胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)在MDS患者骨髓CD34阳性细胞中的表达

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34~+细胞表面胰岛素样生长因子I型受体(IGF-IR)的表达状况。方法:采用流式细胞术检测18例正常对照及100例MDS患者CD34~+细胞表面IGF-IR的表达。结果:100例MDS患者骨髓CD34~+细胞IGF-IR的平均表达率为(41.0±28.1)%,明显高于正常对照中的IGF-IR表达率(4.3±1.8)%(P0.0001),其中22例高危组患者CD34~+细胞IGF-IR表达率较低危组(78例)明显增高[(66.5±27.8)%vs(34.5±24.9)%](P0.0001);23例有染色体异常患者的CD34~+细胞的IGF-IR表达率较染色体正常组患者(77例)明显增高[(56.0±30.9)%vs(36.9±26.2)%](P0.01)。结论:IGF-IR在MDS患者CD34~+细胞中过度表达,提示IGF-IR可能参与MDS的起源、发生及发展。IGF-IR在高危组及染色体异常组增高更明显,提示IGF-IR可能与细胞的恶性克隆增殖有关,有望为MDS患者的预后与转归的评估提供依据。     

骨髓增生异常综合征Cyr61和血管内皮细胞生长因子的表达及其相关性研究

目的 研究富半胱氨酸61(Cyt61)基因在骨髓增生异常综合征(MDS)不同亚型中的表达情况,探讨Cyr61基因在MDS发生、发展及向急性髓系白血病(AML)演变过程中的意义及其与血管内皮生长因子(VEGF)基因的关系.方法 采用RT-PCR和免疫组化SP法对28例MDS患者、12例AML(其中包括4例由MDS转变而来)患者和10例对照者骨髓单个核细胞(BMMNC)中Cyr61和VEGF mRNA和蛋白质水平进行检测.结果 Cyr61和VEGF mRNA在MDS组和AML组中的表达高于对照组,差异有统计学意义.Cyr61和VEGF mRNA在高危型MDS(RAEB-Ⅰ、RAEB-Ⅱ)(0.3998±0.2467,0.4775±0.1342)和AML患者中的表达(0.4594±0.1737,0.4967±0.2324)明显高于低危型MDS(RA、RARS、RCMD)患者中的表达(0.2213±0.1465,0.2872±0.2341)(P值均＜0.05).高危型MDS患者Cyt61和VEGF mRNA的表达水平和AML患者相比差异无统计学意义.MDS患者Cyr61和VEGF蛋白的表达水平高于对照组,差异有统计学意义.高危型MDS患者Cyr61和VEGF蛋白的表达水平[(38.7±2.9)%,(43.2±2.7)%]明显高于低危型MDS患者[(31.4±3.1)%,(33.5±3.4)%](P＜0.05).MDS患者Cyr61和VEGF的表达呈明显正相关关系(r=0.8762,P＜0.01).结论 Cyr61和VEGF可能在MDS骨髓血管生成及病情发展过程中发挥重要作用.     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体在恶性血液病骨髓有核细胞的表达及其抗凋亡作用

为探索胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)在骨髓增生异常综合征(MDS)和急性髓细胞白血病(AML)骨髓有核细胞表面的表达及其与细胞凋亡的关系,收集MDS和AML患者各16例骨髓有核细胞,经离心涂片机制片,用免疫酶标记方法(APAAP)及TdT凋亡检测(TUNEL)法先后在同一标本上检测IGF-IR表达和凋亡信号,并以16名正常人骨髓有核细胞作对照.结果显示①MDS组骨髓细胞IGF-IR表达[(56.8±14.3)%]高于正常对照[(40.4±9.6)%](P＜0.01),AML组骨髓细胞IGF-IR表达[(86.8±13.8)%]高于正常对照(P＜0.01),AML骨髓细胞IGF-IR表达高于MDS骨髓细胞(P＜0.01);②MDS组骨髓细胞凋亡率为[(5.4±3.0)%]高于正常对照[(1.2±0.9)%](P＜0.01),AML组骨髓细胞凋亡率为[(0.3±0.4)%]低于正常对照(P＜0.01),MDS组细胞凋亡率明显高于AML组(P＜0.01);③细胞凋亡主要发生在IGF-IR阴性细胞[(9.0±4.8)%],IGF-IR阳性细胞中凋亡细胞仅占[(1.4±2.4)%](P＜0.01),IGF-IR表达与细胞凋亡呈负相关(r=-0.852;P＜0.01);④MDS骨髓细胞IGF-IR表达阳性率RAEB/RAEB-t/CMML组高于RA/RAS组,分别为(64.1±3.2)%和(53.5±16.2)%,但差异无显著性,细胞凋亡率RAEB/RAEB-t/CMML组低于RA/RAS组,分别为(3.1±2.1)%和(6.4±2.8)%,(P＜0.05);⑤MDS和AML中IGF-IR阳性率与原始细胞百分比存在明显的正相关(r=0.677;P＜0.01).结论MDS和AML造血细胞过度表达IGF-IR.IGF-IR表达增高可能预示造血细胞的恶性增殖倾向并通过某种途径抑制细胞凋亡.如果能证实此点,则抗IGF-IR治疗有希望成为治疗MDS和AML的新方法.     

胃泌素释放肽受体与胰岛素样生长因子1受体对宫颈癌及其淋巴转移的诊断价值

目的 探讨胃泌素释放肽受体(gastrin-releasing peptide receptor,GRPR)与胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factors Ⅰ-receptor,IGF-ⅠR)对宫颈癌及淋巴转移的诊断与预测价值.方法 采用免疫组织化学方法检测106例宫颈癌患者的宫颈组织石蜡包埋标本中的GRPR与IGF-ⅠR,观察两者在宫颈癌不同临床分期、病理分级,有无淋巴转移,不同肌层浸润程度中的表达水平.结果 在宫颈癌不同临床分期及病理分级中GRPR与IGF-ⅠR的表达差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),而在有无淋巴转移、肌层浸润≤1/2与＞1/2之间GRPR的表达差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05),IGF-ⅠR的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 GRPR与IGF-ⅠR对宫颈癌的诊断有一定的价值,而GRPR在宫颈癌淋巴转移中的表达对宫颈癌的预后具有比较理想的预测价值.     

骨髓增生异常综合征骨髓造血祖细胞凋亡与Fas抗原,bcl-2,c-myc的表达及HGFs的影响

骨髓增生异常综合征(MDS)是发生在多能干细胞阶段的异质性克隆性疾病。MDS患者骨髓造血祖细胞增殖、分化过程中存在过度凋亡现象,可能与细胞凋亡密切相关的fas,bcl-2,c-myc和p53等基因异常表达有关。为此,我们用间接荧光标记、流式细胞仪检测了15例MDS患者骨髓造血祖细胞(CD34~ 细胞)体外增殖、分化过程中bcl-2,c-myc蛋白和Fas抗原表达的变化,观察rhEpo,rhIL-3,rhGM-CSF对其影响,并分析这些基因产物表达与造血祖细胞凋亡的关系。新分离出的对照组骨髓CD34~ 细胞Fas抗原呈低水平表达(8.10±3.60％),MDS患者Fas抗原的表达较对照组明显增加(26.32±10.25％),差异显著(P<0.01),体外培养10天后,增加更为明显(40.33±13.83％),且与细胞凋亡呈正相关(r=0.98)。在新分离出的骨髓CD34~ 细胞中,MDS患者bcl-2蛋白的表达(89.90±1.72%)与对照组(84.60±2.40%)无统计学差异,体外培养10天后,MDS患者bcl-2的表达为23.44±9.83％,较对照组(45.11±5.42％)有明显下降,差异具有显著性(P<0.01)。大剂量的GM-CSF,IL-3(均为100 U/ml)可促进MDS患者骨髓细胞bcl-2蛋白的表达,使bcl-2/c-myc比值降低,从而抑制细胞凋亡。MDS患者Fas抗原与bcl-2蛋白的表达呈负相关(r=-0.88)。     

Th17细胞在类风湿关节炎患者外周血中的表达及临床意义

目的 探讨Th17细胞在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的表达及临床意义.方法 选取活动期RA患者33例(其中合并骨侵蚀19例)、稳定期RA患者27例及健康对照组30例为研究对象.运用流式细胞术胞内细胞因子染色的方法检测研究对象外周血Th17细胞,并进一步分析其与疾病活动性(DAS28评分)和骨侵蚀的关系.结果 60例RA患者外周血Th17细胞表达率为(1.60±0.51)％,健康对照组为(0.81±0.21)％,差异有统计学意义(t=10.30,P＜0.01).其中,活动期RA患者外周血Th17细胞的表达率为(1.94±0.38)％,显著高于稳定期RA患者[(1.19±0.27)％]和健康对照组(t值分别为8.85和14.60,P均＜0.01),而稳定期RA患者外周血Th17细胞的表达率亦高于健康对照组(=5.88,P＜0.01).在活动期RA患者中,19例存在骨侵蚀的患者外周血Th17细胞的表达率显著高于14例无骨侵蚀的患者[(2.09±0.39)％与(1.74±0.29)％,t=2.83,P＜0.01].RA患者外周血Th17细胞的表达与DAS28评分呈正相关(r=0.86,P＜0.01).结论 RA患者外周血有高水平的Th17细胞表达,并与疾病活动性和骨破坏相关.Th17细胞可能在RA发病及病情发展中起重要作用.     

骨髓增生异常综合征患者的骨髓细胞端粒酶活性研究

为了研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者的骨髓单个核细胞中端粒酶的表达特点,并与正常骨髓和急性白血病骨髓进行比较,用PCR-ELISA法对20例正常骨髓、21例骨髓增生异常综合征和32例急性白血病骨髓单个核细胞的端粒酶活性进行了半定量检测.结果发现正常骨髓细胞端粒酶表达范围0-0.30 U,平均(0.11±0.08)U,其中仅有3例阳性.急性白血病骨髓细胞端粒酶表达范围0-0.96 U,平均(0.42±0.26)U,阳性率78.1%,与正常骨髓相比,有显著性差异(P＜0.01).MDS骨髓细胞端粒酶的表达范围0-0.97 U,平均为(0.27±0.19)U,阳性率为66.7%.与正常相比,端粒酶表达均值之间的差别有显著性(P＜0.05),其中高风险组端粒酶表达较高(P＜0.05).按IPPS评分等级分为INT-1,INT-2和HIGH组的MDS骨髓细胞端粒酶活性水平之间有显著性差异(P＜0.05).端粒酶活性与染色体异常程度无明显关系.结论提示,正常骨髓细胞具有临界水平的端粒酶活性,急性白血病骨髓细胞端粒酶活性显著升高,而MDS骨髓细胞端粒酶活性则介于正常与急性白血病骨髓细胞端粒酶活性之间,其中高风险组、按IPPS评分预后差的MDS端粒酶活性较高.     

骨髓增生异常综合征患者CD4+CD25+调节性T细胞及血清白细胞介素-10表达水平的变化及意义

目的 探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)及血清白细胞介素(IL)-10的变化及意义.方法 选取2010年10月至2012年12月江苏省兴化市人民医院血液科收治的23例初诊MDS患者为研究对象,纳入研究组,再根据MDS国际预后评分系统(IPSS)将其分为4个亚组,分别为高危型组(n=5),中危Ⅰ型组(n=11),中危Ⅱ型组(n=4),低危型组(n=3).选择同期于本院就诊的10例非恶性免疫性血液病患者纳入对照组.分别采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测研究组各亚组及对照组患者CD4+ CD25+ Treg比例与血清IL-10表达水平,并运用统计学方法进行分析比较.研究组各亚组与对照组患者年龄、性别构成比等基线资料比较,差异均无统计学差异(P＞0.05).本研究遵循的程序符合江苏省兴化市人民医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员批准,征得受试对象的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书.结果 ①研究组CD4+ CD25+ Treg比例和血清IL-10表达水平分别为(6.89±1.28)％和(7.02±1.83) μg/L,显著高于对照组的(2.72±0.46)％和(3.72±1.76) μg/L,差异均有统计学意义(t=5.263,3.824;P＜0.05).②研究组4个亚组中,CD4+CD25+ Treg比例及血清IL-10表达水平整体比较,差异均有统计学意义(F=10.464,9.898;P＜0.05).其中,低危型组和中危Ⅰ型组,以及中危Ⅱ型组和高危型组CD4+ CD25+ Treg比例与血清IL-10表达水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);而低危型组和中危Ⅱ型组,低危型组和高危型组,中危Ⅰ型组和中危Ⅱ型组,以及中危Ⅰ型组和高危型组CD4+ CD25+ Treg比例及血清IL-10表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).③研究组中,MDS患者外周血CD4+ CD25+ Treg比例与血清IL-10表达水平呈正相关关系(r=0.326,P=0.022).结论 CD4+ CD25+ Treg的数量和(或)功能失衡在MDS的发生、发展过程中起着重要作用,且CD4+ CD25+Treg比例及血清IL-10表达水平随预后危险级别的升高而升高,提示免疫异常是MDS发生、发展的一个促进因素.因此,CD4+ CD25+Treg有望成为MDS免疫靶向治疗的新靶点.     

流式细胞术定量检测骨髓细胞免疫表型异常对MDS患者诊断及预后的参考价值研究

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者采用流式细胞术检测骨髓细胞免疫表型对于临床诊断及治疗的应用价值。方法随机选取2011~2015年间160例患者骨髓标本,按是否为MDS分为MDS组及非MDS组,每组80例。MDS组:难治性贫血伴原始细胞增多Ⅰ(RAEB-Ⅰ)35例,RAEB-Ⅱ28例,难治性血细胞减少伴多系发育异常(RCMD)17例。比较不同细胞系群在各组中所占比率,并对两组患者及MDS组不同分型下流式积分值进行比较,采用Spearman相关性分析法分析流式积分与MDS分型及国际预后积分系统(IPSS)预后相关性。结果 MDS组的原始细胞群(7.58±3.9)%、单核细胞群(7.21±4.18)%、有核红细胞群(10.38±6.77)%及淋巴细胞群(23.33±10.19)%比率均较非MDS组患者有明显升高(P0.05),而成熟粒细胞群(41.43±14.33)%比率有所下降(P0.05);此外,以上五个细胞群中仅原始细胞群在MDS亚型(RCMD、RAEB-Ⅰ、RAEB-Ⅱ)中差异有显著性(P0.01);MDS组及非MDS组流式积分值分别为(31.98±5.32)、(17.94±6.02)差异有显著性(P0.01);同样在MDS三个亚型中,流式积分值差异依然存在,经Spearman相关性分析,随着疾病严重程度增加,流式积分值明显升高(r=0.652,P0.01),且流式积分值与现有的IPSS相关性较好(r=0.778,P0.01)。结论 MDS患者多存在多细胞群比例失调及多抗原表达异常情况,而通过流式积分对患者骨髓细胞免疫表型异常进行分析,即可为早期诊断、治疗及预后结果判断上提供可靠的客观数据。     

IGF-ⅠR和IR在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达

本研究的目的是探讨胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin-like growth factor-Ⅰreceptor,IGF-ⅠR)、胰岛素受体(insulin receptor,IR)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的外周血淋巴细胞表面的表达及其与临床特征的关系。收集43例儿童ALL和14例健康儿童外周血标本,采用实时定量PCR检测IGF-ⅠR和IR mRNA的表达。结果表明:儿童ALL和正常儿童的外周血淋巴细胞表面均表达IGF-ⅠR mRNA。ALL初发组、复发组及高血糖组的IGF-ⅠR mRNA表达水平与正常对照组相比明显升高(P=0.000,P=0.002和P=0.05)。完全缓解组与初发组和复发组相比,IGF-ⅠR mRNA表达水平明显减低(P=0.000和P=0.018)。初发组和复发组ALL患儿外周血淋巴细胞IR mRNA表达水平明显低于正常对照组(P=0.001和P=0.018)。完全缓解组与初发组和复发组相比表达量升高,差异有统计学意义(P=0.000和P=0.001)。ALL儿童外周血淋巴细胞IGF-ⅠR mRNA和IR mRNA在不同病程阶段的表达差异有统计学意义,但表达水平与性别、年龄及初诊时白血病计数无关。结论:IGF-ⅠR的表达与儿童ALL病程相关,病情进展时(初发、复发)表达升高,病情缓解(CR)时则降低,提示IGF-ⅠR在ALL增殖中起重要作用,其表达量增高可能反映了ALL细胞恶性增殖倾向。     

急性白血病患儿T淋巴细胞亚群及血清白三烯B4含量变化的临床意义

目的 探讨急性白血病(AL)患儿外周血T淋巴细胞亚群和血清白三烯B4含量的变化及临床意义.方法 用免疫荧光流式细胞技术检测40例AL患儿(观察组)及40名正常儿童(对照组)外周血T淋巴细胞亚群CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞水平及自然杀伤(NK)细胞活性;同时采用酶联免疫吸附试验(ELSA)方法检测上述AL患儿与正常儿童血清白三烯B4含量的变化情况.结果 AL患儿CD3+T细胞[(49.51±6.53)%]、CD4+T细胞[(22.15±4.87)%]及CD8+T细胞[(23.41±3.96)%]均低于对照组[分别为(67.63±5.23)%、(34.43±5.07)%(28.17±4.61)%],差异有统计学意义(t=13.698、t=11.047、t=4.953,P＜0.01);AL患儿自然杀伤细胞活性[(5.41±4.25)%]明显低于对照组[(13.10±4.91)%],差异有统计学意义(t=7.498,P＜0.01);而AL患儿血清白三烯B4含量[(25.23±6.24)ng/L]明显高于对照组[(8.28±2.53)ng/L],差异有统计学意义(t=15.921,P＜0.01).结论 AL患儿T淋巴细胞亚群及白三烯B4发生明显改变,对揭示AL发病机制提供重要的理论依据.

Abstract：

Objective To study the changes of T lymphocyte subtype levels and serum levels of leukotriene B4 ( LTB4 )in children with acute leukemia (AL). Methods The activity of T lymphocyte subsets:CD3+ T cells,CD4+ T cells,CD8 + T cell levels and NK cell were detected in 40 cases of AL and 40 control by Flow Cytometry(FCM). The serum level of LTB4 was measured by ELISA in all subjects. Results Compared with normal control , the percentages of CD3 + T cells ( [ 49.51 ± 6.53 ] ％ vs [ 67.63 ± 5.23 ] ％ ), CD4 + T cells ([22.15±4.87]％ vs [34.43 ±5.07]％),CD8+ T cell ([23.41 ±3.96]％ vs [28. 17 ±4.61]％),NK cell ( [5.41 ± 4.25 ] ％ vs [ 13.10 ± 4.91 ] ％ ) were significantly lower in children AL patients, ( Ps ＜0.01 ). However,the serum levels of LTB4 increased significantly in AL patients compared with normal control ( [ 25.23 ± 6.24 ] ng/L vs [ 8.28 ± 2.53 ] ng/L, P ＜ 0.01 ). Conclusion T lymphocyte subtype and serum level of LTB4 showed significant changes in children AL patients compared with normal control, which revealed an important theoretical basis to AL pathogenesis.     

胰岛素样生长因子-I及其受体在糖尿病足溃疡的表达及意义

目的探讨胰岛素样生长因子-I（Insulin—likegrowthfactor-I,IGF-I）与其受体两亚基（α,B）在非糖尿病正常皮肤和单纯糖尿病患者皮肤,以及糖尿病足患者足溃疡创面中的分布和表达特征,旨在阐明其表达水平变化与糖尿病足溃疡创面的内在联系。方法按照病例入选标准收集30例糖尿病足患者,23例单纯糖尿病患者,以及25例非糖尿病正常人,取足部皮肤组织标本,经固定脱水,石蜡包埋,切片后备用。采用免疫组织化学SP法检测所有取材组织中IGF-I、IGF-IRα和IGF-IRB蛋白定位及含量。在400倍光镜下观察免疫组化结果。结果在非糖尿病正常皮肤和单纯糖尿病患者皮肤,以及糖尿病足溃疡创面皮肤中IGF—I、IGF—I Rα和IGF—IRβ都有阳性表达,但变化规律不尽相同。IGF—I的阳性细胞率单纯糖尿病组较正常对照组表达减弱（P〉0．05）,糖尿病足溃疡组较单纯糖尿病组表达进一步减弱（P〉0．05）。IGF—IRα和IGF—IRβ的阳性细胞率单纯糖尿病组较对照组表达减弱（P〉0．05）,糖尿病足溃疡组较单纯糖尿病组表达进一步减弱（P〉0．05）。结论糖尿病患者创面IGF-I的缺乏或不足可能与糖尿病所引发的内皮细胞损害有关,与糖尿病足部溃疡经久不愈有直接关系。创面IGF-IRα和IGF—IRβ表达减少,和生物活性的降低,影响细胞因子引起的信号传递和核内目的基因表达,导致创面修复失控形成慢性难愈性溃疡。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对重症急性胰腺炎大鼠小肠黏膜上皮细胞凋亡的影响

目的 研究外源性胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡及凋亡相关基因bax,bcl-2,caspase-3 mRNA表达的影响.方法 72只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为假手术组(SO组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、IGF-Ⅰ治疗组(IGF-Ⅰ组)共三组.通过胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠制作大鼠SAP模型,SO组用同样方法经胰胆管逆行注射生理盐水;IGF-Ⅰ组分别于术后30 min和术后3 h经后肢内侧皮下注射ICF-Ⅰ.各组动物分别于术后6,12,24 h处死8只,检测血浆淀粉酶,TUNEL法检测小肠黏膜上皮细胞凋亡,观察小肠组织病理学变化并进行病理评分,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小肠黏膜上皮细胞中bax,bcl-2和caspase-3mRNA的表达.数据采用SPSS 11.0统计软件分析,多组间比较采用单因素方差分析.结果 IGF-Ⅰ治疗组与SAP组各时相点相比,血浆淀粉酶和小肠病理评分均低于各相应时相点,于12 h和24 h差异有统计学意义,均P<0.05;小肠黏膜上皮细胞凋亡指数IGF-Ⅰ组与SAP组各相应时相点相比均显著降低[6 h:(13.88±1.73)vs.(19.00±2.78);12 h:(10.13±1.55)vs.(17.63±1.60);24 h:(9.50±1.07)vs.(17.25±2.76)],P<0.05;电镜示小肠组织病理变化较SAP组明显改善.bax mRNA表达在SAP组各时点较SO组相应时相点明显增高[6 h:(1.35±0.18)vs.(0.85±0.12);12 h:(1.21±0.21)vs.(0.86±0.24);24 h:(1.14±0.24)vs.(0.95±0.22)],6 h即达高峰,而在IGF-Ⅰ组的表达与SAP组相应时相点比较则明显减弱,在12 h和24 h差异具有统计学意义(P<0.05),于24 h即接近SO组;caspase-3 mRNA表达在SAP组各时相点较SO组相应时相点明显增高[6 h:(0.78±0.01)vs.(0.55±0.04);12 h:(0.79±0.04)vs.(0.57±0.05);24 h:(0.81±0.06)vs.(0.55±0.01)(P<0.01)],而在IGF-Ⅰ组的表达与SAP组相应时相点比较则明显减弱,在12 h和24 h差异具有统计学意义(P<0.05):bcl-2 mRNA的表达在SO组和SAP组均较弱且差异无统计学意义,P>0.05,而在IGF-Ⅰ组各时相点的表达则明显增强[6 h:(0.65±0.07)vs.(0.54±0.04)vs.(0.57±0.06);12 h:(0.69±0.04)vs.(0.56±0.05)vs.(0.53±0.05);24 h:(0.72±0.05)vs.(0.54±0.07)vs.(0.58±0.08),P<0.05].结论 外源性IGF-Ⅰ通过拮抗SAP大鼠小肠黏膜上皮细胞的凋亡从而可以减轻SAP大鼠肠黏膜损害,其机制可能与其上调bcl-2 mRNA表达及下调bax,caspase-3 mRNA表达有关.     

60Co γ射线致死剂量全身照射对小鼠脾脏和肠系膜淋巴结T细胞亚群表面免疫分子表达水平的影响

目的 探讨小鼠接受60Co γ射线致死剂量全身照射(TBI)后,脾脏和肠系膜淋巴结T细胞活化分子和黏附分子表达水平的变化.方法 于2012年7月至10月,选择12只无特定病原体(SPF)级雄性BALB/c小鼠为研究对象.研究对象纳人标准:周龄为10～12周龄,体重为20～25 g.按照完全随机法将其分为TBI组(接受致死剂量TBI)和对照组(未照射),每组6只.TBI组予60C0 γ放射源一次性照射(剂量率为0.66 Gy/min,总剂量为7.5 Gy).于照射后第7天,脊椎离断处死两组小鼠,无菌条件下,取其脾脏、肠系膜淋巴结,研磨后采用密度梯度离心法收集单个核细胞.采用流式细胞术检测两组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结中,CD4+T,CD8+T,辅助性T细胞(Th)1及细胞毒性T细胞(Tc)1细胞表面CD44和CD62L的表达水平.并采用统计学方法比较两组小鼠上述免疫分子表达水平.结果 照射后第7天,TBI组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结CD44+ CD4+T细胞比例为(88.1±1.1)％和(76.7±1.8)％,均低于对照组的(95.0±1.1)％和(92.8±1.4)％,且差异有统计学意义(t=-11.01、-17.82,P＜0.05);而CD44+ CD8+T细胞的比例分别为(99.0±0.3)％和(92.5±1.7)％,均高于对照组的(88.7±0.8)％和(83.4±1.6)％,差异亦有统计学意义(t=31.15、9.54,P＜0.05).TBI组小鼠肠系膜淋巴结CD44 Th1比例为(4.1±0.4)％,高于对照组的(1.0±0.2)％,且差异有统计学意义(t=14.78,P＜0.05);而两组小鼠脾脏CD44+Th1比例比较,差异无统计学意义(t=-0.93,P＞0.05).TBI组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结CD44+ Tc1比例分别为(65.5±4.6)％和(26.6±2.8)％,较对照组的(41.8±1.5)％和(18.7±1.3)％增高,且差异有统计学意义(t=9.97、6.51,P＜0.05).TBI组小鼠的脾脏和肠系膜淋巴结中的CD4+T和CD8+T细胞表面CD62L的表达水平均低于对照组,脾脏中表达水平分别为(0.3±0.0)％比(66.7±4.7)％,(1.1±0.2)％比(64.4±5.1)％;肠系膜淋巴结中为(2.6±0.3)％比(89.7±2.8)％,(9.1±0.5)％比(79.4±3.3)％,两组上述4项指标比较,差异均有统计学意义(t=-24.52、-21.53、-53.75、-36.56,P＜0.05).结论 小鼠接受TBI后,脾脏和肠系膜淋巴结的T细胞被激活,表现为活化分子CD44在效应T细胞表达升高,而黏附分子CD62L表达下调,T细胞表型改变.通过检测T细胞表面CD44、CD62L等活化及黏附分子的表达水平,可在一定程度上反映体内T细胞活化情况,为评估TBI预处理方案应用后,机体T细胞功能状态的改变提供依据.     

不同碘摄入量对Graves病自身免疫的影响

目的 探讨不同碘摄入量对Graves病(GD)患者体内细胞免疫、体液免疫的影响.方法　对甲状腺细针细胞学检查诊断为GD的患者,依据尿碘中位数(MUI)489.5 μg/L分为GD Ⅰ组(高于MUI)与GDⅡ组(低于MUI),分别对其进行游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、促甲状腺素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺激素受体抗体(TRAb)、肿瘤坏死因子(TNF-α)联合测定.分析两组各指标的差异及相关性.结果　GD Ⅰ组TRAb高于GDⅡ组[分别为(1.4±0.2)、(1.2±0.1)U/L,t =5.62,P＜0.05];GD Ⅰ组TPOAb、TGAb阳性率(分别为84.2％、78.9％)高于GDⅡ组(62.5％、50.0％)(x2值分别为4.71、7.10,P＜0.05,P ＜0.01),且GD Ⅰ组TPOAb、TGAb高滴度组所占百分比高于GDⅡ组(x2值分别为6.79、10.70,P均＜0.05).相关分析显示,TNF-α与TRAb、TPOAb呈直线正相关(r值分别为0.489、0.563,P均＜0.01).结论 高碘摄入加重GD患者的自身免疫,应限制GD患者的摄碘量.     

血红素加氧酶-1对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡及线粒体跨膜电位的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1 (HO-1)对过氧化氢(H2O2)氧化损伤肺泡Ⅰ型上皮细胞(AEC Ⅰ)凋亡以及线粒体跨膜电位(MTMP)的影响.方法 将24只健康雄性SD大鼠腹腔注射麻醉处死后取肺,分离纯化AEC Ⅰ接种于培养板,原代培养24 h后等量分为正常对照组、H2O2损伤组、HO-1保护组、HO-1抑制组4组.采用0.5 mmol/L H2O2刺激AEC Ⅰ 2.5 h建立细胞氧化损伤模型.制模后用0.2μmol/L HO-1或20μmol/L锌原卟啉Ⅸ处理给予保护或抑制.处理2.5h后用荧光显微镜观察细胞的形态学变化;分别于处理0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h5个时间点用流式细胞仪检测细胞凋亡率及MTMP去极化比例的变化.结果 荧光显微镜下观察.:H2O2损伤组可见大量呈绿色(凋亡早期)、红色(凋亡中晚期)荧光的凋亡细胞;HO-1保护组所见绿色或红色荧光细胞明显减少;HO-1抑制组与H2O2损伤组镜下所见相似.流式细胞仪检测结果显示:与正常对照组比较,H2O2损伤组细胞凋亡率增加,且随H2O2作用时间延长逐渐增加,2.5h达峰值[0.5 h:(30.27±0.74)％比(3.76±0.81)％,2.5 h:(40.46±0.91)％比(22.74±0.60)％,均P＜0.05],MTMP去极化比例明显降低(0.99±0.21比1.91±0.16,P＜0.05);与H2O2损伤组比较,HO-1保护组AEC Ⅰ细胞凋亡率明显降低[0.5 h:(5.99±0.60)％比(30.27±0.74)％,2.5h:(22.69±1.69)％比(40.46±0.91)％,均P＜0.05],MTMP去极化比例明显升高(2.02±0.12比0.99±0.21,P＜0.05);与HO-1保护组比较,HO-1抑制组细胞凋亡率明显增加[0.5 h:(30.73±1.08)％比(5.99±0.60)％,2.5h:(41.38±0.57)％比(22.69±1.69)％,均P＜0.05],MTMP去极化比例明显降低(0.98±0.09比2.02±0.12,P＜0.05).结论HO-1可保护AEC Ⅰ细胞完整性,降低细胞凋亡率并且稳定MTMP,对H2O2所致大鼠AEC Ⅰ氧化损伤具有一定的保护作用.     

肾透明细胞癌组织IGF-1和IGF-1R的表达及其临床意义

目的：探讨胰岛素样生长因子（IGF）-1及IGF-1受体（IGF—1R）在肾透明细胞癌组织的表达及其临床意义。方法：应用实时荧光定量PCR法检测IGF-1及IGF-1R基因在肾透明细胞癌组织和相应癌旁组织中的表达水平,并分析其与临床病理指标的关系。结果：IGF-1mRNA和IGF-1R mRNA在肾透明细胞癌组织中的阳性表达率均为100％,在相应癌旁组织中均为80％。肾透明细胞癌组织中IGF-1mRNA和IGF-1R mRNA的相对表达强度分别为0．42±0．05、0．38±0．02,对应癌旁组织中分别为0．05±0．01和0．06±0．01,两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。肾透明细胞癌患者的AJCC分期越高,IGF-1、IGF-1R水平越高（P〈0．05）。结论：肾透明细胞癌组织和相应癌旁组织普遍表达IGF-1和IGF-1R基因,其中肾透明细胞癌存在IGF-1和IGF-1R高表达;IGF-1和IGF-1R与肾透明细胞癌密切相关,可有助于预测患者病情进展。     

输卵管妊娠患者外周血清人绒毛膜促性腺激素与局部病变组织Ki-67表达及滋养细胞浸润深度的研究

目的 将细胞增殖抗原Ki-67做为细胞增殖活性指标来探讨滋养细胞活性及输卵管患者血人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)与滋养细胞浸润深度的关系.方法 将108例手术治疗的输卵管妊娠患者所取术中切除的输卵管标本,进行光镜检查,根据滋养细胞浸润深度分为3组,Ⅰ组为滋养细胞浸润输卵管黏膜层,Ⅱ组为滋养细胞浸润肌层,Ⅲ组为滋养细胞浸润浆膜层.采用SP法检测各组标本中Ki-67的表达及术前2h内采静脉血检测 β-hCG.并对β-hCG与病变组织中Ki-67的表达及滋养细胞浸润的深度进行分析.结果 Ⅰ组的平均血β-hCG值为(1416.64±859.94)U/L,细胞增殖抗原Ki-67的阳性表达率为21.95％,Ⅱ组平均血β-hCG值为(3380.33±2392.36)U/L,细胞增殖抗原Ki-67阳性表达率为53.66％,Ⅲ组血清β-hCG值最高,平均(6999.33±4949.90)U/L,细胞增殖抗原Ki-67的阳性表达率为86.46％.Ki-67阳性表达Ⅰ组与Ⅱ组、Ⅱ组与Ⅲ组、Ⅰ组与Ⅲ组比较差异均有统计学意义(x2值分别为3.94、4.07、4.35,P均＜0.05);3组患者血β-hCG值比较差异有统计学意义(F=9.914,P＜0.01);Ki-67的阳性表达与患者血清β-hCG水平具有相关性,两者呈正相关(r=0.678,P＜0.05).结论 血清β-hCG水平越高,提示滋养细胞Ki-67阳性表达率越高,滋养细胞浸润输卵管壁亦越深.