利用杂交瘤建立三株分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体细胞的实验研究

以破伤风类毒素疫苗免疫Balb/c小鼠6次,每次间隔10—15天,末次免疫后三天取小鼠脾脏于铜网中研磨成单个细胞,按脾细胞与SP2/0瘤细胞的比值为10:1(脾细胞1.5×10~3,SP2/0瘤细胞为1.5×10~7)用50％PEG1000进行细胞融合,以Balb/c小鼠腹腔细胞为饲养细胞,于HAT培养液中将融合细胞分种于4块16孔大孔板(天津产)内,放入水封密闭的自制培养合中,充入5％Co_2混合气,37℃培养。培养5天后第一次换液,以后每3天观察换     

消化器癌新单克隆抗体KM01、KM02

日本神户大学医学部最近研制出消化器癌单克隆抗体两株,对胰癌的临床诊断有实用价值。免疫原用株化人类结肠癌细胞coLO201 10~8/PBS 5ml中,超声波处理破坏,15000g×30分离心,得细胞提取液。经Sepharose 4B过柱得高分子部,加等量福氏佐剂。免疫鼠每周一次,0.2ml.共5次。融合时以末次免疫4天后取脾,脾细胞与鼠骨髓瘤细胞P_3U_1按4∶1混合,按Galfre等方法融合,得两株分泌单克隆抗体细胞株,即KM_(01)和KM_(02)。     

狂犬病毒单克隆抗体的杂瘤细胞系的建立

《病毒学报》1985,1(2)105朱家鸿、曾毅报道,将感染狂犬病毒aG株(我国狂犬疫苗生产毒种)后发病的BALB/c乳鼠脑内病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞S_P2/0融合。融合率为95.7％(401/419),阳性克隆占26.8％,经克隆化后获得3株杂交瘤细胞,用免疫荧光、BLISA和双向免疫扩散试验证明,该3株细胞分泌抗狂犬病毒     

分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤细胞系

<正> 人绒毛膜促性腺激素(HCG)的免疫测定在妊娠诊断上有极其重要的作用。本工作目的是决定能否用单克隆抗体取代传统抗血清进行该项测定,为此我们进行了用杂交瘤技术制备抗HCG单克隆抗体的研究。 近交的BALB/c小鼠,以孕妇小便中提纯的HCG免疫,3天后,取脾细胞,与无分泌性的小鼠骨髓瘤细胞SP_2融合。聚乙二醇4,000为促触剂,融合率达100％。融合后10天,用HCG交联的胶乳作凝集试验,测定细胞培养上清液,阳性率为6％。取细胞生长好,阳性强的杂交瘤细胞克隆化四次以上,最后获得10个杂交     

北亚立克次体单克隆抗体的产生及用于我国斑点热立克次体的鉴定

本文报道以斑点热立克次体精河株全细胞抗原免疫BALB/c小鼠,取10~8免疫小鼠脾细胞与10~7 Sp 2/0小鼠骨髓瘤细胞用50％PEG 1000融合,以微量间接免疫荧光(Micro-IFA)检测抗体。本试验融合率为79.2％,抗体分泌阳性率为22.7％。选择抗体滴度较高的三孔进行扩大培养及克隆化,选出三株杂交瘤细胞1—2C_(12),1—2F_5和1—2C_5,其腹水单克隆抗体     

分泌旋毛虫McAb杂交瘤细胞株的建立

<正> 用旋毛虫肌幼虫可溶性抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞NS-1系融合,用50％的PEG(MW4,000)作融合剂,融合率达B2.8％。用ELISA间接法和环蚴沉淀试验检测培养上清,共获得抗体     

脊髓胆硷酯酶阳性神经元的分布

<正> 用体重200克左右的大鼠20只,每例于处死前6—8小时肌注DFP(氟二磷酸异戊丙酯)1.5—2mg/kg。然后用10％福尔马林生理盐水灌注,取脊髓及脊神经节,浸泡于含30％蔗糖缓冲液中过夜。冰冻切片,厚40微米,切片入下液孵化2小时(37℃)以显示胆硷酯酶:乙酰硫代胆硷碘化物14mg,     

分泌抗人A型、B型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立(摘要)

本实验分别采用洗涤过的10％正常人A型或B型红细胞悬液、或蒸馏水低渗法提取相当于50％压积红细胞膜抗原0.2～0.3毫升经腹腔或肌肉给8～10周龄BALB/c小鼠两次基础免疫,融合前三天再以0.1毫升上述抗原经尾静脉或脾内加强免疫一次。按常法取此种免疫鼠脾细胞1×10~8与骨髓瘤细胞(NSI或SP2/0)1×10~7在50％PEG(MW1000)、37℃下进行融     

制备抗线粒体单克隆抗体的初步结果

83年初自大鼠肝经蔗糖密度梯度差速离心法分离到形态典型的线粒体,聚丙烯酰胺电泳证明无杂蛋白及核酸,以此线粒体为抗原免疫Balb/c小鼠,腹腔及皮下共免疫4次,末次注射3天后取脾,制成7.6×10~6/ml细胞悬液,与SP2/0骨髓瘤细胞按1:4在50％PEG(分子量4000)溶液中进行融合,融合率为39％,由于后来霉菌污染,仅选了未污染并克隆好的孔上清液进行检测,从151孔中用ELISA法检出特异性抗体的6孔(弱阳性的2孔)计有2H_4,2H_5,2H_6,5C_5,2B_(11),6B_9,有9孔为分泌小鼠Ig的杂交瘤细胞,计有2H_4,     

用基因工程HBcAg制备抗-HBc单克隆抗体的研究

本文探索了用基因工程HBcAg研制抗-HBc单克隆抗体,获得成功。本文用基因工程HBcAg经单克隆抗-HBc制备的亲和层析柱进一步纯化后,免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0瘤细胞在50％PEG(MW 4,000)作用下进行杂交融合,经三次有限稀释克隆化后,选出一株分泌抗-HBc单克隆抗体杂交瘤细胞株,培养上清用兔抗鼠血清作双扩检测免疫球     

分泌抗日本血吸虫排泄分泌抗原McAb杂交瘤细胞株的建立

<正> 本文报道用日本血吸虫尾蚴感染家兔,45天后用灌注法收集成虫,置台氏液中于25℃培育24小时,收集培养液,离心后取上清,蒸馏水透析、冻干,以此排泄分泌抗原(ESA)免疫BALB/c小鼠,于加     

抗绿脓杆菌外毒素A单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立(简报)

本文采用绿脓杆菌国际标准产毒株PA-103株,纯化绿脓杆菌外毒素A。免疫BALB/c小鼠。免疫鼠血清效价经ELISA法检测达1∶80万。取脾脏混悬细胞10~8与10~7Sp2/0骨髓瘤细胞,用50％PEG(MW4000)融合。取有克隆生长孔上清液用ELISA法筛选分泌抗体阳性孔,再选阳性孔进行连续亚克隆。由于种种原因,在前七次融合中仅建系一株,在第八次融合中建系成功五株,共获得6株杂交瘤系,分别命名为PM_1,PM_2、PM_3,PM_4,PM_5。     

分泌肾综合征出血热病毒单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞系的初步建立

本文在己制备了HFRSV多克隆抗独特型抗体的基础上,又制备了HFRSV的单克隆抗独特型抗体,为HFRS的研究开辟了新的途径。 我们从HFRS病人血清制备了HFRSV特异性抗体(Ab_1),纯化后免疫BALB/c小鼠。初次免疫用Ab_1γ200μg加福氏完全佐剂乳化后腹腔注射.而后间隔两周以等量Ab_1γ加福氏不完全佐剂乳化后同法加强免疫。融合前再以100μg Ab_1γ静脉注射追加免疫,3～4天后供细胞融合使用。细胞融合取供体脾细胞与Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞按常规方法进行。融合12～15天后,用ELISA间接法检测培养上清中的抗独特型体。在制备McAb_2的     

仙台病毒的单克隆抗体Ⅰ.单克隆抗体制备及其特性

作者制备了12株抗仙台病毒单克隆抗体,并对其特异性、生物学功能和同种型等进行了研究。以100μg纯化的仙台病毒作为抗原加弗氏完全佐剂,腹腔注射Lou鼠,14和30天后分别以相同剂量的抗原加弗氏不完全佐剂再次注射,约10天后以放射免疫法(RIA)测试抗仙台病毒抗体滴度。取抗体滴度于1:200以上的Lou鼠,以200μg抗原加强免疫一次,4天后取其脾细胞与FO骨髓瘤细胞或Y3骨髓瘤细胞融合。经RIA筛选出     

细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)——用微量滴定板培养淋巴细胞7天后直接检查和半定量检查Ig阳性细胞

本文介绍检测免疫球蛋白阳性细胞(IpCS)的一种敏感ELISA技术。作者用5×10~3/mlTNP—SRBC 0.5ml免疫6—8周龄CBA系雌性小鼠,7天后取其脾(Sp)和肠集合淋巴结(Pp)分离淋巴细胞。用组织培养微量滴定板进行培养,分别加入LPS、LPS+ConA、SRBS进行刺激,培养7天后,做细胞ELISA检查IPC,并检查培养上清液Ig总量。细胞ELI-SA方法如下: 1、细胞培养7天后,取其上清液,保存于-20℃,每孔中加含0.05%吐温20的磷酸盐缓冲液(PBS/T)200±μl。在微量滴定板振荡器上振动30秒。2、然后用平板离心器800rpm离心10分钟,弃上清液后,37℃干燥30分钟。3、每孔加甲醇50μl,置室温固定5分钟,除去多余的甲醇,空气干燥微量板。     

615小鼠移植性肝癌(H615)中甲胎蛋白的检测(摘要)

甲胎蛋白(AFP)作为肝癌的肿瘤标志物已被公认,所以理想的肝癌模型亦应AFP阳性,本文探讨了我国自行培育的615小鼠移植性肝癌(H615)中血清及癌组织内AFP的存在情况。用埋块法接种H615于30只雄性615小鼠腋部皮下,在接种后73天,其瘤块最大横直径乘积为2.81±1.24cm~2时。自眼眶静脉丛取血,并取出肝癌,分别用抗615小鼠AFP单相抗血清与患瘤动物血清进行琼脂及对流电泳,其阳性率达80％,在另20例接种该瘤84天后的动物血清,经对流电泳检测其AFP全部阳性,定量结果为31306±16066ng/ml。肝癌组织用免     

自制复方中药汤剂灌胃对小鼠淋巴细胞转化率和巨噬细胞吞噬功能的影响

目的:观察自制复方中药汤剂对实验小鼠淋巴细胞转化率和巨噬细胞吞噬功能的影响。方法:取昆明小鼠40只,分为对照组、复方中药低剂量组(2.5mg/kg/天)、中剂量组(2.5mg/kg/天)和高剂量组(50mg/kg/天),连续灌胃给药15天后,采尾静脉血瑞氏染色观测淋巴细胞转化率,取腹腔液瑞氏染色观测巨噬细胞吞噬功能。结果:三种剂量复方中药均可明显提高淋巴细胞的转化率(与对照组比较,P<0.01)。各组巨噬细胞吞噬功能与对照组比较显著增强(P<0.01),且中剂量组明显高于低、高剂量组(P<0.05)。结论:复方中药汤剂灌胃对小鼠免疫功能有明显的调节和增强作用。     

近红外信息辐照对免疫抑制大鼠体液免疫功能的影响

本实验观察了近红外信息辐照(辐照)对免疫抑制大鼠体液免疫功能的调整作用。取大鼠54只随机分为三组:甲组各鼠腹腔注射环磷酰胺(CY,75mg/kg)和伤寒沙门氏菌鞭毛抗原(HAg,7×10~8菌体/只),同时各鼠每天全身辐照1h,共4周;乙组腹腔注射CY和HAg丙组仅腹腔注射HAg。结果甲、乙、丙三组于第四周末的存活率分别为83.3％、38.1％和66.7％(甲与乙组比较P<0.05);第四周末血清总IgG含量分别为141.4±17.6U/ml,120.3±16.6U/ml和117.0±22.9U/ml(甲组与其它两组比较P<0.01);第二周末抗H抗体效价分别为1:91.9、1:46.6和1:149.3(甲与乙组比较P<0.05;乙与丙组比较P<0.01)。结果表明,辐照对免疫功能低下的机体有增强免疫功能的作用。     

用前列腺素E_2治疗鼠免疫复合物型肾小球肾炎:免疫复合物沉积、抗体形成和肾小球损伤与剂量关系

许多研究已证明,前列腺素(PGE)对SLE 鼠模型的免疫复合物型肾小球肾炎。(ICGN)有很好的治疗效果。然而,人们还了解PGE对这种鼠模型作用的准确机制。为了解PGE_2如何缓解鼠的免疫复合物型肾小球肾炎的发展,作者对用阿朴铁蛋白制造鼠的ICGN模型进行了实验。实验共分6组。每组10只鼠。第一组每日腹腔注入4mg 阿朴铁蛋白。第2—5组每日注射4mg阿朴铁蛋白,同时每日两次(Bid)皮下分别注射PGE_2 200μg、100μg、50μg、25μg。第6组每日注射0.2ml盐水于腹腔中。注射进行4周。在注射前、注射后2周、4周,采鼠24小时尿,测定其尿蛋白。在末次注射4天后处死小鼠,收集血清,测定抗阿朴铁蛋白抗体;取其肾脏制备     

抗兔出血症病毒单克隆抗体的研究

本文利用兔出血症病毒(RHDV)感染发病兔肝组织液,经高速离心提取病毒抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞和Sp2/0细胞融合,接种24孔板融合率为100％,96孔板融合率为42％,经ELISA试验测定分泌抗体阳性率分别为35％和10％,选其一株进行3次克隆并连续传代2月余,经酶联检测分泌McAb性能稳定。杂交瘤细胞培养上清液滴度为1:40～1:80,小鼠腹水单抗为1:1600～1:3200,Sp2/0细胞培养上清液,正常鼠血清对照为阴性。同时利用腹水McAb