尼克酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂改善老年小鼠认知障碍

目的研究尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)抑制剂FK866,对老年小鼠和老年性痴呆小鼠认知障碍的影响。方法自然衰老的小鼠(17月龄起)和年轻小鼠(3月龄起),腹腔注射FK866分2组,分别为1 mg·kg~(-1)FK866(1周2次,合计每周2 mg),0.5 mg·kg~(-1)FK866(隔天1次,合计每周1.75 mg),连续1个月后,进行行为学检测,以开场活动、高架十字迷宫检测小鼠的焦虑状态,以新事物探究、Y-迷宫、恐惧记忆检测小鼠的短期记忆,检测小鼠的血糖、血脂,以免疫荧光染色和免疫印迹方法检测小鼠脑内慢性炎症(包括星型胶质细胞和小胶质细胞的激活)和神经元自吞噬水平。结果 FK866在2种用药方式时,均能够改善老年小鼠的学习记忆障碍,对小鼠焦虑样行为无影响。同时FK866能够抑制老年小鼠星型胶质细胞和小胶质细胞的激活,促进神经元自吞噬(包括线粒体自噬)。然而,1 mg·kg~(-1)FK866(1周2次)能够增加老年小鼠的血糖水平,而0.5 mg·kg~(-1)FK866(隔天1次)对血糖无影响,对血脂均无影响。此外,FK866对年轻小鼠无明显影响。结论低剂量使用FK866可改善老年小鼠的认知障碍,用于痴呆的预防。     

小胶质细胞通过外泌体释放烟酰胺磷酸核糖转移酶

目的探索炎症条件下小胶质细胞释放烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)的机制。方法采用原代培养的小胶质细胞和小胶质细胞株BV2细胞,以缺糖缺氧再灌注(OGD/R)、TNF-α和ATP诱导细胞炎症,以经典的蛋白释放途径抑制剂和P2X7受体阻断剂、钙离子载体、钙离子螯合剂、磷脂酶D(PLD)途径抑制剂为干预,并采用普通透射电镜、免疫电镜、超速离心法分离和Western蛋白印迹法等确定NAMPT的定位和表达。结果 OGD/R和TNF-α诱导细胞的炎症中,(1)小胶质细胞可主动释放NAMPT;(2) NAMPT不经过经典的内质网/高尔基体途径释放;(3)胞外ATP可增强炎症条件下的NAMPT释放,且NAMPT释放由P2X7受体和细胞内Ca2+介导;(4) PLD抑制剂正丁醇,PLD si RNA和PI3K抑制剂wortmannin显著降低OGD/R和ATP诱导的小胶质细胞NAMPT释放;(5)在排除释放性自噬、内体和释放性溶酶体的机制后,以普通扫描电镜和免疫电镜鉴定具有外泌体的大小和形态特征的细胞外囊泡含有大量NAMPT;(6)以超速离心收集经OGD/R处理的小胶质细胞释放的外泌体,Western蛋白印迹实验进一步证实NAMPT和外泌体标记蛋白有共同表达;(7) NAMPT相对于外泌体蛋白标记的量保持不变,表明小胶质细胞外泌体中的NAMPT负荷量是一定的。结论神经炎症过程中,NAMPT由小胶质细胞通过外泌体主动释放。     

尼克酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂的抗肿瘤作用研究进展

尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT)是哺乳动物细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)补救合成通路的限速酶。NAMPT通过合成NAD,参与调节细胞内重要的生理病理过程。近年研究发现,NAMPT与肿瘤发生、发展有着密切关系,抑制NAMPT可以起到有效的抗肿瘤作用。NAMPT已成为抗肿瘤药物研究新靶点,其抑制剂FK866、GMX1778作为抗肿瘤药,已经进入临床试验。NAMPT抑制剂作用机制的研究主要包括诱导细胞凋亡、细胞自吞噬、抑制细胞增殖、血管生成等。本文综述了NAMPT抑制剂的抗肿瘤作用及机制研究。     

烟酰胺磷酸核糖转移酶基因编辑对人胚胎干细胞生长影响的研究

目的 研究烟酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide phosphoribosyl transferase,Nampt）基因在人胚胎干细胞生长中的作用。方法 采用CRISPR/Cas9技术对人胚胎干细胞H9细胞系的Nampt基因进行移码突变;随后,筛选Nampt基因突变细胞系进行基因测序,同时在显微镜下观察其生长状态。另外,给予H9细胞不同浓度的Nampt抑制剂FK866进行干预,采用CCK-8试剂盒检测细胞活力。结果 Nampt基因发生突变后,人胚胎干细胞会逐渐死亡。同样,Nampt抑制剂FK866也会抑制胚胎干细胞的活力,使细胞逐渐死亡。结论 Nampt基因对维持人胚胎干细胞生长具有不可或缺的重要作用。     

敲减烟酰胺磷酸核糖转移酶基因促进转化生长因子β1诱导的人胚肺成纤维细胞自噬功能的观察

目的 探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)基因的表达对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞系MRC-5细胞自噬功能的影响.方法 基于基因表达综合数据库和人类自噬基因数据库,运用R软件筛选出GSE53845、GSE10667数据集中差异表达的自噬相关基因NAMPT.选择2018年1月至2020年3月于...     

HPLC法测定人红细胞中次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性

目的:建立一种检测次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）活性的高效液相色谱法,并检测患者红细胞中HGPRT活性。方法:在5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP）条件下,HGPRT催化次黄嘌呤生成次黄嘌呤核苷酸（IMP）,高氯酸沉淀蛋白后进行高效液相色谱法分析。采用Hypersil ODS C₁₈（150 mm×4.6 mm,5μm）柱;流动相为磷酸氢盐缓冲液-乙腈（99.6:0.4）,流速1 ml·min^-1,在262 nm处检测IMP。应用新建立的高效液相色谱法测定68例服用过硫唑嘌呤的肾移植患者红细胞中HGPRT活性。结果:在该条件下,测得的线性范围是20～600μmol·L^-1,检测限是20μmol·L^-1,其日间和日内精密度均小于5%,方法回收率和提取回收率分别在100.81%～101.91%和99.05%～101.40%范围内。65例患者红细胞HGPRT活性范围为44.59～123.86 U,平均（87.83±21.55）U。结论:该法操作简便、灵敏度高、重复性好,适用于临床常规检测。     

烟酰胺磷酸核糖转移酶的调控因素及药物作用

烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）是生命过程中不可或缺的蛋白,具有多种生理功能,对许多疾病如心脑血管疾病、糖尿病、癌症、自身免疫性疾病等有潜在的作用。阐明各种生理、病理状态以及化合物对Nampt表达水平的改变,可为Nampt的基础性和应用性研究起到推动作用。本文就各种因素对Nampt转录、表达调控的研究进展进行了较为系统的综述。     

叶酸依赖性酶抑制剂的抗肿瘤活性

 叶酸依赖性酶以四氢叶酸衍生物为辅酶,在细胞DNA的生物合成中发挥重要作用。叶酸依赖性酶抑制剂通过抑制叶酸依赖性酶与正常底物的结合,干扰一碳代谢与叶酸代谢,阻碍DNA的生物合成,从而导致肿瘤细胞死亡。作为抗肿瘤药物作用靶点的叶酸依赖性酶,主要包括二氢叶酸还原酶、胸苷酸合成酶、甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰基转移酶和咪唑甲酰胺核苷酸甲酰转移酶等。本文根据酶的分类,综述近年来叶酸依赖性酶抑制剂的抗肿瘤药物的研究进展。     

靛红衍生物类棕榈酰基转移酶抑制剂的设计、合成及抗肿瘤活性研究

基于已知化合物的化学结构,利用生物电子等排体原理,结合分子对接技术设计合成了12个靛红衍生物类棕榈酰基转移酶抑制剂,测定了其体外抗肿瘤活性并进行了分子对接研究。目标化合物结构均已由核磁共振氢谱(~1H NMR)、核磁共振碳谱(¹³C NMR)和高分辨质谱(HR-MS)进行了确证。体外抗肿瘤实验结果表明,化合物5b对棕榈酰基转移酶高表达的MCF-7细胞表现出的抑制活性与对照药(IC₅₀=8.4μmol·L^-1)相当,IC₅₀为12.0μmol·L^-1。化合物4b对He La细胞(IC₅₀=8.1μmol·L^-1)的抑制活性优于顺铂(IC₅₀=40.1μmol·L^-1)。同时分子对接结果表明,化合物均能完全进入3’-磷酸腺苷-5’-二磷酸(PAP)活性口袋内,且5b打分值最好,具有进一步的研究价值。     

新型PARP-1抑制剂的合成及体外抗肿瘤活性研究

目的设计合成2个系列新型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)抑制剂并测定其体外抗肿瘤细胞增殖活性。方法以上市药物为先导化合物,设计合成了系列以6,8-二氟-2-硫代-2,3-二氢喹唑啉-4(1H)-酮及6-氟-2-硫代-2,3-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(1H)-酮为母核结构的化合物。采用Alarm Blue法测定目标化合物对体外培养的人源乳腺癌细胞MDA-MB-436的增殖抑制作用。结果与结论合成了10个未见文献报道的新化合物,其结构经~1H-NMR、~(13)C-NMR、质谱确证。初步体外细胞活性结果表明,目标化合物对MDA-MB-436细胞具有一定的增殖抑制作用(IC_(50)值为14.1～1 246 nmol·L~(-1));具有6,8-二氟-2-硫代-2,3-二氢喹唑啉-4(1H)-酮母核的目标化合物16a～16e对MDA-MB-436细胞的抑制活性普遍高于目标物16f～16j,其中,化合物16c的抑制活性略低于阳性对照药奥拉帕尼;6,8-二氟-2-硫代-2,3-二氢喹唑啉-4(1H)-酮母核具有一定的抑制肿瘤增殖活性,可为化合物进一步的结构修饰提供参考依据。     

Natural and synthetic acridines/acridones as antitumor agents: their biological activities and methods of synthesis

Acridine derivatives constitute a class of compounds that are being intensively studied as potential anticancer drugs. Acridines are well-known for their high cytotoxic activity; however, their clinical application is limited or even excluded because of side effects. Numerous synthetic methods are focused on the preparation of target acridine skeletons or modifications of naturally occurring compounds, such as acridone alkaloids, that exhibit promising anticancer activities. They have been examined in vitro and in vivo to test their importance for cancer treatment and to establish the mechanism of action at both the molecular and cellular level, which is necessary for the optimization of their properties so that they are suitable in chemotherapy. In this article, we review natural and synthetic acridine/acridone analogs, their application as anticancer drugs and methods for their preparation.     

Inhibition of hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase.

The affinities of eighteen purines or purine analogs for human erythrocytic hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase (EC 2.4.2.8; HGPRTase) were compared to assess the feasibility of obtaining active inhibitors of the enzyme. Three compounds appeared to inhibit the utilization of hypoxanthine by L5178Y cells in vitro due to inhibition of the enzyme rather than depletion of the intracellular 5-phosphoribosyl-1-pyrophosphate pool. The three competitive inhibitors and their affinity constants (K_i) using 6-mercaptopurine as substrate were: 6-mercapto-9-(tetrahydro-2-furyl)-purine, 37 μM; 2,6-bis-(hydroxyamino)-9-β-d-ribofuranosyl-purine, 12 μM; and 6-iodo-9-(tetrahydro-2-furyl)-purine, 108 μM. The KInm for 6-mercaptopurine was 9 μM. Thus, the enzyme tolerates bulky substitution at N⁹. 6-Mercapto-9-(tetrahydro-2-furyl)-purine also potentiated the chemotherapeutic effect of azaserine, an inhibitor of de novo purine biosynthesis, in L5178Y ascites tumor-bearing mice. Four 2-substituted, oxazolo-[5, 4-d]-pyrimidine-7-ones and 2-methylthiazolo-[5, 4-d]-pyrimidine-7-one had K_i values in the range of 84–173 μM. Consequently, isosteric substitution at N⁹ may also be a fruitful and logical course to pursue in the design and synthesis of more potent inhibitors of this important enzyme.     

Synthesis and Comparative Study of Anti‐Mycobacterium Activity of a Novel Series of Fluoronitrobenzothiazolopyrazoline Regioisomers

In an attempt to find a new and a safer drug for tuberculosis, we have synthesized a series of fluoronitrobenzothiazolopyrazolines for antitubercular activity. The series comprises three subclasses: fluorobenzothiazolopyrazolines ( 11a–f ), fluoronitrobenzothiazolopyrazoline, nitro group at 5^th position ( 12a–f ) and 4^th position ( 13a–f ). All compounds were screened for their in‐vitro antitubercular activity against Mycobacterium tuberculosis H37Rv strain by using Middlebrook 7H‐9 broth. An introduction of ? NO₂ group at 5^th position of benzothiazole ring ( 12a–f ) increased the antitubercular activity whereas introduction of ? NO₂ group at 4^th position ( 13a–f ) was found to decrease the activity remarkably. Two compounds from each series showing good antitubercular activity were tested for cytotoxicity on THP‐1 cell lines and they showed low cytotoxicity.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂的合成及其体外抗肿瘤研究

目的设计并合成组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi),并对其组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制活性和体外抗肿瘤活性进行研究。方法以N-Boc-对苯二胺和辛二酸酐为起始原料,反应制得7-(N-Boc-氨基)苯胺甲酰基庚酸,再通过胺醛缩合反应合成HDACi;并采用HDACs试剂盒和CCK-8试剂盒测试所合成目标化合物抑制HDACs的活性和抗肿瘤活性。结果合成了26个新化合物,其结构均经过核磁共振氢谱和质谱进行了确证。初步的生物活性测试结果表明,所合成的目标化合物对HDACs的抑制活性均强于阳性药物伏立诺他,并对MCF-7、PC-3、HepG2、MGC-803和KB 5种肿瘤细胞有不同程度的抑制活性,其中希夫碱含有吸电子基的化合物对HDACs的抑制活性以及抗肿瘤活性强于其他衍生物。尤其是4-氰基化合物11c对HDACs展现出了最强的抑制活性,是阳性药伏立诺他的58倍;同时,化合物11c对肿瘤细胞MCF-7、PC3、MGC-803和HepG2展现出了最强的抗肿瘤活性,其抗胃癌MGC-803甚至是阳性药物伏立诺他的7.2倍。结论希夫碱是一类重要的抗肿瘤药效团,能够提高HDACi的抗肿瘤活性,为今后发展新型、高效的HDACi提供了新的思路。     

二氢黄酮类衍生物的合成及抗肿瘤活性研究

目的 设计合成一系列全新二氢黄酮类化合物,并评价其抗肿瘤活性。方法 以间二甲苯为原料,经硝化、还原、水解、缩合等反应制得目标化合物。采用SRB法、MTT法,以顺铂为阳性对照药,以人肿瘤细胞Bel-7402、HL-60、BGC-823和KB为测试细胞株对目标化合物进行体外抗肿瘤活性评价。 结果与结论 合成了 11 个二氢黄酮类化合物,目标化合物的结构经质谱、核磁共振氢谱确证。化合物5b、5c、5d、5f、5h对人肿瘤细胞KB具有很好的抑制活性,化合物5f、5h同时也对人肿瘤细胞Bel-7402、BGC-823 具有一定的抑制作用。     

N-（氨基吡啶）苯甲酰胺类组蛋白去乙酰化酶抑制剂的合成及其抗肿瘤活性研究

目的 寻找新型组蛋白去乙酰化酶（HDACs）抑制剂,探讨其初步构效关系。方法 在前期研究发现活性结构 Ａ和Ｂ的基础上,参考恩替司他（MS-275）的结构特点,设计合成系列N-（氨基吡啶）苯甲酰胺类新化合物。采用苯并三氮唑-N,N,N',N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)为缩合剂,以取代羧酸与2,3-二氨基吡啶或3, 4-二氨基吡啶反应生成系列含N-（氨基吡啶）结构的目标化合物;采用CCK-8 法并进行体外组蛋白去乙酰化酶抑制活性及抗肿瘤细胞增殖活性测试。 结果 共合成 18 个未见文献报道的新化合物,其结构经质谱、核磁共振氢谱确认。体外抗肿瘤初步研究表明：所有目标化合物均具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性及抗肿瘤细胞增殖活性,Ⅴ-12、Ⅴ-13 和Ⅴ-16等化合物体外抑酶活性和抗肿瘤活性与阳性对照药MS-275相当,值得进一步深入研究。结论 初步构效关系研究发现,含有活性结构B的化合物具有更好的体外抗肿瘤活性;适当增加化合物酶表面识别区基团（R基团）的空间位阻或在R基团上引入供电子取代基将会增强化合物的抗肿瘤活性。     

含硼小分子固醇调控元件结合蛋白抑制剂的合成及其体外抗肿瘤活性研究

目的设计、合成固醇调控元件结合蛋白(SREBP)抑制剂BF-175的衍生物,并对其稳定性和体外抗肿瘤活性进行研究。方法以水杨醛为起始原料,通过6步反应合成了一系列含硼小分子SREBP抑制剂,通过高效液相色谱法分析其稳定性,并采用RT-PCR实验评价其抗肿瘤活性。结果合成了9个含硼小分子SREBP抑制剂,并通过NMR和MS对其进行表征。其药学稳定性均优于BF-175。RT-PCR检测表明目标化合物可以抑制人子宫内膜腺癌细胞(AN3CA)中SREBP靶基因硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)的表达,其中化合物7g的活性高于BF-175。结论含硼小分子SREBP抑制剂具有较好的抗肿瘤活性,为此类药物的作用机制研究奠定了基础。     

美法仑衍生物的合成及其抗肿瘤活性研究

目的以苦参碱和18α-甘草次酸作为载体对美法仑进行结构拼合,并对其体内外抗肿瘤活性进行研究。方法以槐果碱和美法仑为原料,经过加成、酰化反应合成了美法仑衍生物2;以18α-甘草次酸和美法仑为原料,经酯化和酰化反应合成了美法仑衍生物5,目标化合物的结构经元素分析、MS、1H-NMR确证,并采用MTT法对其进行体外抗肿瘤活性研究,对体外活性较为显著的化合物2进行小鼠体内试验。结果目标化合物2和5的合成总收率分别为21.3%、18.1%。目标化合物2的体外抗肿瘤活性明显高于化合物5、18α-甘草次酸、苦参碱和美法仑。体内活性试验中,目标化合物2给药剂量为6、9μmol/kg时对Hep A肿瘤的抑瘤率分别为52.00%、62.12%,而6μmol/kg美法仑的抑制率为39.93%,化合物2的抑瘤效果优于美法仑,尤以高剂量效果最为明显。结论化合物2表现出体外、体内较高的抗肿瘤活性,值得进一步研究。     

10-羟基喜树碱衍生物的合成及体外抑制肿瘤活性

目的寻找高效低毒的喜树碱类抗肿瘤新药。方法合成7个喜树碱衍生物（3~9），经¹HNMR，IR，MS分析确证了所合成化合物的结构，经MTT法筛选了对宫颈癌Hela、肝癌BEL-7402、胃癌7901和大肠癌CCL-187瘤株的体外抑制肿瘤活性。结果7个化合物分别对前三种瘤株有效，其中化合物4对前三种瘤株均有较好的体外抑制肿瘤细胞活性，尤其对宫颈癌Hela细胞的抑制活性大于10-羟基喜树碱。结论该类化合物的抗癌活性值得进一步研究。