IFN—B与恶性黑色素瘤细胞A375的关系

目的探讨恶性黑色素瘤细胞A375肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNFrelatedapoptosisinducedligand,TRAIL）诱导凋亡的敏感性。方法采用MTF法及流式细胞术分别检测不同浓度的可溶性TRAIL蛋白单独处理以及联合IFN-13处理后A375细胞的增殖率和凋亡率。采用western—blot、免疫组化方法检测TRML单独处理及联合IFN—B处理后A375细胞内TRAIL受体及凋亡相关蛋白的表达差异。结果TRAIL蛋白联合IFN-B处理的恶性黑色素瘤细胞A375中TRAIL受体DcRl、DcR2、DR4、DR5表达增高,肿瘤细胞抑制率,凋亡率增加。与单独处理相比,联合处理后A375细胞内凋亡相关蛋白caspase8、caspase9表达上调,NF—KB下调。结论IFN—B能通过上调黑色素瘤A375细胞内凋亡相关蛋白增加TRAIL受体的表达从而增强A375细胞对TRAIL的敏感性。     

凋亡素对黑色素瘤A375细胞的凋亡作用研究

目的:探讨凋亡素对黑色素瘤A375细胞的凋亡作用,为黑色素瘤治疗提供实验依据.方法:通过腺病毒载体介导将凋亡素基因导入黑色素瘤A375细胞中,细胞水平上观察凋亡形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率,评估治疗凋亡效果.结果:凋亡素介导实验组A375细胞的凋亡率要高于对照组.结论:凋亡素基因导入黑色素瘤细胞后,具有致凋亡作用.     

复方苦参注射液对黑色素瘤A375细胞的凋亡作用研究

目的:探讨复方苦参注射液对黑色素瘤A375细胞的凋亡作用,为黑色素瘤治疗提供实验依据。方法:采用MTT法检测复方苦参注射液对黑色素瘤A375细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,评估致凋亡效果。结果:复方苦参注射液浓度在0.1430 g/mL时对细胞的增殖抑制率呈作用时间的依赖性,药效在加药后72 h时最强。在加药24 h时,A375细胞的凋亡率即高于阴性对照组(t=249.03,P0.05)。结论:复方苦参注射液对黑色素瘤细胞有明显的致凋亡作用。     

皮肤恶性黑素瘤细胞株A375细胞RUNX3基因甲基化的研究

目的 研究皮肤恶性黑素瘤细胞株A375细胞中RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化与其基因表达的关系,探讨RUNX3基因甲基化在皮肤恶性黑素瘤发病机制中的作用。方法 采用甲基化特异性PCR（MSP）检测A375细胞RUNX3基因启动子区CpG岛的甲基化状态,Western印迹检测A375细胞RUNX3蛋白表达水平。比较经不同浓度去甲基化药物５-杂氮胞苷（0、1、5、10、20 μmol/L）处理A375细胞后, RUNX3基因启动子区CpG岛的甲基化状态及蛋白表达水平的差异。结果 在A375中,处理前其RUNX3基因启动子区呈高甲基化状态,RUNX3蛋白表达缺失。经不同浓度５－杂氮胞苷处理细胞后,高甲基化的RUNX3启动子区发生不同程度去甲基化,表达缺失的 RUNX3蛋白不同程度恢复表达。结论 A375细胞株中RUNX3蛋白表达缺失可能与其启动子区的高甲基化有关; ５-杂氮胞苷能使A375细胞中的RUNX3基因发生去甲基化,从而重新激活因高甲基化而失活的基因,使RUNX3蛋白得以重新表达。     

内皮素3对恶性黑素瘤A375细胞上皮基质转化的影响

目的 研究内皮素-3（ET-3）对人恶性黑素瘤（MM）A375细胞上皮基质转化（EMT）的影响。方法 体外培养A375细胞,分别设立3组：空白对照组、100 nmol/L ET-3组、100 nmol/L ET-3和100 μmol/L BQ788（内皮素受体B阻断剂）组。采用Transwell小室检测细胞转移,细胞爬片技术检测细胞形态变化,实时PCR和Western印迹检测上皮基质转化相关分子上皮细胞钙黏蛋白、波形蛋白及转录因子（Twist、 Slug）表达情况,使用方差分析及Scheffe法对结果进行分析。结果 各干预条件中,与空白对照组比较,ET-3可以促进A375细胞的转移,BQ788可阻断该效应（3组穿膜细胞数分别为4.200 ± 0.837、9.400 ± 0.548、3.400 ± 0.894,F = 88.44,P < 0.01）;ET-3 可以促进A375细胞由上皮型向成纤维细胞样形态转变,促进A375上皮细胞钙黏蛋白表达下调（3组分别为0.330 ± 0.002、0.280 ± 0.007、0.420 ± 0.008,F = 329.98,P < 0.01）,波形蛋白表达上调（0.830 ± 0.014、1.160 ± 0.003、0.750 ± 0.030,F = 262.94,P < 0.01）,而BQ788可阻断这种效应。ET-3可以促进上皮基质转化相关转录因子Slug mRNA（F = 376.94,P < 0.01）及Twist mRNA（F = 215.62,P < 0.01）及其蛋白水平（FSlug = 288.87,P < 0.01;FTwist = 156.96,P < 0.05）上的表达上调。结论 ET-3/ETRB通过上调波形蛋白,下调上皮细胞钙黏蛋白的表达,并上调转录因子（Twist、 Slug）的表达,促进黑素瘤A375细胞上皮基质转化。     

肿瘤相关巨噬细胞对皮肤恶性黑素瘤细胞A375生物学行为的影响

目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞对皮肤恶性黑素瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响。 方法 取对数生长期人单核细胞株U937,采用佛波酯诱导48 h后,分为3组, Mφ组（继续用佛波酯诱导48 h）、M1组（用25 mg/L LPS诱导48 h）、M2组（用15 μg/L IL-4诱导48 h）。酶联免疫吸附试验检测各组巨噬细胞上清中IL-12p70和IL-10表达水平。建立巨噬细胞与恶性黑素瘤A375细胞体外共培养体系,分别设单独培养组、Mφ组（A375细胞和Mφ巨噬细胞共培养）、M1组（A375细胞和M1型巨噬细胞共培养）、M2组（A375细胞和M2型巨噬细胞共培养）,分别运用噻唑蓝法、Transwell小室法观察不同激活途径的巨噬细胞对A375细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为的影响。 结果 增殖实验显示,共培养48、72 h后Mφ巨噬细胞、M2型巨噬细胞显著促进A375细胞的增殖,M1型巨噬细胞抑制A375细胞的增殖,各处理组间两两比较,差异有统计学意义（均P < 0.05）,共培养24 h后各组间两两比较A375细胞增殖率差异无统计学意义（P > 0.05）。侵袭实验显示M2组和Mφ组穿过Transwell膜的A375细胞数量（147.00 ± 7.92、113.22 ± 8.15）较单独培养组（84.11 ± 6.07）明显增加（P < 0.05）,M1组穿膜细胞（56.44 ± 7.55）明显减少（P < 0.05）。迁移实验显示M2组和Mφ组穿过Transwell膜的A375细胞数量（198.33 ± 8.22、156.00 ± 8.83）较单独培养组（123.89 ± 7.01）明显增加（均P < 0.05）,M1组穿膜细胞（97.11 ± 6.75）明显减少（P < 0.05）。 结论 IL-4激活的M2型巨噬细胞对A375细胞的增殖、侵袭和迁移可能起促进作用;脂多糖激活的M1型巨噬细胞对A375细胞的增殖、侵袭和迁移可能起抑制作用。佛波酯诱导的巨噬细胞更倾向于M2型巨噬细胞表型。     

siRNA抑制生存素基因对恶性黑素瘤细胞A375凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制恶性黑素瘤细胞株A375生存素基因表达后,对A375细胞凋亡的影响。方法 构建针对凋亡抑制基因生存素的siRNA真核表达载体pU-生存素-siRNA,用电穿孔法转染A375细胞,采用蛋白质印迹技术检测生存素的表达,并用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果 转染pU-生存素-siRNA后,生存素在A375细胞中的表达(0.24±0.02)较对照组(0.98±0.21)明显下降,试验组细胞的凋亡率(83%)较对照组(28%)明显增加。结论 通过RNA干扰技术可抑制生存素的表达,诱导A375细胞的凋亡增加。     

FRET技术检测藤黄酸诱导的人恶性黑素瘤A375细胞凋亡

荧光共振能量转移(FRET)技术是近几年被广泛运用实时动态临测蛋白质时空动力学的一项新技术~([1]).目前国内应用FRET技术在蛋门酶活性检测方面取得较好进展.研究表明,藤黄酸(gambogic acid,GA)埘多种肿瘤具有较强的抗肿瘤活性~([2-3]).     

低氧对恶性黑素瘤A375细胞中Nodal及细胞迁移相关蛋白表达的影响

目的：明确低氧对恶性黑素瘤A375细胞中Nodal及细胞迁移相关蛋白表达的影响。方法：体外培养A375细胞，CoCl₂构建细胞内低氧模型。细胞分为空白对照组，CoCl₂组，SB-431542（Nodal抑制剂）组和CoCl₂ +SB-431542组。通过Western Blot技术检测Nodal、类激活素激酶4/7（ALK4/7）、与恶性肿瘤进展相关的上皮钙黏附蛋白（E-cadherin）、基质金属蛋白酶-2（MMP 2)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平。结果：CoCl₂组细胞内Nodal及ALK7蛋白浓度，高于其他组（P<0.05）。各处理组均没有检测到ALK4蛋白；CoCl₂组细胞中Vimentin和MMP2蛋白的浓度高于其他组（P<0.05）；各处理组E-cadherin蛋白水平差异不具统计学意义。结论：低氧环境可诱导A375细胞中Nodal和细胞迁移相关蛋白MMP2和Vimentin的高表达。     

苦参碱抑制人恶性黑素瘤A375细胞株的侵袭

目的 探讨苦参碱对恶性黑素瘤细胞A375转移能力的影响及其作用机制。方法 采用MTT法和膜联蛋白-V-FITC/PI双染色法分别检测不同浓度苦参碱对A375细胞增殖和凋亡的影响,半定量RT-PCR分析经苦参碱干预后A375细胞乙酰肝素酶mRNA的表达变化,细胞黏附实验检测细胞黏附能力的改变,基质胶侵袭实验观察细胞侵袭能力的变化。结果 苦参碱浓度≥0.5mg/mL时可抑制A375细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用呈剂量依赖性;苦参碱浓度在0.125～0.5mg/mL时,能明显下调A375细胞乙酰肝素酶mRNA的表达,并能抑制细胞的黏附、侵袭能力(P<0.01),其抑制效应呈剂量依赖性,在不同浓度组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 苦参碱在体外能抑制A375细胞的黏附、侵袭能力。苦参碱抗肿瘤侵袭可能与抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡以及下调乙酰肝素酶的表达有关。     

生存素反义寡核苷酸对人恶性黑素瘤A375细胞生物学行为的影响

目的研究生存素反义寡核苷酸(AS-ODN)经脂质体介导转染对A375细胞增殖、凋亡的影响。方法合成生存素硫代反义寡核苷酸(AS-ODN),脂质体携带转染人恶性黑素瘤A375细胞。采用台盼蓝计数、软琼脂克隆形成试验、电镜、流式细胞仪检测AS-ODN对A375细胞增殖及凋亡的影响。通过裸鼠致瘤实验观察AS-ODN对A375细胞动物体内增殖的抑制作用。结果生存素反义寡核苷酸能降低G2/M期细胞百分比,诱导细胞凋亡发生,明显抑制A375细胞的生长和克隆形成,裸鼠体内A375细胞恶性增殖潜力下降。结论脂质体介导生存素AS-ODN能有效抑制A375细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡。     

新型维A酸AHPN促人皮肤恶性黑素瘤A375细胞凋亡及机制研究

目的：探讨新合成维A酸AHPN对体外培养的皮肤恶性黑素瘤细胞系A375的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法：噻唑蓝（MTT）法测定AHPN对A375细胞系的增殖抑制作用,光镜观察药物对细胞形态的影响,用流式细胞术研究药物对细胞凋亡及细胞周期的影响。基因系统测定体外A375细胞中AHPN作用与核转录因子NF-κB活化关系。结果：维A酸AHPN可有效抑制A375细胞的生长,并具有剂量依赖性。AHPN可促进A375细胞的凋亡及G1期抑制;可增强A375细胞NF-κB活性。结论：AHPN可有效抑制A375细胞的增殖并诱导其凋亡。AHPN对A375细胞的促凋亡作用与NF-κB活化有关。     

原发皮肤恶性黑色素瘤细胞分子遗传学研究进展

本文综述了原发皮肤恶性黑色素细胞分子遗传学改变，染色体上的非随机改变主要发生在1、6、9、7及10号染色体上。     

TGF-β/BMP信号通路与恶性黑色素瘤的相关性研究

恶性黑色素瘤起病隐匿,误诊率高,预后较差,其发生发展涉及多种作用机制。TGF-β/BMP信号转导通路是近年来研究的热点,该通路与恶性黑色素瘤的发生、侵袭和转移等有密切关系,研究TGF-β/BMP信号转导通路有望为恶性黑色素瘤的治疗提供新的思路。     

紫杉醇对黑素瘤细胞A375体外抑制作用

目的:确定紫杉醇在体外对A375细胞凋亡的影响.方法:不同浓度紫杉醇分别作用A375细胞24 h、48 h和72 h后,用MTT法测定对细胞生长的抑制,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的变化,Western blot检测生存素(Survivin)的表达.结果:紫杉醇呈剂量和时间依赖性抑制细胞增殖,但高浓度组(1000 nmol/L)与低浓度组(100 nmol/L)在促进细胞凋亡及周期阻滞方面均无明显差异(P>0.05).不同浓度紫杉醇作用细胞24 h后,Survivin表达逐渐升高,48 h后其表达逐渐减弱,至72 h与对照组相比无显著性差异.结论:紫杉醇对A375细胞的生长抑制作用在一定浓度范围内呈浓度时间依赖性,抑制Survivin的表达是紫杉醇诱导细胞凋亡的途径之一.Survivin的表达与瘤细胞对紫杉醇产生抗药性有关.     

色素痣和恶性黑素瘤组织及A375细胞中色素上皮衍生因子的表达

目的 探讨色素上皮衍生因子(PEDF)在色素痣和恶性黑素瘤组织及A375细胞中的表达及其意义.方法 用免疫组化法检测正常人皮肤组织、正常人色素痣以及恶性黑素瘤组织中PEDF的表达与分布.用蛋白印迹法检测正常黑素细胞及恶性黑素瘤细胞株A375中PEDF的表达与分布.用RTPCR法检测正常黑素细胞及A375中PEDF mRNA的表达.结果 ①PEDF在正常皮肤组织、正常人色素痣及恶性黑素瘤组织中的表达逐渐降低,三组间差异有统计学意义(P<0.05).②PEDF在正常黑素细胞中表达,而在恶性黑素瘤细胞株缺失.③PEDF mRNA在恶性黑素瘤细胞中的表达量明显低于正常黑素细胞.结论 PEDF的表达降低在恶性黑素瘤的发病机制中可能起一定作用.     

前哨淋巴结的检测与恶性黑色素瘤手术效果的关系

恶性黑色素瘤(Malignant melanoma,MM),简称恶黑,是皮肤恶性肿瘤中常见的一种,而且每6～10年MM的发生率就以一倍的速度增加。白种人发病率高于有色人种,约0.16‰,而澳大利亚昆士兰的恶性黑色素瘤发生率竟高达0.284‰,我国恶性黑色素瘤发病率约0.008‰。恶性黑色素瘤手术治疗是有效的疗法之一,手术效果与诸多因素有关,其中切除瘤体边缘外的距离,瘤体侵犯的深度(瘤体厚度)及前哨淋巴(Sen-tinel node)的受累状况是学者关注的几个重点。本文只介绍PRS 2003年有关手术治疗与前哨淋巴结的关系的几篇最新资料。PU等[1]对头颈部早期恶性黑色素…     

LRP1促进黑素瘤A375细胞的转移

目的探讨低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(low-density lipoprotein receptor-related protein-1,LRP1)与黑素瘤转移的关系。方法沉默黑素瘤细胞A375的LRP1基因,测试划痕实验和Transwell实验;利用免疫组织化学(IHC)检测组织芯片上正常皮肤组织和黑素瘤皮肤组织的LRP1蛋白表达情况。结果黑素瘤A375细胞中沉默LRP1基因后,黑素瘤A375细胞的迁移能力和转移能力减弱;组织芯片免疫组织化学结果发现LRP1蛋白在黑素瘤皮肤组织中相对于正常皮肤组织表达增高。结论 LRP1蛋白可以促进黑素瘤A375细胞的转移;LRP1蛋白可能成为黑素瘤潜在的肿瘤标记物以及黑素瘤诊断治疗的靶蛋白。     

恶性黑色素瘤的新概念

过去认为恶性黑色素瘤是一种危险而能致死的癌肿,近年改变了这种看法。作者等资料提出原发性黑色素瘤的10年生存率为64％。目前最常见的浅部扩散黑色素瘤大都有明显的浅部进行性生长的病史,平均为6年。长时期浅部生长,加以局限于皮肤,从而促使能早期识别,对治疗和预后都有明显的进展。以1949年前后作比较,黑色素瘤的平均