人胚胎早中期肠壁黏膜层发育分化的研究

【目的】研究人胚胎早中期肠壁黏膜层及黏膜上皮杯状细胞的发育。【方法】采用形态学、组化及联合组化和免疫组化等方法对27例4-28周胚胎空肠、回肠及结肠肠壁黏膜层的发育进行观察。【结果】黏膜上皮PAS阳性的杯状细胞在10周时已经出现，爱茜蓝阳性的杯状细胞在12周出现；空肠、回肠的黏膜肌层在10周时已开始形成，起源于黏膜下层的肌肉干细胞，此后，随着胎龄的增加，杯状细胞的数目增加。黏膜肌层α—SMA阳性的细胞逐渐增多。【结论】肠黏膜上皮杯状细胞在10周时开始发育，可分为4类：①含中性黏多糖的杯状细胞；②含酸性黏多糖的杯状细胞；③既含中性黏多糖又含酸性黏多糖的杯状细胞；④既不含中性黏多糖也不含酸性黏多糖的杯状细胞。黏膜肌层起源于黏膜下层的肌肉干细胞。     

人胎儿喉黏膜上皮细胞的发育分化特点

【目的】研究中国人胎儿喉黏膜上皮细胞发育分化的特点。【方法】收集9—40周胎儿喉标本33例。应用连续切片HE染色、细胞角蛋白免疫组化染色、扫描电镜和透射电镜观察其黏膜上皮。【结果】9周胎喉黏膜由1—2层低柱状细胞组成，仅表层细胞表达微弱的角蛋白，13周后出现多种类型的上皮细胞．上皮全层均表达细胞角蛋白；会厌舌面、声带被覆鳞状上皮，会厌喉面、室带、喉室及声门下区被覆假复层纤毛柱状上皮，其基底细胞和中间细胞的胞浆内含有丰富的胞浆泡状系统、张力原纤维和桥粒：过渡上皮和纤毛上皮中均散在岛状鳞状上皮但出现时间不一致。【结论】人喉黏膜上皮细胞的分化发生于胎儿9-13周期间；纤毛上皮的基底细胞和中间细胞具有双向分化的潜能；过渡上皮和纤毛上皮中出现岛状鳞状上皮是生理现象，前者由复层立方上皮分化而来，后者由纤毛上皮分化而来。     

CRF1 IR神经元在豚鼠胃肠道神经系统中的分布

【目的】研究促皮质激素释放激素受体1免疫阳性(corticotrophin releasingfactorreceptor limmunoreactive，CRF1 IR)神经元在豚鼠胃肠道神经系统的分布及CRF1与其他神经元标志物的共存情况。【方法】 RT～PCR、Western blot检测CRF1在肠道神经系统中的表达，免疫荧光组织化学染色或双重染色观察细胞形态和分布。【结果】 小肠黏膜下层和肠肌层神经丛均有CRF1表达；CRF1 IR神经元分布于从胃、十二指肠、空肠、回肠、近端结肠和远端结肠的黏膜下神经丛及肠肌层神经丛；细胞形态为Dogiel Ⅱ型；CRF1与Calbindin、P物质、NF200可共同表达于同一神经元。【结论】CRF1 IR神经元可能是肠道神经系统的内在初级感觉神经元，参与应激时胃肠道功能的调节。     

CRF1 IR神经元在豚鼠胃肠道神经系统中的分布

【目的】研究促皮质激素释放激素受体1免疫阳性(corticotrophin releasing factor receptor 1 immunoreac-tive,CRF1 IR)神经元在豚鼠胃肠道神经系统的分布及CRF1与其他神经元标志物的共存情况。【方法】RT-PCR、Western blot检测CRF1在肠道神经系统中的表达,免疫荧光组织化学染色或双重染色观察细胞形态和分布。【结果】小肠黏膜下层和肠肌层神经丛均有CRF1表达;CRF1 IR神经元分布于从胃、十二指肠、空肠、回肠、近端结肠和远端结肠的黏膜下神经丛及肠肌层神经丛;细胞形态为Dogiel Ⅱ型;CRF1与Calbindin、P物质、NF200可共同表达于同一神经元。【结论】CRF1 IR神经元可能是肠道神经系统的内在初级感觉神经元,参与应激时胃肠道功能的调节。     

国人胎儿十二指肠的组织发生

用引产的１４周～３６周新鲜胎儿标本１３８例，取十二指肠分上部、降部和下部三段石蜡切片，光镜观察组织发生。结果表明：１４周肠壁已有四层，厚１００μｍ～１５０μｍ，绒毛和肠腺短小，其上皮均由柱状细胞组成。１５周绒毛上皮和肠腺内出现少量的杯状细胞。１６周见环形皱襄。１７周～１８周上部出现十二指肠腺。１９周～２０周绒毛增宽和加长，中轴内见少量平滑肌细胞，降部和下部均出现十二指肠腺。２１周粘膜上皮的杯状细胞和粘膜下层的十二指肠腺增多。２２周壁厚６００μｍ～７５０μｍ，绒毛呈叶状，粘膜肌成薄层，十二指肠腺开始有分泌特征。２３周～２５周绒毛内可见中央乳糜管，肠腺底部见少数潘氏细胞。２６周后十二指肠的组织结构特点逐渐与成人近似。     

Expression level of PEPT1 and distribution of substance P in jejunoileum of diabetic rats

[目的]研究糖尿病大鼠胃肠排空延迟和空回肠P物质分布的关系,及这一改变是否影响局部寡肽转运体PEPT1的水平.[方法]Wistar大鼠24只,分为3组(n=8).1型糖尿病模型加胰岛素治疗组,左脲链霉素(streptozocin,STZ)单次股静脉注射(60mg/kg)诱导1型糖尿病模型,并每天给予1次长效胰岛素(20U/d,皮下注射)控制血糖.1型糖尿病模型组,左脲链霉素(STZ)单次股静脉注射(60mg/kg)诱导1型糖尿病模型,并给予等量生理盐水.正常对照组大鼠经股静脉注射生理盐水.1个月后检测胃肠排空功能,选取胃肠排空明显延迟的动物,通过免疫组化分析空肠起始段与回肠末端SP分布变化.刮取空肠起始段与回肠末端的黏膜细胞,通过免疫印迹技术检测PEPT1水平.[结果]糖尿病大鼠胃肠推进率低于60％的,其空肠起始段和回肠末端SP分布明显减少(P＜0.05),其中SP在空肠起始段主要分布于黏膜下层,肌层未发现阳性染色,回肠末端除分布于黏膜下层外,黏膜上皮多见阳性染色.与同月龄正常大鼠及STZ加胰岛素注射非糖尿病组相比,糖尿病大鼠空肠起始段与回肠末端黏膜细胞PEPT1的表达水平显著下降(P＜0.05).[结论]糖尿病导致的胃排空延迟和空回肠P物质分布下调关系密切,同时也出现空肠起始端与回肠末端PEPT1的表达减少.上述变化可能和糖尿病胃肠营养不良有关.     

糖尿病大鼠空回肠PEPT1水平与SP分布的变化

目的研究糖尿病大鼠胃肠排空延迟和空回肠P物质分布的关系,及这一改变是否影响局部寡肽转运体PEPT1的水平。方法 Wistar大鼠24只,分为3组(n=8)。1型糖尿病模型加胰岛素治疗组,左脲链霉素(streptozocin,STZ)单次股静脉注射(60 mg/kg)诱导1型糖尿病模型,并每天给予1次长效胰岛素(20 U/d,皮下注射)控制血糖。1型糖尿病模型组,左脲链霉素(STZ)单次股静脉注射(60 mg/kg)诱导1型糖尿病模型,并给予等量生理盐水。正常对照组大鼠经股静脉注射生理盐水。1个月后检测胃肠排空功能,选取胃肠排空明显延迟的动物,通过免疫组化分析空肠起始段与回肠末端SP分布变化。刮取空肠起始段与回肠末端的黏膜细胞,通过免疫印迹技术检测PEPT1水平。结果糖尿病大鼠胃肠推进率低于60%的,其空肠起始段和回肠末端SP分布明显减少(P<0.05),其中SP在空肠起始段主要分布于黏膜下层,肌层未发现阳性染色,回肠末端除分布于黏膜下层外,黏膜上皮多见阳性染色。与同月龄正常大鼠及STZ加胰岛素注射非糖尿病组相比,糖尿病大鼠空肠起始段与回肠末端黏膜细胞PEPT1的表达水平显著下降(P<0.05)。结论糖尿病导致的胃排空延迟和空回肠P物质分布下调关系密切,同时也出现空肠起始端与回肠末端PEPT1的表达减少。上述变化可能和糖尿病胃肠营养不良有关。     

豚鼠变应性鼻炎模型鼻黏膜形态学的观察

目的：探讨变应性鼻炎鼻黏膜在光镜和电镜超微结构下的病理变化。方法 用橄榄油将甲苯-2，4-二异氰酸酯配成浓度为10％溶液作为致敏剂滴鼻，建立豚鼠变应性鼻炎动物模型8例。另取8例正常豚鼠作对照。致敏结束、模型成功后，取两组鼻黏膜进行光镜、透射电镜观察。结果：①光镜下见对照组鼻黏膜上皮层为假复层纤毛柱状上皮，连续、完整，可见正常的黏膜上皮层、固有层和黏膜下层。模型组鼻黏膜上皮脱落，杯状细胞增生，鳞状上皮组织转化，上皮坏死，固有层和黏膜下层腺体增生，血管扩张，组织水肿，并见特征性的嗜酸性粒细胞、肥大细胞浸润。②透射电镜见对照组鼻黏膜上皮细胞结构完整，纤毛整齐，微管规则，胞质内细胞器丰富。模型组鼻黏膜上皮破损，杯状细胞破损，纤毛微管紊乱，微绒毛消失，细胞体积、核、细胞器改变，见大量嗜酸性粒细胞和肥大细胞，嗜酸性粒细胞发生脱颗粒的改变，可见巨噬细胞及浆细胞，血管扩张，浆液腺体旺盛增生。结论：变应性鼻炎鼻黏膜出现变态反应性形态学的病理改变。     

Hirschsprung病肠壁中葡萄糖转运体-1和一氧化氮合酶阳性神经的变化

目的 观察葡萄糖转运体-1(GLUT-1)和一氧化氮合酶(NOS)阳性神经在Hirschsprung病(HD)肠壁中的变化并探讨二者与HD发病的关系。方法 应用还原型辅酶Ⅱ-黄递酶组织化学和免疫组织化学染色观察9例HD及5例对照组患儿结肠。结果 在正常结肠的肌层和粘膜下层内偶见细小的GLUT-1免疫反应性神经纤维，肠壁外的外源性神经纤维呈阳性染色；而在无神经节细胞肠段的相应区域内GLUT-1免疫反应性神经纤维数量明显增多、增粗。在正常结肠肠壁内有大量NOS阳性神经节细胞，环肌层内含有丰富的阳性神经纤维；而在无神经节细胞肠段的肠壁内缺乏NOS阳性神经元，肌层内阳性神经纤维明显减少。结论 肠壁内GLUT-1阳性神经可能为外源性神经，GLUT-1免疫组织化学染色可能对HD具有诊断价值。NOS阳性神经在病变肠壁中的分布异常可能与HD的病理生理机制有关。     

人胚胎胃肠道粘膜上皮SBA结合位点的定性和定量分析

通过凝集素亲和组织化学ABC法和显微图像分析法对15～38周的人胚胎胃肠道粘膜上皮SBA结合位点的定性和定量分析，结果显示：SBA的标记阳性定位于空肠、回肠、升结肠、横结肠和直肠粘膜上皮糖尊和杯状细胞核上区。定量分析显示在升结肠和胃、回肠、横结肠以及升结肠和直肠之间存在显著差异，说明在胃肠道中相关酶存在显著不同。     

鼠胶质瘤细胞上清液诱导人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化

目的：分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs),探讨鼠胶质瘤细胞上清液对其向神经元样细胞的诱导分化。方法：利用Percoll梯度分离法,培养人MSCs。采用鼠胶质瘤细胞上清液对MSCs进行诱导分化。观察人MSCs经诱导后细胞的形态变化,采用免疫细胞化学方法检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。 结果：诱导24 h后,细胞胞体收缩呈锥形或球形,有突起长出,细胞间突起相互连接,交错成网,为典型的神经元样形态。免疫细胞化学结果显示,经诱导培养后的神经元样细胞的胞体及部分突起NSE和NF染色呈强阳性表达,而GFAP 染色呈阴性。诱导组出现NSE阳性的细胞率为(79.5±3.2)%,而对照组出现NSE阳性的细胞率为(12.1±2.0)%,两组之间比较差异有显著性 (P<0.01)。诱导组出现NF阳性的细胞率为(41.2±2.4)%,而对照组为阴性。结论：鼠胶质瘤细胞上清液可以诱导MSCs向神经元样细胞分化。     

体外诱导细胞转化为胰岛细胞的研究进展

巢素蛋白（nestin）阳性细胞、成体干细胞（包括间充质干细胞和胰腺导管上皮细胞）和胚胎干细胞是常用的体外诱导转化为胰岛细胞的种子细胞,本文就这三类细胞的来源、实验方法及实验结果的研究进展进行综述。     

Expansive effects of aorta-gonad-mesonephros-derived stromal cells on hematopoietic stem cells from embryonic stem cells

Background Hematopoietic stem cells (HSCs) give rise to all blood and immune cells and are used in clinical transplantation protocols to treat a wide variety of refractory diseases, but the amplification of HSCs has been difficult to achieve in vitro. In the present study, the expansive effects of aorta-gonad-mesonephros (AGM) region derived stromal cells on HSCs were explored, attempting to improve the efficiency of HSC transplantation in clinical practice.Methods The murine stromal cells were isolated from the AGM region of 12 days postcoitum (dpc) murine embryos and bone marrow（BM）of 6 weeks old mice, respectively. After identification with flow cytometry and immunocytochemistry, the stromal cells were co-cultured with ESCs-derived, cytokines-induced HSCs. The maintenance and expansion of ESCs-derived HSCs were evaluated by detecting the population of CD34+ and CD34+Sca-1+cells with flow cytometry and the blast colony-forming cells (BL-CFCs), high proliferative potential colony-forming cells (HPP-CFCs) by using semi-solid medium colonial culture. Finally, the homing and hematopoietic reconstruction abilities of HSCs were evaluated using a murine model of HSC transplantation in vivo.Results AGM and BM-derived stromal cells were morphologically and phenotypically similar, and had the features of stromal cells. When co-cultured with AGM or BM stromal cells, more primitive progenitor cells (HPP-CFCs ) could be detected in ESCs derived hematopoietic precursor cells, but BL-CFC’s expansion could be detected only when co-cultured with AGM-derived stromal cells. The population of CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells were expanded 3 times,but no significant expansion in the population of CD34+Sca-1+ cells was noted when co-cultured with BM stromal cells. While both CD34+ hematopoietic stem/progenitor cells and CD34+Sca-1+ cells were expanded 4 to 5 times respectively when co-cultured with AGM stromal cells. AGM region-derived stromal cells, like BM-derived stromal cells, could promote hematopoietic reconstruction and HSCs’ homing to BM in vivo.Conclusions AGM-derived stromal cells in comparison with the BM-derived stromal cells could not only support the expansion of HSCs but also maintain the self-renewal and multi-lineage differentiation more effectively. They are promising in HSC transplantation. Chin Med J 2005; 118(23):1979-1986     

成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学性质

目的：建立人骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）分离培养方法,观察细胞形态,探讨BM-MSCs生物学特征。 方法：从人骨髓中利用Percoll分离有核细胞,培养于含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基中,台盼蓝拒染法测定细胞增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期及细胞表面抗原特征。 结果;BM-MSCs具有纤维样细胞形态特征,独特的表型,即CD29、CD44、CD166和HLA-ABC阳性,CD34、CD45和HLA-DR阴性;细胞周期分析显示：12.8%处于S期,76.4%处于G₀/G₁期;细胞生长倍增时间为2~3 d。 结论：BM-MSC_S是一群均一的单克隆细胞,具有独特的增殖特征及表面标记。     

大鼠肝星状细胞的分离培养鉴定

目的改良分离培养大鼠肝星状细胞的简便方法。方法经过门静脉插管、推注肝素稀释液、肝脏灌流、胶原酶离体循环消化、过滤、离心分离等步骤,分离肝星状细胞,省去了链霉蛋白酶E消化过程,采用台盼蓝染色排斥法鉴定细胞活率,desmin免疫细胞化学染色法鉴定HSCs纯度。结果每只鼠肝HSCs的得率为0.5~1.0×107,纯度为(92.2±2.0)%,活率为(97.8±0.3)%,数量及活率均符合实验要求。结论该方法简便、廉价、实用,值得进一步探索。     

人骨髓间质干细胞对树突状细胞成熟和功能影响的实验研究

目的探讨人骨髓间质干细胞对树突状细胞成熟和功能的影响以及人骨髓间质干细胞发挥免疫抑制作用的可能机制。方法以Friedenstein法分离培养骨髓间质干细胞,以密度梯度离心法分离培养外周血单个核细胞,在重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素-4的培养条件下制备树突状细胞。在LPS(1ng/mL)诱导下获得成熟树突状细胞。将骨髓间质干细胞与成熟树突状细胞共培养48h后,混合淋巴细胞反应检测经骨髓间质干细胞处理前后树突状细胞对同种异体T细胞的增殖能力,流式细胞仪检测处理前后其表面共刺激分子CD86和成熟标记物抗原CD83的表达,ELISA法测定混合淋巴细胞反应上清中细胞因子的表达。结果与未成熟DCs组比较,成熟DCs组表面抗原CD86,CD83的表达均增加,对T淋巴细胞刺激能力增强,致炎细胞因子分泌(IL-12,IFN-γ)增多,而抑炎因子(IL-10)分泌减少,成熟DCs组经hMSCs处理后,表面抗原表达水平明显下降,致炎细胞因子分泌减少,而抑炎因子分泌增加,对T淋巴细胞刺激能力减弱,与未处理成熟组比较差异具有显著性,而与未成熟组比较差异无显著性。结论hMSCs能逆转成熟DCs为未成熟DCs状态,从能间接抑制DCs启动的T淋巴细胞增殖,抑制炎症因子的分泌,发挥免疫抑制作用。     

Mechanism of in Vitro Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells into Neuron-like Cells

Marrowstromalcells (MSCs)arethenon hematopoieticprecursorsinthebonemarrowstromaofadultmammal.Underspecificexperimentalcondi tions,itcandifferentiateintoneuron[1] .Thephe nomenonhasgivenresearchersagreatsurprise .Andnow ,thehotspotistofinditstrueevidence ,…     

Ultrastructural observation on influence of gossypol on the hormone-secreting cells of pituitary-testis axis of rats

Summary After 8 weeks of administration of gossypol (30 mg/kg/day for 6 days/week) to Wistar rats, the following changes in gonadotropic hormon (GTH) cells were observed by electron microscopic examination: slight to medium enlargement of rough endoplasmic reticulum and more apparent development of Golgi complexes in the cytoplasm. These findings suggested an enhanced secretory function. Moreover, increase of ring-shaped mitochondria, increase of lipid droplets and lysosomes, enlargement of smooth endoplasmic reticula and appearance of intracytoplasmic gaps in Sertoli cells were noted. However, no significant changes could be seen in Leydig cells.     

体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的体外分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs)并研究其一般的生物学特性.方法通过密度梯度离心法分离MSCs、体外培养传代细胞计数、流式细胞仪检测细胞增殖周期、表面分子测定以及细胞化学染色了解人MSCs一般的特点.结果人MSCs经过体外培养均一地表达CD29、CD44、CD166,而CD34、CD45阴性.细胞化学结果显示,细胞糖原(PAS)强阳性,脂肪(SB)为阴性,5%～10%细胞碱性磷酸酶(ALP)阳性.细胞周期分析表明:G0/G1、S和G2/M所占比例分别为83.11%、5.17%和11.72%.分离细胞在成骨诱导体系下进一步向成骨细胞分化.结论密度梯度离心法能够分离纯化MSCs有其特殊的生物学特点,能够向成骨细胞分化.     

Th17细胞在白癜风发病中的作用研究进展

在某些特定细胞因子的作用下,CD4+T细胞分化为Th17细胞,Th17细胞可参与多种疾病的发病。在白癜风发病过程中,调节性T细胞(Treg细胞)数量减少、功能缺陷,Th17细胞数量增多,功能活跃。Th17细胞在树突细胞的协助下参与发病过程。Th17细胞主要分泌白介素17(IL-17),还分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-21、IL-22和IL-26等细胞因子参与白癜风发病,导致黑色素细胞生成减少,黑色素细胞萎缩、消失,最终形成白癜风。