小儿病毒性心肌炎与Fas／Fas1介导的外周血淋巴细胞凋亡的关系

目的探讨Fas／Fas1介导的外周血淋巴细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用。方法选择临床诊断病毒性心肌炎患儿和正常小儿各25例,采用Annexin V／PI双参数法经流式细胞仪定量检测两组小儿外周血淋巴细胞凋亡百分率,并用双色流式细胞仪检测外周血淋巴细胞Fas、Fas1蛋白表达。结果心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡率[（0．6976±0．1109）％]较正常对照组[（0．1288±0．1069）％]明显升高（t=18．459,P〈0．001）,且与肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、羟丁酸脱氢酶升高程度均呈正相关（r=0．817,P〈0．01;r=0．785,P〈0．01;r=0．726,P〈0．01;r=0．712,P〈0．01）;心肌炎患儿外周血淋巴细胞Fas、Fas1蛋白表达[（2．8804±0．302O）、（4．4496±0．4836）]较对照组[（2．1300±0．6200）、（0．1238±0．0384）]明显增加（t=17．321,P〈0．001;t’=44．577,P〈0．001）;心肌炎患JLgb周血淋巴细胞凋亡百分率与Fas、Fas1蛋白表达均呈正相关（r：0．972,P〈0．01;r=0．958,P〈0．01）。结论病毒性心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡增加,可能为细胞免疫功能下降的原因之一,且与心肌损害程度相关。Fas、Fas1基因在病毒性心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡中起着重要作用。     

小儿急性病毒性心肌炎心肌酶与外周血淋巴细胞凋亡的关系

目的探讨外周血淋巴细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用。方法选择临床诊断病毒性心肌炎患儿和正常小儿各25例,采用Annexin V/PI双参数法经流式细胞仪定量检测两组小儿外周血淋巴细胞凋亡百分率。结果心肌炎组患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率[(0.697 6±0.110 9)%]较正常对照组[(0.128 8±0.106 9)%]明显升高(t=18.459,P<0.001),且与心肌酶CK-MB、LDH、CK、HBDH升高程度均呈明显正相关(r=0.817,P<0.01;r=0.785,P<0.01;r=0.726,P<0.01;r=0.712,P<0.01)。结论病毒性心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡增加,且与心肌损害程度相关。     

甲基强的松龙对特发性血小板减少性紫癜外周血淋巴细胞凋亡及FasFasl的影响

研究甲基强的松龙对小儿特发性血小板减少性紫癜 (ITP)外周血淋巴细胞凋亡及Fas(CD95 )、Fas配体 (Fasl)表达的影响及其临床意义。用流式细胞仪检测 2 5例ITP患儿治疗前后外周血淋巴细胞凋亡率及Fas、Fasl蛋白表达。结果 ,治疗前淋巴细胞凋亡率及Fas、Fasl蛋白表达与正常对照组相比差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。治疗后血小板增加时淋巴细胞凋亡率增加 ,Fas、Fasl蛋白表达上调 ,与治疗前相比差异有显著性意义 (P <0 0 1)。结果表明 :甲基强的松龙可显著促进ITP患者外周血淋巴细胞凋亡的发生 ,上调淋巴细胞Fas、Fasl的表达 ,有助于清除激活的淋巴细胞。     

Fas/Fasl介导的细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎的关系

目的 探讨Fas/Fasl介导的细胞凋亡在病毒性心肌炎(VM)小鼠发病中的作用。方法 采用光镜观察小鼠心肌组织病理改变;电镜技术、原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;免疫组化技术检测不同时期Fas、Fasl蛋白表达。结果 感染后7～10d凋亡细胞数及Fas、Fasl蛋白表达水平逐渐升高,心肌病变以炎症细胞浸润及心肌坏死为主并逐渐加重,10～14d细胞凋亡及Fas、Fasl蛋白表达水平最高,心肌病变也最重,21～28d细胞凋亡数及Fas、Fasl蛋白表达水平逐渐下降,心肌炎症细胞浸润及坏死逐渐减轻,代之以成纤维细胞增生及心肌纤维化;Fasl蛋白表达与心肌病变积分呈显著正相关(r=0.86 P<0.01)。结论Fas/Fasl介导的细胞凋亡是VM心肌损伤的机制之一;Fas、Fasl基因在VM细胞凋亡中起重要作用。     

病毒性心肌炎患儿血清sFas、sFasL的表达水平

目的 探讨可溶性Fas(sFas)及其配体(sFasL)在小儿病毒性心肌炎中的表达以及与细胞凋亡和免 疫反应的关系。方法 采用ELISA法对21例病毒性心肌炎患儿和20例健康儿童进行血清sFas和sFasL的浓度 测定。结果 病毒性心肌炎患儿血清sFas和sFasL表达水平较健康儿童明显增高(P均<0.01);病毒性心肌炎患 儿血清sFas与sFasL表达水平呈正相关(P<0.01)。结论 血清sFas及sFasL表达增高与病毒性心肌炎疾病过 程有关,其作用机制可能通过抑制或减弱激活的T淋巴细胞凋亡造成免疫性心肌损害;病毒性心肌炎患儿血清 sFas表达增高进一步证实其发病与免疫因素有关;血清中sFas和／或sFasL表达增高可望作为T淋巴细胞激活的 标志和病毒性心肌炎的诊断依据之一。     

过敏性紫癜患儿急性期淋巴细胞凋亡与血清可溶性Fas和FasL变化的关系

目的 探讨过敏性紫癜(HSP)患儿急性期外周血淋巴细胞凋亡与血清可溶性Fasm(sFas)、可溶性FasL(sFasL)水平变化及其相互关系。方法 选择HSP患儿及健康儿童各33例。分别应用形态法、间接免疫荧光法、双抗夹心ABC-ELISA法检测外周血淋巴细胞凋亡率、CD25^ 细胞百分率及血清sFas及sFasL水平。结果 HSP患儿急性期外周血淋巴细胞培养0、48h凋亡率均显著高于正常对照组(P均＜0．01)；HSP组培养48h CD25^ 细胞百分率显著低于正常对照组(P＜0．01)，HSP患儿外周血淋巴细胞培养48h凋亡率与CD25^ 细胞百分率呈负相关(r＝-0．61 P＜0．05)；血清sFas及sFasL水平较正常对照组明显升高(P均＜0．01)；HSP患儿外周血淋巴细胞培养48h凋亡率与sFasL水平呈正相关(r＝0．69 P＜0．05)，与sFas水平呈负相关(r＝-0．58 P＜0．05)。结论 HSP患儿外周血淋巴细胞凋亡过度和血清sFas、sFasL水平升高，与患者免疫功能紊乱关系密切。血清sFasL升高是HSP患儿淋巴细胞凋亡过度的重要原因之一。     

哮喘患儿CD4+T细胞增殖及活化诱导凋亡机制研究

目的 通过体外细胞增殖及活化诱导细胞凋亡试验探讨小儿哮喘免疫炎症及Th细胞过度活化的相关机制.方法 哮喘组患儿21例,年龄(9.6±23)岁;正常对照组20例,年龄(9.7±1.9)岁.流式液相多重蛋白定量技术检测Th1/Th2/Th17细胞因子;磁珠分离CD4+T细胞,PHA结合anti-CD3体外刺激后分析其增殖能力及活化后凋亡情况;最后以相对定量PCR测定凋亡及增殖相关蛋白Fas、FasL、Bcl-2的mRNA表达情况.结果 哮喘组患儿血清细胞因子水平较正常对照组显著增高[IL-4:(2451±1.052)ng/Lvs(1.796±0.615)ng/L,P=0.018;IL-10:(1.920±0.813)ng/Lvs(1.390±0.162)ng/L,P=0.006;TNF:(5.112±5.842)ng/Lvs(1.506±0.551)ng/L,P=0.009];哮喘组CD4+T细胞增殖能力显著强于正常对照组[OD450:(0.498±0.052)vs(0.274±-0.032),P＜0.001],而活化诱导后细胞凋亡率则显著低于正常对照组[(35.62±0.05)％vs(65.28±3.85)％,P＜0.001];哮喘组患儿CD4+T细胞Fas mRNA表达较正常对照组显著降低,而Bcl-2表达则显著高于正常对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.001),FasL表达差异无统计学意义(p＞0.05).结论 哮喘患儿CD4+T细胞Fas表达降低及Bcl-2表达升高在一定程度上抑制了Th细胞活化后凋亡并且促进其增殖,而凋亡抑制及细胞增殖可能导致了哮喘患儿Th细胞过度活化和炎性浸润加剧.     

特发性血小板减少性紫癜患儿外周血T细胞凋亡信号蛋白表达的临床意义

目的检测凋亡信号蛋白死亡结构域(FADD)、Fas、FasL和核因子κB(NF-κB)在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿外周血T细胞中的表达,探讨其对T细胞凋亡的影响及其临床意义。方法无菌采集35例ITP患儿及30例健康儿童外周血,T细胞分离富聚柱法分离纯化T细胞,流式细胞仪检测T细胞凋亡率及Fas、FasL蛋白的表达;免疫组化法检测FADD、NF-κB P65蛋白的表达。结果ITP患儿T细胞凋亡信号蛋白Fas、FADD表达与正常儿童比较明显下降,FasL、NF-κB P65表达显著上升,差异均有显著性意义(P均<0.05);患儿外周血T细胞凋亡率明显降低,并与血小板计数呈对数正相关(r=0.880 P<0.05)。结论ITP患儿可通过下调引起T细胞凋亡的信号蛋白Fas、FADD表达,同时上调活化增殖蛋白FasL、NF-κB P65表达,导致ITP患儿T细胞凋亡减少、活性增强,引起血小板大量损伤。     

病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡和坏死的研究

目的： 探讨病毒性心肌炎小鼠心肌细胞的凋亡与坏死之间的相互关系。方法：　用4周龄Balb/c雄性小鼠腹腔接种柯萨奇B3病毒 (CVB3)制成病毒性心肌炎小鼠模型 ,采用膜联蛋白V联合PI染色双参数技术(AnnexinV/PI)在流式细胞仪上定量检测心肌细胞的凋亡和坏死。结果：　病毒性心肌炎小鼠心肌细胞的凋亡百分率和坏死百分率均显著高于正常对照小鼠(P<0.01),并且心肌细胞凋亡百分率及坏死百分率均与心肌病理积分呈正相关(r =0.70 ,P<0.01和r=0.93,P<0.01)。结论：　病毒性心肌炎小鼠同时存在着心肌细胞的凋亡和坏死 ,两者均与心肌病理损害程度密切相关,为病毒性心肌炎的重要病理过程     

苦参素抗慢性病毒性心肌炎心肌纤维化作用的研究

目的 初步探讨苦参素抗慢性病毒性心肌炎(CVMC)心肌纤维化的作用及其作用机制.方法 以柯萨奇病毒B3株重复增量感染小鼠建立CVMC模型,正常对照组1及正常对照组2同期腹腔注射等体积生理盐水.42 d取模型组8只及正常对照组1小鼠评估CVMC模型制备情况.后将CVMC模型组小鼠随机分为CVMC对照组、卡托普利干预组及苦参素干预组,卡托普利干预组及苦参素干预组按100 mg/(kg·d)灌胃给药28 d;同期给予CVMC对照组及正常对照组2等体积生理盐水灌胃,随后杀死各组小鼠.以苦味酸天狼猩红行心肌胶原组织特异性染色,免疫组织化学方法 及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心肌组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)蛋白及基因水平表达;免疫组织化学法及蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测小鼠心肌组织中转化生长因子(TGF-β1)蛋白水平的表达;并运用图像分析软件计算心肌组织中的胶原容积积分(CVF,%)、Ang Ⅱ及TGF-β1阳性面积百分率.结果 42 d CVMC组小鼠心脏左室舒张末期内径(3.95±0.31)mm、左室收缩末期内径(3.13±0.26)mm较正常对照组1[(3.61±0.26)mm、(2.33±0.20)mm]均明显扩大(P均＜0.01);射血分数[(42.1±5.3)%]、短轴缩短率[(20.3±2.4)%]及主动脉血流峰值速度[(61.1±6.7)cm/s]较正常对照组1[(72.9±7.3)%、(36.8±4.1)%、(83.3±9.2)cm/s]均显著降低(P均＜0.01);心率[(375.3±32.2)次/min]较正常对照组1[(343.4±31.3)次/min]明显增快(P＜0.01).42 dCVMC组小鼠心肌组织CVF[(13.95±1.08)%]较正常对照组1[(6.52±1.31)%]显著增加(P＜0.01).70 d CVMC对照组小鼠心肌组织CVF[(14.88±1.11)%]较正常对照组[(26.77±1.32)%]、卡托普利干预组[(9.83±1.15)%]及苦参素干预组[(9.94±1.35)%]均显著增加(P均＜0.01);卡托普利干预组AngⅡ的蛋白[(5.05±1.80)%]及基因(0.248±0.035)表达较CVMC对照组[(26.92±3.21)%、(0.598±0.049)]明显减少(P均＜0.01),但苦参素干预组小鼠心肌组织AngⅡ的蛋白[(23.94±4.58)%]及基因(0.56±0.033)表达较CVMC对照组[(26.92±3.21)%、(0.598±0.049)]无明显差异(P均＞0.05);苦参素干预组小鼠心肌组织TGF-β1的蛋白表达[(7.925±2.082)%、(0.254±0.036)]及卡托普利干预组TGF-β1的表达[(8.138±2.058)%、(0.222±0.038)]均较CVMC对照组[(24.86±3.813)%、(0.544±0.044)]明显降低(P均＜0.01),两组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论苦参素可抑制慢性病毒性心肌炎心肌组织的纤维化,下调心肌组织中TGF-β1的表达可能是其作用机制之一.     

结缔组织生长因子在病毒性心肌炎心肌组织中的变化

目的 观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在病毒性心肌炎( viral myocarditis,VMC)小鼠心肌组织中的表达情况.方法 实验选取BALB/C小鼠100只,分为对照组、VMC组各50只.应用柯萨奇B3病毒(coxsackie virus B3,CVB3)感染小鼠建立VMC模型.在CVB3感染后第4、7、14、21天各随机抽取8只采集心脏标本,行HE染色测定心肌病理积分,应用Masson染色法观察小鼠心肌胶原纤维分布,测量胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF),检测血清CK-MB水平,应用免疫组织化学方法检测转化因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、CTGF蛋白在小鼠心肌中的分布;应用RT-PCR方法检测小鼠心肌组织TGF-β1、CTGF mRNA的相对表达量;并作相关性分析.结果 (1)VMC组小鼠CK-MB水平于第7天达高峰,后逐渐下降(各时间点分别为455.45±37.95,606.95±35.64,573.62±42.90,308.60±20.49),其中第4、7、14天时高于对照组,差异有统计学意义(t值分别为6.144,12.558,11.182,P均＜0.01);(2)VMC组小鼠第14、21天时CVF明显高于对照组(CVF值分别为8.22±1.95,9.46±1.87,t值分别为4.486,5.552,P均＜0.01);(3)免疫组织化学法检测VMC组小鼠各时间点心肌CTGF蛋白(各时间点分别为171.50±10.25,141.70±10.863,110.35±11.051,81.05±10.190)及TGF-β1蛋白(184.90±11.480,150.25±9.915,103.50±10.455,84.15 ±9.848)阳性表达均较对照组高(P均＜0.01);(4)VMC小鼠心肌组织中CTGF mRNA(0.4728±0.0328,0.5750±0.0439,0.6228±0.0458,0.7265±0.0469)及TGF-β1mRNA(0.5757 ±0.0426,0.6922 ±0.0408,0.7447±0.0510,0.8513±0.0505)表达随病毒感染时间延长而增强(P均＜0.01);(5)VMC小鼠心肌组织中CTGF的表达与TGF-β1的表达呈显著正相关(r=0.987,P＜0.01);VMC小鼠心肌组织中CTGF的表达与CVF密切相关(r=-0.901,P＜0.01),但CTGF的表达早于心肌纤维化的出现.结论 CTGF的表达伴随VMC的心肌纤维化程度而增加,提示CTGF的异常表达可能参与了VMC中心肌纤维化的发展过程.     

心肌疾病抗ADP/ATP载体抗体与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的临床研究

目的探讨病毒性心肌炎（ＶＭＣ）和扩张型心肌病（ＤＣＭ）的自身免疫发病机制。方法采用免疫印转和放射免疫技术检测了３０例ＶＭＣ、１４例ＤＣＭ患儿血浆中抗心肌线粒体ＡＤＰ／ＡＴＰ运载蛋白（ＡＮＴ）抗体和粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）。结果ＶＭＣ和ＤＣＭ患儿抗ＡＮＴ抗体和ＧＭ－ＣＳＦ的阳性率分别为７３％和５７％，而２５例正常健康儿分别为０和１２％（Ｐ均＜０．０１），且抗ＡＮＴ抗体与ＧＭ－ＣＳＦ的血浆水平呈正相关（ｒ＝０．４０９１，Ｐ＜０．０５）。结论小儿ＶＭＣ和ＤＣＭ的发病与心肌的自身免疫损伤有关，抗ＡＮＴ抗体和ＧＭ－ＣＳＦ均参与了这一过程。抗ＡＮＴ抗体可作为小儿ＶＭＣ和ＤＣＭ的一种特异性诊断指标。     

α-干扰素对体外培养血管瘤内皮细胞Fas、Caspase-8表达的影响

目的 观察α-干扰素对体外培养血管瘤内皮细胞Fas、Caspase-8的影响,探讨α-干扰素治疗血管瘤的机制.方法 用组织块法培养增生期血管瘤内皮细胞,检测第Ⅷ凝血因子相关抗原对血管瘤血管内皮细胞进行鉴定,用流式细胞仪检测α-干扰素作用后血管内皮细胞凋亡和Caspase-8表达变化,荧光免疫组化检测Fas抗原表达.结果 α-干扰素作用后,Fas阳性表达率为90％,对照组阳性表达率为15％,二者比较P＜0.01.α-干扰素作用后6h、24 h、48h,Caspase-8的荧光平均值分别为148.99±12.72、87.06±6.81、55.17±9.06,比对照组25.82±3.59增高(P＜0.01或0.05).各α-干扰素组血管瘤血管内皮细胞凋亡百分率分别为:1×104μ组11.89±0.56、1×105μ组18.88±3.04、1×106μ组31.92±1.92,均比对照组3.25±0.23高(P＜0.01).结论 α-干扰素可以诱导体外培养的血管瘤血管内皮细胞Fas、caspase-8高表达,促进血管瘤内皮细胞凋亡.     

卡维地洛对免疫性心肌炎小鼠心肌凋亡调控蛋白影响

目的 观察卡维地洛对免疫性心肌炎小鼠心肌凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Fas的影响,探讨其在免疫性心肌炎中的作用.方法 60只4～5周龄近交系雄性BALB/C小鼠,随机将小鼠分为3组:免疫性心肌炎模型组(模型组),卡维地洛干预组(干预组),空白对照组(对照组),每组20只.眼球取血后处死,留取心脏及血液标本.光镜观察各组小鼠心肌组织病理学改变,电镜观察心肌细胞超微结构,化学发光免疫法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平;免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达的含量;原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡情况.结果 模型组小鼠心肌细胞光镜下见大量炎症细胞浸润,电镜下可见细胞核固缩、染色质边集,对照组小鼠心肌细胞光镜下未见炎症细胞浸润,电镜下染色质边集不明显.模型组Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达较对照组高(23.48±2.24 vs 6.64±1.60,26.15±2.02 vs 5.09±0.85,21.22±3.62 vs 5.86±1.37,P＜0.01);干预组与模型组比较,小鼠心肌组织炎症积分轻(2.60±0.3l vs 2.02±0.26,P＜0.05),电镜下细胞核固缩轻,心肌细胞Bcl-2、Bax及Fas蛋白表达低(17.13±1.94 vs 23.48±2.24,17.66±2.62 vs26.15±2.02,16.79±2.83 vs 21.22±3.62,P＜0.05),凋亡指数低[(16.61±4.67)%vs(24.51±4.70)%,P＜0.05],cTn-I水平低[(1.878±0.48)ng/ml vs(1.102±0.23)ng/ml,P＜0.05].结论 卡维地洛可减轻免疫性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡,对免疫性心肌炎起一定的保护作用.

Abstract：

Objective To observe the effects of carvedilol on the expression of Bcl-2, Bax and Fas in autoimmune myocarditis (AM).Methods A total of 60 inbred male BALB/C mice 4-5 weeks of age were divided at random into 3 groups as follows: AM group ( n = 20), carvedilol group ( n = 20 ) and control group (n = 20).The mice were sacrificed after gathering blood specimens by taking out the eyeballs and hearts tissue.The histological and ultrastructural changes were observed under light microscope and electron microscope.The concentrations of cardiac troponin Ⅰ (cTn Ⅰ ) were detected by chemiluminescence immunoassay (CLIA).Immunohistochemistry (IHC) was performed to analyze the contents of Bcl-2, Bax and Fas, TUNEL to detect the apoptotic index in myocardial cells.Results There were large number of lymphocyte and monocyte infiltrates under light microscope and karyopyknosis and chromatin gathered along the nuclear membrane under electron microscope in AM group.There were no inflammations and chromatin gathering in group C.Compared with control group, the Bcl-2, Bax and Fas protein expression significantly elevated in AM group ( 23.48 ± 2.24 vs.6.64 ± 1.60,26.15 ± 2.02 vs.5.09 ± 0.85,21.22 ± 3.62 vs.5.86 ± 1.37, P ＜ 0.0l ) . The histopathologic scores ( 2.60 ± 0.31 vs.2.02 ± 0.26, P ＜ 0.05 ) and karyopyknosis of carvedilol group decreased as compared with AM group.The Bcl-2, Bax and Fas protein expression (17.13 ±1.94 vs.23.48 ±2.24,17.66 ±2.62 vs.26.15 ±2.02,16.79 ±2.83 vs.21.22 ±3.62, P ＜ 0.05 ), AI [( 16.61 ± 4.67 ) % vs.( 24.51 ± 4.70) %, P ＜ 0.05]and contents of cTnI [( 1.878± 0.48 ) ng/ml vs. ( 1.102 ± 0.23 ) ng/ml, P ＜ 0.05]also decreased in carvedilol group compared with AM group.Conclusion Carvedilol could protect against AM by alleviating cardiomyocyte apoptosis.     

儿童肿瘤化疗后粒细胞减少期并发ARDS肺泡巨噬细胞活性检测

目的 研究儿童肿瘤化疗后粒细胞减少期并发感染后出现ARDS,肺泡巨噬细胞(AM)HLA-DR的表达情况.方法 收集13例儿童肿瘤化疗后并发ARDS患者,其中5例为粒细胞减少期,予粒细胞集落刺激因子治疗.所有患儿行纤维支气管镜检查,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数、分类,流式细胞仪检测AM HLA-DR表达率.结果 粒细胞减少组ARDS患儿肺泡细胞总数、AM绝对值和AM百分比分别为(62.6±9.6)/μl、(40.8±4.3)/μl和65.9%±9.0%,粒细胞正常组ARDS患儿分别为(124.0±6.7)/μl、(67.6±10.7)/μl和54.6%±8.7%,两组差异均有显著性(P＜0.05).粒细胞减少组BALF中AM HLA-DR表达率较粒细胞正常组明显下降(35.3%±5.8%vs62.2%±5.8%),差异有非常显著性(P＜0.01).结论 粒细胞减少的ARDS患儿呈"肺泡细胞减少症"状态,AM呈失活状态.     

钙敏感受体对乳鼠心肌细胞凋亡的诱导作用

探讨在缺氧/复氧所诱导乳鼠心肌细胞凋亡中,钙敏感受体（calcium - sensing receptor,CaSR）对Fas/Fas配体（Fas L）途径的影响。方法对8只2日龄Wistar大鼠心肌细胞进行原代培养,后随机分为三组：(1)对照组：细胞不经缺氧/复氧处理,在其他组复氧开始时培养基内加入与用药组等体积的生理盐水;(2)缺氧/复氧组：心室肌细胞缺氧2h/复氧24h,细胞培养基内于复氧开始时加入与用药组等体积的生理盐水;(3) CaSR激动剂氯化钆(GdCl3)组：细胞培养基内于复氧开始时加入300μmol/L CaSR激动剂GdCl3。流式细胞仪分析细胞凋亡率,透射电镜观察细胞超微结构,蛋白印迹法检测CaSR、Fas和FasL蛋白的表达。结果流式细胞仪检测显示,缺氧/复氧组心肌细胞凋亡为12.18％±1.54％,与对照组相比,心肌细胞凋亡明显增加(P＜0.01)。CaSR激动剂GdCl3使心肌细胞凋亡进一步增加至20.25％±2.87％ (P＜0.01)。透射电镜下可见线粒体絮状变、线粒体嵴溶解、空泡样变;CaSR激动剂使CaSR、Fas和FasL表达进一步上调,明显高于缺氧/复氧组(P＜0.05)。结论CaSR激活参与了缺氧/复氧所诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,CaSR可通过激活Fas/FasL死亡受体途径导致乳鼠心肌细胞凋亡。     

生长因子β1对儿童哮喘的作用及孟鲁司特钠对其影响

目的 探讨生长因子β1在儿童哮喘中的作用及观察孟鲁司特钠对其的影响。方法 筛选2009年9月-2010年9月我院哮喘专病门诊轻度持续哮喘患儿60例及来院健康体检儿童30例,将哮喘患儿随机分成孟鲁司特钠组和安慰剂对照组;采用双抗夹心酶联免疫吸附试验( ELISA)、RT-PCR技术分别检测治疗前后患儿血浆中TGF-β1水平和外周血单个核细胞(PBMC)中TGF-β1mRNA表达;采用流式细胞技术,检测表达叉状头/翅膀状螺旋转录因子3的CD4T调节细胞(Foxp3+ CD4+ Treg)及各亚型的比例。结果 (1)血浆中TGF-β1水平：治疗前哮喘组[(11.51±1.12) ng/L]明显低于健康对照组[(47.92±1.52) ng/L](q=20.01,P＜0.01);治疗后,孟鲁司特钠组[ (20.03±1.14)ng/L]高于安慰剂组[(12.10±3.91) ng/L]（q=14.62,P＜0.05）,但均值仍低于健康对照组;(2)外周血单个核细胞中TGF-β1 mRNA表达：治疗前哮喘组(0.31 +0.07)明显低于健康对照组(0.61±0.2) (q =8.97,P＜0.05);治疗后,孟鲁司特钠组(0.46±0.13)表达高于安慰剂组(0.32±0.04)（q=8.25,P＜0.05）,但仍低于健康对照组;(3)流式细胞检测结果各组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)：哮喘患儿与健康对照组相比,Foxp3+ CD4+ Treg细胞比例增加[(8.30±1.30)％,(6.05±1.80)％];其中CD45 RA+ Foxp3lo比例增高[(4.60±1.04)％,(3.27±1.03)％];CD45 RA - Foxp3h1比例降低[(0.75±0.13)％,(0.93±0.26)％];CD45 RA-Foxp3lo比例两组差异无统计学意义。治疗后,孟鲁司特钠组较安慰剂组,aTreg细胞占Foxp3+ CD4+ Treg比例增加[(1.16±0.24)％,(0.89±0.22)％],差异有统计学意义。结论哮喘儿童体内存在血浆及外周血单个核细胞中TGF-β1表达的降低,可能是导致哮喘发病的重要原因;孟鲁司特钠能有效改善TGF-β1的表达并通过调节Foxp3的表达来发挥治疗作用。     

抗FasL抗体对小鼠病毒性心肌炎作用机制的研究

目的探讨抗FasL抗体对小鼠柯萨奇病毒性心肌炎的治疗作用及作用机制。方法80只BALB／c小鼠随机分为4组：1组为空白对照组、2组为病毒对照组、3组为IgG对照组、4组为抗FasL抗体治疗组。于接种病毒后第10天每组处死小鼠8只,取心脏,分别采用光镜检查心肌组织的病理变化,原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡的情况,免疫组化方法检测活化caspase-3的表达,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌组织中caspase-3和CVB,mRNA表达。结果（1）病毒对照组可见活化的caspase-3表达和心肌细胞的凋亡,且均与心肌病变积分成正相关（r=0．81,P〈0．05;r=0．73,P〈0．05）。（2）抗FasL抗体治疗组小鼠心肌组织病变积分、心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白和mRNA表达及心肌细胞内CVB,mRNA表达均明显低于病毒对照组（P〈0．01,P〈0．01,P〈0．01,P〈0．01,P〈0．05）和IgG对照组（P〈0．01,P〈0．01,P〈0．05,P〈0．01,P〈0．05）。结论凋亡是病毒性心肌炎心肌损伤的重要机制之一,抗FasL抗体可降低caspase-3活化和mRNA表达,减少心肌细胞凋亡,降低心肌细胞内病毒复制,使心肌损伤明显减轻。