人CYP3A4第9外显子基因突变频率的检测

目的建立一种简便、准确、实用的人CYP3A4第9外显子基因突变频率的检测方法,并了解汉族人CYP3A4第9外显子的分布特点.方法应用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增人CYP3A4第9外显子基因序列,扩增产物用限制性内切酶HinfⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP)图谱.结果运用PCR-RFLP法检测了92名汉族人CYP3A4第9外显子基因点突变,其中野生型纯合子频率为85.9%,杂合子频率为14.1%,突变型纯合子频率为0.突变等位基因频率为0.0706.结论该方法简便、快速、准确,适合于一般实验室检测及大规模的人群调查,汉族人CYP3A4第9外显子也存在相同的突变位点.     

人CYP3A4第9外显子基因突变频率的检测

目的建立一种简便、准确、实用的人CYP3A4第9外显子基因突变频率的检测方法，并了解汉族人CYP3A4第9外显子的分布特点．方法应用聚合酶链反应（PCR）特异性扩增人CYP3A4第9外显子基因序列，扩增产物用限制性内切酶Hinf Ⅰ酶切，琼脂糖凝胶电泳后，观察酶切位点的限制性片段长度多态性（RFLP）图谱．结果运用PCR—RFLP法检测了92名汉族人CYP3A4第9外显子基因点突变，其中野生型纯合子频率为85．9％，杂合子频率为14．1％，突变型纯合子频率为O．突变等位基因频率为0．0706．结论该方法简便、快速、准确，适合于一般实验室检测及大规模的人群调查，汉族人CYP3A4第9外显子也存在相同的突变位点．     

妊娠高血压综合征与蛋氨酸合成酶还原酶(MSR)A66G基因多态与Hcy水平的关系

目的探讨妊娠高血压综合征与蛋氨酸合成酶还原酶(MTRR)A66G基因及血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平的关系.方法运用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测54例妊高征患者、100例正常妊娠妇女 MSR A66G基因多态性, 采用荧光偏振免疫法(FPI A)测定血浆总Hcy水平.结果 MSR A66G三种基因型频率与对照组相比差异无显著性.妊高征组总Hcy水平明显高于正常妊娠组(p<0.05).结论 MSR A66G基因突变与妊高征发生无关.     

妊娠高血压综合征与蛋氨酸合成酶还原酶（MSR）A66G基因多态与Hcy水平的关系

目的 探讨妊娠高血压综合征与蛋氨酸合成酶还原酶（MTRR）A66G基因及血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平的关系．方法 运用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术（PCR-RFLP）检测54例妊高征患者、100例正常妊娠妇女MSR A66G基因多态性，采用荧光偏振免疫法（FPI A）测定血浆总Hcy水平．结果 MSR A66G三种基因型频率与对照组相比差异无显著性．妊高征组总Hcy水平明显高于正常妊娠组（P〈0．05）．结论 MSR A66G基因突变与妊高征发生无关．     

150例广东籍汉族人肿瘤坏死因子TNFα-863C/A基因突变频率的检测

目的建立一种简便、准确、实用的人肿瘤坏死因子(TNF)α-863 C/A基因突变频率的检测方法 ,并了解广东籍汉族人TNFα-863 C/A C基因的分布特点。方法应用聚合酶链反应(特异性扩增人TNFα-863 C/A基因序列,扩增产物用限制性内切酶以Tai I酶切,琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切位点的限制性片段长度多态性图谱,对150例广东籍正常人TNFα-863 C/A基因进行检测,并结合文献进行了不同地区间的分析比较。结果 TNFα-863 C/A C/C野生型纯合子频率为75.33%,C/A杂合子频率为24.00%,A/A突变型纯合子频率为0.67%;突变等位基因频率为0.1267。结论该方法简便、快速、准确,适合于一般实验室检测及大规模的人群调查,TNFα-863 C/A基因多态性在不同地区间分布存在着一定的差异。     

广东汉族人甲基四氢叶酸还原酶基因的多态性

目的　了解广东汉族人甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因的分布特点 ,并与其它地区人群进行比较。方法　应用聚合酶链反应技术对正常人甲基四氢叶酸还原酶 (MTHFR)基因进行扩增以HinfI进行限制性酶切图谱分析。结果　广东汉族人MTHFR基因中 ,表现型T/T频率是 3% ,表现型T/C是 36 5 % ,表现型C/C是 6 0 5 %。MTHFR基因T频率是 0 196 ,基因C频率是 0 80 4。结论　广东汉族人MTHFR基因的分布与其它地区及人种有不同。     

2型糖尿病与蛋氨酸合成酶基因多态性的相关性探讨

目的探讨甲硫氨酸合成酶(MS)基因A2756G突变在2型糖尿病发病中的意义.方法 PCR扩增66例2型糖尿病(DM)患者及143例对照者的MS基因突变点,经限制性内切酶消化后行凝胶电泳确定其基因型.结果 MS A2756G各种基因型频率在DM组与正常对照组之间无差异.结论 MS A2756G突变可能不足以构成2型糖尿病的独立遗传性危险因子.     

健康汉族人细胞色素P450 2Cl9基因的检测

目的了解广东地区汉族人细胞色素(P450 2C19)基因的分布情况. 方法应用PCR技术对正常人细胞色素(P450 2C19)基因进行扩增以SmaI进行限制性酶切图谱分析. 结果广东地区汉族人P450 2C19基因中,野生型纯合子(wt/wt) 频率是0.4454;CYP2Cl9杂合子(mt/ml) 频率是0.4091;CYP2Cl9 突变型纯合子(ml/ml)频率是0.1455.P450 2C19基因ml频率是0.3500,基因wt频率是0.6500. 结论广东地区汉族人的细胞色素CYP2C19基因频率与其它地区人群相接近.     

贵州布依族、侗族和苗族人群同型半胱氨酸代谢酶相关MS及MSR基因多态性分析

目的 了解贵州世居布依族、侗族、苗族人群甲硫氨酸合成酶基因MS A2756G、甲硫氨酸合成酶还原酶基因MSR A66G位点多态性分布特点,为进一步研究其与疾病的相关性提供依据.方法 应用TaqMan-MGB探针基因分型方法分析贵州布依族、苗族和侗族个体MS A2756G、MSR A66G位点多态性,并与不同人群进行比较.结果 布依族、侗族、苗族MS A2756G突变型G等位基因频率分别为12.0%、8.9%、15.4%,在苗族中偏高,3个民族之间差异无统计学意义,与中国北京汉族、河南汉族、宁夏回族,及欧洲人群分布相似,差异无统计学意义,而与日本人、印度人、非洲人、尼日利亚人之间差异有统计学意义(P<0.05);MSR A66G位点布依族、侗族、苗族突变型G等位基因频率分别为32.3%、30.4%、21.2%,在苗族中偏低,与布依族、侗族之间差异有统计学意义,3个民族MSR A66G等位基因频率分布与中国北京汉族、广东汉族,以及日本人、非洲人、尼日利亚人差异无统计学意义,而与印度人、欧洲人之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 贵州世居3个少数民族中MS A2756G和MSR A66G多态性分布不同,苗族与布依族、侗族之间差异明显,MS A2756G和MSR A66G在不同种族、地域的人群中也存在明显差异.     

广东汉族人蛋氨酸合成酶基因多态性

目的了解广东汉族人蛋氨酸合成酶基因的分布特点.方法应用聚合酶链反应技术对211例正常人蛋氨酸合成酶基因进行扩增,进行图谱分析.并结合文献进行了不同种族间的分析比较.结果广东汉族人群中MS基因型以AA最多见,AG次之.AA基因型频率为0.8009、AG为0.1802、GG为0.0189.A基因型频率为0.8910、G为0.1090.与其他种族相比较,MS基因型在中国正常人群中的分布与白种人群中的分布差异显著.结论蛋氨酸合成酶基因因多态性在不同种族间分布存在着明显的差异.     

广东籍汉族人Tim-3启动子区-574突变频率的检测

目的建立一种简便、准确、实用的人Tim-3启动子-574区基因突变频率的检测方法,了解广东汉族人Tim-3启动子区-574基因的分布特点。方法应用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)特异性扩增178例广东籍汉族人正常人Tim-3启动子区-574基因序列。结果健康人群Tim-3启动子区-574位G/G、G/T和T/T基因型频率分别是0.8539、0.1348和0.0112,Tim-3启动子区-574位G,T基因频率分别为0.9347、0.0659。结论该方法简便、快速、准确,适合于一般实验室检测及大规模的人群调查,广东汉族人群Tim-3启动子区-574位存在单核苷酸多态性变异,广东汉族人人Tim-3启动子-574区基因的分布与其他地区人群的分布无明显差异。     

亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T突变与山东汉族人群深静脉血栓形成的相关性

目的 研究亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR）基因C677T突变与中国人深静脉血栓形成的关系。方法 采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性方法对山东汉族63例深静脉血栓形成患者和80名正常对照进行了MTHFR基因C677T突变检测，计算患者组与对照组的基因型频率，以及该突变与深静脉血栓形成的相关性。结果 患者组与对照组C／T杂合子频率分别为41.27%和43.75%；T／T纯合子频率分别为52.38%和36.25%。患者组突变频率较高（x^2＝6.372，P＜0.01，ORT／T＝4.552,95%可信区间：1.440-14.398;x^2=6.742,P=0.009）。结论 MTHFR基因C677T突变与山东汉族人群深静脉血栓形成有相关性。     

耐甲氧西林葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的实验研究

目的建立一种简便、特异的mecA基因荧光定量PCR检测方法，用于耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的快速鉴定。方法以煮沸法快速制备DNA模板，采用SYBRGreenI随机参入法，建立mecA基因的实时荧光定量PCR检测体系。并对检测体系的敏感性、特异性和灵敏度进行评价。结果本法对纯菌落的检测敏感性和特异性分别为98．5％和96．9％，检测灵敏度可达10^1CFU／ml，最小检菌量约为3个菌／反应体系。结论本实验所设计的荧光定量PCR方法用于MRS的检测具有快捷、高敏感性、高特异性和高灵敏度的特点。适用于MRS的快速检测。     

湖北地区汉族人群TNF基因多态性分布研究

目的 :了解TNF α和TNF β基因多态性在湖北地区汉族人群中的分布特点。方法 :应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性法(PCR RFLP)检测 2 1 5例正常汉族人TNF α和TNF β基因型并与其它种族和地区的分布进行比较。结果 :TNF α基因型以TNF α1 /1型最为多见(8 7.0 % ) ,而TNF β基因型以TNF β1 / 2型出现频率最高 ( 5 0 .7% )。二种基因多态性分布在男女间均无显著差异 (P >0 .0 5 )。与其它种族和地区比较 ,发现不同种族和不同地区间TNF α和TNF β基因型分布及等位基因频率均存在显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :在湖北地区汉族人群中存在TNF基因多态性 ,但在不同种族和不同地区间分布有明显的差异 ,这种差异可能是导致一些疾病在不同种族、不同地区间的发生、转归和预后不同的遗传因素之一。     

中国汉族、维吾尔族人群甘露聚糖结合凝素基因多态性的检测

分别收集广东省汉族和新疆维吾尔族自治区维吾尔族一般人群血标本,提取白细胞基因组DNA,以多聚酶链反应扩增目的基因片段,应用荧光探针杂交可视技术检测其甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因54位密码点突变(GGC54GAC)。从138份汉族样本中检出GGC54GAC突变型纯合子4例,占2.9%,杂合子30例,占21.74%;120份维吾尔族标本中,检出突变型纯合子3例,占2.5%,杂合子34例,占28.33%。因此,汉族和维吾尔族人群MBL基因GGC54GAC突变的频率分别为0.138和0.167,两民族间无明显差异。     

Polymorphic background of methionine synthase reductase modulates the phenotype of a disease-causing mutation

Methionine synthase reductase (MTRR) is the locus of the cblE class of inborn errors of cobalamin metabolism that is characterized by megaloblastic anemia and homocystinuria. Two highly prevalent SNPs, c.66A>G (p.Ile22Met) and c.524C>T (p.Ser175Leu), are found in the MTRR gene. On the basis of the allele frequency of these amino acids and sequence comparison with members of the same family of proteins, the p.Ile22/p.Ser175 sequence is designated as wild type. While characterizing a pathogenic methionine synthase reductase (MSR) mutation, c.166G>A (p.Val56Met), we discovered an interaction between the mutation and one of the polymorphic sites. Thus, when the p.Val56Met mutant was initially expressed in the p.Ile22/p.Ser175 background, we were surprised to find that kinetically, it was virtually indistinguishable from wild-type protein. To determine if the polymorphisms interacted with the p.Val56Met mutation, it was expressed in all four possible genetic backgrounds. We found that in the p.Ile22Met background, the p.Val56Met mutation impacted the kinetics of MSR and an approximately three- to 10-fold higher concentration of the p.Ile22Met/p.Val56Met mutant was required for maximal activation of methionine synthase vs. the range seen with wild-type MSR variants. A comparable (three- to seven-fold) diminution in MSR activity was observed in extracts of fibroblast cells from patients carrying the p.Val56Met mutation on one MSR allele and a null mutation on the other. These results predicted that the patient allele encodes the p.Val56Met mutation and the p.Ile22Met variation, which was confirmed by sequence analysis. This study reveals how a genetic variation can modulate phenotypic expression of a disease-causing mutation.     

郑州市中原区汉族育龄女性MTHFR和MTRR基因多态性

目的利用基因检测技术筛查出育龄女性叶酸利用能力差的高风险人群,指导育龄女性合理补充叶酸。方法通过荧光定量PCR,对2017年12月至2018年10月采集的2652例郑州市中原区育龄女性进行5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C667T、A1298C位点和甲硫氨酸合酶还原酶(MTRR)A66G位点的基因型测定,并与其他地区人群基因型和等位基因频率分布进行比较,然后根据基因型综合判断育龄女性叶酸代谢能力强弱,由此得出育龄女性是否有叶酸补充风险及风险级别。结果检测的MTHFR C667T位点中,野生型(CC)、杂合突变型(CT)及纯合突变型(TT)分别占15.05%、46.60%和38.35%,突变基因T的基因频率为61.65%;不同年龄组(≤30和>30岁)均以杂合突变型为主。MTHFR A1298C位点中分别为74.55%、23.49%和1.96%,突变基因C的基因频率为13.71%;不同年龄组(≤30和>30岁)均以野生型为主。MTRR A66G位点中分别为57.43%、36.73%和5.84%,突变基因G的基因频率为24.21%;不同年龄组(≤30和>30岁)均以野生型为主。结论郑州地区育龄女性MTHFR C677T基因多态性分布与地域有相关性,超过50%以上的育龄女性携带高风险基因。因此,对叶酸代谢基因多态性检测高风险孕妇合理增补叶酸剂量,可进一步降低新生儿出生缺陷。     

中国湖北地区汉族人群P-选择素基因-2123C/G多态性分布的研究

目的:探讨P-选择素(P-selectin)基因启动子-2123位点多态性在中国湖北地区汉族正常人群中的分布特点。方法:采用聚合酶链反应(PCR)及限制性片断长度多态性(RFLP)方法检测中国湖北地区170名汉族人群P-选择素基因启动子-2123位点多态性,探讨其基因型及等位基因分布特点。结果:中国湖北地区人群P-选择素基因启动子-2123位点各基因型频率CC型8.20%,CG型37.60%,GG型54.10%。等位基因频率C为27.10%,G为72.90%。与欧洲国家人群相比,该位点多态性存在显著差异(P<0.01)。结论:P-选择素基因启动子-2123位点多态性有明显的种族差异。