Evaluation of antitumor activity and in vivo antioxidant status of Anthocephalus cadamba on Ehrlich ascites carcinoma treated mice

Ethnopharmacological relevance

Anthocephalus cadamba (Roxb.) Miq. (Family: Rubiaceae) is commonly known as “Kadamba” in Sanskrit and Hindi in India. Various parts of this plant have been used as a folk medicine for the treatment of tumor, wound healing, inflammation and as a hypoglycemic agent.

Aim of study

The purpose of this investigation was to evaluate the antitumor activity and antioxidant status of defatted methanol extract of A. cadamba (MEAC) on Ehrlich ascites carcinoma (EAC) treated mice.

Materials and methods

In vitro cytotoxicity assay has been evaluated by using the trypan blue method. The determination of in vivo antitumor activity was performed by using different EAC cells (2×10⁶ cells, i.p.) inoculated mice groups (n=12). The groups were treated for 9 consecutive days with MEAC at the doses of 200 and 400 mg/kg b.w. respectively. After 24 h of last dose and 18 h of fasting, half of the mice were sacrificed and the rest were kept alive for assessment of increase in life span. The antitumor potential of MEAC was assessed by evaluating tumor volume, viable and nonviable tumor cell count, tumor weight, hematological parameters and biochemical estimations. Furthermore, antioxidant parameters were assayed by estimating liver and kidney tissue enzymes.

Results

MEAC showed direct cytotoxicity on EAC cell line in a dose dependant manner. MEAC exhibited significant (P<0.01) decrease in the tumor volume, viable cell count, tumor weight and elevated the life span of EAC tumor bearing mice. The hematological profile, biochemical estimations and tissue antioxidant assay were reverted to normal level in MEAC treated mice.

Conclusion

Experimental results revealed that MEAC possesses potent antitumor and antioxidant properties. Further research is going on to find out the active principle(s) of MEAC for better understanding of mechanism of its antitumor and antioxidant activity.     

醇沉对纯化金银花中绿原酸工艺的影响

目的:测定醇沉对绿原酸纯化工艺的影响。方法:采用HPLC测定方法对不同醇沉度提取金银花粗粉中绿原酸的效果进行了比较。结果:最佳醇沉度为60。采用醇沉、萃取复合工艺可将粗粉中绿原酸含量从5.5提高到37.72,收率为83.53。结论:醇沉可有效去除金银花粗粉中的杂质,且绿原酸收率高达90.16。     

牛蒡叶中绿原酸的提取工艺优化

 目的对牛蒡叶中绿原酸的提取工艺进行优化。方法改变温度，提取溶剂pH，提取时间和次数及处理牛蒡叶材料的方法等提取牛蒡叶中的绿原酸，RP-HPLC定量绿原酸含量。结果用甲醇和乙醇为提取溶剂，温度分别为65，80℃，pH 2～3时有利于绿原酸的提取，较佳提取时间为4 h，每次2 h，共2次或第1次2 h，第2，3次各1 h，分3次进行。结论牛蒡叶为用自然晾干的材料，用甲醇/乙醇于65℃/80℃，pH 2～3条件下提取4 h，每次2 h，共2次或第1次2 h，第2，3次各1 h，分3次进行。     

RP-HPLC测定返魂草颗粒中绿原酸和咖啡酸含量

目的:建立返魂草颗粒(返魂草)绿原酸和咖啡酸的反相高效液相色谱分析方法。方法:Eclipse XDB-C18柱,乙腈-0.4%磷酸(12∶88,V/V)为流动相,柱温:室温,于327 nm测定返魂草颗粒中的绿原酸和咖啡酸。结果:绿原酸在0.005 6~0.896μg/L,咖啡酸在0.012 5~0.1μg/L内线性关系良好,平均回收率分别为100.1%、99.8%。结论:该法简便、准确、无干扰,可用于测定返魂草颗粒中绿原酸和咖啡酸含量。     

绿原酸及其13种体内主要代谢物的体外抗菌作用研究

目的 对绿原酸及其13种体内主要代谢物的体外抗菌作用进行比较研究。方法 选择临床分离的常见致病菌如甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）、β-内酰胺酶阴性大肠杆菌（E-）、产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌（E+）、肺炎克雷伯菌（E-/E+）、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌等,采用微量肉汤稀释法测定绿原酸代谢物的最低抑菌浓度,并与绿原酸进行比较。结果 对大多数受试菌株,部分主要代谢物抗菌作用与绿原酸比较有所增强,可提高4～66倍,以苯甲酸、对羟基苯甲酸、对香豆酸、二氢咖啡酸和没食子酸最佳,其中二氢咖啡酸、没食子酸对MSSA和MRSA的抗菌作用提高了33～66倍。结论 与绿原酸相比,绿原酸部分主要代谢产物抗菌活性增强,绿原酸进入体内可能通过其某些代谢产物而发挥抗菌作用。     

绿原酸及其类似物与生物活性

绿原酸具有多种药理作用,是许多中药材及中成药的主要有效成分之一,评述了绿原酸在植物中的分布及其天然和合成类似物的生物活性,可望为创制新药提供可能。     

绿原酸衍生物的合成及体外抗肿瘤活性研究

目的设计并合成天然产物绿原酸的酰胺类衍生物,并对该系列化合物进行体外抗肿瘤活性研究。方法以绿原酸为起始原料,经保护、缩合、脱保护3步反应制得目标产物。采用噻唑蓝(MTT)法,考察所合成的目标化合物对人宫颈癌HeLa细胞、人肝癌HepG2细胞和人盲肠腺癌HCT-8细胞3种肿瘤细胞的体外增殖活性的影响。结果设计并合成了10个绿原酸取代的苯甲酰胺及苯乙酰胺类衍生物B1~B5、C1~C5,其结构均经1H-NMR、13C-NMR及HR-ESI-MS确定。抗肿瘤活性测试结果表明,10个绿原酸衍生物对3株肿瘤细胞株表现出不同程度的抑制效果,其中衍生物B2对HeLa细胞表现出良好的活性,且活性优于阳性对照药顺铂,所有的衍生物均对HCT-8细胞表现出抑制作用,且均优于阳性对照药顺铂。结论10个绿原酸衍生物均为新化合物,部分衍生物具有较好的抗肿瘤活性,值得进一步深入研究。     

绿原酸人工抗原的合成及反应条件的优化

目的:制备中药成分绿原酸(CGA)的人工抗原,并优化合成反应条件,为中药注射剂不良反应的深入研究提供物质基础和技术基础.方法:采用碳二亚胺法,将CGA与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联起来制得完全抗原(CGA-BSA);正交法优化合成反应条件;经基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和紫外吸收光谱(UV)测定其偶联率(Mr).结果:MALDI-TOF-MS和UV测得合成的人工抗原CGA-BSA的Mr分别为20和18.8;反应最佳条件为NHS,EDC,BSA与CGA的比率为4:1,1:1,1:200,pH为9.结论:成功合成了绿原酸全抗原(CGA-BSA),为进一步深入研究绿原酸的过敏原性及其相关性研究提供物质基础.     

RP-HPLC测定射干抗病毒注射液中绿原酸和咖啡酸含量

目的:建立射干抗病毒注射液中绿原酸和咖啡酸的反相高效液相色谱分析方法。方法:以Krom asil ODS柱,水-甲醇-乙腈-冰醋酸(95∶10∶5∶2,v/v)为流动相,柱温(23±0.1)°C,于326 nm测定射干抗病毒注射液中的绿原酸和咖啡酸。结果:绿原酸在0.37~185 mg/L,咖啡酸在0.13~130 mg/L内线性关系良好,平均回收率分别为100.1%,99.6%:检测限(S/N=3)分别为0.012,0.020 mg/L;定量限(S/N=10)分别为0.037,0.052 mg/L。结论:该法简便、准确、无干扰,可用于测定射干抗病毒注射液中绿原酸和咖啡酸含量。     

绿原酸致敏性的综合研究与评价

目的:通过不同纯度绿原酸的致敏试验结果,结合对文献的综合分析,揭示绿原酸的非致敏原性。方法:设定了不同纯度绿原酸提取物组(绿原酸20%~99%)、注射用绿原酸组、不同纯度绿原酸提取物和注射用绿原酸的透析内液组和外液组、过期和降解后的注射用绿原酸组作为受试药物,以豚鼠和大鼠为受试动物,分别采用全身主动过敏试验和皮肤被动过敏试验进行致敏性验证;采用LC-MS法鉴定了透析内液中大分子残留物的相对分子质量范围。结果:质量分数高于92%的绿原酸提取物、注射用绿原酸及其降解物和含小分子的透析外液均未发生过敏反应;质量分数低于40%的绿原酸提取物及其透析内液均被LC-MS鉴定出大分子化合物并且发生明显的过敏反应。结论:根据试验结果和国内外相关文献,均证明了绿原酸没有致敏原性,而低纯度提取物中存在的大分子物质才与致敏反应密切相关。     

不同产地野菊花中绿原酸、咖啡酸和蒙花苷含量

目的:对22份不同产地野菊花中绿原酸、咖啡酸和蒙花苷的含量进行测定,为科学评价及有效控制其质最提供参考.方法:采用Shim-pack C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5 μm);绿原酸和咖啡酸流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液(19:81);检测波长326 nm.蒙花苷流动相甲醇-水-冰醋酸(26:23:1);检测波长334 mn,柱温25℃;流速1 mL·min-1.结果:绿原酸、咖啡酸和蒙花苷的浓度与峰面积,分别在2.5～50 μg(r=0.998),2.5～25μg(r=0.998),4.97～41.47 μg(r=0.999)呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为100.8%,96.2%,103.7%,RSD分别为2.1%,2.3%,1.8%.结论:不同产地野菊花中绿原酸、咖啡酸和蒙花苷含量存在显著差异,重庆丰都产野菊花中绿原酸含量最高为0.232%,咖啡酸含量整体偏低,江苏和安徽产野菊花中蒙花苷含量基本达到药典规定水平.     

薄层扫描法测定益胆片中氯原酸的含量

 目的 研究中药益胆片中绿原酸的定量方法。 方法 样品用甲醇提取,蒸干甲醇后加水使溶解,氯仿脱脂,用10%枸橼酸调Ph1.5～2.0,用醋酸乙酯提取,点样于硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶1∶1∶1)展开,用CS 930溥层扫描仪在λs=330 nm,Λr=210 nm下扫描测定。结果 本法的平均回收率为95.97%,RSD为2.77%。结论 结果显示该方法灵敏、准确、专属性强,可用于本制剂的含量测定及质量控制。     

微波预处理法提取金银花中的绿原酸

目的：通过对微波预处理过程以及热水洗涤过程的影响因素分析，得到最佳提取工艺参数。方法：用75％乙醇溶液湿润干金银花，然后在微波加热下快速汽化进行预处理，最后再用热水洗涤两次，每次10min。并与传统的提取方法相比。结果：微波预处理提取法的提取时间缩短6倍、提取率提高1％。结论：该法提取率高，提取时间短。     

高效液相色谱法测定脉络宁注射液中绿原酸的含量

 目的应用反相高效液相色谱法测定脉络宁注射液中绿原酸的含量。方法以甲醇-水-冰醋酸(15∶85∶1)为流动相，采用C₁₈化学键合硅胶为固定相，在330 nm进行测定。结果绿原酸在0.024 5～0.245 μg范围内线性关系良好，平均回收率为98.36%。结论该方法简便、可靠、准确，可用于该制剂的质量控制。     

反相高效液相色谱法测定复方茵陈注射液中氯原酸和栀子甙的含量

 采用反相高效液相色谱法测定复方茵陈注射液中主要成分氯原酸和栀子成的含量。氯原酸在３３５ｎｍ波长测定，栀子成在２３７ｎｍ波长测定。外标法定量，回收率分别为９３．６％和９７．５％。氯原酸和桅子戒回归方程分别为Ａ＝０．１８７＋０．８５８Ｃ（ｒ＝０．９９９３），Ａ＝０．２１＋６．０５５６Ｃ（ｒ＝０．９９８３）。方法操作简单，灵敏度及准确度均较高。     

清开灵注射液中绿原酸致敏性的研究

目的 观察清开灵注射液中绿原酸(chlorogenic acid,CA)的致敏性.方法 采用类过敏及过敏实验方法,观察CA对Beagle犬及豚鼠的行为学变化,检测血中组胺,IgE,IgG,IgM,ECP和IL-4的含量变化,判断CA的致敏性.结果 CA没有引起Beagle犬及豚鼠产生典型的行为学变化,血中组胺,IgE,IgG,IgM,ECP和IL-4的含量亦没有变化.结论 CA未引起犬及豚鼠发生明显的类过敏及过敏反应.     

RP—HPLC测定蒙药材铁杆蒿（哈日-沙布嘎）中绿原酸的含量

目的：对蒙药材铁杆蒿中绿原酸进行含量测定。方法：采用反相高效液相色谱法,Alltima—C18柱,流动相为乙腈-0．05％磷酸（7：93）,检测波长：327nm。结果：绿原酸线性范围20．27—1013．5ng,r=0．9999,平均回收率99．98％,RSD=1．99％。结论：本测定方法简便、准确,为铁杆蒿质量评价提供了可靠的依据。     

薄层扫描法测定爽咽茶中绿原酸的含量

 目的：采用薄层扫描法测定爽咽茶中绿原酸的含量。方法：选用高效硅胶G薄层板，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶1∶1∶1)为展开剂，在紫外光灯(365 nm)下定位，在λ_S=330 nm,λ_r=205 nm条件下进行双波长反射式锯齿形扫描。结果：绿原酸在1.07～5.34 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系，r=0.9996；平均回收率为97.6%，RSD=2.33%(n=5)。结论：此方法操作简便、快捷、准确，专属性强，重现性好，可用于该产品的质量控制。     

黄芩苷对绿原酸在家兔体内药代动力学的影响

目的:探讨绿原酸及与黄芩苷配伍后静脉推注给药在家兔体内的药代动力学规律。方法:兔子10只,分为两组,Ⅰ组耳缘静脉推注绿原酸溶液6 mg.kg-1,Ⅱ组耳缘静脉推注绿原酸6 mg.kg-1和黄芩苷90 mg.kg-1,采用HPLC测定血浆中的绿原酸浓度,用K inetic软件求算其药物动力学参数,并进行统计学分析。结果:绿原酸单用及与黄芩苷配伍静脉给药后,其药动学过程均符合二室开放模型,其主要药动学参数均有显著差异(P0.05)。Ⅱ组绿原酸的AUC0~∞较Ⅰ组明显增大。结论:黄芩苷在一定程度上能影响绿原酸在家兔体内的药动学过程。     

RP-HPLC测定杜仲平压片中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷的含量

目的建立杜仲平压片(杜仲叶)中京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷含量测定方法.方法采用反相高效液相色谱法,Diamonsil(钻石)C18色谱柱(5 μm,150 mm ×4.6 mm),甲醇-水-冰醋酸(15∶85∶1.5)为流动相,检测波长237 nm.结果该方法线性关系良好.京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷的精密度分别为1.93%、1.50%、1.66%,n=5.加样回收率分别为97.3%、97.2%、96.7%.结论本方法简便快捷、重现性好;可用于同时测定杜仲平压片中3种有效成分含量.