肾上腺素能激动剂和拮抗剂对牛眼小梁细胞环磷酸腺苷的影响

目的测定肾上腺素和肾上腺素能拮抗剂对牛眼小梁细胞内环磷酸腺苷（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ３′,５′－ｍｏｎｏｐｈｏｓｈａｔｅ,ｃＡＭＰ）的影响。方法用３Ｈ标记的ｃＡＭＰ,运用蛋白竞争结合法测定细胞内ｃＡＭＰ的含量。结果（１）１０－５ｍｏｌ／Ｌ的肾上腺素可使牛眼小梁细胞内的ｃＡＭＰ成倍增加。（２）噻吗心安和ＩＣＩ１１８,５５１在较低浓度１０－６ｍｏｌ／Ｌ时即可有效拮抗１０－５ｍｏｌ／Ｌ肾上腺素的作用。（３）比索洛尔只有在较高浓度（≥１０－５ｍｏｌ／Ｌ）时才能有效拮抗肾上腺素的作用。结论１０－５ｍｏｌ／Ｌ肾上腺素可使小染细胞内的ｃＡＭＰ成倍增加,可能与其增加房水流出率有关;牛眼小梁细胞上存在β受体,且以β２受体为主。     

多巴胺受体对牛眼小梁细胞环磷酸腺苷的调节作用

目的分析多巴胺（ｄｏｐａｍｉｎｅ,ＤＡ）能激动剂和拮抗剂对牛眼小梁细胞内环磷酸腺苷的调节作用。方法运用蛋白竞争结合法用氚（Ｈ３）标记的环磷酸腺苷（ａｄｅｎｏｓｉｎｅ３,５ｃｙｃｌｉｃｍｏｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ,ｃＡＭＰ）测定牛眼小梁细胞内ｃＡＭＰ的含量。结果（１）ＤＡ受体激动剂ＤＡ和ＤＡ１受体激动剂诺非泮尔可使牛眼小梁细胞内ｃＡＭＰ含量成倍增加。（２）ＤＡ和诺非泮尔的这种作用可被非选择性ＤＡ受体拮抗剂氟哌丁苯和选择性ＤＡ１受体拮抗剂ＳＣＨ２３３０９有效拮抗,而不被α受体拮抗剂酚苄明和β受体拮抗剂噻吗心安拮抗。结论牛眼小梁细胞上不仅存在β受体,且亦存在ＤＡ１受体。     

眼用β—肾上腺素能受体阻滞剂的临床应用进展

β－肾上腺素能受体阻滞剂是最常用的降眼压药物，也是青光眼基础和临床研究的重要内容。目前国际上的品种繁多，常用制剂包括噻吗心安、倍他心安、贝他根、美开朗和美替洛尔。虽然所有β－肾上腺素能受体阻滞剂都通过减少房水生成而降低眼压，但它们又各具优缺点。本文着重介绍９０年代上述５０种β－肾上腺素能受体阻滞剂的临床应用进展，供眼科医师在选择用药及联合用药时参考。     

内皮素_(-1)及其激动剂、拮抗剂对兔眼睫状体组织环磷酸腺苷的影响

为测定内皮素－１（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－１，ＥＴ－１）及其激动剂Ｓ６ｂ（ｓａｒａｆｏｔｏｘｉｎ）、拮抗剂ＢＱ１２３对兔眼睫状体组织环磷酸腺苷（ｃｙｃｌｉｃａ－ｄｅｎｏｓｉｎｅ－ｍｏｎｏｐｈｏｓｈａｔｅ，ｃＡＭＰ）的影响，运用内源性蛋白结合法测定兔睫状体组织ｃＡＭＰ的含量。结果：单独使用ＥＴ－１、Ｓ６ｂ以及两者联合应用均使睫状体ｃＡＭＰ升高，且呈剂量效应关系；单独应用ＢＱ１２３未引起ｃＡＭＰ改变，但ＥＴ－１与ＢＱ１２３共同作用，可有效地拮抗ＥＴ－１的升高ｃＡＭＰ效应。结论：ＥＴ－１可使兔睫状体组织ｃＡＭＰ升高；兔眼睫状体上有ＥＴＡ亚型受体。     

转化生长因子-β2对牛眼小梁细胞外基质合成的影响

目的观察人眼房水中转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2, TGF-β2)对体外培养牛眼小梁细胞外基质合成的影响.方法将体外培养的第3～5代牛眼小梁细胞分为对照组和实验组,实验各组分别经0.32×103 ng/L、1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2作用48 h后,分别应用3H-脯氨酸掺入及液体闪烁测量技术、酶联免疫吸附法和放射免疫技术检测小梁细胞胶原(collagen, CA)、纤维连接蛋白(fibronectin, FN)及透明质酸(hyaluronic acid, HA)的合成.结果与对照组相比,不同浓度的TGF-β2均可促进牛眼小梁细胞CA的合成.0.32×103 ng/L、1.00×103 ng/L TGF-β2组与对照组比较差异有显著意义(q′=3.85、4.38, P<0.05),3.20×103 ng/L TGF-β2组与对照组比较差异有非常显著意义(q′=11.40, P<0.01),3H-脯氨酸掺入量呈浓度依赖性增高;1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2组促进牛眼小梁细胞合成FN, 与对照组比较差异有显著意义(q′=3.63, P<0.05) 和非常显著意义(q′=20.10, P<0.01); 1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2组均抑制牛眼小梁细胞合成HA, 与对照组比较差异有非常显著意义(q′=15.15、16.92, P<0.01).结论 TGF-β2可能在正常人眼小梁网细胞外基质的增龄性变化及原发性开角型青光眼患者小梁网及其邻管组织内细胞外基质异常沉积的过程中发挥了重要作用.     

β肾上腺素能受体拮抗剂治疗眼部新生血管疾病的研究进展

眼部新生血管形成是糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、视网膜中央静脉阻塞和老年性黄斑变性等多种眼部疾病的病理学改变,严重影响患者视力。β受体在结膜、角膜上皮细胞、角膜内皮细胞、眼外肌、小梁网、睫状肌、晶状体和视网膜中均有表达。β肾上腺素能受体拮抗剂与β受体结合,通过抑制血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子-1、白...     

压力对体外培养牛眼小梁细胞的影响

目的 观察压力对小梁细胞的影响。方法 对体外培养牛眼小梁细胞施以不同程度的压力,用倒置相差显微镜、光镜、电镜观察细胞形态结构及吞噬功能的变化。结果 细胞承受２．００ｋｐａ（１ｋｐａ＝７．５ｍｍＨｇ）、２．６７ｋｐａ压力４８小时,各项指标与对照组比较,差异无显著性。４．００ｋｐａ２４小时,细胞形态结构有轻度的损伤,吞噬功能有轻度下降。当压力进一步增加,时间更加延长后,细胞的损伤也更重。结论小梁细胞只     

压力对牛眼小梁细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨压力对牛眼小梁细胞的增殖周期及凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA表达的影响。方法：体外培养牛眼小梁细胞。按照施加压力的大小分为实验组和对照组,对照组不施加压力,实验组分别给予20、40、60及80mm Hg(1mm Hg=0.133kPa）的压力,培养时间分别为24及48h。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法、流式细胞仪和原位杂交技术,检测不同压力和持续时间下小梁细胞的增殖和凋亡指数,及在此条件下凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA的表达。结果：≤40mm Hg的压力持续24h,小梁细胞凋亡率与对照组比较差异无显著意义（P＞0．05）;≥60mm Hg的压力使小梁细胞凋亡率显著增高。40mm Hg的压力持续24h后,细胞的凋亡指数虽未显著增高,但增殖指数已显著下降,bax基因表达有明显改变。≥40mmHg的压力持续48h后,细胞的凋亡率、增殖指数及bcl-2家庭基因表达量与对照组相比,差异均有显著意义（（均P＜0．01）。结论：≥40mm Hg的压力持续一段时间后,可通过影响bcl-2家族基因抑制小梁细胞的增殖并导致细胞凋亡。     

压力对牛眼小梁细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达及蛋白质合成的影响

目的　研究牛眼小梁细胞中诱导型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase,iNOS)在不同压力下的mRNA表达及蛋白质合成的变化 ,探讨一氧化氮 (nitricoxide,NO)在青光眼发病中的作用。方法　培养新生牛眼小梁细胞 ,并分别给予 2 0、40、6 0及 80mmHg(1mmHg =0 133kPa)的压力 ,以不加压组为对照组 ,用原位杂交和还原型辅酶Ⅱ硫辛酰胺脱氢酶 (nicotinamide adeninedinucleotidephosphate ,NADPH)组织化学染色技术对小梁细胞iNOS的mRNA和蛋白质含量变化进行定性及定量观察。结果　牛眼小梁细胞中iNOSmRNA及蛋白质含量均随压力增高而增高。对照组与压力 2 0mmHg组比较 ,两组iNOSmRNA均为弱表达 ,组间差异无显著性 (t=0 95 0 1,P >0 0 5 ) ;压力 40mmHg和 6 0mmHg组与对照组相比差异有显著性 (t值分别为 0 0 381和 0 0 32 4,P <0 0 5 ) ;压力 80mmHg组与对照组相比差异有非常显著性 (t=0 0 0 0 16 ,P <0 0 1) ;压力 40mmHg组与 6 0mmHg组相比 ,组间差异无显著性 (t=0 112 3,P >0 0 5 ) ,而与 80mmHg组相比差异有非常显著性 (t值分别为 0 0 0 2 9和 0 0 0 45 ,P <0 0 1)。NADPH组织化学染色结果与原位杂交结果基本相同 ,仅显示 40mmHg组与6 0mmHg组的组间差异有显著性 (t=0 0 42 0 ,P <0 0 5     

维拉帕米对牛眼小梁细胞合成细胞外基质的影响

目的 探讨维拉帕米(Verapamil)对牛眼小梁细胞(BTMC)合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。方法 采用免疫组化结合计算机图像分析和放免技术检测等于和低于0.01 mg/ml维拉帕米对BTMC合成胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。结果 0.001、0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白的合成(P<0.05),而促进透明质酸的合成(P<0.05)。0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅳ型胶原(P<0.05),而0.001mg/ml维拉帕米无此作用(P>0.05)。结论 维拉帕米可通过抑制细胞外基质在小梁网异常沉积,减少房水外流阻力,有望在发病学环节上治疗原发性开角型青光眼。     

血小板源性生长因子-BB对体外培养的牛眼小梁细胞中基质金属蛋白酶-2表达的影响

背景 目前在青光眼的治疗研究中,血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)作为直接作用于小梁网的药物手术刀正处于研究中,期望药物成分能直接作用于小梁网,在不破坏正常房角生理结构的前提下,疏通小梁网房水流出通道,从而达到降眼压的目的. 目的 探讨PDGF-BB对体外培养的牛眼小梁细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响及其意义.方法 取新鲜牛眼球的小梁组织,以组织块培养法培养小梁细胞,通过形态学观察和神经元特异性烯醇化酶(NSE)染色对培养的细胞进行鉴定.将第3代小梁细胞接种于6孔培养板,在培养基中加入不同质量浓度(0、5.0、12.5、25.0μg/L)的PDGF-BB培养2h,分别采用逆转录PCR(RT-PCR)法和免疫组织化学法观察PDGF-BB对牛眼小梁细胞MMP-2 mRNA(相对值)和蛋白在小梁细胞中的表达水平,分析各组培养细胞中阳性信号的吸光度(A)值. 结果 牛眼小梁组织块培养5～9 d时可见细胞游出,第3代小梁细胞可见较多突起,细胞核居中,NSE染色细胞基质中呈绿色荧光.RT-PCR检测结果发现,0、5.0、12.5、25.0μg/L PDGF-BB组小梁细胞中MMP-2 mRNA/β-actin的A值分别为0.127±0.026、0.147±0.045、0.178土0.053和0.222±0.062,差异有统计学意义(F=56.71,P＜0.05),其中5.0、12.5、25.0 μ g/LPDGF-BB组小梁细胞中MMP-2 mRNA表达量明显高于0μg/L PDGF-BB组,差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学检测发现,0、5.0、12.5、25.0 μg/L PDGF-BB组小梁细胞中MMP-2蛋白表达量(A值)分别为446.12±13.81、1444.65±54.64、2086.18±73.18和3488.65±25.98,差异有统计学意义(F=213.12,P＜0.01),各组间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 在体外培养的条件下,PDGF-BB可促进牛眼小梁细胞中MMP-2的表达,其作用呈剂量依赖的方式.     

茶碱对培养的牛眼小梁细胞骨架及细胞间黏附的影响

目的 观察茶碱对培养的牛眼小梁细胞的增殖、细胞骨架、细胞间黏附的影响，探讨其降眼压机制。方法 组织块法培养牛眼小梁细胞。不同浓度的茶碱(1、10、50mmol／L)分别作用4h、8h，免疫细胞化学法观察小梁细胞微丝及微管的改变，MTT法观察小梁细胞的增殖。ELISA法检测不同浓度的茶碱作用4h后连接素(β-catenin)的相对表达量。结果 茶碱作用8h抑制细胞增殖。茶碱明显改变细胞形态、微管及微丝染色浓集，变化程度与药物浓度及作用时间有关。茶碱降低连接素的表达量。结论 茶碱抑制小梁细胞增殖，改变细胞骨架，降低细胞间黏附，提示茶碱可能通过影响细胞骨架及细胞间黏附减少房水流出阻力从而降低眼压。     

地塞米松对永生化人眼小梁细胞流畅阻力和水通道蛋白-1表达的影响

目的探讨地塞米松对永生化人眼小梁细胞的流畅阻力和水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响。方法将永生化人眼小梁细胞株第18代接种于0.4μm孔径的滤膜上,待细胞近融合时加入含10-7mol/L地塞米松培养液。细胞融合后1、3、7d,应用内皮细胞电阻测量仪(EVOM)测定滤膜上单层小梁细胞电阻(TEER),评价其流畅阻力的变化;采用免疫印迹法检测小梁细胞AQP-1的表达情况。结果细胞融合后1、3、7d时,对照组TEER分别为(36.4±1.4)Ω、(34.0±1.7)Ω、(36.1±2.9)Ω,而经地塞米松处理组TEER则分别为(48.4±2.3)Ω、(60.3±3.1)Ω、(58.8±0.9)Ω,差异有统计学意义。用免疫印迹法检测,显示经地塞米松处理后的小梁细胞AQP-1表达量较未经处理组增多,差异亦有统计学意义。结论经地塞米松处理后的滤膜上小梁细胞AQP-1表达水平上调、表达量增多,小梁细胞TEER也升高,提示地塞米松上调AQP-1的表达水平可能与小梁细胞的流畅阻力改变有关。应用EVOM检测TEER可以体现内壁单层小梁细胞的流畅阻力,将为房水引流的研究提供新手段。(中华眼科杂志,2005,41:209-211)     

维拉帕米对牛眼小梁细胞增殖和吞噬功能的影响

目的　研究维拉帕米对牛眼小梁细胞 (BTMC)增殖和吞噬功能的影响。方法　采用MTT和3 H TDR实验检测 0 0 0 0 1、0 0 0 0 5、0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1、0 0 5、0 1mg/ml 7种质量浓度的维拉帕米对BTMC增殖功能的影响。以乳胶微粒为标记 ,定量检测等于和低于 0 0 1mg/ml维拉帕米对BTMC吞噬功能的影响。结果　低于 0 0 1mg/ml维拉帕米对BTMC增殖功能无抑制作用 (P >0 0 5 ) ,等于或高于 0 0 1mg/ml的维拉帕米可浓度依赖性地抑制BTMC增殖功能 (P <0 0 5 ) ,其IC50 分别为 0 0 3 2 3mg/ml(MTT)和 0 0 2 5 9mg/ml( 3 H TDR)。 0 0 0 1、0 0 0 5、0 0 1mg/ml维拉帕米可浓度依赖性地促进BTMC的吞噬功能 (P <0 0 5 )。结论　临床应用的 0 12 5 %维拉帕米滴眼剂在房水中的质量浓度为 ( 160 7± 2 72 )ng/ml ,该质量浓度范围不抑制BTMC增殖。选用等于和低于 0 0 1mg/ml作为后续实验的质量浓度。维拉帕米还可通过促进小梁细胞的吞噬功能 ,减少房水外流阻力 ,有望在发病学环节上治疗原发性开角型青光眼     

Effect of epinephrine in vitro on the morphology, phagocytosis, and mitotic activity of human trabecular endothelium

Epinephrine exerts a direct effect on cell morphology, phagocytosis and mitotic activity of human trabecular endothelium in primary culture. Its action is probably mediated through both beta and alpha adrenoceptors in a dose-time dependent manner. Younger cells and cells that were loosely attached to the substrate were found to be affected more rapidly and severely than were older cells and those in confluent regions where cell-to-cell attachment and stress fibers were well established. Continuous exposure to epinephrine at a concentration of 10(-5) M led to cessation of the normal cytokinetic cell movements, inhibition of mitotic and phagocytic activity, marked cell retraction, separation from the substrate, and, by 4-5 days, degeneration of cells. Similar, but less marked changes were seen with a concentration of 10(-6) M, the cell degeneration becoming apparent after one week of exposure. A still weaker concentration of epinephrine, 10(-7) M, did not result in cell degeneration even after 10 days of exposure and observation. On complete withdrawal of the drug, the cellular effects were reversible even after 3 days' exposure to 10(-5) M and 5-7 days' exposure to 10(-6) M epinephrine. The action of epinephrine was partially blocked by pretreatment of cultured trabecular cells with the beta-blocker, timolol. Available evidence suggests that the mechanism of action of epinephrine is mediated through both beta and alpha adrenoceptors, and that it intimately involves the cytoskeletal system of the cells. Extrapolation of our findings in vitro suggests that use of maximal doses of epinephrine over a prolonged time may contribute to tissue damage in certain conditions of glaucoma.     

染料木素对体外培养的牛眼小梁细胞[Ca2+]i的影响

目的:在激光扫描共聚焦显微镜(laserscanning confocal microscopy,LSCM)下测定小梁细胞经染料木素(genistein,Gen)作用后钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。方法:运用组织块培养法获得三代牛眼小梁细胞,Fulo-3/AM负载后,于LSCM下动态扫描不同浓度Gen作用后胞内荧光强度变化,得出[Ca2+]i值。结果:10-6,10-5,10-4mol/LGen可使小梁细胞[Ca2+]i呈剂量依赖性降低,其中10-5mol/LGen可使小梁细胞[Ca2+]i由328.62±16.77nmol/L减少至309.69±16.57nmol/L(n=8,P<0.05)。结论:Gen可通过松弛小梁网而致房水流出阻力减小、眼压下降。     

地塞米松对牛眼小梁水通道蛋白表达的影响

目的观察地塞米松对牛眼小梁细胞的损伤使其水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)表达的影响。方法体外培养牛眼小梁细胞,取第4代细胞鉴定后用于实验。应用浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松的培养液培养7天,通过WesternBlot方法检测培养的牛眼小梁细胞在不同浓度地塞米松作用下AQP-1的蛋白表达水平。结果牛眼小梁细胞可见AQP-1蛋白条带表达,未经地塞米松作用的AQP-1蛋白条带表达灰度值为102.87±11.73。在浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松的培养液培养7天后AQP-1蛋白条带表达灰度值分别为111.64±13.32,115.31±9.41,121.39±9.81,129.42±13.52。当地塞米松浓度≥25μg/L时,AQP-1表达出现抑制作用(P<0.05)。结论地塞米松使培养的牛眼小梁细胞AQP-1的表达减少,这可能是皮质类固醇性青光眼房水流出阻力增加的原因之一。