胞的凋亡诱导作用

目的：探讨绿茶儿茶素（ＣＴＣ）对ＢＥＬ－７４０２人肝癌细胞的凋亡诱导作用。方法：应用透射电镜、流式细胞术、ＴＵＮＥＬ和免疫组化等方法检测受１００或２００ｕｇ／ｍｌＧＴＣ作用４天后的ＢＥＬ－７４０２细胞的凋亡情况及其ＰＣＮＡ、ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ、ｐ５３蛋白表达情况。结果：受ＧＴＣ作用４天后的ＢＥＬ－７４０２细胞的凋亡显著性增加,其ＰＣＮＡ表达显著性下降,而与凋亡相关的癌基因ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ     

HDAC2 cDNA的克隆及在酵母细胞中的表达

目的：研究的目的为获得ＨＪＣＡＣ２的ｃＤＮＡ及构建酵母双杂交系统中的靶基因。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从人ＨｅＬａ细胞中扩增出一约１．５Ｋｂ的ＤＮＡ片段,全自动测序后, 组人ｐＬｅｘＡ载体,构建成ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ２,用醋酸锂法转化醇母菌ＥＧＹ４８（ｐ８ｏｐ－ｌａｃＺ）。结果：结果显示,获得的１．５ＫＢ的Ｄ 段碱基序列与文献报道的ＨＤＡＣ２的ｃＤＮＡ一致。ｐＬｅｘＡ－ＨＤＡＣ２转化ＥＧＹ４８（     

CpG-ODN对树突状细胞的分化成熟的影响

目的：探讨ＣｐＧ－ＯＤＮ对小鼠骨髓来源的树突状细胞（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ,ＢＭＤＣ）分化成熟的影响。方法：利用合成的含非甲基化ＣｐＧ基序的寡核苷酸（ＧｐＧ ｍｏｔｉｆ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＣｐＧ－ＯＤＮ）,通过酶切鉴定ＤＮＡ制品ＣｐＧ基序甲基化程序,ＦＡＣＳ分析ＤＣ表型和内吞作用的变化,ＥＬＩＳＡ检测ＤＣ培养上清     

TUMOR NECROSIS FACTOR－α ALTERS PROTEINMETABOLISM AND CELL－CYCLE KINETICSIN MALIGNANT TUMOR

ＴＵＭＯＲＮＥＣＲＯＳＩＳＦＡＣＴＯＲ－αＡＬＴＥＲＳＰＲＯＴＥＩＮＭＥＴＡＢＯＬＩＳＭＡＮＤＣＥＬＬ－ＣＹＣＬＥＫＩＮＥＴＩＣＳＩＮＭＡＬＩＧＮＡＮＴＴＵＭＯＲＹｅＳｈｅｎｇｌｏｎｇ叶胜龙；ＴａｎｇＺｈａｏｙｏｕ汤钊猷；ＢｒｕｃｅＲＢｉｓｔｒｉａｎ...     

全反式维甲酸激活的人肺腺癌细胞基因的筛选

筛选人肺腺癌细胞中全反式维甲酸（ａｌｌｔｒａｎｓ－ｒｅｔｉｎｏｃｉａｃｉｄ，ＡＴＲＡ）激活表达的基因。方法以我室构建的ＡＴＲＡ诱导前后人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２的ｃＤＮＡ文库Ｌｉｂ．ＧＬＣ－８２，Ｌｉｂ，ＧＬＣ－８２．ＲＡ１，Ｌｉｂ，ＧＬＣ－８２．ｒａ４ＦＪＴＦ     

环境致癌(突变)物和药物代谢相关的人细胞色素P450 cDNA的克隆和转基因细胞系的建立

目的：建立环境致癌（突变）物和药物代谢相关的人细胞色素Ｐ４５０１Ａ２,２Ａ６,２Ｅ１,３Ａ４ｃＤＮＡ的克隆和转基因细胞系。方法：从人肝组织中提取总ＲＮＡ,用逆转录酶生成ｃＤＮＡ。以各个ｃＤＮＡ编码序列两端设计引物,ＰＣＲ扩增各个人细胞色素Ｐ４５０基因的ｃＤＮＡ,并将其连接到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ－Ｔ或ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,通过内切酶图谱分析及全序列测定,再将该ｃＤＮＡ片段重组于哺乳动物细胞表达质粒ｐＲＥＰ９。用改良磷酸钙共沉淀法转入ＣＨＬ细胞中,通过Ｇ４１８抗性筛选,扩大培养。提取细胞的Ｓ９组分,…     

HSP90β蛋白低调肿瘤细胞系的建立 *

目的：通过转染ＨＳＰ９０β反义核酸重组子ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０于４株人消化系肿瘤细胞系,以建立ＨＳＰ９０β蛋白低调肿瘤细胞系,并研究ＨＳＰ９０β蛋白低调后细胞的生长情况。方法：用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导将ｐｅＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ７４０２及人食道癌细胞系Ｅｃ１０９,用Ｇ４１８进行筛选,用ＲＮＡ酶保护分析法鉴定ＨＳＰ９０β反义核酸的表达,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ＨＳＰ９０β蛋白的表达。用细胞生长曲线研究基因转染细胞的生长情况。结果：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１,ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９有ＨＳＰ９０β反义ＲＮＡ表达,这些细胞ＨＳＰ９０β蛋白表达低调。研究还发现这些细胞的生长受到不同程度的抑制,其中ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ及ＡＨ－Ｅｃ１０９细胞受抑程度更明显。结论：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１,ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９　ＨＳＰ９０β蛋白表达降低,细胞的生长受到不同程度的抑制。     

p14ARF基因抑制肿瘤细胞增殖的研究

目的：从正常人肝细胞系Ｌ０２细胞中扩增人的肿瘤抑制基因Ｐ１４＾ＡＲＦ,以研究其对人的多种肿瘤细胞生长的影响。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从培养的下沉人肝细胞系Ｌ０２细胞中扩增出０．４Ｋｂ的Ｐ１４＾ＡＲＦＣＤＮＡ片段,测序正确后郫具核表达载体ｐｃＤＮＡ３上的ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ位点,命名为ｐｃＤＮＡ３ＡＲＦ。此质粒同脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ＾ＴＭ介导转染肿瘤细胞Ｈｅｐ２、ＫＢ、ＫＢ－ｖ２０     

THE BLOCKING EFFECTS OF GLYCYRRHIZE URALENSIS AND CHELIDONIUM MAJUS ON MUTAGENESIS INDUCED BY AFLATOXIN B1

ＴＨＥＢＬＯＣＫＩＮＧＥＦＦＥＣＴＳＯＦＧＬＹＣＹＲＲＨＩＺＥＵＲＡＬＥＮＳＩＳＡＮＤＣＨＥＬＩＤＯＮＩＵＭＭＡＪＵＳＯＮＭＵＴＡＧＥＮＥＳＩＳＩＮＤＵＣＥＤＢＹＡＦＬＡＴＯＸＩＮＢ１ＳｈｉＧｕｉｚｎｉ；史桂芝；ＪｉＸｉｎｈｕａ；纪新华；ＬｉａｎｇＹ...     

反义c-fos寡脱氧核苷酸对淋巴瘤细胞株SAC-IIB2恶性表型抑制的研究

利用ＲＴ－ＰＣＲ克隆出共刺激分子人Ｂ７的全部编码ｃＤＮＡ，将其插入Ｅ１区替代的腺病毒载体ｐＡｘｌｃｗ，选择左向转录的ＣＤ８０重组腺病毒载体ｐＡｘｌｃｗ，ＣＩｈＣＤ８０，与经ＥｃｏＴ２２Ｉ酶切的Ａｄ５腺病毒ＤＮＧＡ－末端太复合物共转染２９３细胞，通过同源重组获得人ＣＤ８０的笔制缺陷性重组腺病毒，扩增到的病毒嘀度为４×１０＾９ｐｆｕ／ｍｌ．     

腺病毒介导的HSV-tk基因治疗对中枢神经系统的安全性研究

腺病毒介导ＨＳＶ－ｔｋ基因结合ＧＣＶ治疗能有效地治疗脑肿瘤［１,２］,目前应用的腺病毒载体在野生型病毒感染或宿主细胞中存在Ｅ１区序列提供反式激活的条件下,有产生野生型或有复制能力的回变病毒（ＲＣＡ）的可能性。另外,在腺病毒载体原位注射治疗肿瘤的过程中,是否会造成正常脑组织的损害？１ 材料与方法１．１ 材料 限制性内切酶、Ｔ４－ＤＮＡ聚合酶Ⅰ大片段（Ｎｅｗ Ｅｎｇ－ｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ公司）;ｄＮＴＰ,ＭＩＴ（Ｓｉｇｍａ公司）; ＤＭＥＭ,１６４０（ＧＩＢＣＯ公司）;Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ（ＧＣＶ,…     

八项生化指标检测对恶性肿瘤诊断的

对１５５例性肿瘤患者血清的ＧＧＴ，ＣＰ，ＬＤ，ＡＬＰ，α１－ＡＴ，ＡＦＵ，ＡＦＰ，ＣＥＡ进行测定，结果：α１－ＡＴ洞察除血液病比正常参考值低外，其它癌症组均高于正常参考值的上限，表明α１－ＡＴ测定适用于多癌症的检测。肝癌患者ＧＧＴ，ＣＰ，α１－ＡＴ，ＡＦＵ，ＡＦＰ活性显著升高，阳性率达５２－９１％。胰头癌除ＬＤ，ＣＥＡ，ＡＦＰ外其它５项指标升高显著，肺癌组ＣＰ，α１－ＡＴ，ＬＤ活性明显升高，阳性率     

人His6—IFNhγ／TNFβ（His6—γTNFβ）融合蛋白（包涵体）的 …

应用ｐＥＴ２８（含Ｔ７ｌａｃ启动子和Ｈｉｓｔ－ｔａｇ）质粒，将人γＴＮＦβ融合基因之组建成ｐＥＴγＬＴ表达质粒，并转化于Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）。本文对ｐＥＴγＬＴ／ＢＬ２１（ＤＥ３）工程菌的Ｈｉｓ６－γＴＮＦβ重组产物进行了诱导表达，分离纯化的研究。结果表明，该工程菌用ＬＢ培养基在３７℃扩增至ＯＤ５９０为０．５左右，加ＩＰＴＧ（终浓度为１ｍｍｏｌ／Ｌ）诱导５小时，此时Ｈｉｓ６－γＴＮＦβ的     

Basic Investigations EXPRESSION OF GAP JUNCTION PROTEIN Cx43 IN CULTURED HUMAN NORMAL AND MALIGNANT LUNG CELLS

ＢａｓｉｃＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＧＡＰＪＵＮＣＴＩＯＮＰＲＯＴＥＩＮＣｘ４３ＩＮＣＵＬＴＵＲＥＤＨＵＭＡＮＮＯＲＭＡＬＡＮＤＭＡＬＩＧＮＡＮＴＬＵＮＧＣＥＬＬＳＺｈａｎｇＺｈｉｑｉａｎ；张志谦；ＬｉｎＺｈｏｎｇｘｉａｎｇ...     

鼻咽癌中p53基因突变的研究

目的：探讨鼻咽癌中ｐ５３基因突变情况。方法：用非同位素不对称ＰＣＲ－单链构象多态性技术（ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ），分析了鼻咽癌活检组织、细胞株和裸鼠移植瘤中ｐ５３基因第５、６、７和８外显子（ｅｘｏｎ）的基因突变，并对其中ｅｘｏｎ８突变的ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１进行ＤＮＡ测序。结果：在２０例鼻咽癌活检组织中没有发现突变；但在鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２、ＳＵＮＥ－１和瘤株ＳＵＮＴ－１中存在第８外显子突变，而ＨＫ１为第５外显子突变。ＤＮＡ测序发现ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１的突变点在ｅｘｏｎ８的密码子（ｃｏｄｏｎ）２８０上，由ＡＧＡ（精氨酸）→ＡＣＡ（苏氨酸）。结论：ｐ５３基因突变热点的ｅｘｏｎ５、６、７和８可能在鼻咽癌变过程中没有重要意义，而在裸鼠移植瘤和细胞株建立过程中起重要作用。ＥＢＶ由于和鼻咽癌的关系密切，在鼻咽癌中可能存在ＥＢＶ编码蛋白与ｐ５３结合或蛋白表达被ＥＢＶ抑制等其他途径使ｐ５３失活。     

人胃癌细胞定向克隆表达cDNA文库的构建及鉴定

克隆胃癌的相关基因，方法，提取人胃癌细胞总ＲＮＡ，分离共ｍＲＮＡ。以ＮｏｔｔＩ／ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１２－１８为引物合成双链ｃＤＮＡ，除去小于４００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段后，连接ＥｃｏＲＩ接头，经ＮｏｔＩ酶酶切，插入定向克隆表达载体λＥｘｃｅｌｌＮｏｔＩ／ＥｃｏｒＲＩ／ＣＩＰ，体外包装后转染大肠杆菌ＮＭ５２２，构建了人胃癌细胞ＭＧＣ－８０３定向克隆表达ｃＤＮＡ文库。结果：文库含１．２＊１０＾６个重组子，     

多聚阳离子对非病毒载体转移效率的影响*

目的：制备Ｔ淋巴瘤ＴＣＲＶβ核酸疫苗。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出人Ｔ淋巴瘤细胞Ｊｕｒｋａｔ的ＴＣＲ　Ｖβ基因片段,并将其重组入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３。用重组表达载体转染ＳＰ２／０细胞,在ｍＲＮＡ水平上检测其表达。再用ｐｃＤＮＡ３和重组载体分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,收集抗血清,用免疫组化技术检测抗体产生情况。结果：扩增出ＴＣＲ Ｖβ的基因片段,测序结果证实其序列与已发表的一致。并构建出重组表达载体ｐｃＤＮＡ３－ＴＣＲ Ｖβ。该质粒转染到 ＳＰ２／０细胞,可在ｍＲＮＡ水平上检测到其表达。在用ｐｃＤＮＡ３－ＴＣＲＶβ免疫的小鼠抗血清中检测到抗Ｊｕｒｋａｔ细胞 ＴＣＲ Ｖβ的抗体。免疫组化结果表明,该血清不与表达 ＴＣＲγδ的人Ｔ淋巴瘤细胞发生反应,而与转染该基因的ＳＰ２／０细胞产生强阳性反应。正常小鼠血清与ｐｃＤＮＡ３免疫的小鼠血清与Ｊｕｒｋａｔ细胞不产生显色反应。结论：所制备的Ｔ淋巴瘤ＴＣＶβ核酸疫苗能有效地诱导机体产生体液兔疫反应。