重组人CD40配体对卵巢癌SKOV3细胞生长特性的影响

目的： 观察重组人CD40配体（rhCD40L）对卵巢癌细胞株SKOV3增殖、表面抗原变化、细胞周期、凋亡相关基因及肿瘤坏死因子受体相关因子( TRAFs)的影响。 方法： 在体外将SKOV3细胞与不同浓度的rhCD40L作用72 h后MTT法测定细胞增殖；直接免疫荧光标记流式细胞术测定细胞表面抗原及TRAFs变化，RT-PCR法测定凋亡相关基因c-myc、bcl-2、bcl-xl的表达程度，并用Annexin V和PI双标记测定细胞凋亡水平。 结果： rhCD40L在100 μg/L的低剂量时即可抑制SKOV3细胞增殖（0.65±0.10 vs 0.81±0.05），其作用随着rhCD40L浓度的增加而加强，10 mg/L时抑制率达（0.13±0.12 vs 0.83±0.15，P＜0.01），呈明显的浓度相关性，并使细胞分裂阻滞于G1期；rhCD40L可上调SKOV3细胞CD95的表达（42.4% vs 59.2%, P＜0.05），下调抗凋亡基因bcl-2和bcl-xl的表达，促进其凋亡；SKOV3细胞高表达TRAF2（81.3%±9.2%）、TRAF5（47.2%±7.2%）和TRAF6（44.5%±6.3%），rhCD40L可显着下调TRAF2（50.4%±5.3%，P＜0.05）、TRAF5（7.2%±2.1%，P＜0.01）和TRAF6（5.1%±1.1%，P＜0.01）表达，而上调TRAF3（25.2%±6.2% vs 68.8%±5.3%，P＜0.01）表达，对TRAF1（4.3%±1.2% vs 5.1%±1.4%）和4（7.4%±1.2% vs 8.1%±1.4%）的表达则无作用。 结论： rhCD40L通过下调bcl-2和bcl-xl基因表达，并改变细胞内TRAFs表达，使SKOV3细胞的增殖受阻滞于G1期，并促进其凋亡。     

T细胞干扰素-γ及其受体与实验性重症肌无力大鼠发病的相关性研究

重症肌无力(myasthenia gravis, MG)是一种由乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor, AChR)抗体介导的自身免疫性疾病,其抗体的产生受诸多细胞因子的调节[1,2].本文应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay, ELISA)和免疫组织化学的方法,初步探讨T细胞干扰素-γ(IFN-γ)及其表面IFN-γ受体(IFN-γR)的表达与实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis, EAMG)大鼠发病的相关性.     

Ikaros的3种亚型对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的:探讨Ikaros的3种亚型对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。方法:利用逆转录病毒转染人卵巢癌SKOV3细胞,分别表达Ikaros的3种亚型(IK1、IK2和IK6);采用CCK-8法分析表达不同亚型后SKOV3细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞周期的改变;Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果:CCK-8结果显示IK1和IK2能明显抑制SKOV3细胞的增殖;细胞周期结果表明IK1和IK2能诱导SKOV3细胞发生G1期阻滞,IK6则对SKOV3细胞的增殖能力和细胞周期则无明显影响;Western blot检测结果显示,IK1和IK2明显降低cyclin D1和cyclin D2蛋白的表达水平,同时升高p21蛋白的表达水平。IK6则对SKOV3细胞的cyclin D1、cyclin D2及p21蛋白表达水平无明显改变。结论:IK1和IK2这2种亚型能明显抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,其机制可能是由于IK1和IK2能降低细胞周期促进蛋白cyclin D1和cyclin D2的表达及增加细胞周期抑制蛋白p21的表达,从而诱导细胞周期发生G1期阻滞。而IK6亚型对SKOV3细胞增殖能力及细胞周期无明显影响。     

藤黄酸对卵巢癌细胞SKOV3生长、转移和侵袭的作用研究

目的 探究藤黄酸(gambogic acid,GA)对卵巢癌SKOV3细胞恶性生物学行为的影响.方法 将SKOV3细胞分为GA(0μmol/L)组、GA(2μmol/L)组、GA(5μmol/L)组、GA(10μmol/L)组,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Hoechst染色和流式检测细胞凋亡,Transwell实验和...     

小檗碱对人卵巢癌细胞SKOV3 增殖及凋亡机制的研究

目的:探讨小檗碱对人卵巢癌细胞(SKOV3)增殖及凋亡的影响。方法:MTT 法检测细胞增殖;流式细胞仪Annexin V/ PI 双染色法和透射电子显微镜检测细胞凋亡情况;甲基化特异性PCR 分析hMLH1 基因启动子区CpG 岛的甲基化状态;实时荧光定量RT-PCR 检测Bcl-2、Bax、Survivin 和hMLH1 mRNA 基因的表达。结果:小檗碱对卵巢癌SKOV3 细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。当与顺铂联用时,小檗碱对卵巢癌细胞有协同抗癌作用。小檗碱可明显诱导SKOV3 细胞凋亡,并下调Bcl-2、Survivin 基因及上调Bax 基因的表达。此外,小檗碱能恢复hMLH1 启动子的甲基化状态及增强hMLH1 mRNA 的表达。结论:小檗碱可抑制卵巢癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,小檗碱可协同增强抗癌药物顺铂的抗肿瘤作用。     

IFNγ调控人肺癌A549细胞Fas／FasL表达对T淋巴细胞生长的影响

为探讨IFNγ调控有肺癌细胞Fas/FasL表达对T细胞生长的影响,分别采用FACScan,RT-PCR方法检测Fas/FasL蛋白质及mRNA表达;以荧光染色及FACScan法观察细胞凋亡;用苔酚兰排除实验分析细胞生长。结果表明,人肺癌细胞A549及T－细胞系（Jurkat)均有Fas及FasL表达;IFNγ可引起A549Fas表达上调,且与剂量相关,并增加了A549细胞凋亡诱导的敏感性;A549细胞与Jurkat细胞共培养实验证明：人A549细胞通过Fas/FasL介导导致Jurkat细胞生长抑制及凋亡诱导;IFNγ处理A549细胞后,减少了其对Jurkat细胞的生长抑制。上述结果提示：Fas/FasL途径介导了A549细胞与Jurkat细胞之间的凋亡,IFNγ通过对人肺癌细胞Fas/FasL系统表达调控,使A549细胞自身对凋亡诱导的敏感性增加,并对T细胞生长的抑制作用减弱,提示IFNγ在防止肿瘤细胞逃避免疫监控有一定作用。     

携带mIFN-γ的溶瘤病毒CNHK300-mIFN-γ对肿瘤细胞的体外杀伤作用

目的: 研究携带小鼠干扰素γ(mIFN-γ)基因的溶瘤病毒CNHK300-mIFN-γ(CNHK300-Mγ)对恶性肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法: CNHK300-Mγ、CNHK300、ONYX-015和AdEasy-mIFN-γ(AdEasy-Mγ)感染肺癌细胞株A549、肝癌细胞株SMMC-7721、胰腺癌细胞株PANC-1和正常成纤维细胞株BJ,通过病毒增殖实验、细胞病理效应和细胞杀伤实验观察CNHK300-Mγ、CNHK300和ONYX-015在上述肿瘤细胞和正常细胞中的增殖能力和对这些细胞的杀伤作用,通过双抗体夹心ELISA检测CNHK300-Mγ和AdEasy -Mγ在上述肿瘤细胞和正常细胞中不同时相的mIFN-γ表达量。结果: CNHK300-Mγ具有类似于CNHK300的肿瘤细胞选择增殖性,能在恶性肿瘤细胞中大量增殖并杀灭肿瘤细胞,均强于ONYX-015(P<0.01),而在正常细胞中增殖和杀伤作用均较弱,弱于ONYX-015(P<0.05)。CNHK300-Mγ感染恶性肿瘤细胞后有大量的mIFN-γ表达,并随着感染时间延长表达量也相应上升,而AdEasy-Mγ感染后只有少量mIFN-γ的表达,而且感染的时间延长表达量变化也不大(P<0.01)。结论: CNHK300-Mγ能选择性地在肿瘤细胞中增殖,并杀灭肿瘤细胞,同时大量表达具有抗肿瘤作用的蛋白,发挥多重抗瘤作用,有良好的临床应用前景。     

干扰素-γ对乳腺癌细胞HLA-Ⅰ分子表达的影响

目的 研究干扰素-γ（IFN-γ）对乳腺癌细胞表面HLA-Ⅰ类分子表达的影响,并探讨其在乳腺癌治疗中的免疫作用机制。方法 培养乳腺癌SKBR3细胞株,根据IFN-γ浓度将其分为25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组,未加药组为空白对照组。通过实时荧光定量PCR和流式细胞术实验检测经不同浓度IFN-γ作用后的乳腺癌SKBR3细胞内HLA-Ⅰ mRNA的含量,以及表面的HLA-Ⅰ类抗原的表达。结果 实时荧光定量PCR结果显示,空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组HLA-Ⅰ mRNA的表达量分别为（1.00±0.00）、（2.26±0.54）、（3.89±0.81）、（5.94±0.97）,三个浓度组均较空白对照组表达量高（P＜0.05）;流式细胞术结果显示,空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞表面HLA-Ⅰ蛋白表达量为（14.87±2.80）、（44.33±3.36）、（48.80±2.63）、（56.77±1.93）,三个浓度组均高于对照组（P＜0.05）。结论 IFN-γ上调乳腺癌细胞HLA-Ⅰ类抗原的表达有利于抗乳腺癌作用。     

维甲酸对胰腺癌细胞生长的抑制作用及其机制研究

目的：观察两种维甲酸对人胰腺癌细胞生长的抑制作用及其可能机制。方法：应用ＭＴＴ以法，流式细胞仪，裸鼠肾包膜下移植瘤抑制试验和透射电镜技术进行检测。结果；ＲＡ抑制胰腺癌细胞生长，６ｄ组抑制５０Ａ％细胞生长的药物浓度全反式ＲＡ和１３－顺式为１０－３０μｍｏｌ／Ｌ和３０－５０μｍｏｌ／Ｌ。     

hrIFN-γ和hrIL-4对人早孕滋养层细胞形态改变的研究

目的　研究人重组γ 干扰素 (hrIFN γ)和白细胞介素 4(hrIL 4)对人早孕滋养层细胞形态的作用。方法　采用人工流产方法取得绒毛膜组织 ,加入hrIFN γ和hrIL 42 4h短期组织培养 ,通过光镜和透射电镜观察滋养层细胞形态学变化。结果　hrIFN γ组滋养层细胞核由圆形变为扁圆形 ,细胞界限不清 ,滋养层细胞数目明显减少 ;hrIL 4组滋养层细胞核多呈圆形或椭圆形 ,滋养层细胞数目明显增多至数层。结论　外源性Th1、Th2型细胞因子对滋养层细胞形态具有调节作用     

重组腺病毒介导INF—γ基因转染的巨噬细胞的体外免疫效应功能…

巨噬细胞既是免疫效应细胞又是抗原提呈细胞，为研究ＩＮＦ－γ基因转染的巨噬细胞过继回输疗法，以重组腺病毒为载体将小鼠ＩＮＦ－γｃＤＮＡ转染入小鼠腹腔巨噬细胞，观察了对其体外免疫功能的影响，表明重组腺病毒载体能将ＩＮＦ－γ基因成功地转染入巨噬；细胞并增强巨噬细胞免疫效应功能。     

大鼠γ—干扰素基因转染大鼠气道上皮细胞的实验研究

目的 探讨大鼠γ-干扰素基因转染大鼠气道上皮细胞的可行性。方法 构建重组大鼠γ-干扰素真核表达载体,将其转染大鼠气道上皮细胞,检测外源质粒的整合和培养上清液中γ-干扰素浓度和活性。结果 构建的重组载体中γ-干扰素的基因序列与Genebank中大鼠的γ-干扰素cDNA序列相同。转染后气道上皮细胞基因组DNA的PCR产物电泳可见转染的基因片段条带,培养上清液中γ-干扰素浓度和活性显著高于对照组。结论 本研究构建的重组大鼠γ-干扰素真核表达载体可成功地转染大鼠气道上皮细胞,整合入基因组DNA,并分泌有活性的γ-干扰素。     

视黄酸对pRARE4-IFNα表达载体转染细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的：探讨视黄酸（RA）及其诱导的外源性α－干扰素（TFNα）抗肿瘤的协同效应及其可能分子机制。方法：通过构建的含视黄酸反应元件（RARE）的IFNα表达载体（pRARE4-IFNα)，转染肿瘤细胞后，使外源性IFNα基因的表达受RA的诱导。运用MTT比色法，流式仪分析和RT－PCR等技术方法，观察RA对pRARE4-IFNα转染和未转染的HL－60和MCF－7细胞的体外增殖能力，细胞周期分布和细胞凋亡的影响，以及IRF－1，STAT1和Fas抗原表达的改变。结果：pRARE4-IFNα转染和未转染的HL－60和MCF－7细胞经RA处理后，生长减慢，细胞周期被阻滞在G1／G0期，细胞凋亡率增加，DNA片段化百分率升高，IRF－1和STAT1 mRNA水平明显增高，其中，以pARE4-IFNα转染细胞经RA处理后变化更明显，结论：RA及其诱导的外源性INFα具有协同抗肿瘤作用，上调节IRF－1和STAT1基因表面可能是其主要分子机制。     

IFN-γ对人胃癌细胞侵袭力及转移力的调节作用

用IFN γ处理胃癌细胞 ,采用流式细胞仪分析胃癌细胞表面抗原分子的表达水平 ,用附壁试验检测胃癌细胞对细胞外基质的亲和力 ,用细胞聚集试验检测胃癌细胞的聚集能力以研究IFN γ对胃癌细胞侵袭力及转移力相关因素的调节作用。结果表明 ,经高浓度和低浓度IFN γ处理后 ,胃癌细胞表面ICAM 1及HLAI表达均显著增加 ,CD44表达显著减少 ,胃癌细胞对细胞外基质的亲和力及胃癌细胞聚集程度均降低。提示IFN γ可增加胃癌细胞ICAM 1及HLAI的表达 ,抑制CD44表达 ,抑制胃癌细胞对细胞外基质的亲和力及胃癌细胞的聚集作用 ,因此可抑制胃癌细胞的侵袭力和转移力。     

TCRVβ7.1基因转染对肝癌细胞刺激的外周血单个核细胞ERK信号通路和IFN-γ表达的影响

目的： 研究肝癌特异性识别基因TCRVβ7.1表达重组体转染外周血单个核细胞(PBMCs)后对T细胞细胞因子表达的影响和信号通路的激活作用。方法: 以肝癌特异性T细胞受体Vβ7.1转染PBMCs,流式细胞仪检测TCRVβ7.1表达量;Western blotting检测ERK1/2表达量及磷酸化水平（p-ERK）的改变;用ELISA法检测白细胞介素-4（IL-4）、γ-干扰素（IFN-γ）的表达量。结果: TCRVβ7.1基因转染健康人PBMCs并得到有效表达,转染TCRVβ7.1基因的PBMCs 与肝癌细胞共培养后ERK蛋白磷酸化水平明显高于未转染组(P<0.01)。p-ERK1/2水平与T细胞激活有关。ELISA结果表明,转染PBMCs细胞与肝癌细胞共培养后,IFN-γ水平明显高于未转染组,而IL-4无明显改变。结论: TCRVβ7.1转染PBMCs与肝癌细胞共培养后,ERK信号通路被激活,IFN-γ表达增高。     

青藤碱抑制人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭

目的:观察青藤碱对人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:分别采用不同浓度的青藤碱处理SKOV3细胞12、24和48 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Transwell实验检测细胞迁移率和侵袭率,同时采用Western blot法检测细胞周期素(cyclin)A、cyclin D1、E-cadherin和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平。结果 :随着青藤碱作用浓度和作用时间的增加,SKOV3和IOSE80细胞活力逐渐降低,青藤碱作用SKOV3和IOSE80细胞48 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为2.12 mmol/L和17.35 mmol/L;青藤碱可呈剂量依赖性地诱导SKOV3细胞发生G_0/G_1期和S期阻滞(P0.05),抑制SKOV3细胞迁移和侵袭(P0.05),下调cyclin A、cyclin D1和MMP-9蛋白水平(P0.05),并上调E-cadherin蛋白水平(P0.05)。结论 :青藤碱可在体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭,这可能与其下调cyclin D1、cyclin A和MMP-9蛋白水平,以及上调E-cadherin蛋白水平有关。     

γ-氨基丁酸对人细胞因子诱导的杀伤细胞增殖的影响

目的：研究γ-氨基丁酸（GABA）及A受体激动剂（THIP）对人细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer，CIK）增殖和凋亡的影响以及作用机制。方法：在体外用不同浓度的GABA和THIP与人CIK细胞作用后，用MTT比色法和流式细胞仪（FCM）检测人CIK细胞的增殖能力、细胞凋亡、细胞周期和免疫表型的变化。结果：GABA能显著抑制CIK细胞的生长（P〈0．01），且具有浓度依赖性，THIP对GABA的抑制细胞增殖有明显促进作用；GABA显著影响细胞周期比例的分布，促进细胞凋亡；GABA显著降低CIK细胞表面分子CD28、CD25的表达，并能被THIP增强。结论：GABA可抑制CIK细胞增殖，诱导其凋亡，降低其细胞表面CD28、CD25的表达，抑制T淋巴细胞活化，具有免疫抑制作用。这些作用通过T淋巴细胞上的GABAA受体介导。     

rHuIFN-γ对裸鼠异种移植物人结肠癌导向治疗的促进作用

本文应用１３１Ｉ标记的抗人结肠癌单克隆抗体（ｍＡｂ）Ｓｃ３Ａ及其Ｆ（ａｂ′）２作为导向治疗剂，加ｒＨｕＩＦＮ－γ治疗荷人结肠癌裸鼠获得明显的抑瘤效果。结果表明，ｒＨｕＩＦＮ－γ＋１３１Ｉ－Ｓｃ３ＡｍＡｂ或１３１Ｉ－Ｆ（ａｂ′）２的抑瘤作用分别为８４．５％和９１．９％，明显优于ＰＢＳ＋１３１Ｉ－Ｓｃ３ＡｍＡｂ或１３１Ｉ－Ｆ（ａｂ′）２治疗组（分别为６９．６％或６０．５％）；Ｆ（ａｂ′）２组优于完整的ｍＡｂ组，提示ＩＦＮ－γ具有良好的导向辅佐作用。上述结果可为临床应用提供重要的实验依据。     

Bcl-xl和p53在人卵巢癌SKOV3细胞中表达及中药干预作用

目的探讨Bcl-xl、p53基因在白毛藤诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡中的作用。方法不同浓度白毛藤作用于细胞,荧光显微镜观察人卵巢癌SKOV3细胞凋亡作用,RT-PCR法检测Bcl-xl、p53基因表达量的变化。结果白毛藤能诱导人卵巢癌细胞凋亡,并且上调p53和降低Bcl-xl表达。结论白毛藤促进凋亡,其机制可能与激活p53、抑制Bcl-xl表达有关。