康莱特注射液诱导肝癌细胞凋亡及其对凋亡蛋白procaspase-3和caspase-9表达的影响

目的:探讨康莱特注射液(Kanglaite)对人肝癌BEL-7404细胞的增殖抑制作用、凋亡诱导作用以及对凋亡蛋白procaspase-3和caspase-9表达的影响.方法:采用MTT法检测康莱特注射液和阳性对照顺铂(cisplatin ,DDP)对BEL-7404细胞的增殖抑制作用,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核的情况,FCM检测细胞凋亡率,Western印迹法检测凋亡蛋白procaspase-3和caspase-9的表达.结果:MTT结果显示,经不同体积浓度康莱特注射液(10、20、40、80及160 μL/mL)作用BEL-7404细胞后,80 μL/mL康莱特注射液作用48 h时对肝癌BEL-7404细胞有明显的抑制增殖作用;Hoechst 33258染色可见细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变;FCM法检测结果提示,空白对照组、DDP 10 μg/mL组和康莱特注射液80 μL/mL组的凋亡率分别为(1.23±0.40)%、(32.53±0.65)%和(3.13±0.32)% (P＜0.01);Western印迹法检测结果提示,康莱特注射液及DDP作用48 h后 procaspase-3蛋白的表达量明显降低 (P＜0.01),caspase-9蛋白的表达量显著升高(P＜0.01).结论:康莱特注射液可抑制肝癌BEL-7404细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与凋亡相关蛋白procaspase-3表达下调及caspase-9表达上调有关.     

顺铂对肝癌细胞BEL-7404、BEL-7404/ADM 中hTERT表达的研究

目的 观察不同浓度及作用时间顺铂对BEL-7404、BEL-7404/ADM肝癌细胞hTERT-mRNA表达及影响。方法 以不同浓度顺铂处理BEL-7404细胞24h、48h、72h后,RT-PCR检测hTERT-mRNA表达。结果 不同浓度DDP处理48h、72h后,BEL-7404细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,与对照组比较有显著性差异,对比BEL-7404/ADM细胞,随着DDP剂量和作用时间的增加,hTERT活性也呈减弱趋势。结论 顺铂可降低BEL-7404、BEL-7404/ADM细胞hTERT-mRNA表达,表现为明显的时间及浓度的依赖性。     

二乙酰去水卫矛醇联合野生型p53基因诱导肝癌BEL-7404细胞凋亡的作用

目的 实验通过转染野生型p53基因与应用二乙酰去水卫矛醇(1，2：5，6-Dianhydro-3，4-diacetylgalactitol，DADAG)联合作用于肝癌BEL-7404细胞，来研究p53基因联合二乙酰去水卫矛醇诱导肝癌BEL-7404细胞的凋亡作用。方法野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌BEL-7404细胞，同时加入DADAG作用。96h后，用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。结果流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为1．6％、转染pUHD10-3组为3．9％、用DADAG处理组为29.4％、转染pUHD10-3-p53组为35.3％、转染p53基因及用DADAG处理组为59．8％。结论野生型p53基因与DADAG均可诱导人肝癌BEL-7404细胞发生凋亡，转染野生型p53基因与DADAG联合作用，有促进肝癌BEL-7404细胞凋亡的作用。     

鲜壁虎活性组分对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨鲜壁虎活性组分对人肝癌BEL．7404细胞增殖及凋亡的影响。方法将鲜壁虎活性组分冻干粉配制为不同浓度的溶液,并作用于肝癌BEL-7400细胞。以MTT法检测不同浓度的鲜壁虎活性组分对肝癌BEL-7400细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析各组细胞的凋亡情况。结果不同浓度的鲜壁虎活性组分均对肝癌BEL-7404细胞的增殖有抑制作用,且呈剂量．时间依赖效应,实验组的抑制率均较对照组显著提高（P〈0．05）。不同浓度的鲜壁虎活性组分均能诱导肝癌BEL-7404细胞凋亡,高浓度组（2560p,g／m1）的作用更为明显（P〈O．05）。结论鲜壁虎活性组分可显著抑制BEL-7404细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

STAT3抑制剂S3I-201对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 研究STAT3小分子抑制剂S3I-201对人肝癌细胞系BEL-7402增殖、凋亡与细胞周期的影响和初步的作用机制。方法 分别采用细胞活性检测试剂盒cell couting kit-8(CCK-8)和EdU细胞增殖法检测S3I-201对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖的影响,应用流式细胞术分析S3I-201对BEL-7402的细胞凋亡和周期的影响,通过Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 CCK-8及EdU结果显示,S3I-201能抑制BEL-7402细胞的生长和增殖(P<0.05),使BEL-7402细胞阻滞于S期,具有诱导细胞凋亡的作用,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达(P<0.05)。结论 STAT3小分子抑制剂S3I-201通过促进BEL-7402凋亡、上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并将BEL-7402阻滞于S期而发挥抗肿瘤效应。     

芬太尼对人肝癌细胞bel-7404生长与凋亡的影响

目的探讨芬太尼对人肝癌细胞bel-7404生长及凋亡的影响。方法体外培养人肝癌bel-7404细胞,分F1、F2、F13、F4,4个实验组和1个对照组,实验组分别在RPMI-1640培养液中加入5ng／ml（F1）、50ng／ml（F2）、500ng／ml（F3）、5000ng／ml（F4）芬太尼,对照组不加芬太尼,所有样本孵育24h后,用倒置显微镜观察细胞形态学改变,应用MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖活性,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率与细胞周期。结果各实验组人肝癌bel-7404细胞MTT和克隆形成率明显低于对照组（P〈0．01）,细胞凋亡百分比显著高于对照组（P〈0．05）。芬太尼浓度≥50ng／ml时,随着浓度的增加,凋亡率逐渐增高,细胞周期中G0／G1期比例逐渐增加,S期细胞比例逐渐减少,与对照组比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论芬太尼可剂量依赖性抑制人肝癌细胞bel-7404的生长,干扰肝癌细胞增殖周期,诱导肝癌细胞凋亡。     

顺铂对肝癌细胞凋亡及其细胞周期的影响

目的：探讨顺铂对Hca-F细胞凋亡及细胞周期的影响。方法：采用荧光，透射电镜及流式细胞术分析法检测肝癌细胞凋亡，细胞周期和增殖指数（PI）的变化。结果：CDDP可引起肿瘤细胞凋亡，并随着给药时间的延长，药物浓度的增高，细胞凋亡率随之增高，细胞凋亡形态结构越发典型，表现为核固缩，染色质边集，核小体形成等，同时药物浓度的升高，细胞周期S期比例下降，G0/G1期比例上升，PI增殖指数下降。结论：CDDP可引起细胞凋亡，细胞周期G0/G1期阻滞，使细胞分裂增殖活动受到抑制。     

miR-16对人肝癌细胞BEL-7402增殖与凋亡的影响

背景与目的：miR-16和miR-15a基因复合体位于人13q14区域的DLEU2基因内含子内,是目前公认的抑癌基因之一。该基因区域的缺失与多种实体肿瘤有关,miR-16同时促进肿瘤细胞的凋亡。该研究旨在探讨miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：人肝癌细胞BEL-7402分为miR-16感染组(加入LV-hsamiR-16-1慢病毒)和阴性对照组(加入阴性对照病毒),采用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光的强度;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测miR-16对BEL-7402肝癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术分析miR-16对人肝癌细胞BEL-7402的细胞周期与凋亡的影响。结果：CCK-8检测结果显示,感染组细胞增殖能力明显降低(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,阴性对照组BEL-7402细胞周期中G₁期细胞百分率数值明显下降,但S及G₂/M期细胞的百分率均明显上升(P<0.05)。miR-16促进BEL-7402肝癌细胞凋亡。结论：miR-16抑制BEL-7402肝癌细胞的增殖并促进其凋亡,miR-16有望成为临床肝癌靶向治疗的新靶点。     

复方苦参注射液对SGC-7901，HepG2和BEL-7402肿瘤细胞作用的实验研究

 目的 通过观察复方苦参注射液（岩舒注射液）对SGC-7901，HepG2和BEL-7402肿瘤细胞的作用，探讨其在恶性肿瘤治疗中的作用机制。方法 本实验选用SGC-7901、HepG2和BEL-7402细胞，采用MTT法检测岩舒注射液对于各肿瘤细胞的体外杀伤率，流式细胞仪检测岩舒注射液作用后的肿瘤细胞的细胞周期、凋亡率及bcl-2、CD44V6和nm23基因表达的变化。结果 岩舒注射液浓度达到150 μl／ml时HepG2，SGC-7901和BEL-7402细胞存活率最低。岩舒注射液终浓度100 μl／ml作用后的HepG2细胞G0／G1期、G2／M期明显增高，S期的细胞数量明显减少，凋亡率（2.8 %）明显高于对照组（0.2 %）；SGC7901细胞G2／M期细胞明显增多，S期细胞明显减少，凋亡率（4.6 %）明显高于对照组（0.8 %）；100 μl／ml岩舒注射液浓度作用后的nm23为97.85 %，明显高于对照组（41.01 %），CD44V6为10.29 %明显低于对照组（12.26 %）。结论 岩舒注射液对于SGC-7901，HepG2和BEL-7402细胞具有明显的体外杀伤作用，并影响SGC-7901、HepG2的细胞周期，促进其凋亡；同时能够明显的抑制BEL7402细胞体内CD44V6的表达，促进抑转移因子nm23的表达，具有明显的抑制肿瘤转移的作用。     

熊果酸诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨熊果酸(UA)对人肝癌BEL-7404细胞凋亡的诱导作用及其机制.方法 采用MTT法检测UA对BEL-7404细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测BEL-7404细胞凋亡率,Western blot法检测BEL-7404细胞proeaspase-3、caspase-9、survivin蛋白的表达.并用顺铂(DDP)作为阳性对照.结果 UA和DDP对BEL-7404细胞增殖具有明显抑制作用,并呈浓度、时间依赖性;作用48 h后,阴性对照组、uA 50μmoL/L组、DDP 10 mg/L组的BEL-7404细胞凋亡率分别为(0.83±0.25)%、(16.10±0.30)%、(31.87±0.65)%,差异有统计学意义(P<0.01);作用48 h后,与阴性对照组相比,UA 50μmol/L组、DDP 10 mg/L组的procaspase-3、survivin蛋白表达降低,caspase-9蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.01).结论 UA能够诱导BEL-7404细胞凋亡,其作用机制与procaspase-3、survivin蛋白表达降低及caspase-9蛋白表达升高有关.     

顺铂联合迷迭香酸抑制Huh7细胞增殖诱导凋亡

目的:探讨含铂抗癌药物顺铂（Cisplatin,CDDP）联合中药单体迷迭香酸（Rosmarinic acid,RA）对人原发性肝癌Huh7细胞系增殖与凋亡的影响。方法:通过CCK-8细胞增殖实验检测并计算CDDP和RA治疗24 h、48 h、72 h后的IC50值,随后设置未经药物处理组（control组）、5 μg/mL CDDP处理组、200 μg/mL RA处理组以及5 μg/mL CDDP联合200 μg/mL RA处理组。采用流式细胞术检测control组、CDDP处理组、RA处理组以及联合用药组的细胞凋亡率分别为（7.28±0.56）%、（18.23±2.53）%、（26.44±1.99）%和（37.27±0.28）%。最后,利用免疫印迹试验(Western blot)检测Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3以及Procaspase-3凋亡相关蛋白的表达水平。结果:RA可增强CDDP对Huh7细胞增殖的抑制能力并呈现出浓度依赖性（P＜0.05）,在CDDP联合RA处理组中Huh7细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,CDDP联合RA作用后促凋亡蛋白Bax与Cleaved-caspase-3的表达水平增加,而Bcl-2的表达水平下降（P＜0.05）。结论:RA能抑制Huh7细胞增殖并且诱导细胞凋亡,与顺铂联用具有协同作用,其机制可能与激活线粒体凋亡通路有关。     

全反式维甲酸联合顺铂在诱导人头颈癌 TCA8113细胞凋亡中的作用

目的：研究全反式维甲酸（ATRA）与顺铂对人头颈癌 TCA8113细胞凋亡的影响。方法 ATRA 和顺铂单独及联合作用于 TCA8113细胞,采用 MTT 法检测细胞生长,并观察细胞形态变化;使用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;通过 western blot 实验检测 caspase-3表达情况。结果 ATRA 作用于 TCA8113细胞后,细胞生长明显受到抑制,细胞形态发生改变,细胞凋亡比例明显增加,caspase-3蛋白表达下调,ATRA 与顺铂联合作用于肿瘤细胞后,其抑癌作用加强。结论 ATRA 联合顺铂对人头颈癌 TCA8113细胞具有协同抑癌作用。     

原苏木素A对胃癌SGC-7901细胞系放疗增敏作用的研究

目的 本研究将原苏木素A、苏木醇提物、顺铂分别与放疗联合作用于胃癌细胞SGC-7901细胞系,研究原苏木素A是否增加胃癌SGC-7901细胞系放射敏感性,为临床用药开创更新的领域。方法 体外培养人胃癌细胞SGC-7901细胞系,以苏木醇提物、顺铂为对照,MTT法检测原苏木素A对细胞增殖作用的影响,以及其与作用浓度和作用时间的关系;采用克隆形成实验,拟合细胞存活曲线,以单纯放疗组为对比,计算放射增比(SER),分析原苏木素A的增敏效果。结果 原苏木素A对人胃癌细胞SGC-7901有生长抑制作用,但抑制作用相对较弱,其细胞毒性有明显的时间和浓度依赖性。不同作用时间及作用浓度下的细胞形态发生明显的改变。克隆形成实验显示原苏木素A显著增加了SGC-7901细胞的放射敏感性,与单纯放射组对比,差异有统计学意义。结论 原苏木素A对胃癌SGC-7901细胞的抑制有浓度和时间的依赖性,联合放射治疗能够提高放射增敏作用,两者可能具有协同抗肿瘤作用。     

Amorphigenin联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞的协同抗肿瘤作用

背景与目的 Amorphigenin是从紫穗槐属植物的种子中分离提取的鱼藤酮类化合物,研究发现amorphigenin对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究拟探讨amorphigenin对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的抗肿瘤作用及其可能的分子机制。方法采用CCK-8法测定A549/DDP细胞的增殖;克隆形成实验测定A549/DDP细胞的克隆形成;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot技术检测caspase-3、PARP和LRP蛋白的表达。结果Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞的增殖48 h[半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentra-tion, IC50）]为（2.19±0.92）μmol/L、抑制克隆形成及诱导细胞凋亡。此外,Amorphigenin与顺铂联合可协同地抑制A549/DDP细胞生长和促进凋亡;降低耐药蛋白LRP蛋白的表达。结论 Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡;amorphigenin可能是通过抑制耐药蛋白LRP蛋白表达,进而与顺铂对A549/DDP细胞产生协同抑制作用。     

DHA 联合葫芦素B对人胃癌BGC -823细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究二十二碳六烯酸（docosahexaenoicacid，DHA）联合葫芦素 B（cucurbitacin B）体外对人胃癌BGC -823细胞增殖及凋亡的影响。方法：利用 NADH 酶染色、吉姆萨染色显微镜下观察人胃癌 BGC -823细胞经 DHA 联合葫芦素 B 作用后细胞形态学上的变化。采用 MTT 法、流式细胞仪检测细胞增殖、周期及凋亡的情况。结果：根据 MTT 法 DHA 联合葫芦素 B 作用于胃癌细胞比分别利用 DHA、葫芦素 B 直接作用细胞增殖抑制更为明显，更有效降低细胞的存活率，且在相同时间随着药物浓度的提高，作用效果也随之提高。NADH 酶染色法、吉姆萨染色法在显微镜下明显可见细胞凋亡现象。流式细胞仪检测肿瘤细胞，药物联合干预 G0/ G1期细胞明显增多，G2/ M 期和 S 期细胞明显减少。结论：DHA 联合葫芦素 B 可抑制人胃癌 BGC -823细胞增殖、诱导细胞凋亡，其联合具有协同作用。     

唑来膦酸对肺癌细胞生长抑制的观察及机制的初步研究

目的:研究唑来膦酸对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A-549生长抑制及诱导凋亡的作用。方法:用MTT法测定唑来膦酸、泰索帝及二药联合对肺癌细胞A-549的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率。结果:0·1~100μmol/L的唑来膦酸对肺癌细胞A-549均有抑制作用,首先表现为G1期阻滞,继而出现细胞凋亡,呈剂量、时间依赖性,并且与泰索帝联用可以提高细胞凋亡率。结论:唑来膦酸对肺癌细胞A-549具有明显抑制作用,且与泰索帝联用有协同作用,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡来实现的。     

环氧化酶-2 抑制剂联合依托泊苷对肺癌细胞增殖凋亡的影响

 目的 探讨环氧化酶-2（COX-2）抑制剂尼米舒利（NIM）与化疗药依托泊苷（VP-16）联用对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 培养人肺癌细胞A549：①NIM（25μmol／L）与VP-16（2～32μg／mL）联合，MTT试验观察干预48h后细胞增殖变化及增殖抑制率；②分为对照组、NIM组（25μmol／L）、VP-16组（8μg／mL）和NIM＋VP．16组，观察12h、24h及48h后A549细胞生长情况，描记生长曲线；流式细胞术检测干预48h后细胞凋亡率。结果 ①VP-16能抑制肺癌A549细胞的增殖，且呈量一效关系（r=-0．908，P〈0．01），NIM与VP-16联用后，抑增殖作用增强，二者有相加或协同作用；②NIM及VP-16均可抑制A549细胞的生长，诱导凋亡，二者联用后作用增强。结论 NIM与VP-16联用可增强对肺癌细胞增殖的抑制和凋亡的诱导，二者具有协同抗肿瘤作用。     

尼美舒利与顺铂联合应用对肺癌A549细胞增生的协同抑制效应

 目的 探讨尼美舒利（Aulin）联合化疗药物顺铂（Cis）对肺癌A549细胞生长的协同抑制效应。方法 分别采用MTT比色法、RT-PCR观察Aulin与Cis联合应用对A549细胞生长及PCNA、bcl-2的mRNA水平变化的影响；荧光显微镜、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察Aulin与Cis联合应用对A549细胞诱导凋亡的作用及细胞周期的影响。结果 Aulin协同Cis抑制A549细胞增生，抑制率最低64.9 %，最高82.9 %，呈时间、剂量依赖性方式； 联合干预组PCNA、bcl-2的mRNA表达水平均显著降低。Aulin协同Cis诱导A549细胞凋亡；并改变细胞周期分布，增加G0／G1期细胞比例。结论 Aulin以时间、剂量依赖性方式协同Cis抑制A549细胞增生；并改变细胞周期分布，以剂量依赖性方式协同诱导其凋亡。     

拉帕替尼联合顺铂抗食管鳞癌的作用及机制

目的 探讨拉帕替尼联合顺铂抗食管鳞癌的体外活性及其作用机制。方法 MTT法检测拉帕替尼、顺铂单独及二者联合对食管鳞癌细胞的增殖抑制作用，并计算两药联合作用指数。碘化丙啶（PI）染色或Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞周期进程及凋亡，Western blot法检测两药单独及联合处理后食管鳞癌细胞EGFR和HER2的磷酸化及下游信号分子的表达变化。结果 拉帕替尼联合顺铂可协同抑制食管鳞癌细胞的增殖，二者之间的联合作用指数小于1。拉帕替尼联合顺铂可使食管鳞癌细胞阻滞于G2/M期，并可显著诱导细胞凋亡。联合用药可显著抑制EGFR和HER2的磷酸化，并进而抑制两个主要的下游信号分子ERK和AKT的活化。结论 拉帕替尼联合顺铂在体外具有协同抗食管鳞癌活性，对EGFR和HER2过表达食管鳞癌是一种有前景的治疗策略。     

人β防御素-1联合冬凌草甲素对膀胱癌T24 细胞生长抑制作用的研究

[目的]探讨人β防御素-1联合冬凌草甲素对膀胱癌T24细胞的生长抑制作用及机制。[方法]以不同浓度的β防御素-1、冬凌草甲素单独或联合作用于体外培养的T24细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用Hoechst 33258荧光染色法以流式细胞仪观察细胞凋亡,显微镜下观察细胞的形态学变化。[结果]人β防御素-1及冬凌草甲素均可抑制T24细胞的生长,引起T24细胞溶解坏死,并呈现明显的浓度—效应与时间—效应关系。[结论]人β防御素-1、冬凌草甲素均对膀胱癌具有明显的体外抗肿瘤作用,两者联合能对膀胱癌细胞起协同杀伤作用,杀伤机制以细胞毒性作用为主。