对LPS诱导的急性肺损伤幼鼠肺组织SP-A变化的研究

目的：SP-A在维持肺表面活性物质（PS）功能和肺局部免疫功能方面起着重要作用。该文旨在探讨急性肺损伤（ALI）时肺组织SP-A随时间的变化规律。方法：无病原体的21日龄Sprague-Dawley幼鼠110只被随机分为正常对照组和ALI组（每组又分为6个亚组）。腹腔注射脂多糖（LPS，4 mg/kg）建立ALI模型，正常对照组注射等量生理盐水。LPS注射后6，12，24，36，48和72 h每亚组各处死8只大鼠。 用Western blot方法测定肺组织SP-A的相对含量。结果：与正常对照组相比，ALI时肺组织SP-A的变化在12 h内无明显变化(P＞ 0.05)； 在24 h 至48 h处于上升阶段（P＜ 0.01）， 于36 h达最高点（6.94±0.80）；到72 h时SP-A下降(P＜0.01)。结论：肺组织SP-A在LPS诱导的ALI中的变化为时间依赖性。肺组织SP-A一过性升高，表现出SP-A在某种程度上的代偿能力较强。     

抗氧化剂对急性肺损伤大鼠肺表面活性物质的影响

目的 探讨急性肺损伤(ALI)时血中中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、肺组织肺表面活性物质蛋白A(SP-A)的变化及抗氧化剂的影响效应.方法 健康、成熟Wistar大鼠60只随机均分为2组,模型组和治疗组,2组均以大肠杆菌腹腔注射建立ALI动物模型.治疗组在注射大肠杆菌30 min后,经大鼠尾静脉注射还原型谷胱甘肽.分别于注射大肠杆菌后3、6、12 h测定血中NE及肺组织SP-A的变化.结果 模型组注射大肠杆菌后3 h出现ALI症状,6 h更为明显,12 h口吐粉红色分泌物.肺组织大体病理检查可见双肺有明显水肿及出血点.治疗组3h无明显变化,6h呼吸稍促,12h肺组织仅轻度水肿.治疗组3、6、12 h测得血中NE水平低于模型组,在6、12 h差异有显著性(P<0.05);3、6、12 h测得肺组织SP-A阳性表达细胞数均高于模型组,差异均有显著性(P<0.05).结论 ALI时肺表面活性物质功能失常是继发性变化,其中原因之一就是SP-A被降解,应用抗氧化剂--还原型谷胱甘肽后可有效抑制NE分解细胞外基层弹性蛋白、破坏表面活性蛋白的作用,对ALI具有保护效应.     

急性肺损伤新生大鼠血清及支气管肺泡灌洗液CC16的变化及意义

目的 探讨急性肺损伤(ALI)早期Clara细胞蛋白CC16的变化及意义.方法 70只健康新生SD大鼠随机分为无菌生理盐水对照组(NS组)及内毒素急性肺损伤组(LPS组,又按注射LPS后处死时间分为7个亚组).LPS组新生大鼠经腹腔注射5 ms/kg LPS,注射后按时间点收集肺组织标本行病理学观察及测定肺湿/干重比值,并收集血清.另取70只健康新生SD大鼠按上述方法分组(NS组及LPS组),收集支气管肺泡灌洗液(BALF),以双抗体夹心ELISA法检测血清及BALF中的CC16含量变化.结果 LPS注射0.5 h后新生大鼠即出现针尖样肺出血,随着时间延长,从局灶性向弥漫性发展;注射2、4 h新生大鼠肺湿/干重比明显增高,差异有非常显著性(P＜0.01),之后回落;BALF中CC16水平在注射LPS后迅速下降,各时点较NS组差异有非常显著性(P＜0.01);血清中CC16水平较NS组上升.以LPS 4 h达高峰,8、16 h组较前下降,但较NS组差异仍有非常显著性(P＜0.01).结论 ALI早期BALF与血清CC16浓度即发生改变,BALF中CC16下降,血清中CC16上升,血清CC16浓度与肺泡上皮及血管内皮完整性相关,血清CC16可作为早期诊断ALI的外周性生物学标志物.     

氢化可的松对内毒素致急性肺损伤大鼠多形核白细胞氧自由基释放的影响

目的　　观察氢化可的松 (6mg/kg)对内毒素致急性肺损伤 (ALI)大鼠多形核白细胞(PMN)释放氧自由基 (OFR)及肺部病理改变的影响 ,探讨激素在ALI中发挥作用的可能机制。方法复制大鼠ALI模型 ,随机分为空白组、内毒素组 (LPS组 )、氢化可的松组 (HC组 ) ,空白组于注药后 6h、LPS组和HC组分别于注药后 2、4、6h抽血检测OFR释放 ,同时比较各组间肺组织病理改变。结果　(1)LPS组大鼠肺病理符合ALI表现。 (2 )OFR释放 3组比较有差异显著意义 (P <0 0 1) ,LPS组较空白组明显增强 (P <0 0 5 ) ,并在观察时间内 (2～ 6h)不断升高。HC组在各时点较LPS组均明显降低(P <0 0 5 ) ,在 4h抑制作用最明显 ,达 98 2 %。 (3)肺病理半定量评分 ,3组间差异有显著意义 (P <0 0 1)。与空白组相比 ,LPS组与HC组评分均显著升高 (P <0 0 5 )。而与LPS组相比 ,HC组病理评分显著降低 (P <0 0 5 )。结论　在LPS诱导ALI大鼠模型中 ,OFR大量释放在ALI发病中起了重要作用 ,6mg/kgHC可使肺损伤改善 ,同时对OFR释放可产生明显、持续的抑制 ,提示HC对ALI起保护作用 ,机制可能是通过抑制PMN释放OFR而实现     

急性肺损伤新生大鼠肺组织水通道蛋白5的变化及意义

目的 探讨早期急性肺损伤(ALI)肺组织水通道蛋白5(AQP 5)的变化及意义.方法 70只新生SD大鼠随机分为生理盐水对照组及内毒素(LPS)急性肺损伤组(LPS组,7个亚组).LPS组新生大鼠腹腔注射5 mg/kg LPS,各亚组分别在注射后0.5、1、2、4、8、16 h和24 h处死,收集肺组织行病理学观察及测肺湿/干重比值,用免疫印迹法测肺组织AQP 5的表达,观察其动态变化.结果 注射LPS后0.5 h病理可见针尖样肺出血,随时间延长,肺出血从局灶性向弥漫性发展;注射后2、4 h新生大鼠肺湿/干重比值较对照组增高(P＜0.05),之后回落;注射后0.5 h,肺组织AQP 5表达开始下调,1～2 h达到最低,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01),随后AQP 5表达逐渐升高,8 h时AQP 5表达接近正常水平,8 h后又出现下调直至24 h,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 新生大鼠ALI早期即出现明显的AQP5表达下调,并与肺组织湿/干重比值呈负相关,可能是导致肺泡水肿的重要因素之一.     

急性肺损伤幼鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞和SP-A变化相关性的研究

目的：该实验旨在研究急性肺损伤（ALI）时肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEC-Ⅱ）超微结构变化和肺组织表面活性蛋白SP-A含量的变化关系，从而探讨ALI的发病机制。方法：48只Sprague-Dawley幼鼠被随机分为正常对照组和ALI组。 腹腔注射脂多糖（LPS，4 mg/kg）建立ALI模型，正常对照组注射等量生理盐水。 LPS注射后24，48，72 h每亚组各处死8只大鼠。 取左肺下肺组织待透射电镜检查。 用Western blot方法测定肺组织SP-A的相对含量。结果：ALI 24 h时，AEC-Ⅱ微绒毛消失。24 h及48 h时板层小体（lamellar body, Lb）数量增加，体积增大，密度减低，排空明显增强，呈指环状绕核排列，细胞增生活跃，代谢旺盛。48 h时Lb呈巨大空泡样变性。肺组织SP-A含量明显高于对照组（24 h时ALI组为6.52±0.62，对照组为5.02±0.35， P< 0.01；48 h时ALI组为6.65±0.62，对照组为5.01±0.36，P< 0.01）。72 h时Lb破溃，数目明显减少，细胞核形态不规则，部分核边界不清，肺组织SP-A含量下降(ALI组为3.87±0.50，对照组为5.22±0.36，P<0.01)。结论： LPS致幼鼠ALI时AEC-Ⅱ和肺组织SP-A的变化为时间依赖性，随AEC-Ⅱ损伤程度的加重肺组织SP-A由代偿转为失代偿，可能是发生ARDS的重要机制之一。     

不同剂量氢化可的松对急性肺损伤大鼠多形核白细胞氧自由基释放的影响

目的观察不同剂量氢化可的松(HC)对内毒素(LPS)致鼠急性肺损伤(ALI)病理及多形核白细胞(PMN)释放氧自由基(OFR)的影响,并探讨其原因。方法大鼠腹腔注射O111B4,2000亿/kg复制ALI模型。40只大鼠随机分为空白组、内毒素组(LPS组)、大剂量HC组(150mg/kg)、中剂量HC组(20mg/kg)、小剂量HC组(6mg/kg),注药6h后采集标本,观察各组大鼠肺湿/干比(W/D值)、肺通透性指数(PPI)、肺病理变化(光镜、电镜)等指标,并检测PMN释放的OFR水平,在不同组之间进行比较。结果W/D值、PPI及肺光镜病理半定量评分等指标,LPS组均显著高于空白组(P<0.05)。使用HC干预后,小剂量HC组较LPS组各项指标均显著降低(P<0.05),中剂量HC组仅肺病理半定量评分较LPS组降低,差异有显著性(P<0.05),大剂量HC组各项指标与LPS组比较,差异均无显著性。OFR释放水平,LPS组显著高于空白组(P<0.01),应用HC后,各剂量组均显著降低(P<0.05),但不同剂量HC组差异无显著性。结论LPS组大鼠OFR产生明显增多,提示其在ALI发病中起重要作用;不同剂量激素均可对ALI大鼠OFR释放产生明显抑制,其抑制作用与激素剂量无关;小剂量激素组对ALI大鼠肺病理损伤的改善最明显,中剂量组次之,大剂量组无明显改善作用。     

糖皮质激素对急性肺损伤幼鼠水通道蛋白-1表达的作用

目的 研究急性肺损伤(acute lung injury,ALI)幼鼠肺组织中水通道蛋白-1(aquaporin1,AQP-1)的表达变化,探讨糖皮质激素治疗ALI的可能机制.方法 将实验动物分为生理盐水对照组(对照组)、致ALI组(lipopolysaccharide,LPS组)、甲泼尼龙(methylprednisolone,Mp)治疗组(Mp组).观察6h后测定动脉血氧分压、肺湿干重比值,并采用免疫组织化学方法和RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中AQP-1的表达变化及对肺组织进行常规病理染色观察.结果 RT-PCR结果显示LPS组AQP-1mRNA相对表达量与对照组相比明显减少(0.28±0.05 vs 0.50 ±0.24,P＜0.05),Mp组AQP-1 mRNA相对表达量与LPS组相比明显增加(0.47±0.16 vs 0.28±0.05,P＜0.05).免疫组织化学结果与RT-PCR结果一致.同时Mp组血氧明显改善(P＜0.01),肺湿干重比值下降(P＜0.05),肺2组织损伤减轻.结论 糖皮质激素对ALI的治疗作用可能与其影响AQP-1的表达有关.     

地塞米松对脂多糖诱导的急性肺损伤幼鼠肺表面活性物质蛋白－D的影响

目的：肺表面活性物质蛋白D(SP－D)被认为是急性肺损伤(ALI)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)有价值的生物指标。该研究旨在探讨幼鼠ALI时及地塞米松干预后肺组织SP－D的变化。方法：144只SD大鼠被随机分为正常对照组、肺损伤组和地塞米松治疗组。腹腔内注射脂多糖（LPS，4 mg/kg)建立急性肺损伤模型, 正常对照组注射等量生理盐水, 治疗组于注射LPS 1小时后注射地塞米松(5 mg/kg)。LPS注射后6，12，24，36，48，72 h 每组各处死8只大鼠。用Western blot方法测定肺组织SP－D的相对含量。结果：与正常对照组相比,ALI组在注射LPS后36，48，72 h SP－D含量明显下降(P<0.01)，在48 hrs达最低点(0.92±0.11 vs 3.27±0.52)。地塞米松治疗组于注射LPS后36，48，72 h SP－D含量明显高于ALI组 (P<0.01), 6，12，24，36和48 h 与对照组相比差异无显著性, 72 h差异有显著性(P<0.05)。结论：急性肺损伤早期幼鼠肺组织SP－D含量降低。早期应用地塞米松能使ALI肺组织下降的SP－D明显上升。［中国当代儿科杂志，2007，9（2）：155-158］     

肺复张手法对急性肺损伤幼猪肺表面活性物质的影响

目的 研究肺复张手法(RM)对急性肺损伤(ALI)时肺表面活性物质表达的影响,探讨RM产生肺泡复张效应的机制.方法 健康雄性幼猪12只,静脉注射内毒素(LPS)构建ALI模型,随机分为常规潮气量通气组(对照组)和小潮气量联合肺复张手法通气组(RM组),观察8 h,酶联免疫吸附法检测血浆、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的肺表面活性蛋白(SP)-A浓度,分析BALF中的磷脂成分[总磷脂(TPL)、活性磷脂(DSPC)及总蛋白(TP)],并采用RT-PCR和免疫组织化学染色测定肺组织中SP-A、SP-B、SP-C、SP-D的mRNA及SP-A的蛋白表达水平.结果 与对照组相比,RM组中SP-A、SP-B、SP-C、SP-D的mRNA水平明显升高,对照组与RM组SP-A平均灰度值为97.8±6.4与106.3±8.5,差异有非常显著性(P＜0.01),并且采用RM后BALF中DSPC/TP、DSPC/TPL比例升高,血浆中SP-A浓度降低,而BALF中的SP-A浓度明显上升.结论 肺复张手法可以改善ALl幼猪肺表面活性物质相关蛋白的合成及肺部表达,增加肺表面活性物质的活性,调节SP-A的浓度,有助于促进肺复张后的肺泡开放,并减轻呼吸机相关肺损伤.     

Maternal tobacco smoking and lung epithelium-specific proteins in amniotic fluid

The bronchiolar 16 kD Clara cell secretory protein (CC16) and the alveolar surfactant-associated protein A (SP-A) are secreted in the amniotic fluid (AF), where they reflect the growth and the maturity of the fetal lung. To evaluate the possible effects of in utero tobacco smoke exposure upon infant bronchoalveolar epithelium function and maturity, CC16 and SP-A levels were determined in AF obtained at term (36-41 wk) from 28 nonsmoking, 18 smoke-exposed, and 28 smoking mothers with uncomplicated pregnancies. Tobacco smoke exposure was assessed by questionnaire and the assay in AF and maternal urine of cotinine, a stable nicotine metabolite. The specificity of the changes of CC16 and SP-A concentrations in AF was assessed by comparison with nonpulmonary proteins of high- (albumin and transferrin) or low-molecular weight (beta2-microglobulin, retinol binding protein, cystatin-C). Pulmonary and nonpulmonary AF proteins were also compared by two-dimensional gel electrophoresis between smoking and nonsmoking mothers. The levels of CC16 and SP-A as well as low- and high-molecular-weight proteins were not significantly different between the three smoking categories. The protein pattern of AF, established by two-dimensional gel electrophoresis, did not reveal any quantitative or qualitative difference between nonsmoking (n = 10), smoke-exposed (n = 5), and smoking mothers (n = 5). By multiple regression analysis of possible determinants, tobacco smoke did not emerge as a significant predictor of CC16 and SP-A concentrations in AF. SP-A level was dependent only on gestational age at birth (r2 = 0.1, p = 0.001), whereas CC16 correlated only with the levels of low-molecular weight proteins (r2 = 0.2, p = 0.0001). The latter correlation suggests that CC16 enters AF not only as a result of its secretion at the surface of the respiratory tract but also partly following its elimination by the fetal kidney. This study suggests that maternal smoking during pregnancy is not associated with alterations of the secretory functions of the epithelium of the distal airways and the alveoli at term.     

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目的探讨新生儿常见肺部疾病支气管肺泡灌洗液肺表面活性蛋白A(BALSPA)水平及其与临床的关系。方法收集2000年1月至2003年2月在广州市儿童医院新生儿重症监护室住院的需行机械通气治疗的新生儿重症肺炎、胎粪吸入综合征(MAS)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)以及新生儿呼吸窘迫综合征(RDS)患儿共57例。测定其BALSPA水平,监测血气、PaO2/FiO2水平。结果重症肺炎组与MAS组患儿BALSPA水平无明显差异,但MAS组患儿PaO2、PaCO2及PaO2/FiO2水平较重症肺炎组明显降低(P值<0.01,<0.05,<0.05);ARDS及RDS组患儿BALSPA水平均较上述两组低(P值均<0.001),而RDS组患儿BALSPA水平较ARDS组低(P<0.001),但ARDS组患儿PaO2水平较RDS组患儿低(P<0.05)。PS治疗组患儿的病死率较非PS治疗组明显降低(P=0.049),其PaO2/FiO2与BALSPA水平密切相关(r=0.741,P=0.000)。结论与重症肺炎患儿比较胎粪吸入综合征患儿BALSPA水平无明显降低;ARDS及RDS患儿BALSPA水平明显降低;BALSPA水平能反映新生儿肺损伤的严重程度,对于新生儿肺部疾病预后的判断有一定意义。     

肺炎支原体肺炎患儿支气管肺泡灌洗液和血清中肺表面活性蛋白的变化及意义

目的：研究肺表面活性蛋白在小儿肺炎支原体肺炎（MPP）血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中的变化及意义。方法：根据肺CT结果将47例MPP患儿分为两组：单侧病变组（n=32）和双侧病变组（n=15）。采用ELISA法检测两组患儿BALF和血清中肺表面活性蛋白A、B、C、D（SP-A、B、C、D）的含量。血清与BALF中SP-A、B、C、D含量的相关性采用Spearman秩相关分析。结果：两组患儿中,主病变侧或病变侧BALF中 SP-A、B、C、D含量显著高于次病变侧或健侧BALF和血清中SP-A、B、C、D含量（P＜0.01）。单侧病变组患儿血清中SP-A、B、C含量显著低于健侧BALF中含量（P＜0.01 或0.05）,而血清中SP-D含量与健侧BALF中SP-D含量差异无统计学意义（P＞0.05）。双侧病变组患儿血清中SP-A、B、C、D含量与次病变侧BALF中SP-A、B、C、D含量相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。Spearman秩相关分析显示,双侧病变组患儿中血清SP-D含量与主病变侧BALF中SP-D含量呈密切正相关（P＜0.01）。结论：血清中SP-D可作为反映小儿社区获得性肺炎肺组织感染损伤严重程度的生化指标。     

实验性肺损伤时纤溶酶原激活物抑制剂-1 mRNA表达及吸入一氧化氮对其表达的影响

目的 观察实验性急性肺损伤时纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)mRNA的表达情况及其在肺损伤发病机制中的可能作用;探讨吸入一氧化氮对实验性肺损伤时PAI-1 mRNA表达的影响.方法 采用内毒素(LPS)二次打击诱导4～5周SD大鼠以建立急性肺损伤模型.应用荧光实时定量PCR的方法 测定肺组织的PAI-1 mRNA水平,同时做肺组织病理评分.结果 内毒素组2 h病理评分(3.10±0.38)明显高于对照组(1.12±0.84),两者差异有显著性(P＜0.05);2 h后各观察时点病理评分较对照组增高(P＜0.05),并高于内毒素组2 h病理评分(P＜0.05);内毒素组2 h时PAI-1 mRNA水平(6.30±0.19)明显高于对照组(4.94±0.32),两者差异有显著性(P＜0.05),并持续增高直至48 h恢复正常(P＞0.05);吸入一氧化氮后PAI-1 mRNA水平有下降趋势,其中4 h时与内毒素组4 h差异有显著性(P＜0.05).结论 急性肺损伤早期PAI-1 mRNA即表达增高,持续时间长,治疗剂量的一氧化氮吸入能抑制PAI-1基因的表达,促进急性肺损伤肺修复.     

一氧化氮吸入对新生鼠高氧肺损伤时表面活性蛋白A和肺甘露糖结合力的影响

目的：通过观察吸入一氧化氮(iNO)对新生大鼠高氧肺损伤时表面活性蛋白A(SP-A)和肺组织甘露糖结合力(MBA)的影响,探讨iNO对高氧肺损伤保护作用的可能机制。方法：新生大鼠随机分为对照组(空气);高氧组(>95%O2,6d);NO组(空气+10ppmNO,24h);高氧+NO组(>95%O2,6d+10ppmNO,24h)。观察暴露后2d和6d肺组织病理变化,肺SP-AmRNA基因表达、蛋白含量和MBA的变化。结果：高氧组病理损伤明显,暴露后2d时SP-A的mRNA含量(0.81±0.04vs1.53±0.25)和蛋白表达(59.45±18.37vs89.77±16.41)比对照组减少,6d时分别比对照组增加(0.81±0.02vs0.63±0.03),(93.57±13.71vs47.73±21.69),(P<0.05)。高氧+NO组暴露后2d时病理损伤比高氧组明显减轻,SP-AmRNA(0.55±0.91)比对照组和高氧组降低,SP-A蛋白表达(55.12±17.53)比对照组降低(P<0.01);6d时SP-A蛋白表达(67.33±18.59)比高氧组降低(P<0.05)。甘露糖结合力在暴露后2d时NO组比对照组增加(0.821±0.133vs0.580±0.158)、高氧+NO组比高氧组增加(0.430±0.175vs0.738±0.141)(P<0.05)。结论：小剂量NO吸入可降低高氧肺组织SP-A蛋白表达的升高,增加肺组织的MBA,减轻肺组织的病理损伤。