血浆中miR-199a/b-3p表达水平在肝癌筛查及愈后诊断中的潜在价值

目的 探讨血浆中miR-199a/b-3p表达水平是否可以应用于肝癌的筛查.方法 采用realtime PCR方法及统计学方法分析肝癌患者(90例)和健康人(50例)的miR-199a/b-3p水平,分析肝癌手术前后(44例)miR-199a/b-3p表达水平,肝癌不同分期血浆中miR-199a/b-3p表达水平的差异,以及miR-199a/b-3p表达水平与肝癌患者存活期的相关性.结果 肝癌患者血浆中miR-199a/b-3p表达水平明显低于健康人(t=-4.557,P＜0.01);经手术切除肿瘤之后,患者血浆中miR-199a/b-3p表达水平较术前明显上升(t=-0.414,P＜ 0.01);不同分期肝癌患者血浆中miR-199a/b-3p表达水平差异无统计学意义(F=0.258,P＞0.05);术后miR-199a/b-3p表达水平与患者的存活时间正相关(r=0.788,P＜0.01).结论 通过检测血浆中miR-199a/b-3p表达水平可以对肝癌患者进行筛查,并对术后患者的愈后情况进行判断.     

miR-199b-5p在骨肉瘤中的预测和诊断作用

目的 探索miR-199b-5p在骨肉瘤中的预测和诊断作用。方法 运用RT-PCR方法检测骨肉瘤患者组织中miR-199b-5p和DRAM的表达水平;利用生物信息学预测工具预测miR-199b-5p的靶基因;分析DRAM与miR-199b-5p的表达关系。结果 miR-199b-5p在组织中有表达,和癌旁正常组织相比,肿瘤组织中的miR-199b-5p表达水平显著升高(P < 0.05);miR-199b-5p与患者的性别、发病年龄、病变部位、肿瘤分型和分期无明显关系(P > 0.05)。研究还发现DRAM在各种组织中均有表达,而DRAM mRNA表达在两者中无明显差异,DRAM与miR-199b-5p呈负相关的表达关系。结论 本研究表明miR-199b-5p可以作为骨肉瘤一个诊断标志物,而DRAM可能是miR-199b-5p的调控靶基因。     

miR-424-5p靶向KIF23调控细胞周期并抑制肝癌细胞的增殖和迁移能力

目的 探究miR-424-5p、KIF23对肝癌细胞的作用机制,为探索新的肝癌靶向治疗途径提供思路。方法 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-424-5p的表达水平,生物信息学技术和萤光素酶报告基因验证KIF23与miR-424-5p在肝癌中的结合关系。qRT-PCR和蛋白免疫印迹(western blot, WB)分别检测KIF23 mRNA和蛋白表达水平。CCK8实验、克隆形成实验、迁移实验和流式细胞术评估miR-424-5p和KIF23对肿瘤细胞的增殖、迁移能力,以及对细胞周期进展的影响。结果 与正常肝组织比较,miR-424-5p在肝癌组织和细胞中显著低表达(P<0.05);KIF23是miR-424-5p的直接下游靶点,在肝癌组织和细胞中的表达显著上调(P<0.05)。过表达KIF23会促进肝癌细胞增殖和迁移,并将细胞周期阻滞于G2/M期。过表达miR-424-5p能显著减弱过表达KIF23对细胞增殖、迁移和细胞周期分布的影响(P<0.05)。结论 miR-424-5p可以通过靶向下调KIF23,从而抑制肝癌细胞增殖和迁移能力,影响细胞周...     

miR-199a-5p和miR-17-5p在子宫内膜异位症患者血清中的表达及意义研究

目的探讨miR-199a-5p和miR-17-5p在子宫内膜异位症(EMS)患者血清中的表达及其临床意义。方法收集EMS患者血清40例为EMS组,同期不孕症检查的患者血清20例为对照组;采用实时定量PCR检测两组患者血清中miR-199a-5p和miR-17-5p的差异表达,分析其与临床特征的关系。构建受试者工作特征曲线(ROC曲线),采用SPSS17.0软件对实验数据进行统计分析。结果 miR-199a-5p在EMS组血清中的相对表达量较对照组显著减少(Z=-2.090,P=0.037),血清miR-199a-5p的变化与EMS r-AFS分期呈负相关(P=0.038),与痛经程度无关。miR-17-5p在EMS组血清中的表达水平较对照组显著减少(Z=-2.464,P=0.014),血清miR-17-5p的变化与r-AFS分期及痛经程度均无关。ROC曲线分析显示,miR-199a-5p和miR-17-5p应用于诊断EMS的AUC值为73.8%、78.0%,敏感度为70.0%、80.0%,特异度为85.0%、65.0%。结论 1miR-199a-5p和miR-17-5p可能参与EMS的发病。2miR-199a-5p和miR-17-5p可能成为诊断EMS的分子生物标志物。     

LncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-5590-3p调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨LncRNA PTPRG-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法以正常乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR法检测乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中 LncRNA PTPRG-AS1 和 miR-5590-3p 表达。分别转染 si-LncRNA PTPRG-AS1、miR-5590-3p mimics、共转染si-LncRNA PTPRG-AS1与anti-miR-5590-3p至乳腺癌MCF-7细胞,用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PTPRG-AS1和miR-5590-3p的调控关系。结果与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中LncRNA PTPRG-AS1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),miR-5590-3p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。敲减LncRNA PTPRG-AS1或过表达miR-5590-3p后,MCF-7细胞增殖活性、迁移数、侵袭数及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA PTPRG-AS1靶向负调控miR-5590-3p。敲减miR-5590-3p逆转了敲减LncRNA PTPRG-AS1对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论 LncRNA PTPRG-AS1可能靶向下调miR-5590-3p促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-9-3p对HepG2细胞脂蛋白调节因子ABCA1蛋白表达的影响

目的 评估miR-9-3p对ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-bindingcassettetransporterA1,ABCA1基因及蛋白表达的影响。方法 采用HepG2细胞，应用细胞培养、miR-9-3pmimics转染、实时定量PCR技术（qRT-PCR）以及Westernblotting免疫印迹等实验技术，分析miR-9-3p对细胞ABCA1mRAN及蛋白表达水平的影响。结果 (1) miR-9-3p转染组miR-9-3p水平较对照组显著升高，差异有统计学意义（P<0.001），证明转染成功；(2)两组ABCA1mRNA水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；(3) miR-9-3p转染组ABCA1蛋白水平较对照组显著降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-9-3p能够抑制细胞内ABCA1蛋白表达，但对转录水平未见显著影响。     

miR-548c-3p通过调控TRIM59表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的研究miR-548c-3p对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测TRIM59 mRNA和miR-548c-3p的表达,Western blot检测TRIM59、增殖相关蛋白CyclinD1和p21,及迁移侵袭相关蛋白MMP2和MMP9的表达水平,MTT法测定HepG2细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-548c-3p与TRIM59的调控关系。结果与正常肝细胞L02相比,在肝癌细胞HepG2、SMMC-7721和BEL-7402组中TRIM59的mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.05),miR-548c-3p的表达量则均显著降低(P<0.05);过表达miR-548c-3p和抑制TRIM59表达均可抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告系统结果表明,miR-548c-3p靶向负调控TRIM59的表达;过表达TRIM59逆转了过表达miR-548c-3p对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-548c-3p通过靶向TRIM59基因抑制HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-548c-3p是肝癌的潜在治疗靶点。     

miR-125a-5p在人乳腺癌细胞侵袭和转移中的作用机制研究

目的探讨miR-125a-5p在人乳腺癌细胞侵袭与转移中的作用机制。方法采用荧光定量PCR检测人乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,利用瞬时转染技术将过表达质粒转染到MDA231中,检测miR-125a-5p质粒在乳腺癌MDA231、MCF-7细胞中的转染效率,利用趋化运动实验与Transwell侵袭试验检测趋化运动能力和运动能力。结果人乳腺癌淋巴结转移、组织分期及雌激素受体均与miR-125a-5p表达水平有关,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-125a-5p在MDA231和MCF-7中表达量较MCF-10A中低,差异有统计学意义(P<0.05);MDA231与MCF-7相比,MDA231中表达量更低,差异有统计学意义(P<0.05)。GAB2在MDA231/miR-125a-5p细胞组的表达量低于MDA231组和MDA231/NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);在AntimiR-125a-5p/MCF-7组中的表达量高于AntiNC/MCF-7和MCF-7组,差异均有统计学意义(P<0.05)。穿过基质胶...     

LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p调控卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性分子作用机制

目的 探讨LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p表达对卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 运用qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910、OVCAR3和正常卵巢上皮细胞HOSE中miR-196b-5p和TUG1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证TUG1可能的靶基因。建立TUG1抑制表达、miR-196b-5p过表达及si-TUG1和anti-miR-196b-5p共转染的SKOV3细胞株,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞不同剂量X射线照射后的存活情况,曲线拟合计算不同剂量辐射后各放射生物学参数。结果 正常卵巢上皮细胞HOSE相比,卵巢癌细胞SKOV3、HO8910及OVCAR3中miR-196b-5p的表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),TUG1的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-196b-5p是TUG1的靶基因。TUG1抑制表达或miR-196b-5p过表达均促进SKOV3细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)并增加其放射敏感性,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-196b-5p表达可部分逆转抑制TUG1表达对SKOV3细胞促进凋亡和增强放射敏感性作用。结论 TUG1可负性调控miR-196b-5p的表达,抑制TUG1表达,可促进卵巢癌细胞凋亡,增加细胞放射敏感性。     

子宫内膜异位症患者血清中miR-199a-5p和基质金属蛋白酶-9的表达及意义

目的 探讨miR-199a-5p和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在子宫内膜异位症(EMS)患者血清中的表达及临床意义. 方法 分别采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法及ELISA法检测40例EMS患者(EMS组)与20例输卵管积水患者(对照组)血清中miR-199a-5p和MMP-9的表达,分析miR-199a-Sp和MMP-9的相关性及其与子宫内膜异位症临床特征的关系. 结果 两组血清中均检测出miR-199a-5p和MMP-9的表达,EMS组血清中miRNA-199a-5p表达少于对照组,MMP-9含量高于对照组,差异均有统计学意义.EMS组血清miR-199a-5p相对表达量随r-AFS分期增加而减少,MMP-9表达量随r-AFS分期增加而增加,差异均有统计学意义;EMS组血清中miR-199a-5p和MMP-9的表达量与VAS评分无关.EMS组血清中miR-199a-5p相对表达量与MMP-9呈负相关(r=-0.501). 结论 miR-199a-5p和MMP-9可能参与EMS的发病,且发病机制可能与miRNA调控异常相关.     

肝卵圆细胞与骨髓间质干细胞经脾移植治疗实验性小鼠肝纤维化的疗效比较

目的比较肝卵圆细胞（HOC）与骨髓间充质干细胞（MSC）治疗小鼠肝纤维化的疗效。方法以含浓度为0．1％的3，5-二乙酯基．1，4二氢三甲基吡啶（DDC）喂养C57BL／6小鼠，建立小鼠肝卵圆细胞增殖模型，而后利用胶原酶原位灌注及percoll密度梯度离心法分离肝脏非实质细胞，再用免疫磁珠分离纯化出Sca-1阳性的肝卵圆细胞。利用四氯化碳（CCl4）皮下注射诱导小鼠肝纤维化模型。最后经脾分别输入卵圆细胞、骨髓间充质干细胞或生理盐水（NS）。4周后观察肝功能各项指标、羟脯氨酸及肝脏的病理改变，比较各组间的差别。结果在继续注射CCl4的情况下，HOC移植与MSC移植治疗均能改善肝纤维化小鼠的肝功能，降低肝脏羟脯氨酸含量，缓解肝纤维化，但HOC移植组更加明显（P〈0．05）；在停用CCl4后，各组肝纤维化均有不同程度缓解，差异不明显（P〉0．05）。结论肝卵圆细胞经脾注射移植后，能改善肝硬化小鼠的肝功能，减轻其肝纤维化的程度。且效果比骨髓间充质干细胞更明显。     

肝卵圆细胞与骨髓间质干细胞经脾移植治疗实验性小鼠肝纤维化的疗效比较

目的 比较肝卵圆细胞(Hot)与骨髓间充质干细胞(MSC)治疗小鼠肝纤维化的疗效.方法 以含浓度为0.1%的3,5-二乙酯基-1,4二氢三甲基吡啶(DDC)喂养C57BL/6小鼠,建立小鼠肝卵圆细胞增殖模型,而后利用胶原酶原位灌注及percoll密度梯度离心法分离肝脏非实质细胞,再用免疫磁珠分离纯化出Sca-1阳性的肝卵圆细胞.利用四氯化碳(CCl4)皮下注射诱导小鼠肝纤维化模型.最后经脾分别输入卵圆细胞、骨髓间充质干细胞或生理盐水(NS).4周后观察肝功能各项指标、羟脯氨酸及肝脏的病理改变,比较各组间的差别.结果 在继续注射CCl4的情况下,HOC移植与MSC移植治疗均能改善肝纤维化小鼠的肝功能,降低肝脏羟脯氨酸含量,缓解肝纤维化,但HOC移植组更加明显(P<0.05);在停用CCl4后,各组肝纤维化均有不同程度缓解,差异不明显(P>0.05).结论 肝卵圆细胞经脾注射移植后,能改善肝硬化小鼠的肝功能,减轻其肝纤维化的程度,且效果比骨髓间充质干细胞更明显.     

二氧化硅对人呼吸道上皮细胞及巨噬细胞内IL-8和TNFα的诱导作用

[目的]探讨二氧化硅对人支气管上皮细胞（BEAS-2B）、Ⅱ型肺泡上皮细胞（A549）及巨噬细胞（THP-1）内白细胞介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子（TNFα）基因表达的诱导作用。[方法]将100μg/mL二氧化硅悬液与上述3种细胞分别温育4h,提取总RNA,用定量PCR技术测定生理盐水（对照组）与二氧化硅染毒组细胞内IL-8及TNFα mRNA表达水平。[结果]与对照组相比,在同一实验剂量及刺激时间（100μg／mL,4h）下,二氧化硅刺激可致THP-1内IL-8及TNFα mRNA表达水平分别升高至76．79倍及4．49倍;BEAS-2B内IL-8及TNFα mRNA表达水平分别升高至3．46倍及2．33倍;A549内IL-8及TNFα mRNA表达水平分别升高至1．64倍及1．52倍。[结论]二氧化硅可提高矽肺发病相关细胞因子IL-8及TNFα基因的表达水平。二氧化硅的上述作用,以对THP-1内IL-8 mRNA的诱导作用为最强。     

右旋氨基酸氧化酶在胃癌和正常胃黏膜细胞中的表达

目的:研究右旋氨基酸氧化酶(DAO)在胃癌和正常胃黏膜细胞中的表达. 方法:以裸鼠肝、肾组织为对照,采用定量PCR法,检测7株胃癌细胞和胃黏膜细胞株GES-1中DAO的表达.用RT-PCR法检测46份新鲜胃癌组织和正常胃黏膜组织标本中DAO的表达. 结果:DAO在裸鼠肝和肾组织中有表达,在肾组织中表达量较高;7株胃癌细胞和正常胃黏膜细胞株GES-1中均无DAO表达;除1份胃癌组织标本中DAO有表达外,其余胃癌组织和正常胃黏膜组织中均无DAO表达. 结论:胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中均无DAO表达,右旋甲硫氨酸替代左旋甲硫氨酸用于胃癌的营养治疗,可避免甲硫氨酸饥饿对肝、肾等重要器官的不利影响.     

脐带间充质细胞来源诱导性多潜能干细胞的建立和鉴定

目的建立和鉴定脐带间充质细胞（UMC）来源的诱导性多潜能干细胞（iPS）。方法以逆转录病毒作为Sox2、KIf4、Oct4、c—Myc基因转移载体,将UMC细胞编程为iPS细胞。应用RT-PCR检测细胞基因表达量,鉴定外源编程基因是否整合到iPS细胞核内,分析细胞核型,对细胞进行碱性磷酸酶染色和免疫荧光染色,体内分化畸胎瘤和体外分化拟胚体实验,对建立的iPS细胞进行鉴定。结果（1）iPS细胞形态学上类似于胚胎干细胞（ES）。（2）iPS与ES细胞内源多能基因（Nanog、Oct-4、Rexl、Sox-2）表达谱相类似,外源编程基因（Sox-2、KIf4、Oct-4、c—Myc）表达发生沉默。（3）外源编程基因已被插入到iPS细胞核内。（4）iPS细胞核型正常,碱性磷酸酶活性增高,表达Es细胞特异性膜蛋白（SSEA3、SSEA4）,质蛋白（TRA-1-60、TRA-1—81）,核蛋白（Nanog）。（5）iPS细胞在体内能分化为畸胎瘤,在体外能分化为拟胚体。结论iPS细胞类似于Es细胞具有多向分化潜能。     

Evidence for dietary regulation of microRNA expression in cancer cells

MicroRNAs (miRNAs) are an abundant class of short noncoding RNAs that are widely expressed in mammalian cells and are important in post-translational gene regulation, including regulation of cell proliferation, apoptosis, and differentiation processes. miRNAs are involved in cancer initiation and progression and their expression patterns serve as phenotypic signatures of different cancers. Recent evidence suggests that dietary components as diverse as folate, retinoids, and curcumin exert cancer-protective effects through modulation of miRNA expression. miRNAs may be useful as biomarkers of cancer prevention or nutritional status, as well as serve as potential molecular targets that are influenced by dietary interventions.     

HCCR重组蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

目的:克隆人宫颈癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)的C末端截短序列(膜外区序列),重组表达并纯化HCCR-C端蛋白,制备和初步鉴定针对HCCR-C端蛋白的单克隆抗体。方法:从人肝癌细胞株HepG2中提取总RNA,RT-PCR扩增出HCCR-C端,构建其原核表达质粒,表达HCCR-C融合蛋白,以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,常规细胞融合和选择性培养,亚克隆筛选出分泌特异抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水,Western blot、细胞组化初步鉴定抗HCCR-C端单克隆抗体。结果:成功克隆了HCCR-C末端截短序列,原核表达并纯化了HCCR-C端重组蛋白;经ELISA双筛,获得3株能稳定分泌抗HCCR-C端单克隆抗体的杂交瘤细胞株;Western blot及细胞免疫荧光结果显示,其分泌抗体效价高且均能特异识别HCCR蛋白。结论:成功制备并初步鉴定了针对HCCR-C端的单克隆抗体,为深入研究HCCR蛋白的生物学功能和建立新的肝细胞癌早期诊断方法奠定了可靠基础。     

姜黄素对人宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的作用的研究以及p53表达的影响

目的：主要探讨姜黄素对人类宫颈癌Hela细胞中增殖作用的影响,以及细胞p53蛋白表达的影响。方法：本文通过不同浓度姜黄素干预人宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测药物对Hela细胞的增殖抑制率;RT—PCR和Westernblot检测细胞凋亡相关蛋白p53表达。结果：MTT发现姜黄素对人宫颈癌Hela细胞有一定的抑制作用,并呈时间一剂量依赖性;RT—PCR结果显示p53mRNA的表达增加;westernboltting显示p53蛋白的表达增加。结论：姜黄素可一直Hela细胞增殖,其机制可能是通过增加p53基因的表达而实现。     

Nodal 信号通路在人胚胎干细胞的作用机制

Nodal作为转化生长因子母（TGF-13）家族重要成员在维持人胚胎干细胞的多潜能性和诱导胚胎组织形成完整体轴方面具有重要作用。近年发现Nodal信号在人胚胎干细胞体外诱导分化进程中也起着关键的作用，同时其还参与包括前列腺癌、睾丸癌、黑色素瘤、卵巢癌、肝癌、胰腺癌等肿瘤的发生机制，但是关于其具体作用机制尚未完全明确。探索Nodal信号在人胚胎干细胞中的作用机制可能对于更加深入了解人类胚胎发育学及为肿瘤发生提供可靠的理论依据。