全反式维甲酸对糖尿病大鼠肾组织Toll样受体4表达的影响

目的观察Toll样受体4（TLR4）在糖尿病大鼠肾脏的表达及全反式维甲酸（ATRA）对肾组织TLR4表达的影响。方法将18只大鼠随机分为对照组（N组）、糖尿病组（DM组）和AT—RA组（T组）,每组6只。DM组和T组用链脲佐菌素诱导糖尿病模型。T组给予ATRA20mg·k^-1·d^-1灌胃8周。于第8周末比较各组大鼠24h尿蛋白量、肌酐清除率（Ccr）、肾质量／体质量比值。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组大鼠肾组织TLR4 mRNA的表达。免疫组织化学法检测肾组织TLR4蛋白的表达部位和强度。结果①DM组24h尿蛋白量、Ccr、肾质量／体质量比值均高于正常组,T组尿蛋白量和Ccr较DM组明显降低,差异均有统计学意义（P〈0．01）;②DM组TLR4 mRNA表达高于N组,T组TLR4 mRNA表达高于DM组,差异均有统计学意义（P〈0．01）;③TLR4主要表达于近曲、远曲小管上皮细胞和部分肾小球细胞,DM组TLR4表达高于N组,T组TLR4表达高于DM组,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论ATRA可能通过干预肾组织TLR4表达,从而延缓糖尿病肾脏病进展。     

全反式维甲酸对糖尿病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对糖尿病大鼠足细胞损伤的保护作用。方法24只链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组(DM)和治疗组(T)各12只,另以12只正常大鼠作为对照组(N)。T组给予ATRA 20 mg·kg-1·d-1灌胃。于第4、8周末检测各组大鼠尿蛋白定量(24 h)、Cer、肾重/体重、尿中足细胞以及肾脏病理改变。结果DM组尿蛋白定量(24 h)、Ccr、肾重/体重、尿中足细胞数[8周时,0．84(0．60～1．50)个/ml]均显著高于同期N组[0．03(0-0．15)个/m1],而肾小球足细胞数(8周时,11．27±2．15)显著低于同期N组(14．07±2．07),且足细胞足突增宽、融合。T组尿蛋白定量(24 h)、Cer、肾重/体重、尿中足细胞数较同期DM组显著降低[0．46(0．25～0．70)个/ml],且病理改变减轻。结论ATRA可以减少糖尿病大鼠尿足细胞的排泄、降低尿蛋白,对肾脏足细胞损伤具有保护作用。     

p27蛋白表达与糖尿病肾病细胞增殖和凋亡的关系研究

p27是近年来在肾脏疾病研究中受到广泛关注的一种细胞周期激酶抑制剂,它通过影响细胞周期基本过程来调节细胞的生长[1]。已证实p27对肾脏细胞增殖、肥大、分化、凋亡等均具有重要的调控作用[2]。国内外已有大量研究在细胞周期水平上阐明糖尿病肾病(DN)的发病机制,但从细胞生长平衡这一角度出发的研究报道尚不多。我们试图对糖尿病早期肾小球固有细胞p27蛋白的表达与细胞异常增殖和凋亡之间的关系     

联合应用罗格列酮与维甲酸对HCT-15细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨联合应用罗格列酮（ROS）与维甲酸（ATRA）对人结直肠癌细胞株HCT-15细胞增殖和凋亡的影响。方法：实验分为ROS单药组（ROS浓度分别为6.25、12.5、25、50μmol/L）、ATRA单药组（ATRA浓度为2μmol/L）、ROS与ATRA联合用药组（ROS以上各浓度＋2μmol/L ATRA）。在分别或联合应用不同浓度ROS和ATRA干预人结直肠癌细胞株HCT-15不同时间后,MTT法检测药物对细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测细胞发生凋亡和细胞生长周期的变化;免疫细胞化学法检测干预前后细胞COX-2、MMP-7和TIMP-1表达蛋白水平的变化。结果：单独应用ROS可抑制HCT-15细胞的增殖,并呈浓度-时间依赖性,与ATRA联合应用则有明显的协同作用（q〉1.15）。流式细胞术结果显示：单独应用ROS和ATRA可导致G0/G1期细胞比例上升,而S期比例下降明显,诱导HCT-15细胞凋亡;而联合应用对细胞G1期的阻滞作用更强（P〈0.05）。免疫细胞化学结果显示：COX-2、MMP-7和TIMP-1在对照组人结直肠癌细胞HCT-15中阳性表达率分别为66.79%、73.21%、64.08%,联合应用后3种蛋白的表达率为19.33%,20.58%,13.13%,二者差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：ROS和ATRA可降低HCT-15细胞中COX-2、MMP-7和TIMP-1的表达,使细胞周期阻滞于G1期,诱导细胞凋亡,从而发挥抑制细胞增殖的作用。     

细胞凋亡与糖尿病肾病

糖尿病肾病 (ＤＮ)是糖尿病全身性微血管合并症之一 ,其早期改变为肾脏肥大、肾小球滤过率升高 ,肾小球及肾小管基底膜增厚 ,逐渐导致肾小球硬化 ,最终发生肾衰竭。其发病机理尚不十分清楚 ,目前研究证实细胞凋亡在其发生发展中起着重要作用。1　细胞凋亡的理化特征及相关基因细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)或细胞程序性死亡 (ｐｒｏ ｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ ,ＰＣＤ)是与细胞坏死截然不同的细胞死亡方式 ,是指在一定的生理或病理条件下 ,细胞遵循自身的规律 ,按步就班地走向死亡的过程。凋亡是维持细胞群体动态平衡的重要因素之…     

全反式维甲酸对环孢素诱导的肾小球系膜细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的  探讨全反式维甲酸（ATRA）对环孢素（CsA）诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响及机制。方法  采用不同剂量ATRA作用于不同剂量CsA诱导下的肾小球系膜细胞。采用MTT比色法检测细胞增殖,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡形态,后用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光法检测线粒体促凋亡的Smac蛋白的表达。结果  与对照组比较,CsA剂量为0.5 μg/mL及以上可抑制细胞増殖,CsA剂量为1.0 μg/mL及以上可诱导细胞凋亡,且Smac蛋白的表达随CsA剂量的增加而增加,具有剂量和时间依赖的特征（均为P＜0.05）。而与CsA组比较,CsA+ATRA处理组对细胞增殖的抑制作用更为明显,而加入ATRA可呈剂量依赖性抑制CsA诱导的肾小球系膜细胞凋亡及Smac蛋白的表达（均为P＜0.05）。结论  CsA可抑制肾小球系膜细胞增殖,诱导其凋亡并刺激Smac蛋白的表达。ATRA可以抑制CsA诱导的肾小球系膜细胞凋亡,且可能是通过Smac信号通路介导的。     

全反式维甲酸延缓糖尿病肾脏纤维化进展的实验研究

目的：探讨全反式维甲酸对延缓糖尿病大鼠肾脏纤维化的保护作用。方法：随机选择雄性SD大鼠分为空白对照组（NC）与造模组,制作糖尿病模型分为模型组（DM）与维甲酸治疗组（DM＋atRA）。于模型成型后分别于第8、12周观察各组大鼠24h尿蛋白（Ualb）,内生肌酐清除率（Ccr）,肾重／体重。肾脏病理及电镜观察肾小球基底膜厚度,免疫组织化学方法观察肾组织Ⅳ、Ⅲ型胶原表达。结果：维甲酸组肾重／体重、Ualb、Ccr较同时期模型组下降（P＜0．05）,且12周大鼠肾组织细胞外基质（ECM）重要成分ColⅣ表达（5．75±0．41）、ColⅢ表达（4．98±1．37）与模型组比较显著减少（P＜0．01）。病理观察维甲酸组与模型组比较肾小球系膜细胞和内皮细胞增生减轻,足突融合改善,系膜基质增生缓解,基底膜厚度变薄,减轻了肾脏病理损害。结论：全反式维甲酸能减轻糖尿病大鼠早期肾脏病理损伤,减少细胞外胶原基质积聚,延缓肾脏纤维化。     

牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用的可能机制。方法 用噻唑蓝MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡，吖啶噔活体染色观察细胞凋亡形态，免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测cjn,cfos表达。结果 在5－50mmol/L浓度范围内牛磺酸能剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖，可使G0－G1期细胞增多，S期细胞减少，并能明显抑制c-jun,c-fos的表达（P＜0．01），而牛磺酸并不诱导系膜细胞的凋亡。结论 牛磺酸可显著抑制系膜细胞增殖，使系膜细胞阻滞于G0－G1期；牛磺酸对系膜细胞增殖的抑制作用与其抑制c-jun,c-fos的表达有关。牛磺酸对系膜细胞凋亡无诱导作用。     

全反式维甲酸诱导膀胱癌Ｔ２４细胞株凋亡的研究

目的 :探讨全反式维甲酸 (ATRA)对人膀胱癌 T2 4细胞株的凋亡诱导作用。方法 :应用荧光显微镜、流式细胞仪及 DNA琼脂糖凝胶电泳等技术研究 T2 4细胞凋亡。结果 :用 3× 10 - 6 m ol/ L 的 ATRA处理 T2 4细胞6天 ,荧光显微镜下计数 T2 4细胞凋亡率为 15 .2 0 % ,对照组为 0 .0 1% (P <0 .0 5 ) ;流式细胞仪测定 T2 4细胞凋亡率为 15 .31% ,对照组为 1.49% ;T2 4细胞 DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性梯形条带。结论 :ATRA对人膀胱癌 T2 4细胞株有凋亡诱导作用 ,为 ATRA应用于膀胱癌临床治疗提供了实验依据     

全反式维甲酸诱导人膀胱癌细胞T24凋亡的研究

目的　探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ） 诱导人膀胱癌细胞Ｔ２４ 凋亡的可能性。方法　应用细胞和分子生物学技术检测不同浓度ＡＴＲＡ 对Ｔ２４ 细胞生长和凋亡的影响。结果　３ ×１０－５ ～３ ×１０－ ７ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ可显著抑制Ｔ２４ 细胞增殖。用３×１０－５ ｍｏｌ／Ｌ和３×１０－ ６ ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ 作用细胞６ 天,可出现典型凋亡特征;３ ×１０－５ 、３×１０－ ６ ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ 组及对照组的细胞凋亡率分别为２０ ．１６ ％ 、１５ ．３１％和１ ．４９ ％ ;ＤＮＡ 琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性的ＤＮＡ 梯形带。结论　ＡＴＲＡ对人膀胱癌细胞Ｔ２４ 有剂量生长抑制作用,且可成功地诱导人膀胱癌细胞Ｔ２４ 发生凋亡。     

Active vitamin D reduces macrophage infiltration by TREM-1 in renal tissue of diabetic nephropathy rats

Objective To investigate the effects of active vitamin D (VD) on the expression of triggering receptor expressed on myeloid cells-1 (TREM-1) in renal tissue of diabetic nephropathies (DN) rats and to explore the impact of TREM-1 on adhesion and migration capacity of macrophage. Methods DN rat models were established by streptozotocin. Rats were randomly distributed into four groups: control (NC) group, VD group, DN group and DN+VD group (DN rats with 0.1 μg?kg-1?d-1 calcitriol by gavages). Rats were sacrificed respectively at 8 weeks and 12 weeks after treatment. Pathological changes in kidney tissue were detected and the expressions of CD68 and TREM-1 were acquired by immunohistochemistry stain and Western blotting. In vitro, RAW264.7 cells were divided into NC group, VD group, high glucose (HG) group and HG+VD group. In HG+VD group rats were treated by high glucose with 10-8 mol/L 1,25(OH)2D3. TREM-1 expression was measured by immunohistochemistry stain and Western blotting, and the ability of macrophage in migration and adhesion was evaluated by Transwell migration assay and adhesion assay. TREM-1 siRNA was transferred to silence TREM-1 expression, while plasmid of TREM-1 was transferred for high expression. Their ability of adhesion and migration in macrophage and the effect of 1,25(OH)2D3 were examined. Results (1) Compared with the NC group, the expressions of CD68 and TREM-1 were increased in DN group (P＜0.05), whereas markedly decreased in DN+VD group (P＜0.05). (2) The number of adhesion and migration cells, and the expression of TREM-1 protein in macrophage were obviously increased in HG group as compared with those in NC group (all P＜0.05); whereas above changes were markedly decreased in HG+VD group than those in HG group (P＜0.05). (3) The number of adhesion and migrated macrophage was reduced after TREM-1 siRNA intervention (all P＜0.05). VD could significantly decrease the effect of high glucose on adhesion and migrated macrophages after TREM-1 siRNA (all P＜0.05). (4) Adhesion and migration of macrophage were increased via TREM-1 overexpression (all P＜0.05), but the effects of VD on high glucose-induced adhesion and migration of macrophage were disappeared. Conclusions VD can suppress the adhesion and migration of macrophage via reducing the expression of TREM-1, and inhibit infiltration of macrophage in renal tissue of DN rats.     

Effect of Ad-FLT-1/PC on apoptosis and oxidative stress in rats with diabetic nephropathy atherosclerosis

Objective To observe the effect of recombinant adenovirus-mediated the fms-like tyrosine kinast-1 (FLT-1) gene promoter carrying protein C (PC) gene (Ad-FLT-1/PC) on apoptosis and oxidative stress in rat with diabetic nephropathy atherosclerosis. Methods High sugar, high fat diet and streptozotocin by intraperitoneal injection were used to establish diabetic nephropathy atherosclerosis rat model. The rats were randomly divided into Ad-FLT-1/PC group (n=23), Ad-GFP group (n=23) and normal saline group (n=22) and injected with 300 ul Ad-FLT-1/PC, Ad-GFP and normal saline by caudal vein. Another healthy rats (n=23) were control group. At day 1, 3, 7 and 14 after transfection, rats of each group were randomly executed to observe vascular apoptosis and assay the level of SOD and MDA in plasma by the kit method of WST and TBA. Results Vascular cell apoptosis was observed in Ad-FLT-1/PC group, Ad-GFP group and NS group, the apoptosis index showed no statistical difference between three groups at each time point (P＞0.05). At day 14 after transfection, Ad-FLT-1/PC group rats had higher concentration of the plasma SOD and lower MDA than Ad-GFP group and NS group. The difference were statistically significant (all P＜0.05). Conclusions The recombinant adenovirus Ad-FLT-1/PC can effectively regulate oxidative stress but not apoptosis.     

脂联素基因重组慢病毒对早期糖尿病肾病小鼠肾脏的保护作用

目的 探讨静脉注射小鼠脂联素基因重组慢病毒对糖尿病肾病(DN)模型小鼠的肾脏保护作用及其机制.方法 40只C57BL/6小鼠按数字随机法分为正常对照组(NC组)、糖尿病肾病组(DN组)、阴性对照病毒(Lenti-IRES-EGFP)治疗组(DL组)、脂联素基因重组慢病毒( Lenti-Acdc-IRES-EGFP)治疗组(DA组),每组10只.应用链脲菌素(SFZ)结合高脂饮食诱导建立DN模型.重组慢病毒注射8周后,检测各组小鼠血浆脂联素水平、肾功能、尿白蛋白排泄率、肾组织病理改变.用免疫组织化学法原位检测肾组织增殖细胞核抗原( PCNA)表达.用Western印迹检测肾组织腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)水平.结果 成功构建脂联素超表达DN动物模型.与NC组比较,第12周末DA组小鼠肾质量指数(肾质量/体质量,KWI)、平均肾小球体积(MGV)、系膜面积比(FMA)、24h尿蛋白(UTP)均明显升高(P＜0.05),但低于DN组、DL组(P＜0.05).DA组肾组织PCNA阳性细胞数显著低于DN组、DL组(P＜0.01).与DN组、DL组相比,DA组小鼠肾组织AMPKα磷酸化水平显著升高(P＜0.01),mTOR磷酸化水平降低(P＜0.01).结论 脂联素通过激活AMPK信号通路,抑制mTOR信号活化,进而抑制早期DN时肾组织异常增殖.     

维甲酸对结直肠癌组织维甲酸受体和增殖细胞核抗原表达的影响

目的探讨维甲酸(RA)对结直肠癌组织维甲酸受体(RAR)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法选Wistar大鼠160只,随机分4组。第1、2组注射二甲基肼,第3、4组注射生理盐水。于第7周开始,第2、3组每天给大鼠灌服维甲酸50mg/kg,至第14周,然后分批处死。用受体放射性配基结合分析法测定正常结直肠组织和癌组织的RAR含量和用免疫组织化学法计算PCNA指数。结果第1、2组结直肠癌发生率100%和15%,差异有非常显著性意义(P<0.01)。注射RA前后正常结直肠组织和结直肠癌组织RAR水平分别为2.64、2.11、1.16和1.78fmol/μgDNA,RA可使癌组织RAR水平升高(P<0.01)。注射RA治疗前后正常结直肠组织和癌组织PCNA分别为33、33、168、98,RA能明显降低结直肠癌组织PCNA指数(P<0.01)。结论RA可以减少二甲基肼诱发结直肠癌的发生;并可使结直肠癌组织的RAR水平上升和PCNA水平下降。     

脂联素及其受体对糖尿病肾病大鼠的保护作用

目的 探讨脂联素（ADPN）及其受体（AdipoR）对糖尿病肾病的保护作用及其可能机制。 方法 （1）64只雌性SD大鼠被随机均分入对照组和实验组：实验组一次性空腹腹腔注射链脲菌素（STZ) 60 mg/kg,诱导糖尿病大鼠模型;对照组腹腔注射等体积的枸橼酸缓冲液。于糖尿病大鼠成模后第2、6、10、12周两组分别测体质量、肾质量、空腹血糖、24 h尿白蛋白排泄量;心内采血检测空腹血清胰岛素;ELISA法检测血、尿脂联素浓度;取肾脏常规制作PAS染色,免疫组化SP法检测肾脏脂联素受体1和2（AdipoR1和AdipoR2）的表达。（2）将NRK-52E细胞分别用含5 mmol/L葡萄糖（正常对照组）、30 mmol/L葡萄糖（高糖组）、30 mmol/L葡萄糖+不同浓度ADPN（终浓度分别为1 mg/L、5 mg/L、10 mg/L）培养,12 h后RT-PCR法检测单核细胞趋化蛋白1（MCP-1） mRNA表达。 结果 （1）造模成功后6、10、12周实验组血清和尿ADPN水平均高于对照组（P < 0.01）,并随着肾脏病变进展而逐渐升高。（2）实验组各时期AdipoR1和AdipoR2在肾脏的表达高于对照组,并随时间逐渐增强,其与血清脂联素水平呈正相关（r = 0.666,P < 0.01;r = 0.684,P < 0.01）。（3）MCP-1 mRNA在高糖组表达较高,加入脂联素以后MCP-1 mRNA表达显著减少（P < 0.05）。 结论 血和尿脂联素水平随糖尿病肾病病程进展而升高,与AdipoR1和AdipoR2的表达亦呈正相关,推测脂联素通过AdipoR直接作用于肾小管,通过减少MCP-1的表达对肾脏起保护作用。