单纯疱疹病毒Ⅰ型心肌炎细胞凋亡与TGF-β1表达的关系

目的探讨小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型心肌炎细胞凋亡与转化生长因子β1(TGF-β1)表达的关系.方法通过给BALB/C小鼠腹腔接种单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)诱发病毒性心肌炎(VMC),感染病毒3～35天,VMC检出率为91.67%.应用原位末端标记法(TUNEL)及免疫组化技术检测VMC小鼠心肌细胞中凋亡细胞的出现情况及TGF-β1的表达情况.结果 78.33%感染病毒鼠心肌中发现凋亡细胞,71.67%有TGF-β1表达,二者之间分布区域一致.结论细胞凋亡可能参与HSV-1诱导的VMC发生、发展,而TGF-β1可能参与VMC细胞凋亡的调控.     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗结肠癌的研究

目的：观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk),丙氧鸟苷(GCv)自杀基因治疗系统在体内外对结肠癌的杀伤效应。方法：构建携带HSV-tk基因的逆转录病毒载体,将该重组逆转录病毒感染结肠癌细胞株SW480,筛选稳定表达tk的细胞克隆SW480／tk,测定SW480／tk细胞在体外对GCV的敏感性;SW480／tk细胞在裸鼠皮下成瘤,用GCV治疗并观察疗效。结果：HSV-tk基因整合入SW480细胞并在SW480／tk细胞中稳定表达;GCV在体外对SW480／tk细胞有明显的杀伤作用,其作用呈现剂量和时间依赖性特点和旁杀伤效应,对未转染细胞则无明显毒性。裸鼠ex vivo实验得到相应结果,治疗组肿瘤受到明显抑制。结论 在in vitra和ex vivo水平,表达HSV-tk基因的肿瘤细胞均可被GCV有效杀伤,逆转录病毒介导HSV-tk/GCV自杀基因治疗系统有可能成为结肠癌的有效治疗方法。     

单纯疱疹病毒感染与冠心病急性心肌梗死的关系

目的　探讨单纯疱疹病毒 (HSV )感染与冠心病心肌梗死的关系。方法　测定 5 1例急性心肌梗死 (AMI)和 42例陈旧性心肌梗死 (OMI)及 3 1例冠脉造影正常者 (对照组 )的HSV 1抗体、C 反应蛋白 (CRP)、血脂水平。结果　AMI组HSV 1IgG阳性率及水平高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,血HSV 1DNA检测结果与之吻合。校正冠心病危险因素前、后 ,HSV 1IgG阳性与AMI均有相关关系 (OR4.2 66,OR3 .3 2 1)。AMI组中HSV 1( +)组CRP、TC、LDL C高于HSV 1( -)组(均P <0 .0 5 ) ,并且IgG与CRP、TC、LDL C呈正相关。 结论　HSV 1感染与AMI之间存在明显的相关性 ,与血脂、CRP也存在相关性     

弓形体,单纯疱疹病毒,乙肝毒感染与异常妊娠的关系

为探讨弓形体、单纯疱疹病毒、乙型病毒与异常妊娠的关系,应用酶联免疫吸附法分别对３６０例异常妊娠患者和２２０例正常孕妇的血清进行ＴＯＸ、ＨＳＶ特异性抗体ＩｇＭ和ＨＢｓＡｇ的检测。结果显示,异常妊娠组ＴＯＸ和ＨＳＶ的感染率分别为２３．１０％和１９．１７％,ＨＢｓＡｇ的阳性率为４．６％。     

单纯疱疹病毒I型与消化性溃疡的关系

消七性溃疡(PU)的病因和发病机制尚未完全明了.近年来,有人认为HSV-I与PU可能有关[1-3],我们合成了一对DNA聚合酶序列中的特异性引物,应用PCR技术检测PU患者及正常人的胃和十二指肠粘膜中HSV-I DNA,试图了解HSY-I与PU的关系. 1材料和方法 1.1材料有复发性口唇疱疹病史及其他HSV-I感染者不纳入本试验.入选病例年龄为18岁～65岁复合性溃疡不入选.对照组30例,均为健康成人,男15例,女15例,平均年龄32.5岁.内镜检查胃和十二指肠粘膜正常,于胃窦小弯侧(GNor)和十二指肠球部前壁(DNor)各钳取粘膜组织1块.DU组30例,男20例,女10例,平均年龄36.6岁.内镜检查证实溃疡长径≥0.5 cm,为活动期,而胃粘膜大致正常或轻微浅表性胃炎,分别于溃疡边缘(DU1),溃疡对侧球部正常粘膜(DU2)及胃窦小弯侧(GNor)各钳取粘膜组织1块.GU组11例,男7例,女4例,平均年龄42.3岁.内镜检查证实溃疡长径≥0.25 cm,为活动期,活检排除胃癌,而十二指肠粘膜大致正常者,分别于溃疡边缘(GU1),溃疡对侧正常粘膜(GU2)及十二指肠球部(DNor)各钳取粘膜组织1块.以上病例标本均为孙逸仙纪念医院消化疾病研究室内镜室提供.     

单纯疱疹病毒Ⅰ型与消化性溃疡的关系

消化性溃疡（ＰＵ）的病因和发病机制尚未完全明了．近年来，有人认为ＨＳＶⅠ与ＰＵ可能有关［１－３］，我们合成了一对ＤＮＡ聚合酶序列中的特异性引物，应用ＰＣＲ技术检测ＰＵ患者及正常人的胃和十二指肠粘膜中ＨＳＶⅠＤＮＡ，试图了解ＨＳＶⅠ与ＰＵ的关系．１　材料和方法１．１　材料　有复发性口唇疱疹病史及其他ＨＳＶⅠ感染者不纳入本试验．入选病例年龄为１８岁～６５岁．复合性溃疡不入选．对照组３０例，均为健康成人，男１５例，女１５例，平均年龄３２－５岁．内镜检查胃和十二指肠粘膜正常，于胃窦小弯侧（ＧＮｏ…     

弓形体、单纯疱疹病毒、乙肝病毒感染与异常妊娠的关系

为探讨弓形体 (TOX)、单纯疱疹病毒 (HSV)、乙肝病毒 (HBV)与异常妊娠的关系。应用酶联免疫吸附法分别对 36 0例异常妊娠患者和 2 2 0例正常孕妇的血清进行 TOX、HSV特异性抗体 Ig M和 HBs Ag的检测。结果显示 ,异常妊娠组 TOX和 HSV的感染率分别为 2 3.10 %和 19.17% ,,HBs Ag的阳性率为 4.6 %。TOX和 HSV的感染率与正常孕妇相比 (3.1%和 7.5 % )有非常显著性差异 (P <0 .0 0 1)。异常妊娠组 HBs Ag的检出率与正常孕妇(5 .12 % )相比无统计学意义。研究结果进一步证实了弓形虫和单纯疱疹病毒感染是引起异常妊娠的重要致病因素 ,HBs Ag与异常妊娠发生无关     

人单纯疱疹病毒-2型感染致豚鼠输卵管上皮细胞凋亡的研究

目的 探讨人单纯疱疹病毒-2型感染导致输卵管妊娠的机制. 方法 培养豚鼠原代输卵管上皮细胞,用人单纯疱疹病毒-2型感染,显微镜下观察输卵管上皮细胞的形态学变化,并用Western blot法检测细胞凋亡关键蛋白caspase-3的变化. 结果 豚鼠原代输卵管上皮细胞被人单纯疱疹病毒-2型感染后,显微镜下观察到典型的细胞凋亡特征,Western blot检测发现细胞凋亡关键蛋白caspase-3活化成两个亚基. 结论 人单纯疱疹病毒-2型感染后引起豚鼠输卵管上皮细胞凋亡,人单纯疱疹病毒-2型感染引起输卵管上皮细胞凋亡是输卵管妊娠的机制之一.     

腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒-1-胸苷激酶双自杀基因对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察构建的含胞嘧啶脱氨酶／单纯疱疹病毒－1－胸苷激酶（CD／TK）双自杀基因的重组腺病毒对血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响。方法：将含CD／TK单、双自杀基因的重组腺病毒感染培养至3－5代的大鼠VSMCs。荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白的数量确定感染效率。用MTT法检测前体药物对各转基因组细胞增殖的抑制作用。结果：单、双自杀基因组腺病毒均可100％感染VSMCs。当感染复数（M．0．I）为10时，双自杀基因组靶细胞的存活率仅10％，明显低于腺病毒（Ad）－TK（43％）和Ad-CD(64%)单基因组（P＜0．05）。当M．O．I≤20时双自杀基因能够对细胞产生最大（90％）杀伤而CD、TK单基因组和单基因共转染组则不能，而且双基因组所需前体药物的浓度（无环鸟苷0．1μg/ml,5－氟胞嘧啶10μg/ml)低于单基因组（无环鸟苷0．5μg/ml，5-氟胞嘧啶50μg/ml）。双基因组的TK或CD基因单独作用时对细胞的抑制作用接近或低于相应的单基因组。结论：双自杀基因共表达腺病毒载体对VSMCs的抑制作用、安全性及可调控性均优于单基因。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型感染极早期对离体人动脉平滑肌细胞原癌基因c-sis及c-myc表达的影响

目的：观察单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－２）感染极早期对离体人动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）原癌基因ｃ－ｓｉｓ及ｃ－ｍｙｃ表达的影响。方法：采用不同感染剂量的ＨＳＶ－２吸附单层ｈＡＳＭＣ１小时作为病毒感染细胞模型,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法观察上述原癌基因表达。结果：病毒吸附细胞后０分钟、３０分钟、６０分钟,病毒感染组［５感染复数（ＭＯＩ）和１０ＭＯＩ;ＭＯＩ＝空斑形成单位／细胞数（ＰＦＵ／细胞数）］均比对照组的原癌基因ｃ－ｓｉｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加,且基因表达与感染时间也有关。结论：ＨＳＶ－２感染可以诱导ｈＡＳＭＣ原癌基因ｃ－ｓｉｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加,该作用可能是病毒促进ｈＡＳＭＣ异常增殖进而参与动脉粥样硬化或血管成形术后再狭窄形成的分子机制之一。     

单纯疱疹Ⅱ型病毒感染对培养的猪主动脉平滑肌细胞形态和LDH…

病毒感染与动脉继样硬化之间的关系近年来逐步受到人们重视。本文以培养的猪主动脉平滑肌细胞对象，观察了单纯疱疹Ⅱ型病毒感染对细胞乳酸脱氢酶释放及形态的影响。结果显示，ＨＳＶ－Ⅱ感染主动脉平滑细胞４８－７２ｈ后，会引起ＳＭＣ出现细胞变，并且呈滴度依赖性释放乳酸脱氢酶，在高滴度时甚至呈现溶细胞病变，提示长期潜伏存在的疱疹病毒可能作为一种局部损害因子，造成动脉壁平滑肌细胞的损伤。     

中药对沙眼衣原体和单纯疱疹病毒作用的筛选

目的 对28种中草药进行沙眼衣原体和单纯疱疹病毒(HSV)的敏感性体外筛选，以期发现能用于临床的药物。方法 测定中药对McCoy和Vero细胞的最大无毒浓度。利用细胞培养技术检测中药对沙眼衣原体和单纯疱疹病毒半数有效浓度(IC50)和最小抑制浓度(MIC)。结果 28种中药中，天花粉、生大黄、野菊花对HSV有体外抗病毒活性，其最小抑制浓度和最大无毒浓度接近。天花粉的抗HSV作用强于生大黄和野菊花。生大黄、黄连、炒黄芩、苦参、鱼腥草对沙眼衣原体有体外抗病毒活性，其最小抑制浓度和最大无毒浓度接近。黄连的抗沙眼衣原体作用强于其它几种中药。生大黄对HSV和沙眼衣原体均有体外活性。其余药物的体外抗沙眼衣原体和HSV活性不明显。结论 研究发现一些中草药具有体外抗沙眼衣原体和单纯疱疹病毒活性，可为临床处方配伍等提供线索，也为今后进一步研究中药有效成分打下基础。     

单纯疱疹病毒感染与性病后尿道炎综合的关系

性病后尿道炎综合征是指男性淋病或非淋菌性尿道炎经治疗后,已无尿道炎的临床及实验室客观依据,但患者仍有多种不适的症候群。因其原因未明,疗效欠佳,故治疗颇为棘手。笔者总结多年的治疗经验,发现该病与单纯疱疹病毒（HSV）感染有一定联系。现分析报告如下。     

人乳头状瘤病毒16型、18型、单纯疱疹病毒2型和巨细胞病毒感染与宫颈癌的关系

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)-16、18型、单纯疱疹病毒2型(HSV-2)和巨细胞病毒(CMV)感染与宫颈癌的关系。方法对66例宫颈癌、58例宫颈上皮内瘤样变(CIN)、20例慢性宫颈炎患者宫颈活检组织用聚合酶链反应方法检测HPV-16、18型、HSV-2和CMV感染情况。结果 HPV-16、18型、HSV-2、CMV阳性率从宫颈癌组到慢性宫颈炎组均有递减趋势;HPV-16型病毒的阳性例数中宫颈癌组分别与CIN组比较、慢性宫颈炎组比较差异有统计学意义(c2=28.714,c2=55.907,P<0.05),CIN组与慢性宫颈炎组比较差异有统计学意义(c2=11.507,P<0.05);HPV-18、HSV-2和CMV病毒的阳性例数中,宫颈癌组分别与CIN组、CIN组与慢性宫颈炎组比较差异无统计学意义(c2=1.758,c2=0.000,c2=0.937,P>0.05);在宫颈癌组中单独或合并HPV-16、HPV-18、HSV-2、CMV的感染率明显高于非宫颈癌组。结论HPV在引起宫颈癌的作用是主要的,HSV-2、CMV合并感染可能会增加患病的危险性,可将性传播疾病患者作为宫颈癌风险人群进行防癌筛查,以提高早期诊断和早期治疗率。     

单纯疱疹病毒1型糖蛋白gD的表达纯化及多克隆抗体的制备

目的表达及纯化单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)糖蛋白D(glycoprotein D,gD)并制备多克隆抗体。方法双酶切pcDNA 3.1-HSV1-gD和pFastBacTM I质粒,gD基因克隆到pFastBacTM I载体,连接产物转化E.coli DH10Bac感受态细胞并鉴定重组杆状病毒质粒Bacmid-gD。将构建正确的重组杆粒转染Sf9细胞包装杆状病毒。杆状病毒经传代扩增后,诱导重组gD蛋白的表达,使用Ni-NTA亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组gD蛋白,进行15%SDS-PAGE电泳鉴定并采用肽指纹图谱分析纯化的gD蛋白。将纯化的gD蛋白进行热稳定性试验检测其在不同缓冲液条件下的稳定性。用重组gD蛋白免疫小鼠,利用ELISA法检测血清抗体滴度。结果成功构建重组质粒pFastBacTM I-gD,转化E.coli DH10Bac感受态细胞后,经蓝白斑筛选鉴定重组杆状病毒质粒Bacmid-gD,鉴定正确的重组质粒感染Sf9细胞,包装出重组杆状病毒,获得滴度为8×108 pfu/ml的P3代杆状病毒。重组杆状病毒再次感染Sf9细胞能够表达高纯度可溶性的重组gD蛋白。不同缓冲液条件下重组gD蛋白稳定性良好。用gD蛋白免疫小鼠,获得ELISA效价为1×105的多克隆抗体。结论成功构建重组杆状病毒质粒Bacmid-gD,表达的HSV-1 gD蛋白稳定及免疫原性良好,制备的抗gD蛋白多克隆抗体滴度高,为HSV-1的亚单位疫苗的制备鉴定了基础。     

重组单纯疱疹病毒-胸苷激酶和人白介素-2基因痘苗病毒真核表达载体的构建

目的 松建含单纯疱疹病毒-胸苷激酶（HSV-tk）和人白介素-2（hIL-2）基因的痘苗病毒真核表达载体pMJ601,为进一步实施胃癌的基因治疗作必要的准备。方法 利用目的的基因与载体的连接、感受态细胞的制备及转化、质粒抽提、琼脂糖凝胶电泳、酶切、DNA序列分析等多种基因工程技术,将纯化回收的HSV-tk和hIL-2分别与pMJ601进行连接、转化并鉴定。结果 分别用BamH I-HindⅢ和Sal I-BamH I酶切位点,将HSV-tk与hIL-2DNA成功地克隆到pMJ601真核表达载体。结论 重组HSV-tk hIL-2基因PMJ601的构建,为进一步研究胃癌的基因治疗打下坚实的基础。