人眼小梁细胞体外表达表皮生长因子mRNA和表皮生长因子受体

目的 了解培养的小梁细胞分泌表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＥＧＦ）及细胞膜上表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＥＧＦＲ）的情况。方法 进行人眼小梁细胞体外培养。用ＥＧＦ ｃＤＡＮ探针,α＾－３２ｐ同位素标记及斑点杂交放射自显影法,检测小梁细胞分泌ＥＧＦｍＲＮＡ的情况。结果 人眼小梁细胞体外培养成功。免疫组化染色显示小     

维拉帕米对牛眼小梁细胞表达转化生长因子-β的影响

目的　研究维拉帕米 (Verapamil)在抑制牛眼小梁细胞 (BTMC)合成细胞外基质 (ECM )的同时 ,对BTMC表达转化生长因子 β1(TGF β1)、TGFβ2 的影响。方法　采用半定量RT PCR和免疫组化结合计算机图像分析技术分别检测等于和低于 0 0 1mg/mLVerapamil对BTMC表达TGFβ1、TGFβ2 蛋白和mRNA。结果　 0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1mg/mLVerapamil可质量浓度依赖性抑制BTMC表达TGFβ1、TGFβ2 蛋白和mRNA(P <0 0 5 ) ,且 0 0 1mg/mLVerapamil可完全抑制TGF β1的蛋白合成 ,同样质量浓度的Verapamil对TGF β1的抑制程度要大于TGF β2 (P <0 0 5 )。结论　Verapamil抑制BTMC合成ECM的机制可能为抑制TGF β表达 ,这种抑制是在转录水平上 ,且对TGF β1的抑制可能在其中起主要作用。此外 ,TGF β可通过自分泌方式作用BTMC ,促进ECM的合成 ,进一步为Verapamil在发病学环节上防治原发性开角型青光眼提供实验依据。     

转化生长因子-β2对牛眼小梁细胞外基质合成的影响

目的观察人眼房水中转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2, TGF-β2)对体外培养牛眼小梁细胞外基质合成的影响.方法将体外培养的第3～5代牛眼小梁细胞分为对照组和实验组,实验各组分别经0.32×103 ng/L、1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2作用48 h后,分别应用3H-脯氨酸掺入及液体闪烁测量技术、酶联免疫吸附法和放射免疫技术检测小梁细胞胶原(collagen, CA)、纤维连接蛋白(fibronectin, FN)及透明质酸(hyaluronic acid, HA)的合成.结果与对照组相比,不同浓度的TGF-β2均可促进牛眼小梁细胞CA的合成.0.32×103 ng/L、1.00×103 ng/L TGF-β2组与对照组比较差异有显著意义(q′=3.85、4.38, P<0.05),3.20×103 ng/L TGF-β2组与对照组比较差异有非常显著意义(q′=11.40, P<0.01),3H-脯氨酸掺入量呈浓度依赖性增高;1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2组促进牛眼小梁细胞合成FN, 与对照组比较差异有显著意义(q′=3.63, P<0.05) 和非常显著意义(q′=20.10, P<0.01); 1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2组均抑制牛眼小梁细胞合成HA, 与对照组比较差异有非常显著意义(q′=15.15、16.92, P<0.01).结论 TGF-β2可能在正常人眼小梁网细胞外基质的增龄性变化及原发性开角型青光眼患者小梁网及其邻管组织内细胞外基质异常沉积的过程中发挥了重要作用.     

地塞米松体外抑制人眼小梁细胞生长及表皮生长因子mRNA的表达

目的 探讨地塞米松对培养的人眼小梁细胞生长的影响及抑制小梁细胞表达表皮生长因子（epidermal growth factor EGF)mRNA的情况。方法 取人眼小梁组织进行小梁细胞体外培养,对传3代的小梁细胞进行地塞米松处理实验。实验组在传代后的培养液中按300ug/ml加入地塞米松,另一组作为对照组进行常规培养,观察生长5d后的细胞情况,取培养7d的两组的小梁细胞分别提取RNA,用EGFcDNA探针,a-^32P同位素标记进行斑点杂交,放射自显影。对显影片用计算机激光密度扫描,测定吸光度A值相对值进行组间比较。结果 加入地塞米松300ug/ml实验组,小梁细胞生长明显受到抑制,5d时对照组细胞已经融合,地塞米松组的细胞仍呈集落状态。从对照组小梁细胞提取RNA22.5ug,地塞米松组提取RNA 14ug,取14ug两组等量RNA,用EGFcNDA探针进行斑点杂交。结果阳性。激光密度扫描值地塞米松明显低于对照组。结论 地塞米松对培养的人眼小梁细胞有明显的生长抑制作用,通过抑制总RNA转录及EGFmRNA表达而抑制小梁细胞生长。提示糖皮质激素性青光眼是因抑制了小梁细胞的多种代谢和生理功能所致。     

地塞米松诱导牛眼小梁细胞凋亡的研究

目的：探讨地塞米松诱导牛眼小梁细胞凋亡的机制。方法：采取体外组织块培养法,培养新生牛眼小梁细胞。将1－500mg/L地塞米松加入融合的第3－5代小梁细胞培养液中,作用1－14d,用相差显微镜、荧光显微镜、透射电子显微镜、DNA电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：125－500mg/L地塞米松作用1－14d,小梁细胞凋亡呈浓度时间依赖性。 凋亡的小梁细胞经Hoechst3258染色,于荧光显微镜下观察,细胞核呈致密度浓染的颗粒块状荧光;透射电镜下可见小梁细胞染色质固缩,并有凋亡小体,细胞器基本完好;DNA电泳呈梯状条带,流式细胞仪测到亚二倍体峰。结论：地塞米松可诱导体外培养的小梁细胞凋亡,可能是激素性青光眼的发病机制之一。     

5—氟尿嘧啶对体外培养牛眼小梁的细胞的毒性研究

目的探讨５－氟尿嘧啶在临床应用中对小梁细胞的毒性损伤。方法在体外增减牛眼小梁细胞，从细胞的形态、结构、自下而上了及吞噬功能等方面观察５－Ｆｕ对牛眼小梁细胞的影响。结果５－Ｆｕ对牛眼小梁细胞的安全浓度为１×１０＾－６ｇ．ｍｌ＾－１。结论结合５－Ｆｕ在兔眼前房的药代动力学研究资料，推论目前在人眼应用的剂量，不致对小鼠细胞造成损伤。     

压力对体外培养牛眼小梁细胞的影响

目的 观察压力对小梁细胞的影响。方法 对体外培养牛眼小梁细胞施以不同程度的压力,用倒置相差显微镜、光镜、电镜观察细胞形态结构及吞噬功能的变化。结果 细胞承受２．００ｋｐａ（１ｋｐａ＝７．５ｍｍＨｇ）、２．６７ｋｐａ压力４８小时,各项指标与对照组比较,差异无显著性。４．００ｋｐａ２４小时,细胞形态结构有轻度的损伤,吞噬功能有轻度下降。当压力进一步增加,时间更加延长后,细胞的损伤也更重。结论小梁细胞只     

上皮状牛眼小梁细胞选择性体外培养

目的建立上皮状牛眼小梁细胞体外培养的方法。方法用DME培养液加10％胎半血清选择性培养上皮状牛眼小梁细胞．结果（1）原代和传1、传2代牛眼小粱细胞生长不稳定，传3～7代牛眼小梁细胞生长旺盛；（2）原代细胞和传代细胞汇合前其形态可是多种多样，汇合后均为单层上皮状小梁细胞。结论（1）牛眼小梁组织丰富，解剖清楚，体外培养易生长；（2）选择性培养可得到单纯上皮状牛眼小梁细胞，更易与邻近组织细胞相区别。     

选择性牛眼上皮样小梁细胞的体外培养

目的选择性行牛眼上皮样小梁细胞的体外培养，为进一步研究原发性开角型青光眼提供实验材料。方法利用组织块法进行小梁细胞的原代培养，之后利用机械划除法、酶消化法、反复贴壁法，对牛眼上皮样小梁细胞进行选择性培养和传代。结果成功选择性培养出形态、性状良好的牛眼上皮样小梁细胞。结论选择性牛眼上皮样小梁细胞的体外培养所获细胞形态单一，可以用此种方法进行牛小梁细胞的体外培养并为实验应用做好准备。     

地塞米松诱导人小梁细胞bcl—2基因的表达

目的:探讨地塞米松对小梁细胞bcl-2基因表达的影响。方法:应用组织块培养的方法建立人小梁细胞培养。取第三代小梁细胞培养于载玻片上,含10~(-7)mol/L地塞米松的培养液作用6小时、12小时、24小时后,应用LSAB观察bcl-2基因表达的情况。结果:地塞米松作用6小时后可见bcl-2蛋白阳性细胞,且随时间的延长,阳性细胞有所增多。结论:地塞米松可诱导小梁细胞bcl-2基因表达,可能在激素性青光眼发病中起着一定的作用。眼科学报1998;14:187～189。     

表皮生长因子与眼科疾病

表皮生长因子是一条由氨基酸残基组成的单链多肽,广泛存在于人体各种组织的细胞中,可以刺激体内或体外培养的多种组织类型细胞的有丝分裂、增殖和分化.本文就表皮生长因子在角膜、晶状体、小梁网和视网膜等疾病中的研究进展作一综述.     

表皮生长因子受体家族在翼状胬肉上皮内的异常表达

目的 了解表皮生长因子受体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＥＧＦＲ）家族的ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２及ＥｒｂＢ３蛋白在翼状胬肉上皮内的表达。方法 用免疫荧光组织化学及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ地１５例初发期翼状胬肉患者切除的翼状胬肉组织进行ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２及ＥｒｂＢ３蛋白的检测,并与正常人结膜组织进行对照。结果 免疫荧光组织化学染色显示,在正常结膜上皮中,ＥＧＦＲ蛋     

曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子-β2表达的抑制作用

目的　观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞转化生长因子 β2 (TGF β2 )表达的影响。方法　体外培养的第 3～ 5代人眼小梁细胞经 0 0 (对照组 )、12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理 4 8h后 ,采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)观察曲尼司特对体外培养的人眼小梁细胞TGF β2 表达的影响 ,以人甘油醛 3 磷酸酯脱氢酶 (G3PDH)作为内参照。结果　 12 5、2 5 0及 5 0 0mg/L曲尼司特处理组TGF β2 /G3PDH象素值比值分别为 1 85± 0 35 ,1 6 6± 0 4 2 ,1 16± 0 2 4 ,与对照组比值 3 82± 0 5 6比较 ,差异有非常显著意义 (q′ =10 77,11 80 ,14 5 4 ;P <0 0 1) ;同时 ,TGF β2 /G3PDH比值随曲尼司特浓度增加而变小 ,呈现明显的量效关系。结论　曲尼司特能明显抑制小梁细胞TGF β2 的表达。可从发病学途径探讨曲尼司特对原发性开角型青光眼的治疗机制。     

转化生长因子β1对体外培养的牛眼小梁细胞MMP3和MMP9表达的影响

目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对培养的牛眼小梁细胞基质金属蛋白酶（MMPs)的影响。房水引流阻力在原发性开角型青光眼（POAG）发病机制中的作用。方法 对牛眼小梁细胞进行体外原代及传代培养，对传三代小梁细胞分别施加含TGF-β1终浓度为0、0.5,1,5ng/ml的培养液，48h后行MMP3及MM农艺师免疫组人SP法染色。结果进行计算机图像分析并行统计学检验。结果 体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP3及MMP9，TGF-β1可抑制小梁细胞MMP3及MMP9表达。结论 TGF-β1在一定范围内抑制小梁细胞MMP3及MMP9表达，造成小梁网ECM的异常堆积，导致房水引流阻力增高。     

人表皮生长因子对体外培养兔角膜内皮细胞影响的实验研究

目的：明确人表皮生长因子（ｈｕｍａｎ Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ,ｈＥＧＦ）对角膜内皮细胞的影响。方法：采用体外培养的兔角膜内皮细胞,观察接种后不同时点ｈＥＧＦ对其生长状态的影响;兔角膜片内皮损伤模型,离体培养后行Ｈ－Ｅ染色和Ｈ＾３－ＴｄＲ掺入放射自显影,观察ｈＥＧＦ对其修复的影响。结果：兔角膜内皮细胞体外培养ｈＥＧＦ组细胞数高于对照组,并使细胞形态产生纺锤形改变;角膜内皮细胞     

表皮生长因子在角膜损伤疾病中的应用

表皮生长因子（EGF）是一种非常重要的多肽类生长因子,不仅参与眼部多种细胞的有丝分裂、增生和分化,而且还具有介导细胞与细胞、细胞与基质之间相互作用及信号转导等生物学功能。角膜损伤是眼科的一种常见病和多发病,如果治疗不恰当,将导致患者失明。许多研究发现,EGF可以促进损伤角膜的修复和再生,近年来该领域的研究已从动物实验阶段进入了临床研究阶段、从形态学研究阶段进入了基因学研究阶段。就EGF的基本概念、生物学效应、与角膜损伤的关系及其在眼科临床的应用等方面的研究进展进行综述,以便更好地指导临床用药。