应用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察体外培养破骨细胞的生…

抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）是破骨细胞（ＯＣ）的标志酶，为ＯＣ所特有。本研究应用改良的ＶａｎＤｅＷｉｊｎｇａｅｒｔ和Ｍｏｓｔａｆａ方法对培育在骨片上的ＯＣ进行了ＴＲＡＰ染色，成功地观察了体外培养ＯＣ的形态与生存时间，该方法简便，特异性高，能准确计数体外培养的ＯＣ数，所用底物对萘酚ＡＳＢＩ，原料易获得，培养在骨片上的ＯＣ生存时间可长达２４０小时。     

血小板衍生生长因子-BB体外促进破骨细胞样细胞形成

目的 获得大量和高纯度破骨细胞样细胞。方法 从急性单核细胞性白血病(M5a亚型)患者骨髓中分离前体单核细胞，与血小板衍生生长因子(PDGF)-BB共同培养，获得多核细胞；利用免疫电镜、免疫荧光、扫描电镜等技术鉴定多核细胞的生物学特性。结果 多核细胞表达抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)，细胞膜具有Vitronectin受体，能够形成骨吸收陷窝。结论 所获得的多核细胞是破骨细胞样细胞，PDGF-BB能够促进前体破骨细胞向破骨细胞转化。     

破骨细胞体外培养方法的建立与形态观察

1　材料和方法1 1　骨磨片制备　新鲜牛股骨皮质锯成 6ｍｍ× 6ｍｍ×2 0 0 μｍ的小块 ,再磨成 10 μｍ厚。1 2　破骨细胞分离培养　拉颈处死出生 2 4ｈ内的新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,75 %乙醇浸泡 5ｍｉｎ。无菌条件下分离股骨、肱骨、胫骨 ,清除骨表面的软组织和骨骺 ,放入培养液 (含ＤＭＥＭ ,2 5ｍｍｏｌ/ＬＨＥＰＥＳ ,15 %胎牛血清 ,青霉素 10 0Ｕ/ｍｌ,链霉素 10 0ｍｇ/Ｌ ,ｐＨ 7 0 )。骨干纵行剖开 ,吸管反复冲洗骨髓腔 ,静止 1ｍｉｎ。取 2 4孔培养板 ,每孔加 1ｍｌ培养液和一个骨磨片或盖玻片 ,37℃、5 %ＣＯ2 孵育箱 1ｈ。吸出培…     

成人破骨细胞的体外培养

目的 建立成人破骨细胞体外培养的方法，观察成骨细胞对破骨细胞分化、增殖和功能的影响，为进一步研究补肾中药防治骨溶解和骨质疏松症提供基础。材料和方法 从成人骨髓中提取单核细胞，以1，25—(OH)2D3作为刺激因子，分3组培养：单核细胞与成骨细胞共同培养，单核细胞单独培养，单核细胞与成骨细胞条件培养液培养。生物显微镜下观察细胞的分化过程，HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap)染色方法作组织化学观察，扫描电镜(SEM)观察骨吸收功能。结果 在单核细胞与成骨细胞共同培养组，可见单核细胞逐步融合成多核细胞；HE染色和Trap染色可见阳性多核细胞；扫描电镜观察可见骨片上有骨吸收陷窝形成。其他两组则未得到上述结果。结论 成人骨髓单核细胞在一定培养条件下能分化成熟为具有典型的破骨细胞表型的多核细胞：Trap染色阳性，具有骨吸收功能。与成骨细胞的直接接触是破骨细胞分化、增殖和发挥功能的必不可少的条件。     

不同年龄健康女性血清性激素和抗酒石酸酸性磷酸酶的变化

目的 :研究女性血清性激素和抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRACP)水平随年龄的变化 ,为骨质疏松症的基础与临床研究提供参数。方法 :测量 2 36例 2 3～ 5 3岁绝经前 (按年龄分为 3组 ,每组间隔 10年 )和 91例 4 8～ 71岁绝经后健康女性志愿者血清黄体生成素 (LH)、卵泡刺激素 (FSH)、雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)水平及TRACP活性。结果 :绝经前各年龄组比较 ,仅FSH水平在绝经前第 3组妇女中明显升高 (P <0 .0 5 ) ;绝经后与绝经前组比较 ,FSH ,LH和TRACP明显升高 (P <0 .0 1) ,而雌二醇和孕酮明显降低 (P <0 .0 1) ,且与TRACP呈显著负相关 (r分别为 - 0 .4 1和 - 0 .37,P <0 .0 1)。结论 :女性绝经后 ,雌孕激素缺乏 ,导致FSH ,LH升高 ,同时骨吸收加快 ,血清TRACP活性增加     

体外应用不同方法培养破骨细胞的实验对比研究

目的:研究体外应用不同培养方法对所生成的破骨细胞数量及功能的影响?方法:体外采用3种方法培养破骨细胞:A组小鼠骨髓细胞中加入10 ng/ml 巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)培养24 h,未贴壁细胞30 ng/ml M-CSF预诱导3 d后,50 ng/ml M-CSF + 100 ng/ml核因子κB受体活化因子配体(RANKL)继续诱导;B组小鼠骨髓细胞与小鼠颅骨成骨细胞以10∶1的比例混合培养,加入1 × 10-6 mol/L 前列腺素E2(PGE2)和1 × 10-8 mol/L 维生素D3(VitD3);C组小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7中加入100 ng/ml RANKL诱导培养?检测每组细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色情况及牙本质磨片吸收陷窝情况,Real-time PCR检测各组破骨细胞NFATc1?c-Fos表达情况?结果:各组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝?B组所形成的破骨细胞数量最多,C组次之,A组最少;B组骨吸收陷窝数目最多,陷窝总面积最大,A组其次,C组最差;B组NFATc1?c-Fos表达高于C组及A组,A组表达最差?结论:3种培养破骨细胞的方法相比较,B组在破骨细胞分化和吸收功能方面优于A?C组?A?C组相比较,A组培养的破骨细胞骨吸收功能更强,C组所培养的破骨细胞分化更佳?     

抗酒石酸性磷酸酶在骨组织不同细胞中的表达

目的:明确抗酒石酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)活性和蛋白在骨组织不同细胞中的表达和定位?方法:取正常6周龄C57BL/6J小鼠的胫骨,制备石蜡切片,分别通过组织化学?免疫组织化学以及上述两者双重染色的方法检测TRAP活性和蛋白在骨组织不同细胞的表达和定位?结果:组织化学和免疫组织化学染色显示破骨细胞呈现TRAP强阳性反应,而且关节软骨细胞?生长板软骨细胞?成骨细胞和骨外膜细胞也呈现TRAP阳性反应?双重染色结果可见大多数免疫组织化学TRAP阳性细胞显示组织化学阳性反应,但也有少数细胞只显示免疫组织化学阳性反应?结论:TRAP活性和蛋白不仅在破骨细胞高表达,在软骨细胞?成骨细胞和骨外膜细胞中也有表达?     

氟化钠对体外培养大鼠破骨细胞的影响

目的:探讨氟对体外培养的破骨细胞的作用.方法:体外分离培养大鼠乳鼠四肢长骨破骨细胞,于分离后2 h加入氟化钠(NaF)4、6、8和10 mg@L-1,对其进行形态学的动态观察.结果:破骨细胞形态多样,含多个核,体外培养存活时间短,24 h大部分细胞凋亡.加入NaF后,破骨细胞数目减少,体积变小,空泡增多,甚至崩解坏死.结论:在一定的剂量和时间范围内,氟对体外培养的破骨细胞有直接的损伤作用.     

兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶多克隆抗体的制备和应用

目的：采用已构建的pET28a-ΔPTP-oc重组质粒纯化重组蛋白,制备兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTP-oc）多克隆抗体并鉴定其性能。方法：将构建的pET28a-ΔPTP-oc重组质粒转化至BL21（DE3）中,应用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达。表达产物经过Q柱阴阳离子交换和Ni柱亲和层析获得纯化的PTP-oc重组蛋白,将纯化的重组蛋白作为抗原免疫家兔,获得PTP-oc多克隆抗体。采用间接ELISA法检测抗体效价,Western blotting法检测抗体的特异性。结果：成功纯化出PTP-oc重组蛋白。间接ELISA法检测,采用纯化诱导后的重组蛋白免疫家兔获得了兔抗PTP-oc多克隆抗体,多克隆抗体效价达1∶32000以上,Western blotting法检测,所得多克隆抗体有较高的特异性。结论：成功纯化了PTP-oc重组蛋白,制备出PTP-oc多克隆抗体。     

不同年龄健康女性血清性激素和抗酒石酸酸性磷酸酶的变化

目的：研究女性血清性激素和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）水平随年龄的变化，为骨质疏松症的基础与临床研究提供参数。方法：测定236例23－59岁绝经前（按年龄分为3组，每组间隔10年）和91例48－71岁绝经后健康女性志愿者血清黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）、孕酮（P）水平及TRACP活性。结果：绝经前各年龄组比较，仅FSH水平在绝经前第3组妇女中明显升高（P＜0．05）；绝经后与绝经前组比较，FSH，LH和TRACP明显升高（P＜0．01），而雌二醇和孕酮明显降低（P＜0．01），且与TRACP呈显著负相关（r分别为－0．41和－0．37，P＜0．01）。结论：女性绝经后，雌孕激素缺乏，导致FSH，LH升高，同时骨吸收加快，血清TRACP活性增加。     

HL-60细胞诱导分化过程中酸性磷酸酶活性的变化

研究结果表明,经 DMSO 诱导的 HL—GO细胞酸性磷酸酶活性升高不到2倍,出现第Ⅰ组同工酶;经 TPA 诱导后 AcP 活性升高4～5倍,并出现Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组同工酶。超微结构观察发现,DMSO 处理的 HL—60细胞 AcP 活性局限在溶酶体及粗面内质网;TIPA 诱导的细胞 AcP 反应在溶酶体、粗面内质网、核周界及高尔基复合体膜囊等处均为阳性。结果提示,HL-60细胞 AcP 酶活性变化,对研究白血病细胞诱导分化有重要意义。     

含吐温α—萘磷酸盐速率法测定酸性磷酸酶

应用国产酸性磷酸酶测定试剂添加吐温增溶,使反应呈色试液透明,从而确立了结果可靠的血清酸性磷酸酶测定法。本法酶反应产物的显色化合物最大吸收波长仍为405nm,批内CV=2.2%～3.6%;批间CV=3.2%～3.4%;线性范围至少在0～42u L。正常参考值(X±2s).男性为5.7～9.7u/L,女性4.9～8.4u/L,本法(Y)与Bessey·Lowry法(X)法比较结果相一致(Y=1.026X 1.5,n=30)。本法反应液完全透明。准确性可靠,重复性好。     

NGF对大鼠离体中脑神经元的存活和突起生长的影响

研究神经生长因子（ＮＧＦ）对中脑神经元的突起生长和促生存作用。方法采用体外培养法进行形态学观察与测量。结果每个视野的细胞数ＮＧＦ组较对照组明显增多，（ＮＧＦ组为２２．８７±４．８５个，对照组为１５．４７±２．６１个，Ｐ＜０．０１）；ＮＧＦ组细胞突起个数（１．９６７±０．８１个／细胞）多于对照组（１．５３３±０．８２个／细胞），Ｐ＜０．０５；但两组细胞突起长度却无明显差别（ＮＧＦ组为６１．２５±３３．５μｍ，对照组为５７．８６±２８．４μｍ，Ｐ＞０．０５）。结论ＮＧＦ对大鼠离休中脑神经元的生长发育有明显的促进作用     

香烟及矽尘对肺泡巨噬细胞酸性磷酸酶和乳酸脱氢酶的影响

本实验对体外与香烟和(或)矽尘共同培养的肺泡巨噬细胞(AM)培养物上清液中酸性磷酸酶(AcP)及乳酸脱氢酶(LDH)的活性进行了测定。结果显示,AM-香烟-矽尘共同培养组上清液中AcP活性比单独的香烟或矽尘与AM共同培养组及单纯AM组高,说明香烟和矽尘对AM的影响具有协同作用。实验结果还表明我们已报导的AM-香烟-矽尘共同培养物上清液刺激人胚肺成纤维细胞生长这一现象,可能与AM某种(些)产物量的改变有关。     

甲状腺细胞培养的观察和应用

目的 :观察甲状腺细胞体外培养的生长和分泌激素的功能特点 ,为临床治疗甲状腺功能减退 (甲减 )探索新的治疗方法。方法 :取 5～ 8个月胎龄的水囊引产新鲜甲状腺细胞进行体外培养 ,观察培养的甲状腺细胞生长特点 ,超微结构特点 ;对培养的甲状腺细胞分泌 T3、T4 的功能进行测定 ;并对 1例临床诊为甲减的患者进行了甲状腺细胞移植观察。结果 :甲状腺细胞在体外培养中 ,经组织学观察 ,细胞生长良好 ,开始为圆形、椭圆形 ,尔后为多边形 ,为上皮型细胞 ,贴瓶生长。培养 12 d后 ,细胞以生长晕为中心 ,呈放射状向四周贴瓶生长。电镜下 ,可见细胞内有大量粗面内质网、线粒体、溶酶体和胶质滴 ,经放射免疫法测定 ,培养的甲状腺细胞可分泌 T3、T4 ,以培养后的前 9d激素分泌水平较高 ,10～ 12 d激素分泌水平逐渐降低 ,随培养时间的延长 ,激素分泌处于较低水平。经统计学两两比较 ,各组均数之间的差别均有高度显著性 (P <0 .0 1)。 1例甲减病例移植甲状腺细胞后 ,临床症状大多消失 ,实验室检查 :T3由移植前的 0 .35 nmol/ L 提高到 2 .4 nmol/ L;T4 由移植前的 3.2 nmol/ L提高到 4 0 .2 nmol/ L;TSH由移植前的 6 7.5 m U/ L 下降到 18.3m U/ L。结论 :甲状腺细胞经体外短期培养 ,生长良好 ,结构正常 ,具有分泌甲状     

细脚拟青霉对小鼠血清及肝,脾,肾组织酸性磷酸酶活力的影响

本文观察了细脚拟青霉菌丝体水煎剂对正常及环磷酰胺所致免疫抑制小鼠血清及肝、脾、肾组织中酸性磷酸酶活力的影响作用。结果表明：细脚拟青霉水煎剂给小鼠灌胃２１天后，小鼠血清中酸性磷酸酶活力无显著改变，正常小鼠脾组织酸性磷酸酶活力显著提高，对环磷酰胺所致小鼠肝、脾、肾组织酸性磷酸酶活力下降具有非常显著的抑制作用。提示：细脚拟青霉对免疫抑制小鼠脏器组织内的酸性磷酸酶活力具有调节作用。     

人骨膜源性成骨细胞的体外培养

目的：探索成骨细胞的体外培养方法，建立人骨膜源性成骨细胞体外实验模型。方法；以人骼骨骨膜为材料，通过植块培养法进行细胞培养，通过形态学观察；细胞的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）染色；培养液中骨钙放免分析等进行细胞学鉴定。结果：成骨细胞为成纤维细胞型，，贴壁生长，形态多样化，ＨＥ染色细胞轮廓清晰，核内可见２～３个核仁；细胞的ＡＬＰ染色淡了性；培养液中检测出较高浓度的ＢＧＰ。结论：可以利用人骨膜灯民骨细胞的体外     

全反式维甲酸对结肠癌CW-2和LS174T细胞株增殖的抑制作用研究

目的：研究全反式维甲酸(ATRA)对结肠癌不同增殖能力细胞株生长抑制的可能机制，为ATRA应用于结肠癌的治疗提供可靠依据。方法：应用细胞观察和MTT方法，研究ATRA对结肠癌不同增殖能力细胞株LS174T和CW-2细胞的生长抑制现象。结果：LS174T的生长速度明显比CW-2细胞快。ATRA对体外培养的结肠癌细胞株LSl74T和CW-2细胞的生长有明显抑制和诱导细胞分化作用。结论：ATRA对LS174T和CW-2细胞的生长有抑制作用，抑制细胞增殖的程度与ATRA的浓度有关，ATRA对结肠癌细胞有一定的抑制癌细胞增殖和诱导癌细胞分化作用。     

叶酸及维生素B_(12)伍用抗精神病药物治疗精神障碍的疗效观察

本文报告了100例精神障碍患者,随机分为两组,Ⅰ组单用抗精神病药物治疗,Ⅱ组合并用叶酸及维生素 B_(12)治疗。两组在治疗前后均测血清叶酸及维生素 B_(12)浓度,其中Ⅱ组疗效较Ⅰ组明显。这些资料提示对精神障碍患者在常用抗精神病药物之外加用叶酸及维生素 B_(12)可能有益。     

管壁不同厚度的聚乳酸管对周围神经再生影响的实验研究

目的 探讨可吸收性聚乳酸管管壁厚度对周围神经再生的影响。方法 选用wister大鼠45只，分为三组，分别以0.1,0.3,0.5mm三种不同管壁厚度的聚乳酸管桥接单侧坐骨神经10mm缺损，同时管内植入相同浓度的雪旺细胞和白芨胶混合液，旨在提高神经再生率，术后8周，12周进行显微解剖学，组织学等检查。结果 管壁为0.3mm的聚乳酸管内有较多的再生神经纤维。三个月内管壁变薄，但无软化变形。结论 壁厚0.3mm的聚乳酸管为缺损的周围神经再生最佳管道。