建立引物双标记的 PCR- ELISA 法检测军团菌mip 基因

许多流行病学、临床观察和实验研究均表明，军团菌的早期诊断十分重要，虽然ＰＣＲ技术是一种早期、快速、敏感、特异的诊断方法，但临床应用尚有待于不断发展和完善。近年来随着对军团菌基因水平的深入研究以及ＰＣＲ及其相关技术的不断发展，为军团病的早期诊断提供了良好的契机。在众多的方法中，ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ法有望将ＰＣＲ技术发展为临床常规应用的诊断方法，而成为当今国内外临床医学研究的热点。本文拟建立一种新的检测嗜肺军团菌ｍｉｐ基因的引物双标记１　上海医科大学华山医院传染病学教研室（２０００４０）２　美国食物药…     

地高辛标记引物酶显色法检测HBV基因多态性及应用

目的　建立地高辛标记引物酶显色法 ,用于DNA芯片检测HBV基因多态性 ,并对实验条件进行优化。方法　用地高辛标记引物进行HBVDNA前C/C区和P区双重PCR ,制备含地高辛标记的DNA样品目的片段 ,并将目的片段杂交于含HBVDNA核苷酸序列野生型及突变型探针的DNA芯片上 ,用抗地高辛抗体 碱性磷酸酶进行显色 ,并转印于尼龙膜上 ,最后用光学扫描仪读取结果。结果　通过一次杂交反应同时获取HBVDNA前C/C区 (1896、1814 )、BCP区 (176 2、176 4 )和P区 (5 5 2 )位点的信息。杂交温度与时间为 4 2℃ 1h、酶作用和显色时间分别为 30min和 4 5min时结果较理想 ,采用高盐浓度洗涤获满意杂交信号 ,批内CV均在 15 %左右 ,敏感度为 2 .0× 10 3 拷贝 /ml。 5 0例乙型肝炎患者突变率 5 2 .0 % (2 6 / 5 0 ) ,以上各位点突变率分别为 34.0 %、2 2 .0 %、38.0 %、38.0 %、4 .0 %。结论　地高辛标记引物酶显色法用于芯片检测HBV基因常见位点多态性 ,简便易行 ,试剂成本显著降低 ,不需特殊设备 ,易于临床推广应用。     

双抗原夹心ELISA法检测类风湿因子

用辣根过氧化物酶标记的聚合人IgG,建立了一种测定类风湿因子(RF)的双抗原夹心ELISA 技术。实验结果提示此法是特异的、敏感的和可重复的。以P/N≥2.1为阳性,健康供血员(82例)、RA(40例)、SLE(29例)RF 的阳性率分别为4.8%、62.5%、17.2%;而其它病人(114例)为10.5%。     

引物特异性HCV基因分型检测方法的建立及应用

[目的]建立引物特异性HCVRNA基因分型的方法，并应用于临床诊断。[方法]采用型特异性引物建立单管逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和双管引物特异性套式聚合酶链反应（NEST-PCR）检测技术，1b和3a一管内扩增，1a、2a和2b一管内扩增，分别对147例HCV抗体阳性的标本，设计HCV的C区特异性引物，采用Trizol浓缩RNA进行双管巢式PCR分型。[结果]统计结果表明我国丙型肝炎流行主要以1b（Ⅱ）和2a（Ⅲ）2种基因型为主，但有部分1a、2b、3a的HCV感染者检出，其中1a为1．36％（2／147），1b为65．99％（97／147），2a为6．12％（9／147），3a为1．36％（2／147），1b／2a型混合占22．45％（33／147），1a／2b混合型为0．68％（1／147），未分出型或其它型者分别为2．04％（3／147）。[结论]本文建立的方法具有良好的特异性和敏感性，可同时区分5种HCV基因型，我国北方地区发现有1a和3a基因型感染病例。     

军团菌的流行病学标记

军团菌是感染性疾病军团病的病原菌,可表现为军团病(肺炎型)或庞城热,呈散发性,地方性或流行性。军团菌是一种无所不在的细菌,它存在于软水、空调系统的水、饮用热水或某些医疗器械中。自这些贮存     

基于三引物荧光PCR-毛细管电泳法的FMR1基因突变检测技术建立及其在自闭症辅助诊断中的应用

目的 对自闭症患者FMR1基因5'非编码区CGG重复序列及重复数进行检测,探索检测脆性X综合征的新方法. 方法 应用三引物荧光PCR-毛细管电泳法(Qseq100TM全自动核酸分析系统检测)对111例自闭症患者进行筛查,检测其FMR1基因5'非编码区CGG序列,计算CGG重复数,并与ABI 3500Dx基因分析仪毛细管电泳测序法进行结果比较验证. 结果 111例临床检测为自闭症的样本中,有2例为FMR1前突变携带者,一例为中间型.与3500Dx毛细管电泳测序结果一致. 结论 三引物荧光PCR-毛细管电泳法能够用来检测FMR1基因5'非编码区CGG重复序列,在脆性X综合征发病机制及大规模携带者筛查方面都具有一定的应用价值.     

双抗体夹心ELISA法检测血清CBV抗原

能致心肌炎的病毒较多,但以柯萨奇B 组病毒(CBV)最为常见,约占病毒性心肌炎的50%左右.因此,近几年对CBV 的研究渐多.一般采用检测患者双份血清抗CBV 抗体含量、病毒分离及     

ELISA双抗原夹心法检测梅毒的应用研究

梅毒是经输血(包括血制品)和性接触传播的一种传染病,其病原体是梅毒螺旋体,其危害性在性病之中仅次于艾滋病。目前国内外血站采用非特异性血清试验来筛选梅毒,国内常用的试剂盒：勾甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和快速血浆反应素试验环状卡片试验(RPR),主要是检测螺旋体在破坏组织时释放的一种抗原性物质——心拟脂刺激机体产生的具有抗体性质的反应素。     

双抗体夹心ELISA检测人胎儿血红蛋白体系的建立

目的建立一种定量检测人胎儿血红蛋白(HbF)的双抗体夹心ELISA方法。方法用抗人HbF单抗作为捕获抗体,加入待测抗原,检测抗体为兔抗人HbF多克隆抗体,最后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG。结果本检测体系灵敏度约为0.039μg/ml,测量范围0.039-24.66μg/ml,特异性强,重复性好,100份血标本的检测结果与高效液相色谱法结果符合率高。结论建立了一种可用于检测人外周血HbF的双抗体夹心ELISA方法,有望为临床上诊断某些与HbF有关的疾病提供帮助。     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立

目的建立检测肺炎支原体(MP)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨其临床应用的可行性。方法采用不同株MP单抗,用双抗体夹心ELISA检测MP抗原,优化该方法检测MP抗原的最佳实验条件。对MP标准株及147份临床标本进行测定,观察双抗体夹心ELISA的敏感性和特异性及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测的符合率。结果包被单抗量为20μg／ml,酶标记单抗1：200稀释时,阳性对照与阴性对照吸光度之比(P／N值)最大,检测MP抗原敏感度达2μg／ml,和其他支原体没有交叉反应;147份临床标本PCR检测阳性率13．6％(20／147),双抗体夹心ELISA检测阳性率12．2％(18／147),两者符合率达95．9％。结论建立的双抗体夹心ELISA检测MP抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立

目的　建立检测肺炎支原体(MP)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨其临床应用的可行性。方法　采用不同株MP单抗,用双抗体夹心ELISA检测MP抗原,优化该方法检测MP抗原的最佳实验条件。对MP标准株及147份临床标本进行测定,观察双抗体夹心ELISA的敏感性和特异性及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测的符合率。结果　包被单抗量为20μg/ml,酶标记单抗1∶200稀释时,阳性对照与阴性对照吸光度之比(P/N值)最大,检测MP抗原敏感度达2μg/ml,和其他支原体没有交叉反应; 147份临床标本PCR检测阳性率13. 6% (20 /147),双抗体夹心ELISA检测阳性率12. 2% ( 18 /147 ),两者符合率达95. 9%。结论　建立的双抗体夹心ELISA检测MP抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

用Dot-ELISA法检测军团菌抗体

由于直接从病人标本(痰、胸水、血液、支气管灌洗液等)分离军团菌进行诊断最为可靠,然而,进行细菌分离比较困难。因此,检测病人血清中的抗体是临床诊断军团病的主要手段。常用的血清学方法有间接荧光抗体检查法(IFA)、被动血凝试验(PHA)、试管凝集法、微量凝集法(MAgg)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。采用 Dot-ELISA 法检测军团菌抗体在我国尚未见报道。本文首次用 Dot-ELISA 法对一些诊断为军团病病例及部分健康人进行了嗜肺军团菌血清Ⅰ型抗体的检测,以考验本法的特异性和敏感性。材料和方法一、材料(一)载体:硝酸纤维素膜浙江黄岩人民化工厂生产。(二)LP_1家兔免疫血清(试管凝集反应效价1:2560～1:5120)和健康兔血清(效价<1:20)(三)可疑军团病病人血清50份,健康人血清20份,流脑病人血清3份,采自北京市某些医院。     

ELISA双抗原夹心法在血液检测中的应用

梅毒是由密螺旋体属苍白球细菌引起的传染性疾病 ,可经血液途径传播。梅毒螺旋体侵入机体后 ,产生两种抗体 :一种是特异性抗体 ,另一种是非特异性抗体。目前 ,国内各采供血机构大多采用血清学非特异性试验检测献血者梅毒抗体 ,主要有 TRUST法和RPR法。由于非特异性试验检测结果敏感性高而特异性较低 ,常出现假阳性和漏检[1] 。本站于 2 0 0 1年 6月～ 2 0 0 2年 1 0月 ,对 1 3465例街头无偿献血者应用 ELISA双抗原夹心法作为献血者血液的梅毒抗体复检试剂 ,初检试剂仍用TRUST法 ,并以梅毒螺旋体血凝试验 ( TPHA)作为确证试验 ,现将…     

PCR-荧光法与PCR-膜杂交法在检测HPV-DNA中的比较分析

目的比较并分析PCR-荧光法与PCR-膜杂交法在临床感染人乳头瘤病毒(HPV)中的检测结果,探讨其不同的应用价值。方法收集204例标本,分别采用PCR-荧光法与PCR-膜杂交法检测HPV-DNA,以细胞组织学诊断为标准分为未见上皮内病变或恶性病变(NILM)组(152例)、意义不明的非典型鳞状上皮细胞增生(ASC-H)组(27例)、鳞状上皮细胞低度病变(LSIL)组(21例)、鳞状上皮细胞高度病变(HSIL)组(2例)和宫颈鳞癌(SCC)组(2例)。比较各组患者HPV-DNA阳性率,通过统计学方法比较2种方法的差异性。结果 204例标本中PCR-荧光法检测阳性67例,阴性137例,阳性率为32.8%。PCR-膜杂交法检测阳性94例,阴性110例,阳性率为46.1%。细胞学诊断有异常细胞52例(25.5%)。NILM组患者2种方法检测HPV阳性率分别为12.5%、28.3%,差异有统计学意义(χ~2=11.670,P=0001);细胞异常组患者2种方法检测HPV阳性率分别为92.3%、98.1%,差异无统计学意义(χ~2=1.891,P=0.363);细胞异常组患者2种方法检测HPV阳性率与NILM组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 PCR核酸扩增检测HPV-DNA具有很高的特异性与灵敏度。在临床筛查诊疗中PCR-荧光法具有更高的应用价值,而在非高危性HPV检测领域和科研领域PCR-膜杂交法更具优势。HPV-DNA检测结合细胞组织病理学检查可提高HPV感染诊断的准确性与临床指导意义。     

ELISA双抗原夹心法与TRUST法检测梅毒抗体的比较

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema Pallidum, TP)感染引起的性传播性疾病,可侵犯全身多种器官,产生多种症状和体征,危害程度极高.梅毒可通过性传播、胎盘传播,也可经血液传播,因此,做好血液的梅毒安全性检查,提高梅毒的检出率对于控制梅毒蔓延极为重要.     

相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法的建立与评价

目的建立相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法并进行方法学评价。方法优化最佳相思子毒素多抗包被浓度后建立了相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法,鉴定其检测灵敏度、线性范围、特异性、重复性、回收率等。结果双抗夹心ELISA方法检测相思子毒素的最小检出限为1ng/mL,标准曲线在10～100ng/mL范围内线性良好。血清中加入已知量的标准毒素蛋白,测得平均回收率为89%。结论本方法检测相思子毒素的可测范围广、特异性强、灵敏度高、变异系数较小,表明其灵敏、特异、可靠。     

ELISA双抗原夹心法与TRUS法检测梅毒抗体的比较

梅毒是由梅毒螺旋体 ( Treponema Pallidum,TP)感染引起的性传播性疾病 ,可侵犯全身多种器官 ,产生多种症状和体征 ,危害程度极高。梅毒可通过性传播、胎盘传播 ,也可经血液传播 ,因此 ,做好血液的梅毒安全性检查 ,提高梅毒的检出率对于控制梅毒蔓延极为重要。本站应用 EL ISA双抗原夹心法试剂作为血液梅毒抗体的检测试剂 ,使检出率作者单位 :32 30 0 0　浙江省丽水市中心血站大为提高 ,现以 TPHA确诊试剂为参考 ,将 ELISA双抗原夹心法试剂与 TRUST法试剂检测梅毒及非梅毒血清标本的结果报告如下。材料与方法1　材料1 .1　试剂 :E…     

ELISA双抗原夹心法在梅毒检测中的重要性分析

梅毒是由苍白螺旋体(Treponemapallidum ,TP)感染引起的性传播疾病,也是血液传播性疾病之一。由于快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)和甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)为非特异性血清试验,敏感性与特异性有一定的局限性,在一期和晚期梅毒的阳性率只有5 3%～85 % [1] 。为保证血液质量,预防梅毒经输血传播,我们对初检TRUST阴性、复检酶联免疫吸附试验(ELISA)阳性标本做TP抗体血凝试验(TPPA) ,并对3种方法作一比较。一、材料和方法1.标本来源　2 0 0 1年10月～2 0 0 2年7月在本站无偿献血者ELISA检测阳性而TRUST检测阴性的标本,…     

氯霉素单克隆抗体ELISA检测方法的建立

目的 建立CAP间接和直接ELISA检测方法.方法 用重氮化法分别偶联氯霉素(Chloramphenicol,CAP)与BSA和OVA作为免疫原和检测原,腹腔注射8周健康雌BALB/c小鼠大量制备抗CAP的单克隆抗体并优化条件,建立了CAP的快速、灵敏、简便的直接和间接竞争ELISA方法.结果 两种检测方法的回归方程和相关系数分别为:y=-25.411x 97.041,R2=0.9889和y=-27.768x 103.91,R2=0.9889,线性范围分别为1.87-75ng/mL和0.93-25ng/mL,对CAP的最低检出浓度为0.97ng/mL和0.35ng/mL.并利用所建立的两种ELISA方法对鸡肉模拟样品进行了检测,其检测样品的回收率分别为98.607%,85.152%.结论 为下步CAP的试纸条或试剂盒建立提供基础.