线粒体KATP开放剂二氮嗪促进星形胶质细胞摄取谷氨酸

目的研究线粒体ATP敏感性钾通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel, mitoKATP)开放剂二氮嗪(diazoxide)对星形胶质细胞摄取谷氨酸(glutamate)的影响.方法取新生大鼠脑星形胶质细胞作原代培养,用液体闪烁计数仪测定[3H]-D,L-谷氨酸的摄入量判断细胞的谷氨酸摄取功能.结果二氮嗪呈浓度依赖性地促进星形胶质细胞摄取谷氨酸,且能抑制1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)对星形胶质细胞摄取谷氨酸的损伤作用;浓度在100μmol·L-1以上时,二氮嗪可完全逆转MPP+对星形胶质细胞摄取谷氨酸的抑制作用;二氮嗪的上述作用可被选择性mito KATP 阻断剂5-羟基癸酸 (5-hydroxydecanoate,5-HD)拮抗.结论二氮嗪通过开放mitoKATP增强星形胶质细胞谷氨酸转运体(glutamate transporters, GluTs)的功能.     

丹参和三七有效组分对氧糖剥夺损伤的大鼠星形胶质细胞谷氨酸摄取的影响

目的探讨丹参、三七有效组分单独及联合使用对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的星形胶质细胞谷氨酸摄取能力的影响。方法体外培养原代Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞,分为8个组别:正常组,模型组,低、高剂量丹参多酚酸组,低、高剂量血栓通组和低、高剂量联合组。正常组和模型组均不给药;低、高剂量丹参多酚酸组分别给予12.5和25.0μg·mL^-1丹参多酚酸;低、高剂量血栓通组分别给予3.125和6.25μg·mL^-1血栓通;低、高剂量联合组分别给予12.5μg·mL^-1丹参多酚酸联合3.125μg·mL^-1血栓通,25.0μg·mL^-1丹参多酚酸联合6.25μg·mL^-1血栓通。正常组给予常规培养;模型组进行OGD 3 h/R 3 h的处理;给药组于给药2 d后进行OGD 3 h/R 3 h的处理。用酶标仪检测细胞活力和谷氨酸含量。结果正常组,模型组,低、高剂量丹参多酚酸组,低、高剂量血栓通组和低、高剂量联合组的细胞活力值分别为1.00±0.14,0.35±0.66,0.41±0.10,0.68±0.09,0.41±0.13,0.60±0.12,0.44±0.14和0.71±0.11,摄取谷氨酸量分别为(65.29±0.89),(34.96±13.27),(57.33±18.56),(52.34±13.07),(55.50±4.54),(52.94±12.30),(48.73±11.27)和(52.15±7.52)nmol·L^-1。与模型组相比,正常组和3个高剂量组的细胞活力均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.001);与低剂量联合组相比,3个高剂量组的细胞活力均显著升高,正常组、低剂量丹参多酚酸组和低剂量血栓通组的摄取谷氨酸量均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与高剂量联合组相比,3个低剂量组的细胞活力均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论低剂量丹参多酚酸组和低剂量血栓通组可以提高受损星形胶质细胞谷氨酸摄取能力,高剂量丹参多酚酸组、高剂量血栓通组和低、高剂量联合组对受损星形胶质细胞谷氨酸摄取能力无影响。     

白藜芦醇对培养大鼠脑皮层星形胶质细胞增殖及谷氨酸代谢的影响

目的 探讨不同浓度向藜芦醇(resveratrol,Res)对培养大鼠脑皮层星形胶质细胞增殖及谷氨酸代谢功能的影响.方法 原代提取并纯化培养脑皮层星形胶质细胞.采用5-溴脱氧尿核苷(BrdU)掺入法检测细胞增殖:通过同位素掺人法和ELISA法检测谷氨酸代谢指标:谷氨酸摄取量、总谷胱苷肽(GSH)含量和谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase,GS)含量与活性.结果 Res抑制细胞增殖并随着浓度升高和培养时间延长而抑制增强.Res浓度为25μM和50μM时,谷氨酸摄取量和GSH含量显著增加(P<0.05).而大于250μM时,两者却降低,但在此高浓度下,GS的细胞含量与活性却显著升高(P<0.05),而在低浓度时无任何变化.结论 Res可抑制星形胶质细胞增殖;对其谷氨酸代谢具有二元效应,即低浓度可促进谷氨酸代谢,高浓度则降低谷氨酸代谢.     

埃他卡林增强星形胶质细胞摄取谷氨酸的作用

目的研究新型ATP敏感性钾通道开放剂(KATPCO)埃他卡林(iptakalim,Ipt)对星形胶质细胞摄取谷氨酸的影响。方法取新生大鼠脑星形胶质细胞作原代培养，将Ipt直接作用于细胞，观察它对正常和6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤模型细胞摄取谷氨酸的影响；分别加入阳性对照药吡那地尔和非特异性钾通道阻断药格列本脲分析Ipt的作用机制。根据［³H］标记的D,L-谷氨酸摄入量判断细胞谷氨酸摄取作用强度。结果Ipt和吡那地尔都能增强星形胶质细胞的谷氨酸摄取作用、逆转6-OHDA引起的谷氨酸摄取抑制效应，预先加入格列本脲后，上述作用均被取消。结论埃他卡林可能通过促进钾通道开放增强星形胶质细胞摄取谷氨酸的作用。     

疏血通注射液对缺氧缺糖后星形胶质细胞内谷氨酸清除的影响

脑血管闭塞后,神经元突触前膜释放的谷氨酸无法很快的被突触后膜转运,导致在神经元外部的谷氨酸大量聚集[1]。星形胶质细胞可通过兴奋性氨基酸转运蛋白2(excitatory amino acid transporters 2,EAAT2)清除过量的谷氨酸[2]。有研究表明,EAAT2在急性缺血性脑中风时的表达大量减少,而增加EAAT2的表达可对神经产生保护作用[3]。     

谷氨酸和γ-氨基丁酸对原代培养星形胶质细胞神经甾体合成释放的影响

目的研究氨基酸类神经递质对原代培养大鼠大脑皮质星形胶质细胞神经甾体合成释放的影响。方法采用原代培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞,分别加入不同浓度的谷氨酸和γ-氨基丁酸处理48h;采用固相萃取结合高效液相色谱质-谱联用分析方法提取分离和测定细胞培养液中游离型(脱氢表雄酮,DHEA;孕烯醇酮,PREG;别孕烯醇酮,AP)及结合型神经甾体(脱氢表雄酮硫酸酯,DHEAS;孕烯醇酮硫酸酯,PREGS)。结果与生理盐水对照组比较,谷氨酸处理使PREG和PREGS水平明显下降,DHEAS水平明显升高;γ-氨基丁酸处理使PREG水平明显降低,AP水平增加。结论谷氨酸和γ-氨基丁酸两种神经递质对原代培养的星形胶质细胞PREG合成释放均呈抑制作用;谷氨酸对DHE-AS、γ-氨基丁酸对AP的合成释放分别呈现明显促进作用;高剂量的谷氨酸还可以抑制PRGES的合成和释放。     

谷氨酸引起星形胶质细胞核形态改变

谷氨酸是中枢神经系统中最主要的兴奋性神经递质,参与脑细胞问兴奋性信息的传递。星形胶质细胞表面丰富的谷氨酸转运蛋白可以有效清除细胞外谷氨酸,以终结谷氨酸的信号传递作用,但谷氨酸摄取的潜在生物学功能尚不明确。本研究首次证明谷氨酸进入星形胶质细胞后,直接引起细胞核发生形态改变。细胞核形态改变是谷氨酸的特异反应,与细胞外谷氨酸浓度密切相关。细胞膜表面的谷氨酸转运蛋白直接参与细胞核形态调节,而与离子型、代谢型谷氨酸受体,细胞内钙离子浓度改变无关。我们进一步证实水通道蛋白-1（AQP1）分布于星形胶质细胞核膜表面,并直接参与了谷氨酸引起的核形态调节。本项目证明细胞外谷氨酸通过转运蛋白和AQP1直接调节星形胶质细胞核形态,提示神经元兴奋性调节细胞核形态功能的潜在机制。     

布比卡因抑制谷氨酸诱导大鼠海马星形胶质细胞内钙升高的机制

本文以原代培养的大鼠海马星形胶质细胞为研究对象,探讨布比卡因(bupivacaine)抑制谷氨酸诱导的海马星形胶质细胞内钙升高的机制。运用免疫荧光技术确定代谢型谷氨酸受体(mGluR5受体)在神经元和星形胶质细胞上的表达情况;利用钙离子成像技术,观察布比卡因和mGluR5受体拮抗剂2-甲基-6-(苯乙炔)吡啶盐酸盐[2-methyl-6-(2-phenylethynyl)-pyridine, MPEP]对谷氨酸诱导的大鼠海马神经元和星形胶质细胞胞内游离钙(intracellular free Ca²⁺concentration,[Ca²⁺]_i)变化的影响;观察布比卡因对mGluRs (mGluR1/5)受体激动剂(RS)-3,5-二羟基苯基甘氨酸[(RS)-3,5-dihydroxyphenylglycine, DHPG]及mGluR5受体特异性激动剂2-氯-5羟苯基甘氨酸钠盐[(RS)-2-chloro-5-hydroxyphenylglycine sodium salt, CHPG]诱导的大鼠海马神经元和星形胶质细胞...     

强啡肽A_(1～13)对谷氨酸诱导的大鼠星形胶质细胞肿胀的影响

目的　建立谷氨酸诱导的大鼠星形胶质细胞肿胀模型,观察 Ｄｙｎ Ａ１ ～１３ 对谷氨酸诱导的大鼠星形胶质细胞肿胀的影响。方法　［３ Ｈ］ ３ 氧甲基 Ｄ 葡萄糖摄取测定细胞含水量。结果　①给予０５ ,１０ ,１００ ｍ ｍｏｌ· Ｌ－ １ 的谷氨酸作用１ ｈ 均可引起细胞的含水量增加。②强啡肽 Ａ（ Ｄｙｎ Ａ） 可降低谷氨酸诱导肿胀的大鼠星形胶质细胞含水量。③κ受体拮抗剂ｎｏｒ Ｂ Ｎ Ｉ可阻断 Ｄｙｎ Ａ１ ～１３ 降低谷氨酸诱导的肿胀大鼠星形胶质细胞含水量的作用。结论　谷氨酸可诱导大鼠星形胶质细胞肿胀; Ｄｙｎ Ａ１ ～１３ 可通过激活κ受体抑制谷氨酸诱导的大鼠星形胶质细胞肿胀     

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究盐酸法舒地尔(FH)对大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞与无糖Na2S2O42 mmol·L-1孵育4 h,制备OGD模型。FH 5和10μmol·L-1在OGD前2 h加入。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH);乙炔基脱氧尿苷(Ed U)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光双染观察细胞凋亡;2,7-二氯氢化荧光素(DHCF-DA)荧光染色和硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果与正常对照组比较,OGD模型组星形胶质细胞存活率为(24±6)%,下降了4倍(P<0.01);OGD模型组LDH释放量显著升高至(366±7)U·L-1(P<0.01)。加入FH 5和10μmol·L-1的预处理组,细胞存活率分别上升至(42±5)%和(43±5)%,LDH释放分别下降至290±18和(268±20)U·L-1(P<0.01),细胞Ed U阳性率由OGD模型组的(47±6)%,分别下降到(35±6)%和(29±5)%(P<0.01)。Hoechst染色及AO/EB双染实验结显示,FH能显著减少OGD损伤后细胞的凋亡及坏死,使晚期凋亡细胞比例减少(P<0.05);DCFH-DA荧光和NBT还原实验显示,FH降低OGD损伤后ROS水平,且FH10μmol·L-1的预处理组降低的幅度比5μmol·L-1的预处理组更明显,但两组差异无统计学意义。结论FH对传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞OGD具有保护作用,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关。     

KATP开放剂埃他卡林对高K+刺激PC12细胞释放谷氨酸的影响

目的：研究KATP开放剂埃他卡林（iptkalim,IPT)对高K^ 刺激PC12释放谷氨酸（Glu)的影响及其作用机制。方法：以培养的PC12细胞为模型细胞，应用HPLC法测定细胞培养液中Glu含量。结果：IPT以浓度依赖方式抑制高K^ 刺激PC12细胞释放Glu，格列苯脲（Gli)增强高K^ 刺激PC12细胞释放Glu的效应，并部分逆转IPT的抑制效应，PKC抑制剂HA-100和钙调素（CaM)拮抗剂三氟拉嗪不影响高K^ 刺激PC12细胞释放Glu，也不拮抗Gli的增强效应。结论：IPT抑制Glu释放与开放KATP有关，Gli拮抗IPT的抑制效应并非由PKC或CaM信号传导途径介导。     

地黄寡糖对谷氨酸诱导的海马神经元损伤及葡萄糖摄入的影响

目的观察地黄寡糖(ROS)对谷氨酸(Glu)诱导海马神经元损伤及葡萄糖摄入的影响。方法将培养7d的SD大鼠海马细胞随机分为对照组、活性ROS用药组(4,20及100mg.L-1)、Glu损伤组(Glu0.1mmol.L-1)及Glu损伤前ROS预处理组(ROS+Glu)。采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,比色法测定培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)活性,[3H]葡萄糖掺入法测定神经元葡萄糖的摄取。结果单纯ROS4,20及100mg.L-1组与对照组间各指标差异没有显著性(P>0.05)。ROS4,20及100mg.L-1预处理可使Glu损伤的细胞存活率由70.4%分别上升为77.8%,85.2%,92.6%,同时也改善了神经细胞形态并减少LDH的漏出;[3H]葡萄糖掺入量也由Glu损伤组的(1547±120)分别下降为(1384±181),(1303±123),(1134±123)cpm。结论ROS对Glu引起的神经元损伤具有保护作用,这种保护作用可能与其抑制神经细胞对葡萄糖的过度摄入有关。     

Effect of methyl isocyanate on rabbit cardiac Na+, K+-ATPase

 The present study describes the effect of methyl isocyanate (MIC) on rabbit cardiac microsomal Na⁺, K⁺-ATPase. Addition of MIC in vitro resulted in dose-dependent inhibition of Na⁺, K⁺-ATPase, Mg²⁺-ATPase and K⁺-activated p-nitrophenyl phosphatase (K⁺-PNPPase). Activation of Na⁺, K⁺- ATPase by ATP in the presence of MIC showed a decrease in V_max with no change in K_m. Similarly, activation of K⁺ PNPPase by PNPP in the presence of MIC showed a decrease in V_max with no change in K_m. The circular dichroism spectral studies revealed that MIC interaction with Na⁺, K⁺-ATPase led to a conformation of the protein wherein the substrates Na⁺ and K⁺ were no longer able to bind at the Na⁺- and K⁺-activation sites. The data suggest that the inhibition of Na⁺, K⁺-ATPase was non-competitive and occurred by interference with the dephosphorylation of the enzyme-phosphoryl complex. Received: 3 November 1994/Accepted: 23 February 1995     

mGluR5拮抗剂SIB-1893逆转6-OHDA抑制星形胶质细胞摄取谷氨酸的作用

目的 :研究亲代谢型谷氨酸受体 5 (mGluR5 )拮抗剂 (E) 2 甲基 6 (2 苯乙烯 )嘧啶 (SIB 1893)及6 羟基多巴胺 (6 OHDA)对星形胶质细胞摄取谷氨酸功能的影响。方法 :取新生大鼠脑星形胶质细胞作原代培养 ,根据 [3 H]标记的D ,L 谷氨酸摄入量判断细胞的谷氨酸摄取功能。应用高效液相色谱法(HPLC)与荧光检测器联用的方法检测培养液中的谷氨酸水平 ;乳酸脱氢酶 (LDH)释放法测定细胞活力。结果 :6 OHDA呈浓度依赖性抑制星形胶质细胞谷氨酸摄取功能、降低细胞活力 ,但不诱导细胞释放谷氨酸 ;SIB 1893不影响正常星形胶质细胞的谷氨酸摄取量 ,但可以增加 6 OHDA损伤组的谷氨酸摄取量。结论 :6 OHDA的神经损伤机制可能与其抑制星形胶质细胞谷氨酸摄取功能有关 ,SIB 1893则能逆转 6 OHDA引起的谷氨酸摄取抑制效应 ,具有神经保护作用     

薏苡仁酯对荷瘤小鼠Na+,K+-ATPase活性的影响

本文采用Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性研究了薏苡仁酯对Ｓ１８０小鼠、ＥＡＣ小鼠及Ｌ６１５小鼠红细胞免疫功能的影响,结果表明,薏苡仁酯能明显降低荷瘤小鼠红细胞膜Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰａｓｅ活性。     

胍丁胺对慢性应激大鼠海马神经元和星形胶质细胞的影响

目的在海马神经元和星形胶质细胞水平探讨胍丁胺抗抑郁作用机制。方法采用多种应激方式建立大鼠慢性应激抑郁模型,通过开场实验和蔗糖饮水实验观察模型组、阳性对照药氟西汀组(10 mg.kg-1,ig)和胍丁胺组(20 mg.kg-1,ig)大鼠的行为学变化;应用神经元标志物——微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2,MAP2)和星形胶质细胞标志物——胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidicprotein,GFAP)免疫组织化学染色,观察各组大鼠海马神经元和星形胶质细胞形态改变。结果慢性应激模型组大鼠开场实验水平运动得分和垂直运动得分明显降低,蔗糖偏嗜度明显降低,氟西汀和胍丁胺可逆转此变化;免疫组化结果显示,慢性应激模型组MAP2和GFAP表达明显减弱,表现为海马神经元突起长度和数目以及星形胶质细胞的数量和突起数量明显降低,氟西汀和胍丁胺可改善此病理变化。结论海马神经元和星形胶质细胞共同参与抑郁症发生,胍丁胺可逆转慢性应激引起的细胞形态结构改变,发挥抗抑郁作用。     

千金黄连片对高脂高糖致糖耐量异常模型大鼠的治疗作用

目的 观察千金黄连片对高脂高糖致糖耐量异常模型大鼠的治疗作用。方法 选用4～6周龄的雄性SD大鼠90只,随机选取10只作为对照组,剩余大鼠喂饲高脂高糖饲料,连续喂饲5个月,测定对照组及模型组大鼠糖负荷（2.5 g·kg^-1）后0.5 h血糖值,挑选糖耐量异常的大鼠［0.5 h血糖值＞8.5 mmol·L^-1及0.5 h血糖值、血糖曲线下面积（AUC）均显著大于对照组］70只随机分为7组：模型组、盐酸二甲双胍片（125 mg·kg^-1）组、金芪降糖片（2.1 g·kg^-1）组、辛伐他汀组（0.8 mg·kg^-1）和千金黄连片高、中、低剂量（生药6.50、3.25、1.60 g·kg^-1）组,ig给药,给药体积10 mL·kg^-1,每天给药1次,连续给药28 d,对照组与模型组给予等量去离子水。观察千金黄连片给药1次对糖耐量的影响及给药多次对糖耐量、胰岛素耐量、淀粉耐量、血脂的影响：①糖耐量：禁食但不禁水12 h后,各组ig给予2.5 g·kg^-1的葡萄糖,分别测定给予葡萄糖前、给予葡萄糖后30、60、120 min各组大鼠血糖水平并计算AUC;②胰岛素耐量：动物不禁食,测定给胰岛素前血糖,各组sc给予5 U·kg^-1的胰岛素溶液,测定给予胰岛素后45、90、180 min各组大鼠的血糖水平并计算AUC;③淀粉耐量：禁食但不禁水16 h后,各组ig给予2.5 g·kg^-1的淀粉糊,分别测定给淀粉前、给予淀粉后30、60、120 min各组大鼠血糖水平。于连续给药4周后检测大鼠血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）水平。结果 与模型组比较,千金黄连片给药1次、给药1周、给药3周能显著降低高脂高糖致糖耐量异常大鼠糖负荷后血糖水平及AUC（P＜0.05、0.01、0.001） ;给药3周能使胰岛素降血糖作用显著增强（P＜0.05、0.01）;给药4周能显著降低淀粉负荷后血糖（P＜0.05、0.01）,显著降低血清TG、LDL-C水平（P＜0.01、0.001）。结论 千金黄连片能显著地改善糖耐量异常;增强胰岛素敏感性,改善胰岛素抵抗;显著降低血清TG、LDL-C水平,改善脂质代谢异常。其降血糖作用与盐酸二甲双胍片相当,强于金芪降糖片,其改善胰岛素抵抗、增加胰岛素敏感性的作用强于盐酸二甲双胍片和金芪降糖片,调节血脂的作用与盐酸二甲双胍片、辛伐他汀相当。     

Reduced inhibition of cortical glutamate and GABA release by halothane in mice lacking the K+ channel, TREK-1

BACKGROUND AND PURPOSE: Deletion of TREK-1, a two-pore domain K(+) channel (K(2P)) activated by volatile anaesthetics, reduces volatile anaesthetic potency in mice, consistent with a role for TREK-1 as an anaesthetic target. We used TREK-1 knockout mice to examine the presynaptic function of TREK-1 in transmitter release and its role in the selective inhibition of glutamate vs GABA release by volatile anaesthetics. EXPERIMENTAL APPROACH: The effects of halothane on 4-aminopyridine-evoked and basal [(3)H]glutamate and [(14)C]GABA release from cerebrocortical nerve terminals isolated from TREK-1 knockout (KO) and littermate wild-type (WT) mice were compared. TREK-1 was quantified by immunoblotting of nerve terminal preparations. KEY RESULTS: Deletion of TREK-1 significantly reduced the potency of halothane inhibition of 4-aminopyridine-evoked release of both glutamate and GABA without affecting control evoked release or the selective inhibition of glutamate vs GABA release. TREK-1 deletion also reduced halothane inhibition of basal glutamate release, but did not affect basal GABA release. CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS: The reduced sensitivity of glutamate and GABA release to inhibition by halothane in TREK-1 KO nerve terminals correlates with the reduced anaesthetic potency of halothane in TREK-1 KO mice observed in vivo. A presynaptic role for TREK-1 was supported by the enrichment of TREK-1 in isolated nerve terminals determined by immunoblotting. This study represents the first evidence for a link between an anaesthetic-sensitive 2-pore domain K(+) channel and presynaptic function, and provides further support for presynaptic mechanisms in determining volatile anaesthetic action.