天然及氧化修饰脂蛋白对人动脉平滑肌细胞原癌基因表达的影响

天然及氧化修饰脂蛋白对人动脉平滑肌细胞原癌基因表达的影响汪浩川，刘秉文，傅明德。华西医科大学生物化学与分子生物学研究所生物化学与生物物理学报１９９５；２７（５）∶５０７动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ＡＳ）的形成过程中极其重要。我们在建...     

天然和氧化修饰型脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞形态的影响

在建立人主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）体外培养方法的基础上，观察了各种天然和氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣ形态以及表型的影响。在氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ），氧化修饰高密度脂蛋白（Ｏｘ－ＨＤＬ）和氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）的作用下，ＳＭＣ形态发生以下变化：胞体变大，由梭形变为不规则多边形，突起细而长，而且“谷”、“峰”样生长方式也发生改变；ＬＤＬ和ｖＬＤＬ对ＳＭＣ的形态亦有影响，但不如氧化修饰脂蛋白明显；ＨＤＬ则无影响。电镜下观察，在ＯＸ－ＬＤＬ的诱导下，ＳＭＣ胞浆中的肌丝较对照组明显减少，而高氏器，内质网和线粒体则明显增多。上述结果说明，ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＯＸ－ＬＤＬ、ＯＸ－ＶＬＤＬ和ＯＸ－ＨＤＬ的致动脉粥样硬化作用可能与刺激ＳＭＣ表型由“收缩”型向“合成”型转化有关。     

天然及氧化修饰型脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞DNA合成的影响

天然及氧化修饰型脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞ＤＮＡ合成的影响汪浩川刘秉文傅明德动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖，在动脉粥样硬化（Ａｓ）的形成过程中发挥重要作用［１，２］。因此研究脂蛋白和氧化修饰脂蛋白对ＳＭＣ增殖的影响，对探讨Ａｓ发病机制具有重要意义。...     

天然和氧化修饰型脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞基因转录表达及DNA合成的影响

天然和氧化修饰型脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞基因转录表达及ＤＮＡ合成的影响成都华西医科大学生物化学与分子生物学研究所６１００４１汪浩川，刘秉文ＡＳ是一种以动脉ＳＭＣ和单核／巨噬细胞增殖为主的疾病。就其本质而言，它的发生与肿瘤有相似之处，可能是癌基因异...     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因c-fos及PDGF受体基因表达的影响

动脉平滑肌细胞 (sm ooth muscle cell,SMC)的增殖在动脉粥样硬化 (atherosclerosis,AS)的形成过程中极其重要。利用体外培养的人主动脉 SMC,观察了天然高密度脂蛋白 (Native high density lipoprotein N-HDL)及氧化修饰 HDL(OX- HDL)对培养的人主动脉 SMC原癌基因 c- fos及 PDGF受体基因转录表达的影响。结果表明 :1 N- HDL 对 SMC c- fos,PDGF受体基因表达无影响 (P>0 .0 5 ) ;2 OX- HDL 对 SMC PDGF受体基因表达无影响 (P>0 .0 5 ) ;3OX- HDL使 SMC c- fos基因表达显著增强 (P<0 .0 1 ) .上述结果表明 ,OX- HDL的致 AS作用可能与刺激 SMC c- fos原癌基因表达增加有关     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因c—fo …

动脉平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）的形成过程中极其重要利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（Ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ＮＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ＯＸ－ＨＤＬ）对培养的人主动脉ＳＭＣ原癌基因ｃ－ｆｏｓ及ＰＤＧＦ受体基因转录表达的影响。     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋…

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及氧化修饰极低密度脂蛋白对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的作用

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。结果表明，培养的ＳＭＣ可表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ，而且ＳＭＣ暴露于ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达水平明显增高，分别增高约１１倍、６倍和２０倍。因此我们认为ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ可以刺激培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达。     

培养人动脉平滑肌细胞诱发高密度脂蛋白的氧化修饰

目的：观察高密度脂蛋白（High density lipoprotein,HDL）经与培养人动脉平滑肌细胞（Smooth muscle cell,SMC）保温后发生氧化修饰。方法：HDL组分琼脂糖凝胶脂蛋白电泳，及其共轭二烯（Conjugated diene CD)、硫代巴比妥酸反应物质（Thiobarbituric acid reaction substance TBARS）及脂氢过氧化物（Lipid hydroperoxide LOOH）的测定。结果：HDL经过与人动脉SMC共培养后，与天然HDL（Native HDL N-HDL)比较，其电泳迁移率明显增加，其CD、TBARS及LOOH的含量均显著增加（P＜0．01）。结论：HDL经过与培养人动脉SMC37℃保温48h后可发生氧化修饰。     

内源性高甘油三酯血症患者体内存在LDL,VLDL和HDL的氧化修饰

内源性高甘油三酯血症（hypertriglyceri－dewa，Iflt）又称w型高脂血症，是我国最常见的一类高脂血症。最近，大量流行病学研究表明，HTh是冠心病的独立危险因子。1989年Steinbelg等提出氧化修饰LDL致动脉粥样硬化的作用比天然LDL更强。汪浩川等报告在体外不仅toL，而且VLDL及     

高脂膳食诱发家兔血清LPO升高及LDL、VLDL和HDL在活体内的氧化修饰

为探讨高脂膳食对家兔血清过氧化脂质（ＬＰＯ）升高和ＬＤＬ、ＶＬＤＬ，特别是ＨＤＬ氧化修饰的影响。正常对照组（ｎ＝８）喂以普通饲料，高脂实验组（ｎ＝８）用高胆固醇饲料（普通饲料加５％猪油，另每只兔加喂０．５ｇ胆固醇）喂养１２周。兔血清ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＨＤＬ用密度梯度超速离心法分离得到。ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＨＤＬ的氧化修饰用琼脂糖凝胶电泳、２３４ｎｍ光吸收及ＴＢＡＲＳ荧光检测进行鉴定。结果显示：高脂实验组兔血清的ＴＣ、ＴＧ和ＬＰＯ均显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），而ＨＤＬ－Ｃ则显著降低（Ｐ＜０．０５）；同时，高脂实验组的ＬＤＬ、ＶＬＤＬ和ＨＤＬ的电泳迁移率增加，其２３４ｎｍ光吸收及ＬＰＯ含量均显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。表明高脂膳食在诱发家兔血清ＴＣ、ＴＧ显著增高的同时，不仅可引起血浆ＬＤＬ及ＶＬＤＬ的氧化修饰，而且还可引起ＨＤＬ在活体内的氧化修饰     

氧化修饰低密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞周期及增殖 …

应用流式细胞仪对氧化修饰低密度脂蛋白刺激动脉平滑肌细胞增殖，细胞周期及增细胞核原、Ｐ５３、Ｐ２７及ｃ－ｅｒｂＢ蛋白表达的影响进行了观察。结果发现：Ｏｘ－ＬＤＬ和天然低密度脂蛋白刺激培养人动脉ＳＭＣ细胞增殖时其Ｓ期细胞百分率增加，且Ｏｘ－ＬＤＬ的作用比Ｎ－ＬＤＬ强。     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞细胞周期蛋白D1基因表达的影响

动脉平滑肌细胞 (smooth m uscle cell,SMC)是动脉粥样硬化 (atherosclerosis,AS)斑块中的主要细胞 ,它的增殖在AS形成过程中极其重要 ,利用体外培养的人主动脉 SMC,观察了天然高密度脂蛋白 (native high density lipoprotein,N - HDL )及氧化修饰 HDL (oxidized HDL ,OX- HDL )对培养人主动脉 SMC cyclin D1 (细胞周期蛋白 D1 )基因转录表达的影响。结果表明 :(1) N- HDL对 SMC cyclin D1 基因表达无影响 (P>0 .0 5 ) ;(2 ) OX- HDL 使 SMC cyclin D1 基因表达显著增强 (P<0 .0 1) ,其表达量随时间 (2、12、2 4h)延长…     

LDL和HDL对培养的人血管内皮细胞的影响

本文以不同胆固醇浓度的低密度脂蛋白和高密度脂蛋白或将其混合,施加于培养呈融合状态的人脐带静脉血管内皮细胞。通过相差显微镜、扫描电镜和透射电镜观察,发现LDL对内皮细胞有损伤作用,并随所含胆固醇浓度的增高,其损伤程度加重,损伤机制可能与脂质过氧化物的增加有关。HDL对内皮细胞有保护作用,可使其免遭LDL的损伤,可能与HDL可阻止LDL所引起内皮细胞膜中胆固醇的过多或毒性堆积等有关。     

氧化修饰低密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞周期及增殖细胞核抗原的影响

应用流式细胞仪对氧化修饰低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）刺激动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖、细胞周期及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ５３、Ｐ２７及ｃ－ｅｒｂＢ蛋白表达的影响进行了观察。结果发现：Ｏｘ－ＬＤＬ和天然低密度脂蛋白（Ｎ－ＬＤＬ）刺激培养人动脉ＳＭＣ细胞增殖时其Ｓ期细胞百分率增加，且Ｏｘ－ＬＤＬ的作用比Ｎ－ＬＤＬ强，表明Ｏｘ－ＬＤＬ和Ｎ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ细胞增殖时与Ｓ期细胞的增加有关；Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖的同时ＰＣＮＡ蛋白阳性率增加，而与Ｐ５３、Ｐ２７和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达无关。提示ＰＣＮＡ可能参与了Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ的细胞增殖作用；特异性蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ＧＦ１０９２０３Ｘ能降低Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖过程中ＰＣＮＡ的阳性率，表明该细胞增殖过程中ＰＣＮＡ表达的抑制可能与ＰＫＣ信号传递通路有关。     

氧化修饰蛋白刺激人动脉平滑肌细胞DNA合成

３０氧化修饰蛋白刺激人动脉平滑肌细胞ＤＮＡ合成汪浩川，刘秉文，付明德。华西医科大学生物化学与分子生物学研究所生物化学与生物物理进展１９９６；２３（６）∶５４４动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（Ａｓ）斑块中的主要细胞，它的增殖在Ａｓ的形成过程中极...     

高脂膳食诱发家兔血清LPO升高及LDL,VLDL和HDL在活体内的氧化修饰

为探讨高脂膳食对家兔血清过氧化脂质升高和ＬＤＬ、ＶＬＤＬ，特别是ＨＤＬ氧化修饰的影响。正常对照组（ｎ＝８）喂以普通饲料，高脂实验组（ｎ＝８）用高胆固醇饲料（普通饲料加５％猪油，另每只兔加喂０．５ｇ胆固醇）喂养１２周。兔血清ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＨＤＬ用密度梯度超速离心法分离得到。ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＨＤＬ的氧化修复用琼脂糖凝胶电泳、２３４ｎｍ光吸收及ＴＢＡＲＳ荧光检测进行鉴定。结果显示：高脂实验组兔血清     

LDL和HDL对体外培养的人肾小球系膜细胞生长的影响

我们利用体外培养的人肾小球系膜细胞（ＧＭＣ），观察了低密度脂蛋白（ＬＤＬ）和高密度脂蛋白（ＨＤＬ）对其增殖的影响。我们发现，经ＬＤＬ刺激４８ｈ，在浓度为５０～２００ｍｇ／Ｌ范围内，ＬＤＬ能促进系膜细胞增殖，且在１００ｍｇ／Ｌ时促进作用达高峰，ＭＴＴ掺入后细胞的Ａ值为０．２０８±０．０１９，较阴性对照（含５％脱脂小牛血清）０．０８５±０．０２４明显升高（ｔ＝８．０９２，Ｐ＜０．００１）。延长刺激时间至１０６ｈ，则高峰为２００ｍｇ／Ｌ，３Ｈ－ＴｄＲ掺入后的ｍｉｎ－１数为３０１０±３２４．５６，是阴性对照（１４３２．３４±５７０）的２倍多（ｔ＝４．２４１，Ｐ＜０．０１）。但当ＬＤＬ浓度＞２００ｍｇ／Ｌ时，细胞增殖水平均有所下降，甚至显示出轻度抑制作用。用２０％脱脂血清取代全脂血清，细胞增殖明显降低，Ａ值由０．４２２±０．０９降至０．１０２±０．０４２（ｔ＝７．８６，Ｐ＜０．００１）；在脱脂血清中重新加入２０ｍｇ／Ｌ和１００ｍｇ／Ｌ的ＬＤＬ，Ａ值上升为０．３３５±０．０５７和０．６４±０．０９８，分别为脱脂血清的３．２８和６．２７倍（ｔ值分别为８．０３和１１．９７，均Ｐ＜０．００１）。而不同浓度的ＨＤＬ对细胞显示有     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c－fos，c－myc异常表达的实验研究

我们观察了不同浓度的胰岛素对体外培养人血管平滑肌细胞增殖的影响，及其该过程中原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ的表达。结果表明，胰岛素能促进血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖，即：ＳＭＣ数目的增多，ＳＭＣＤＮＡ的合成；胰岛素能促进原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的异常表达；且以上作用均存在着剂量－效应关系。这些结果提示，高胰岛素血症促进动脉粥样硬化（ＡＳ）发生、发展可能是通过促进某些原癌基因异常表达，进而促进ＳＭＣ增殖而实现的。这也许是某些基因治疗ＡＳ的基础。