腺苷、左旋精氨酸对动脉化静脉的保护的实验研究

目的研究腺苷、左旋精氨酸对兔颈外静脉移植至股动脉后的保护作用,并探讨可能的机制。方法40只新西兰大白兔随机分为A、B、C、D四组,每组10只。各组获取颈外静脉后,A组颈静脉作为正常对照组,B、C、D组作为桥血管端-端吻合于股动脉,每日分别经耳缘静脉给予B组-腺苷、C组-左旋精氨酸、D组-生理盐水各1周,于术后4周取血管桥标本,用40%甲醛固定,石蜡包埋,制成5μm切片,常规脱蜡至水,行HE染色和弹力纤维染色,光镜下观察、测定移植静脉内膜中膜厚度变化。结果移植后血管狭窄程度观察:移植4周后,各组静脉均有内膜及中膜较正常颈静脉明显增厚表现,腺苷及左旋精氨酸组内膜及中膜增厚较对照组轻。内膜中膜厚度分别为:A组(51.15±2.64)、B组(74.02±2.15)、C组(80.98±2.25)、D组(98.54士4.34),可见单纯手术组>左旋精氨酸干预组>腺苷干预组>正常对照组,各组之间P=0.000,均小于0.05,有统计学意义。结论1.兔颈外静脉移植至股动脉后内膜及中膜增厚。2.腺苷及左旋精氨酸能抑制动脉化静脉内膜及中膜增厚,有减轻桥静脉狭窄的作用。     

奥美沙坦改善大鼠移植静脉内膜重构及其超声评价

目的:观察大鼠颈外静脉移植后的内膜重构变化,研究奥美沙坦对内膜重构的干预作用。方法:制作大鼠颈外静脉移植模型,48只雄性大鼠被随机分成:①假手术组;②模型对照组;③奥美沙坦组;④生理盐水对照组等4组。观察各组血管壁内膜厚度,采用血管超声方法,观察大鼠颈外静脉移植后的血管超声显像,观察奥美沙坦干预前后各组血管搏动指数(pulsatility index,PI)的变化。结果:与假手术组相比,模型对照组移植静脉内膜厚度明显增加(P<0.01),PI明显增加(P<0.01);与模型对照组相比,奥美沙坦组桥静脉内膜厚度明显减轻(P<0.05),PI明显减低(P<0.05),生理盐水对照组与模型对照组相比内膜厚度无显著变化(P>0.05),PI值无显著变化(P>0.05)。超声检查可清晰显示移植静脉血管的走行、血管腔径大小,吻合口的延续情况。结论:奥美沙坦可以减轻大鼠移植静脉内膜重构,并改善移植血管的弹性功能,超声检查可以评估移植静脉内膜重构情况。     

C-myc siRNA抑制大鼠自体移植静脉再狭窄的研究

目的静脉移植术后c-myc基因持续高表达是导致血管内膜增生进而再狭窄的原因之一。文中探讨通过局部给药方法给予针对c-myc基因的小分子干扰RNA(siRNA)对自体移植静脉内膜增生的影响。方法建立SD大鼠自体颈外静脉-颈总动脉移植模型。32只大鼠按移植静脉外膜局部给药不同处理方式方法分为未处理组(No treatment组)、凝胶组(Gel组)、无义序列组(scramble sequence group,SCR组)、c-myc RNA干扰组(C-myc siRNA组),于术后3周处死大鼠取移植静脉,光学显微镜下测量内膜厚度,免疫组化染色检测移植静脉增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、c-myc蛋白的表达,Q-RT-PCR检测移植静脉c-myc mRNA的含量。结果 C-myc siRNA组内膜厚度[(15.0±2.2)μm]显著低于No treatment组[(58.3±8.3)μm]、SCR组[(60.5±6.1)μm]和Gel组[(63.5±5.4)μm]。C-myc siRNA组静脉内膜区和中膜区PCNA阳性细胞率显著低于SCR组[分别为(8.4±2.2)%vs(68.5±5.0)%,P<0.05和(15.0±3.1)%vs(55.2±7.5)%,P<0.05],c-myc蛋白阳性细胞率C-myc siRNA组显著低于SCR组[(30.6±2.6)%vs(48.5±3.5)%,P<0.05]。C-myc siRNA组移植静脉中c-myc mRNA的表达相对量显著低于SCR组(0.48±0.05 vs 1.00±0.12,P<0.05)。结论C-myc siRNA能抑制移植静脉中平滑肌细胞的增殖,抑制内膜的增生,减轻移植静脉再狭窄程度。     

外膜涂抹川芎嗪防治静脉移植物再狭窄的实验研究

目的 探讨术中局部应用川芎嗪对自体移植静脉再狭窄的影响及其作用机制.方法 建立家兔颈总动脉自体颈外静脉移植模型,随机分为两组:pluronic-F-127 gel组和川芎嗪组.pluronic-F-127 gel组在静脉移植物外膜涂抹pluronic-F-127 gel凝胶,川芎嗪组在静脉移植物外膜涂抹由pluronic-F-127 gel凝胶携带的川芎嗪.分别于术后3、7、14 d用免疫组织化学方法检测移植静脉壁的增殖细胞(BrDU阳性细胞)数,HE、Masson染色后应用计算机图像分析系统测量术后14 d移植静脉内膜厚度、中膜厚度及内膜厚度/中膜厚度(I/M).结果 术后14 d,川芎嗪组移植静脉内膜厚度、中膜厚度、I/M值均明显低于pluronic-F-127 gel组,分别减少68.35%、22.02%,54.48%,差异有统计学意义(P<0.05);术后3、7、14 d,川芎嗪组的细胞增殖指数均低于pluronic-F-127 gel组,分别减少约31.78%、41.03%、38.75%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 用pluronic-F-127 gel携带川芎嗪涂抹自体移植静脉外膜可使移植静脉内膜、中膜增生减轻,对静脉移植物早期再狭窄有良好的防治作用,其机制可能与川芎嗪作用于移植静脉外膜细胞靶点有关.     

局部应用VEGF-165抑制兔颈移植静脉内膜增生的研究

目的 探讨局部应用VEGF-165抑制兔颈移植静脉内膜增生的机制。方法 健康家兔24只,均建立颈外静脉-颈总动脉移植模型并分为对照组及实验组。对照组移植静脉周围仅应用Pluronic-F-127,实验组移植静脉周围应用Pluronic-F-127+VEGF-165。观察静脉移植血管外膜、内膜增生情况,移植静脉VEGF及eNOS的表达量,增殖细胞核抗原PCNA表达情况。分析外膜厚度与静脉桥血管内膜增生的关系。结果 与对照组相比,实验组移植静脉内膜增厚明显减轻、而外膜明显增厚,移植静脉eNOS的表达量明显增加;实验组移植静脉平滑肌细胞向外膜方向迁移;术后免疫组化检查显示,实验组移植静脉血管壁内膜VEGF-165的蛋白含量高;两组移植静脉PCNA的表达量未及明显差异。结论 VEGF-165可以通过增加内皮eNOS表达加速移植静脉血管内皮化,促进移植静脉外膜生长促进平滑肌向外膜迁移减轻移植静脉内膜增厚。     

血管外膜局部应用缬沙坦防治自体移植静脉再狭窄的实验研究

目的 探讨局部应用缬沙坦防治自体移植静脉再狭窄的可行性及其可能机制.方法 建立家兔颈外静脉颈总动脉移植模型,随机分为pluronic-F-127 gel组和缬沙坦组,pluronic-F-127 gel组在静脉移植物外膜涂抹pluronic-F-127 gel凝胶,缬沙坦组在静脉移植物外膜涂抹由pluronic-F-127 gel凝胶携带的缬沙坦.分别于术后7、14、28d用免疫组织化学方法检测移植静脉增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况;HE、Masson染色后应用计算机图像分析系统检测术后14d移植静脉内膜、中膜增生情况及内膜厚度/中膜厚度值(I/M);RT-PCR 法检查术后14d移植静脉血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2)mRNA 表达情况.结果 术后14d,缬沙坦组移植静脉内膜厚度、中膜厚度、I/M值均明显低于pluronic-F-127 gel组,差异有统计学意义(P<0.05);术后7、14、28d,在同一时间点,缬沙坦组的血管平滑肌细胞增殖率均低于pluronic-F-127 gel组,差异有统计学意义(P<0.05);术后14d,缬沙坦组AT2 mRNA 表达较pluronic-F-127 gel组显著增高.结论 用携带缬沙坦的pluronic-F-127 gel涂抹自体移植静脉外膜能抑制血管平滑肌细胞增殖,减轻移植静脉内膜、中膜增生,防治移植静脉再狭窄,其机制可能是上调AT2的表达.     

局部应用雷帕霉素抑制CABG后移植静脉内膜增生

目的 探讨局部应用含雷帕霉素凝胶对冠状动脉旁路移植术(CABG)后移植静脉血管内膜增生的影响.方法 健康Yorkshire猪24只,建立CABG模型,取大隐静脉于升主动脉和冠状动脉回旋支间搭桥.动物随机分为3组(n=8):空白对照组仅行CABG术;空载体对照组于桥血管局部喷洒20%缓释载体Pluronic F-127 0.5 mL;雷帕霉素组于移植血管局部喷洒含100 mg/mL雷帕霉素的20%Phronic F-127 0.5 mL.2个月后处死动物取下桥静脉,光镜下HE染色观察血管内膜增生程度和管腔狭窄程度,免疫组化染色观察细胞增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果 与空白对照组和空载体对照组相比,雷帕霉素组内膜增生减轻,内膜厚度分别为(78.85±12.63)、(177.99±12.55)、(168.21±11.58)μm(P<0.05);管腔狭窄程度减小,管腔面积/(内膜+管腔面积)分别为0.910±0.011、0.796±0.015和0.798±0.015(P<0.05);平滑肌细胞增殖受抑制,细胞增殖指数分别为(19.0±4.6)%、(33.5±5.2)%和(36.4±5.6)%(P<0.05);细胞凋亡水平增加,凋亡指数分别为(30.3±5.4)%、(17.9±3.8)%和(19.5±4.8)%(P<0.05).结论 局部缓释雷帕霉素可以有效抑制CABG后静脉移植血管内膜增生,这种作用是通过抑制平滑肌细胞增殖以及促进凋亡而实现的.     

局部应用雷帕霉素抑制CABG后移植静脉内膜增生

目的探讨局部应用含雷帕霉素凝胶对冠状动脉旁路移植术(CABG)后移植静脉血管内膜增生的影响。方法健康Yorkshire猪24只,建立CABG模型,取大隐静脉于升主动脉和冠状动脉回旋支间搭桥。动物随机分为3组(n=8):空白对照组仅行CABG术;空载体对照组于桥血管局部喷洒20%缓释载体Pluronic F-127 0.5 mL;雷帕霉素组于移植血管局部喷洒含100 mg/mL雷帕霉素的20%Pluronic F-127 0.5 mL。2个月后处死动物取下桥静脉,光镜下HE染色观察血管内膜增生程度和管腔狭窄程度,免疫组化染色观察细胞增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果与空白对照组和空载体对照组相比,雷帕霉素组内膜增生减轻,内膜厚度分别为(78.85±12.63)、(177.99±12.55)、(168.21±11.58)μm(P<0.05);管腔狭窄程度减小,管腔面积/(内膜 管腔面积)分别为0.910±0.011、0.796±0.015和0.798±0.015(P<0.05);平滑肌细胞增殖受抑制,细胞增殖指数分别为(19.0±4.6)%、(33.5±5.2)%和(36.4±5.6)%(P<0.05);细胞凋亡水平增加,凋亡指数分别为(30.3±5.4)%、(17.9±3.8)%和(19.5±4.8)%(P<0.05)。结论局部缓释雷帕霉素可以有效抑制CABG后静脉移植血管内膜增生,这种作用是通过抑制平滑肌细胞增殖以及促进凋亡而实现的。     

外膜涂抹益气活血方防治静脉移植物再狭窄的实验研究

目的 探讨术中局部应用益气活血方对自体移植静脉再狭窄的影响及其作用机制.方法 建立家兔颈总动脉自体颈外静脉移植模型,随机分为:(1)A组,手术组;(2)B组,手术+抹胶(pluronic-F-127 gel)组;(3)C组,手术+抹益气活血方剂(由黄芪、川穹、三七组成)组,益气活血方由pluronic-F-127gel携带,涂抹于静脉移植物外膜.分别于术后7、14、28 d用免疫组织化学方法检测移植静脉增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况;HE、Masson染色后应用计算机图像分析系统检测术后14 d移植静脉内膜、中膜增生情况及内膜厚度/中膜厚度(I/M)值;应用流式细胞仪检测移植静脉DNA含量,观察血管平滑肌细胞(VSMC)的细胞周期,确定各期细胞所占的百分比.结果 术后14 d,C组移植静脉内膜厚度、中膜厚度、I/M值明显低于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.05);术后7、14、28 d,C组的VSMC增殖率低于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪分析,C组G0/G1、S、G2/M期细胞所占比例逐渐减少,A组和B组G0/G1、S、G2/M期细胞所占比例逐渐增多,与C组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 用pluronic-F-127 gel携带益气活血方涂抹自体移植静脉外膜可使移植静脉内膜、中膜增生减轻,对防治静脉移植物术后早期再狭窄有良好作用,其机制可能在于益气活血方能显著抑制VSMC的过度迁移增殖,减少细胞外基质的大量合成,从而减轻移植静脉内膜、中膜增生,对抗血管重构.     

辛伐他汀联合左旋精氨酸对自体移植静脉保护作用的实验研究

目的研究辛伐他汀联合左旋精氨酸对兔颈外静脉移植至股动脉后的保护作用,并探讨可能的机制。方法50只新西兰大白兔,随机分为辛伐他汀实验组、生理盐水对照组。术前3 d开始采用灌胃法给予辛伐他汀（10 mg/Kg溶于10 ml生理盐水）,经耳缘静脉给予左旋精氨酸（100 mg/kg）,对照组给与等量生理盐水,每天一次,直至术后取材。所有动物于术日建立自体静脉旁路移植模型：利用显微外科技术将颈外静脉端侧吻合于股动脉,于术后4周取血管桥标本,同时取0.5 cm移植静脉作为正常静脉参照。光镜下观察、测定移植静脉内膜中膜厚度变化。扫描电镜观察近吻合口处和中央部静脉桥的管腔狭窄程度（管腔增生面积与管腔面积比（S1/S2）,统计学分析各组间差异。结果移植4周后,各组静脉均有内膜及中膜较正常颈静脉明显增厚表现,辛伐他汀组内膜及中膜增厚较对照组轻。两组静脉桥的管腔狭窄程度进行比较存在明显差异。结论（1）兔颈外静脉移植至股动脉后内膜及中膜增厚。（2）辛伐他汀联合左旋精氨酸能抑制动脉化静脉内膜及中膜增厚,有减轻桥静脉狭窄的作用。     

Significance of changes in transforming growth factor-β mRNA levels in autogenous vein grafts

Background This study was designed to investigate changes in mRNA levels of transforming growth factor-β(TGF-β), collagen Ⅰ, and collagen Ⅲ in autogenous vein grafts. Methods Twenty-four New Zealand rabbits were randomly divided into 4 groups with 6 rabbits each. The external jugular veins of the New Zealand rabbits were harvested and grafted into the ipsilateral carotid artery. All rabbits were fed with a standard diet. After the operation, the rabbits were sacrificed at 1, 2, 3, or 4 weeks. TGF-β, collagen Ⅰ, and collagen Ⅲ mRNA levels in the venous grafts were measured by semiquantitative methods at every time point. The contralateral external jugular veins were also harvested and analyzed as controls. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase was used as an internal standard to normalize all samples for potential variations in mRNA content. In order to observe the expression of TGF-β protein, immunohistochemical SABC methods were used. Results One week postoperation, the mRNA level of TGF-β was upregulated to 1.73±0.19 in the vein graft and 1.21±0.16 in the control vein (P＜0.01). High mRNA levels were maintained until week 4 postoperation. The mRNA levels of collagen Ⅰ and collagen Ⅲ were also significantly increased to 2.18±0.21 versus 1.12±0.24 and 1.08±0.13 versus 0.83±0.12, respectively (P＜0.05). Immunohistochemical staining revealed a higher density of TGF-β expression in the vein grafts.Conclusions An uninterrupted increase in mRNA levels of TGF-β, collagen Ⅰ, and collagen Ⅲ is observed in autogenous vein grafts. This increase may be the major cause of intimal hyperplasia, sclerosis, and even graft failure.     

Effects and mechanisms of non-restrictive external stent for prevention of vein graft restenosis in a rabbit model

Background Among various treatments preventing vein graft restenosis, external stent is receiving more and more attention. This study aimed to investigate the effect of non-restrictive external stent on the prevention of vein graft restenosis and the potential mechanisms of platelet-derived growth factor （PDGF） in the process of restenosis.Methods Thirty-six ＂New Zealand white rabbits＂ were randomly divided into two groups, stented group （group S） and control group （non-stented group, group NS）. Each rabbit underwent a reversed autologous external jugular vein into common carotid artery bypass grafting. In group S, the vein grafts were surrounded by a non restrictive stent which was 6 mm in diameter （a kind of Dacron vascular prosthesis）; and in group NS, there was no stent to support the vein grafts.The grafts were harvested at the first week （1W）, second week （2W） and fourth week （4W） after surgery respectively. The dimensions （including the thickness and area of the intima and media, luminal area） were measured by computer-aided image analysis system, and the intimal hyperplasia ratio was defined as the percentage of the area enclosed by the internal elastic lamina occupied by the intima.Results At 1W, the difference of the thickness and area of the intima between groups S and NS was not significant （P 〉0.05）; at 2W and 4W, the thickness and area of the intima and the intimal hyperplasia ratio in group S were less significant than those in group NS （P 〈0.05）; from 1W to 4W, the thickness and area of the media in group S were smaller than those in group NS （P〈0.05）. Immunocytochemistry staining of PDGF-B showed that the percentage of positive cells of intima in both two groups was peaked at 2W, and a significantly smaller percentage was detected in group S compared with that in group NS at 2W and 4W （P 〈0.05）; the percentage of PDGF-B positive cells of media in both two groups was also peaked at 2W, and that in group S was smaller than that in group NS from 1W to 4W （P 〈0.05）; and the percentage of PDGF-B positive cells of adventitia in group S was peaked at 4W, whereas the percentage of adventitia in group NS peaked at 2W, and the percentage of adventitia in group S was greater than in group NS at 4W （P 〈0.05）.Conclusions Non-restrictive external stenting inhibits the hyperplasia of the intima and media of the vein grafts and reduces the thickness and area of the intima and media; Non-restrictive external stenting inhibits the synthesis of PDGF and changes its distribution, and then inhibits the hyperplasia of the intima.     

局部应用肝细胞生长因子对静脉移植物内膜增生的影响

目的:探讨局部应用肝细胞生长因子静脉移植物内膜增生的影响。方法:取犬一侧颈外静脉,对半剪成两段后分别吻合在双侧股动脉上,其中一侧静脉移植物在移植前用肝细胞生长因子处理(实验组),另一侧为单纯的静脉移植(对照组)。术后2周、4周分别切除移植静脉,计算机图像分析系统测量和计算内膜厚度、内膜面积,进行扫描电镜检查,用免疫组织化学方法检测静脉移植物平滑肌细胞增殖细胞核抗(PCNA)的表达。结果:实验组静脉移植物术后2周、4周内膜厚度和内膜截面积明显低于对照组(P<0.01)。实验组静脉移植物术后2周、4周的PCNA指数也明显低于对照组(P<0.01;P<0.05)。扫描电镜检查显示实验组静脉移植物内皮层破坏程度轻于对照组。结论:局部应用肝细胞生长因子能抑制静脉移植物内膜的增生。     

Effect of external stents on prevention of intimal hyperplasia in a canine vein graft model

Background  External stents have been used to reduce intimal hyperplasia of vein grafts. The aim of the present study was to define the size of an external stent appropriate for a particular graft by comparing vein grafts with different sizes of external stents.
Methods  A series of paired trials was performed to compare femoral vein grafts with different sizes of external stents, where 30 modeled canines were equally divided into three groups: 6-mm external stent vs non-stent control, 4-mm vs 6-mm external stent, and 4-mm vs 8-mm external stent. At day 3 after operation, color Doppler flow imaging (CDFI) was done to observe blood flow in the lumen. Four weeks later, CDFI was re-checked and the veins were harvested, stained and measured.
Results  All grafts were patent without formation of thrombosis. External stents significantly reduced intimal thickness of the vein grafts with a 6-mm external stent compared with the vein grafts without external stents (P<0.05).The vein grafts with the 4-mm external stent had similar intimal, medial and adventitial thicknesses compared with those with the 6-mm external stent and the 8-mm external stent.
Conclusions  External stents can reduce intimal hyperplasia of vein grafts. Stents of different diameters exert the similar effect on prevention of intimal hyperplasia.

     

p27kip1基因在大鼠自体静脉移植中的表达

目的:观察p27kip1基因在静脉移植模型中的动态表达及与内膜增生的关系。方法:建立大鼠自体静脉移植动物模型,分别于术后1,2,3,7,14,28d取材。Verhoeff染色观察各时间点内膜厚度及管壁厚度;RT-PCR、原位杂交、Western blot检测p27kip1mRNA及蛋白的变化,免疫组化(SABC)法检测p27kip1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:术后7d内膜明显增厚,14d内膜增厚达到高峰(P<0.01)。p27kip1蛋白在正常对照血管可见表达,术后3d内无表达,术后7d开始表达,14d明显增高,28d达到高峰(P<0.01)。mRNA的表达于术后7d出现增高,持续表达至28d,其间各时间点之间表达无明显差异。PCNA的表达于术后7～14d达到高峰。结论:p27kip1基因的表达可能是抑制移植静脉内膜增生的环节之一,其可能成为治疗移植血管狭窄、闭塞的目的基因。     

可降解外套管抑制自体移植静脉内膜增生的研究

目的:研究可降解的外套管束缚自体移植静脉对减轻桥静脉内膜、中层增厚的作用,探讨其防止或延缓桥静脉再狭窄的机制。方法:建立犬自体股静脉至股动脉的端-端静脉移植模型,其中一侧桥静脉外加聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)做成的圆柱形外套管(外套管组),对侧单纯静脉移植作为对照组。超声多普勒观察在体移植血管的通畅性。术后2、4、6、8、24周再次手术取桥静脉。光镜观察移植静脉中段内膜、中层厚度,胶原、弹力纤维变化;透射电镜观察静脉壁基底膜、细胞排列、细胞增殖、凋亡,细胞骨架结构,细胞外基质(ECM)变化等;免疫组化观察静脉壁细胞增殖、凋亡及分布。结果:术后40条静脉均通畅,吻合口无狭窄。对照组术后2周见内膜、中层增厚;随时间延长,增厚更加明显。外套管组术后2周内膜、中层稍增厚;4~24周持续增厚,但各时间点均明显小于对照组(P<0.05,P<0.01);对照组术后2周见中层平滑肌、外膜弹力纤维断裂严重,而外套管组无明显断裂。新生静脉内膜由平滑肌细胞(SMCs)和大量ECM构成,中层主要为SMCs和ECM;术后2周,静脉壁细胞增殖和凋亡率都较高,主要分布在内膜和中层,外套管组明显低于对照组(P<0.01),4周以后两者显著下降,凋亡率高于增殖率(P<0.05)。结论:可降解外套管在术后早期可保持静脉结构的完整性,减轻管壁结构破     

非限制性外支架对兔移植静脉血小板源性生长因子表达的影响

目的 探讨非限制性外支架防治移植静脉再狭窄的可能作用机制. 方法新西兰白兔随机分为支架组和对照组,每组18只.均实施颈外静脉-颈总动脉移植术,支架组在移植静脉外套以外支架(直径6 mm的人造涤纶血管),对照组无外支架.术后7、14、28 d每组各6只兔手术取出移植静脉,分别进行血小板源性生长因子B链(PDGF-B)免疫组织化学染色,计算PDGF-B阳性率;以RT-PCR方法检测PDGF-B mRNA的表达量. 结果支架组移植静脉内膜PDGF-B阳性率术后14、28 d均明显低于对照组(15.2%±3.6%vs 21.6%±4.6%,6.5%±2.6%vs 12.5%±4.4%,均P＜0.05);中膜阳性率术后7、14、28 d均明显低于对照组(13.8%±4.6%vs 25.4%±6.2%,21.3%±4.4%vs 35.7%±7.3%,7.2%±3.2%vs 19.2%±5.4%,均P＜0.01);外膜阳性率术后28 d达高峰,而对照组在术后14 d达高峰,28 d时支架组阳性率明显高于对照组.RT-PCR检测显示术后7、14、28 d 2组移植静脉均可见PDGF-B特异条带(457 bp),各时间点支架组PDGF-B mRNA的表达均明显低于对照组(31.2%±6.5%vs 45.4%±8.4%,P＜0.05;42.3%±6.2%vs 65.2%±11.5%,P＜0.01;21.3%±5.6%vs 36.2%±9.4%,P＜0.01). 结论抑制移植静脉PDGF合成、改变PDGF分布规律可能是非限制性外支架防治移植静脉再狭窄的作用机制之一.     

静电纺丝血管外支架缓释siRNA纳米粒抑制静脉移植物内膜增生

目的 评价聚(乳酸.羟基乙酸)共聚物/壳聚糖(PLGA/CS)纳米粒超细纤维复合膜血管外支架缓释组织因子小干扰RNA(TFsiRNA)抑制静脉移植物内膜增生的有效性.方法 使用改进静电纺丝技术制备PLGA/CS纳米粒超细纤维复合膜.氯仿溶解复合膜PLGA后测量壳聚糖含量,检测超细纤维复合膜吸水率.建立SD大鼠右颈外静脉一颈总动脉间置移植模型,随机分为5组:A组(PLGA/CS-TFsiRNA纳米粒外支架组),B组(PLGA/CS-Stealth~(TM) RNAi阴性对照纳米粒外支架组),C组(PLGA/CS空白纳米粒外支架组),D组(PLGA外支架组),E组(无外支架组).BLOCK-iT~(TM)荧光寡核苷酸检测静脉移植物转染.分别于术后1、3、7、14、28 d取标本.免疫印迹和免疫组化检测管壁组织因子蛋白表达,免疫组化检测管壁增殖细胞核抗原表达,计算机图像系统分析新生内膜厚度.结果 通过调节静电纺丝PLGA和壳聚精纳米粒溶液流量控制复合膜中PLGA和壳聚糖含量.复合膜由于加入壳聚糖具有良好吸水性.术后12 d静脉移植物管壁可检测BLOCK-iT~(TM)荧光寡核苷酸绿色荧光.术后3、7 d,A组组织因子蛋白表达明显低于其他组(P＜0.05,其中术后3 d分别为0.40±0.03与0.75±0.01、0.75±0.05、0.77±0.07,术后7 d分别为0.30±0.03与0.84±0.05、0.86±0.06、0.85±0.06),术后14 d,A组增殖细胞核抗原表达明显低于其他组(P＜0.01,13.O%±2.6%与25.0%±2.8%、24.2%±3.9%、24.0%±4.1%、44.8%±3.7%),A组术后28 d新生内膜厚度明显低于未治疗组,P＜0.01,(18.8±2.9)μm与(38.7±5.0)μm、(37.3±3.6)μm、(37.2±2.6)μm、(67.5±4.8)μm.结论 静电纺丝制备PLGA/CS纳米粒超细纤维复合膜血管外支架缓释组织因子siRNA能有效抑制大鼠静脉移植物早期内膜增生,这将成为基因治疗静脉移植物狭窄一种新方法.