1988年北京急性出血性结膜炎大流行的病原学研究(简报)

急性出血性结膜炎(AHC)可由肠道病毒70型(E70),柯萨奇A24型变异株(CA24)和腺病毒引起。临床上不同病毒引起的AHC不易鉴别,发生AHC流行时,尽快查清病原对防治有重要意义。 AHC在我国曾多次发生过流行。1984年北京AHC流行,病原学研究证明该次流行由E70型病毒     

1992年夏秋季汕头市小儿急性呼吸道感染病毒病原分析

本文报告1992年夏秋季汕头市小儿呼吸道感染病毒病原调查结果，104份标本病毒分离，检出病毒42株，检出率40.38%，双份血清抗体呈≥4倍升高者12例。本次阳性病例共49例，其中肠道病毒22例、腺病毒23例、乙型流感病毒1例、两种病毒混合感染3例。检测结果表明，汕头市小儿呼吸道病毒病原是以肠道病毒及腺病毒感染为主，腺病毒以2型为主。     

西宁地区婴幼儿病毒性肺炎病原体及血清学试验的实验观察

本文对251例病毒性肺炎病原体的分离,阳性毒株,腺病毒98株占73.1％,RSV12株占9％,付流感13株占9.7％,肠道病毒10株占7.5％及RSV Ad1株。37份双份双份血清抗体测定,82.5％≥4倍增高。5份RSV双份血清抗体测定均为增高。初步观察到腺病毒及RSV是西宁地区病毒性肺炎的主要病原体。在重危、死亡病例中,腺病毒3型又占重要地位。     

肠道病毒性脑膜炎的病原学研究

本告从23例临床上诊断为病毒性脑膜炎患者的脑脊液、血液中分离出柯萨奇B组病毒2株,未定型病毒1株,用所分离到的病毒与该患者恢复期血清做中和抗体测定均4倍或4倍以上升高,可以确定分离出的病毒与脑膜炎患者是相关的。同时检测57例脑膜炎患者恢复期血清中的柯萨奇B组病毒中和抗体,4倍或4倍以上升高者19例(33.3％)。40例健康人血清中柯萨奇B组病毒抗体阳性的(1:64)1例,两者差异显著(P<0.01)。结果表明,测定恢复期血清中和抗体结合临床对肠道病毒性脑膜炎的病因学诊断有一定的参考价值。     

福州地区急性出血性结膜炎26例病原学检测分析

急性出血性结膜炎(AHC)俗称“红眼病”，是病毒感染引起的一种暴发流行的严重急性结膜炎。引起本病大流行和暴发流行的主要病原体为微小核糖核酸病毒科中的肠道病毒70型和柯萨奇病毒A24变异株。2002年7—9月福州地区发生暴发流行，笔者收集流行期间眼科门诊AHC患者眼拭子标本及血清标本进行病原学检测，报告如下。     

上海地区小儿心肌炎病原学的初步研究

本文报道应用人胚肾单层细胞和HeLa细胞从34例心肌炎患儿的粪便标本中分离到柯萨奇B_3型病毒3株,腺病毒3型和5型各1株,埃柯病毒和疑似疱疹病毒各1株。结合患儿双份血清对自身病毒的中和抗体效价的变动,可以确定其中3例患儿的心肌炎系由柯萨奇B_3型病毒引起,另2例心肌炎的病原分别为腺病毒3型和5型。     

广西2010年急性出血性结膜炎暴发病原基因型分析

目的确定引起2010年广西急性出血性结膜炎（Acute Hemorrhagic Conjunctivitis,AHC）流行的病原及分子进化特征。方法流行期间采集门诊AHC就诊病例眼结膜拭子标本20份,用聚合酶链反应（PCR）方法同时检测腺病毒、人肠道病毒70型（Human Enterovirus 70,HEV70）和柯萨奇病毒A组24型变种（Coxsackievirus A24 variant,CoxA24v）核酸,对CoxA24v 3C区和VP1区核苷酸序列进行分析。结果 CoxA24v核酸阳性11份,阳性率为55.0%,HEV70和腺病毒核酸检测结果均为阴性。广西各株间的3C区和VP1区核苷酸序列一致性分别为99.6%~100.0%和98.3%~100.0%,在进化树中聚集在基因3群中,形成独立分支。结论引起2010年广西AHC流行的主要病原为CoxA24v,属于基因3群,在进化树中独成一个新的分支。     

1986年我国急性出血性结膜炎病人分离病毒的鉴定

1988年我国北京等城市发生急性出血性结膜炎(AHC)的大流行,病原学研究证实病原为柯萨奇病毒A24型变异株(CA24V).1986年我国上海、河南和福建也曾发生AHC的流行,并从病人分离出病毒,上海、福建分离的病毒未定型,河南分离的病毒当时定为肠道病毒70型(EV 70).为了准确鉴定1986年以上三省分离的病毒,本研究收集上海、福建86年的病毒各2株,河南分离的病毒5株,共9株病毒,在     

1994年青岛市急性出血性结膜炎的病原分离和鉴定

1目的　了解 1994年青岛市流行的急性出血性结膜炎 (AHC)的病毒病原。2方法　在 AHC暴发流行高峰时 ,对 AHC病人有选择地采集眼拭子标本 ,采用多种细胞对病人的标本进行病毒分离 ,并对分离出的病毒进行中和试验鉴定。 3结果　经用 CA2 4v,EV70 ,CA2 4和北京地方 CA2 4v株病毒抗血清中和试验鉴定 ,分离的毒株为 CA2 4v.4结论　青岛市 1994年流行的 AHC的主要病毒同 1988年全国范围内流行的病毒血清型相同     

杭州市××幼儿园一次柯萨奇B_3型病毒感染的小型暴发——Ⅰ.病原学研究

1964年9～10月杭州××幼儿园有32例儿童在临床上表现为无菌性脑膜炎、上感及腹泻型和6例为健康接触者的38份粪便中分离出病毒14株,经鉴定为柯萨奇 B_3型病毒12株,脊髓灰质炎Ⅱ型病毒及未定型者各1株。另自1例无菌性脑膜炎的脑有液中亦分离到1株柯萨奇 B_3型病毒。在16例双份血清中,有12例血清对柯萨奇 B_3型病毒中和抗体滴度有4倍或4倍以上升高;8例恢复期血清中,有4例血清抗体滴度高达≥1∶128。从而经病毒分离及双份血清抗体测定证实系柯萨奇 B_3型病毒感染引起的一次小型暴发。     

肠道病毒71型特异性单克隆抗体的制备及其在病毒鉴定中的应用

目的：建立肠道病毒71型（ EV71）特异性检测的免疫荧光方法用于病毒分离培养后的EV71鉴定,为EV71生物学特征研究和疫苗株的筛选奠定基础。方法：以EV71 VP1为免疫原制备单克隆抗体,用经测序鉴定的肠道病毒毒株建立EV71特异性免疫荧光方法;将不同地区收集的手足口病患儿的临床标本进行病毒分离,利用EV71特异性单抗进行分离培养后的病毒鉴定。结果：制备获得2株单抗,经鉴定其中1株3 E12为EV71特异性单抗;以此单抗建立的免疫荧光方法对EV71感染细胞呈阳性反应,而与柯萨基病毒A16和埃可病毒6等非EV71肠道病毒不反应。从104份手足口病临床标本中共分离到35株病毒,产生肠道病毒典型的细胞病变;用3E12特异性单抗免疫荧光鉴定分离病毒,其中29株为EV71,与RT-PCR验证结果完全一致。结论：成功制备获得EV71特异性单克隆抗体,以此单抗建立的EV71特异性免疫荧光方法敏感性高、特异性强,可用于分离培养EV71的鉴定。     

2010年天津市流行的肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型VPl区域序列分析

【目的】研究2010年天津市手足口病患者中肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型的VPl基因特征。【方法】采集60例天津地区2010年手足口病流行期间患儿的粪便标本,分别用EV71和CoxAl6的VPl区域引物对粪样中病毒RNA进行PCR检测。同时选取11株EV71扩增阳性和4株CoxAl6扩增阳性的样本,对其扩增产物的VPl区进行核苷酸序列测定,比照EV71和CoxAl6各基因型进行同源性分析,并构建系统发生树。【结果】从60例手足口病患儿粪便标本共检测出27例EV71阳性和4例CoxAl6阳性。经VPl区测序,11例EV71阳性与EV71C4基因型同源性94．4％～94．8％;4例CoxAl6阳性与CoxAl6C基因型同源性93．4％-94．7％。在系统发生树上,这11株EV71均属于EV71C基因型,与c4亚型属于同一分支;4株CoxAl6均属于CoxAl6的C基因型。【结论】2010年天津市手足口病患者粪便样本中检测出的EV71毒株属于EV71C4亚型,CoxAl6毒株属于CoxAl6C基因型。     

1株肠道病毒71型南京分离株的全基因组序列的测定及遗传进化分析

［摘要］目的: 对肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）南京分离株EV71-NJ2012全基因组核苷酸序列进行测定,并与基因库中的代表性序列进行分析比对。方法: 登录基因库,选取不同国家和地区的EV71全基因组序列,设计8对覆盖病毒整个基因组且首尾部分重叠的引物,采用RT-PCR扩增出8个基因片段,通过测序和拼接获得全基因组序列,并与国内外其他EV71分离毒株一起用MEGA 4.0软件进行进化树分析,用DNAStar进行同源性分析。结果： EV71-NJ2012株的基因组长度为 7 404 bp, 其中5′非编码区(UTR)长742 bp, 3′UTR长82 bp,病毒基因组开放阅读框(ORF) 全长6 582 bp, 编码一个含有2 193个氨基酸残基的多聚蛋白。病毒序列在分型上属于C4a基因型,与上海株的核苷酸同源性最近,而与我国台湾、湖北等分离株的核酸序列差异较大。结论： EV71-NJ2012株基因组的组成和结构符合肠道病毒特征,与上海株亲缘关系最近,而与我国台湾、湖北分离株的差异较为明显。EV71-NJ2012株可能与上海株来源于EV71病毒株的同一种系。     

肠道病毒71型基因组5'非编码区序列分析

目的 了解2009年山东省临沂市分离的肠道病毒71型(EV71)基因组5 '非编码区(5'UTR)序列特征,探讨基因组中引起神经毒性作用的候选位点.方法 从手足口病患者的粪便标本中分离EV71,运用一步法逆转录聚合酶链反应扩增8个病毒株的5 'UTR区,运用DNAstar和MEGA 4软件进行序列分析.结果 8个病毒株5'UTR区核苷酸为741 ～745 nt,核苷酸序列同源性介于97.0％～99.9％,8个病毒株的5'UTR区与C4亚型的同源性最高.序列比对发现,在5'UTR区第265 nt及703 nt处出现了核苷酸的突变(G265A,G703T).遗传进化分析显示,8个病毒株序列与C4亚型的亲缘关系最为密切.结论 此8个病毒株为C4亚型,核苷酸突变(G265A,G703T)可能与EV71的致神经毒性作用有关.     

宁夏2010年肠道病毒71型进化分析

目的分析2010年宁夏回族自治区手足口病(HFMD)患者中肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)分离株基因特征。方法收集宁夏2010年手足口病患者粪便,咽拭子和疱疹液标本,进行病毒分离培养和Real-time RT-PCR检测后,对鉴定为EV71毒株的VP1编码区进行核苷酸序列测定分析。结果共收集各类标本994份,分离获得EV71 225株,对所有EV71毒株的VP1编码区基因进行序列测定,选择其中53株进行序列分析。宁夏分离株与A、B、C型基因型代表株核苷酸同源性分别为80.0%～81.5%、82.4%～84.7%和87.2%～99.1%;氨基酸同源性分别为93.9%～94.3%、96.3%～97.6%和97.6%～100%,与C4a亚型同源性最高为95.6%～99.1%,在系统发生树上,这53株毒株与C4基因型代表株聚为一簇,属于C4亚型中的C4a分支,而且提示至少存在4条病毒传播链。结论 2010年EV71的C4a亚型在宁夏有较广泛的流行,是宁夏流行的绝对优势基因亚型,其流行存在多条传播链。     

漳州市肠道病毒71型分离株的VP1区基因特征分析

目的了解漳州市肠道病毒71型分离株的VP1区基因特征。方法对2010年漳州市的5株肠道病毒71型分离株进行VP1区基因全长序列测定,测序结果利用DNASTAR软件进行核苷酸、氨基酸序列分析和同源性比较,并用Mega4．0软件构建系统发生树。结果5株肠道病毒71型分离株的VP1区核苷酸序列全长均为891bp,且与2008年安徽阜阳流行株Fuyang．Anhui．P．R．C-17．08-2的VP1区核苷酸序列同源性和氨基酸序列同源性最高,分别为98．2％-98．8％和99．7％-100．0％。5株肠道病毒71型分离株间的核苷酸序列同源性为97．2％-99．8％．氨基酸序列同源性为99．3％～100．0％。氨基酸在98位和218位这两个位点发生了特异性变异。VP1区基因遗传进化分析表明,漳州市所有分离株均属于C4基因亚型的C4a进化分支。结论5株肠道病毒71型分离株均属于C4基因亚型的C4a进化分支．与2004年以来的中国大陆EV71病毒流行的基因型完全-致。     

新疆2011-2013年肠道病毒71型VP1区基因特征分析简

目的了解新疆肠道病毒71型（EV71）分离株VP1区基因特征。方法选取2011-2013年新疆部分地州手足口病病例标本,临床标本或其病毒培养物经实时荧光PCR鉴定后,通过RT—PCR法进行VP1区编码基因扩增,并对扩增产物进行序列测定,所得序列用ChromasPro1．7．4,BioEdit7．1．11和MEGA5．1软件进行序列校正、拼接、整理和分析,并与EV71各型及亚型参考序列构建基于VPl序列的系统进化树。结果新疆EV71分离株之间核苷酸和氨基酸序列同源性在92．8％～100．0％和97．9％～100．0％,22株病毒株与安徽阜阳和山东临沂C4a基因参考株最为相近,核苷酸和氨基酸序列序列同源性在93．9％～98．6％和98．6％～99．6％。而与A、B基因型参考株差异较大,核苷酸和氨基酸序列序列同源性在82．1％～84．8％和95．9％～98．3％。直接用临床标本进行核酸提取、扩增和序列测定的阳性率为30．0％,低于用病毒培养物的阳性率（100．0％）。结论2011—2013年新疆EV71分离株均为C4a基因型,与安徽和山东分离的EV71毒株可能有相同的起源。直接用临床标本进行核酸提取、扩增和序列测定可用于肠道病毒的分型鉴定。     

重庆地区2009年手足口病病原分离鉴定及病毒基因组特征

目的 对2009年重庆市手足口病(hand-foot-mouth disease, HFMD)患儿粪便标本的病原进行分离鉴定及全基因组序列测定,并同相关毒株序列进行同源性比对和进化分析,以了解新分离病毒基因组序列特征及可能的传播来源.方法 将47例手足口病患儿临床标本接种人横纹肌肉瘤细胞(human rhabdomyosarcoma,RD)进行分离培养,采用EV、EV71、Cox A16特异性引物对出现细胞病变的细胞上清进行PCR鉴定,同时电镜观察病毒颗粒形态,将鉴定的病毒基因组分为4个片段进行RT-PCR扩增,扩增产物纯化后进行PCR测序.通过末端重叠序列拼接成全长病毒基因组序列,利用生物信息学软件对序列进行比对分析,绘制进化树.结果 在47例HFMD患儿临床标本接种RD细胞培养中,有7份观察到明显的细胞病变,通过RT-PCR检测有3份呈EV特异性引物及EV71特异性引物阳性,而所有标本Cox A16特异性引物检测为阴性,EV71特异性引物的PCR产物测序结果证实为EV71病毒,同时用电镜观察形态病毒感染的RD细胞,为圆形无包膜病毒颗粒,证实所分离病毒为EV71.测序获得的3株EV71病毒基因组全长分别为7 409、7 406 nt和7 404 nt,其VP1氨基酸序列同源性达99%以上.Blast分析表明重庆毒株Chongqing-2-09-China(GQ994990.1)、Chongqing-3-09-China (GQ994991.1)均与安徽阜阳2008年分离的3株EV71毒株同源性较高,重庆毒株Chongqing1-09-China (GQ994989.1)与2005年台湾分离984 polyprotein、1235 polyprotein序列毒株同源性最高,进化分析表明属于C4基因亚型.结论 新分离的重庆EV71毒株基因组序列符合肠道病毒特征,与国内2008年安徽阜阳及台湾2005年分离的EV71病毒可能具有相同来源.