急性白血病细胞周期调节因子的表达及意义

目的 研究急性白血病患者骨髓细胞周期调控因子细胞S期激酶相关蛋白(Skp2)、P27、周期蛋白(cyclin) E 和Cyclin A1的表达及其临床意义.方法 将60例白血病患者分为初发组(n=41),复发组(n=9),完全缓解组(n=10),将非恶性血液病患者作为对照组(n=10).采用免疫细胞化学方法检测骨髓细胞Skp2、P27、Cyclin E 和Cyclin A1的表达,分析其表达与化疗疗效的关系.结果 急性白血病初发组及复发组Skp2、Cyclin E和Cyclin A1表达明显高于完全缓解组及对照组(P＜0.05),P27在初发组、完全缓解组及对照组的表达差异无统计学意义(P＞0.05),在复发组的表达较其他3组低(P＜0.05).急性白血病患者骨髓细胞Skp2、P27、Cyclin E和Cyclin A1阳性表达与患者年龄、性别、外周血乳酸脱氢酶水平无相关性(P＞0.05);Skp2与外周血白细胞计数呈正相关(P＜0.05);Skp2与完全缓解率呈负相关(P＜0.05),P27与其呈正相关(P＜0.05).Skp2和P27的比值比分别是0.076和6.842.结论 Skp2和P27可能是影响急性白血病化疗完全缓解率的独立预后因素.     

凋亡相关因子XAF-1和XIAP的表达及与膀胱癌复发的相关性研究

目的探讨凋亡抑制蛋白XIAP和XIAP相关因子1(XAF-1)的表达及与膀胱癌复发的相关性。方法以第一次复发的20例膀胱癌患者(复发组)和其对应的20例初发的膀胱癌患者(初发组)为研究对象,对照组为20例复发的膀胱癌患者的正常膀胱组织。采用免疫组化方法(SABC)检测XIAP和XAF-1在初发组、复发组、对照组中的表达水平,分析与膀胱癌进展和复发的关系,同时分析XIAP和XAF-1与肿瘤数目、是否肌层浸润、临床分期及恶性程度分级的相关性。结果在初发组与复发组中XIAP的表达强度与临床分期、恶性程度分级呈正相关(P0.05);即XIAP在不同的临床分期、恶性程度分级的表达强度不同,分期越高,表达强度越强。在初发组与复发组中XAF-1的表达强度与临床分期、恶性程度分级呈负相关(P0.05),即XAF-1在不同的临床分期、恶性程度分级的表达强度不同,分期越高,表达强度越低。XIAP、XAF-1的表达强度在肿瘤数目、是否肌层浸润均无明显相关性(P0.05)。对照组、初发组、复发组XIAP指标与XAF-1指标相关(P0.01),呈负相关,XIAP指标越高,XAF-1指标相对低。结论 XIAP异常高表达和XAF-1异常低表达可能在膀胱癌发病和病情进展中起重要作用,为膀胱癌的治疗和判断预后提供了新思路。     

JNK／c-Jun 信号通路参与介导 EB 病毒编码的BARF1基因上调胃癌细胞 Bcl-2的表达

目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对胃癌细胞JNK-MAPK信号通路活性及Bcl-2基因表达的影响。方法:以p SG5空载体转染的胃癌细胞系BGC823(BGC-SG)为对照,采用蛋白质印迹分析稳定表达BARF1的BGC823细胞(BGC-BARF1)中,以及采用JNK-MAPK的特异性抑制剂SP600125处理后JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平以及cJun和Bcl-2蛋白的表达。结果:与BGC-SG相比,BGC-BARF1细胞中JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平,以及c-Jun和Bcl-2蛋白的表达均显著提高(P<0.05)。SP600125处理后,c-Jun蛋白的磷酸化水平以及c-Jun和Bcl-2蛋白的表达均显著下降。结论:JNK/c-Jun信号通路参与介导BARF1上调胃癌细胞中Bcl-2的表达。     

人前列腺癌细胞骨转移潜能差异表达蛋白的研究

目的 研究人前列腺癌不同骨转移潜能细胞株的差异表达蛋白质图谱,筛选前列腺癌骨转移相关蛋白并探讨其功能.方法 应用蛋白质组学和免疫印迹等.方法比较和筛选来源相同但具有不同骨转移潜能的前列腺癌细胞株(PC-3/骨转移亚克隆T3B/淋巴结转移亚克隆P2-4)的蛋白质表达差异.构建高迁移率族蛋白1(HMGB1)的真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1siRNA转染至高骨转移潜能的T3B细胞中,通过动物实验观察HMGB1对前列腺癌细胞骨转移的影响.结果 蛋白质组学技术获得6个有意义的蛋白质,分别参与细胞骨架构成、转录调控、磷酸化过程和物质代谢等功能.成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1siRNA,转染后可使T3B细胞HMGB1的蛋白表达水平显著降低(P<0.05).动物实验显示,抑制HMGB1表达可明显降低T3B细胞的骨转移能力(P<0.05).结论 高骨转移潜能的前列腺癌细胞株中存在与前列腺癌骨转移相关的蛋白质,HMGB1与前列腺癌骨转移密切相关.应用siRNA干扰技术能有效地抑制HMGB1基因的表达,同时也能有效抑制前列癌细胞的骨转移能力.     

胃癌前病变内镜活检组织γH2AX蛋白的表达及意义

目的 探讨胃癌前病变内镜活检组织γH2AX蛋白的表达及意义.方法 应用流式细胞技术检测53例患者胃癌前病变组织中γH2AX蛋白的表达情况.结果 肠型化生和异型增生组织γH2AX蛋白的相对含量高于正常组织(P＜0.01);异型增生组织γH2AX蛋白的相对含量高于肠型化生组织(P＜0.05).结论 γH2AX蛋白在胃癌前病变组织中的表达反映了胃黏膜上皮细胞发生DNA双链断裂的情况,可能与胃癌前病变演变成胃癌的几率大小有关.     

ATF2在低钾诱导小脑颗粒神经元凋亡中的作用

目的 探讨bZip家族蛋白ATF2在撤钾诱导小脑颗粒神经元凋亡时的作用及机制.方法 体外培养小脑颗粒神经元,用含5mM KCl的无血清培养基(简称为低钾或5K)处理诱导凋亡,Western blot检测ATF2和c-Jun蛋白的表达及磷酸化水平;免疫耗竭检测ATF2是否主要与c-Jun形成复合物;转染小分子干扰RNA检测沉默ATF2与c-Jun表达对神经元凋亡的影响.结果 低钾刺激使ATF2和c-Jun磷酸化水平增加;ATF2主要与c-Jun形成复合物.分别沉默ATF2或c-Jun表达能抑制神经元凋亡(P＜0.05),且抑制凋亡程度没有差异(P＞0.05).结论 低钾条件下,ATF2主要通过与c-Jun形成复合物促进小脑颗粒神经元凋亡.     

HIF-1α表达与膀胱癌分级与复发相关性研究

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在膀胱癌中的表达及与肿瘤微血管计数(MVC)、分级和复发的关系.方法用免疫组织化学染色显示膀胱癌中HIF-1α表达,并用计数定量血管形成,回顾性分析HIF-1α表达与MVC、肿瘤分级和复发的关系.结果HIF-1α表达,19例正常膀胱黏膜均为阴性,在Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ级膀胱癌中HIF-1α阳性率分别为29%,41%和64%,Ⅰ与Ⅲ级阳性率差异显著(P＜0.05).19例正常膀胱黏膜MVC为0,在Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ级膀胱癌中MVC分别为39.72±11.62,44.70±11.52和52.36±16.83,其中Ⅰ与Ⅲ级差异显著(P＜0.05);根据肿瘤属于初发或复发分组,初发组51例,复发组19例,HIF-1α阳性率分别为35%和74%,差异显著(P＜0.05).初发组和复发组MVC分别为42.68±13.73和53.47±12.50,差异显著(P＜0.05).结论HIF-1α的表达与膀胱肿瘤MVC、分级以及复发呈正相关,提示HIF-1α表达与膀胱癌的生物学行为有关,可作为膀胱癌生物学行为的标志.     

蛋白质组学方法识别nm23-H1为鼻咽癌的转移抑制蛋白和预后因子

目的:筛选鼻咽癌(NPC)转移相关蛋白质,为鼻咽癌防治提供科学依据。方法:采用二维电泳和质谱技术筛选不同转移潜能鼻咽癌细胞系(5-8F和6-10B)的差异表达蛋白质,并应用Western 印迹对部分差异蛋白质进行验证;使用siRNA抑制差异蛋白质nm23-H1的表达,分析nm23-H1表达水平对鼻咽癌细胞体外侵袭能力的影响; 应用免疫组织化学染色分析nm23-H1表达水平与鼻咽癌临床病理特征和预后的关系。结果:在不同转移潜能鼻咽癌细胞系中鉴定了15个差异表达的蛋白质,并选择性证实3个差异蛋白质;siRNA下调nm23-H1的表达能增强6-10B鼻咽癌细胞的体外侵袭能力;淋巴结转移鼻咽癌组织中nm23-H1的水平显著低于原发性鼻咽癌;nm23-H1的表达水平与鼻咽癌淋巴结和远处转移、临床分期和复发正相关;生存分析显示nm23-H1低表达的鼻咽癌患者预后差;多因素分析显示:nm23-H1表达水平是鼻咽癌患者独立的预后因子。结论:nm23-H1是鼻咽癌的转移抑制蛋白和预后因子。     

鼻咽癌复发患者EB病毒DNA及抗体的表达情况及其临床意义

目的 探讨鼻咽癌复发患者治疗前后EB病毒(EBV)-DNA、病毒衣壳蛋白抗原-IgA(VCA-IgA)和早期抗原-IgA(EA-IgA)的表达情况及其临床意义.方法 选择鼻咽癌复发患者124例为复发组,其中手术组77例,采用鼻内镜手术或鼻内镜手术联合放、化疗;放化疗组47例,采用放疗和(或)化疗.另选取30例鼻咽癌治疗后放射性颅底骨坏死患者(无复发)为对照组.在治疗前及治疗结束时,检测所有患者血清VCA-IgA、EA-IgA、EBV-DNA阳性表达情况.结果 治疗前,复发组、对照组EBV-DNA阳性率分别为51.61％、0,两组VCA-IgA和EA-IgA阳性率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).治疗前,局部、颈部、局部及颈部复发的鼻咽癌患者间EBV-DNA、VCA-IgA和EA-IgA阳性率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).在Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期复发鼻咽癌患者中,EBV-DNA阳性率随临床分期增高而增高(P＜0.05),但VCA-IgA及EA-IgA阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗前,手术组与放化疗组EBV-DNA、VCA-IgA、EA-IgA阳性率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);治疗后,手术组EBV-DNA转阴率高于放化疗组(P＜0.05),且手术组EBV-DNA阳性率低于放化疗组(P＜0.05),但两组VCA-IgA及EA-IgA阳性率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 检测EBV-DNA可能有助于判断鼻咽癌复发和分期,手术治疗有助于清除机体的EBV.但在鼻咽癌治疗后放射性颅底骨坏死患者中仍可检出VCA-IgA、EA-IgA,建议对患者的抗体水平进行动态观察.     

鼻咽癌血清比较蛋白质组学研究

目的 采用双向电泳-质谱技术优化肿瘤抗原筛选方法,筛选鼻咽癌肿瘤抗原.方法 鼻咽癌转移组、鼻咽癌未转移组和正常对照组血清先采用高丰度蛋白去除、脱盐预处理等以优化双向电泳,图像分析3组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定.结果 通过调整、优化各个阶段的实验条件,实验结果比较稳定,重复性也比较好,分辨率得到一定的提高.图谱比较所得29个差异蛋白质点,成功鉴定了23种蛋白质.与正常组比较,转铁蛋白、锌指蛋白544、甲状腺激素结合蛋白、NM23-H1蛋白和FAD合成酶在两组鼻咽癌患者中低表达,12-脂氧合酶、血清淀粉样蛋白A1前体、细胞色素P450、sICAM-1、组织蛋白酶G和组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1等在两组鼻咽癌中均高表达.其中12-脂氧合酶、sICAM-1、组织蛋白酶G和组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1在鼻咽癌转移组中比未转移组中表达增高,而热休克蛋白70则只在鼻咽癌转移组表达.结论 双向电泳-质谱技术可发现鼻咽癌发生发展过程中血清蛋白表达谱质或量的变化,从而为鼻咽癌的早期诊断和治疗奠定基础.     

初发鼻咽癌与复发鼻咽癌差异表达基因的研究

目的：通过全基因组基因芯片研究初发鼻咽癌（pNPC）与复发鼻咽癌（rNPC）之间的差异表达基因。方法：选择rNPC和pNPC组织标本,应用Affymetrix Gene1.0 ST芯片,构建表达谱,检测两者之间的差异表达基因。结果：rNPC组与pNPC组比对,发现差异基因46个,下调基因38个,上调基因8个。这些基因参与钙结合、蛋白结合、酶活性调节等过程。结论：rNPC和pNPC之间存在基因差异表达,为了解rNPC的发生机制的研究起了一定的作用。     

应用激光捕获显微切割和蛋白质组学技术筛选鼻咽癌的差异表达蛋白质

目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的差异表达蛋白质,为寻找NPC的分子标志物提供科学依据. 方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从NPC组织和正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal epithelial tissue,NNET)中纯化NPC细胞和正常鼻咽上皮细胞(normal nasopharyngeal epithelial cells,NNEC),应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM 纯化细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾电离串联质谱(ESI-Q-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western 印迹和组织芯片(tissue microarray,TMA)免疫组织化学验证差异蛋白鳞状细胞癌抗原1(SCCA1)在两种组织中的表达水平.结果:建立了LCM 纯化的NPC细胞和NNEC的2-DE图谱,质谱鉴定了36个差异蛋白质,其中20个蛋白只在NPC表达或表达上调,16个蛋白在NPC中表达下调或缺失. Western 印迹和组织芯片免疫组织化学结果显示:SCCA1在NPC中的表达水平较NNET明显下调,与比较蛋白质组学结果一致.结论:36个差异蛋白可能与NPC的发病有关,为筛选NPC分子标志物奠定了基础.     

鼻咽癌原发病灶肿瘤细胞核蛋白提取方法的建立和优化

目的鼻咽癌细胞蛋白组分复杂,分离并分析其细胞核蛋白有助于进行肿瘤细胞蛋白质组学研究。文中建立并优化从原发鼻咽癌活检组织标本中提取肿瘤细胞核蛋白的方法。方法采用差速离心结合蔗糖密度梯度离心方法分离和富集鼻咽癌患者活检组织中肿瘤细胞的细胞核,用甲醇/三氯甲烷法和丙酮沉淀法提取核蛋白,用Western blot方法鉴定细胞核蛋白。结果分离细胞核和提取核蛋白至少需要200mg鼻咽癌组织。用差速离心和蔗糖密度梯度离心方法进行细胞核抽提,用甲醇/三氯甲烷和丙酮沉淀法提取的细胞核蛋白具有较高纯度,基本无其他细胞器污染,可用于鼻咽癌原发病灶中细胞核蛋白的提取分离。结论建立了从鼻咽癌原发病灶中提取细胞核蛋白的方法,用于鼻咽癌细胞核蛋白质组学研究。     

nm23-H1蛋白在鼻咽癌中的表达研究

目的研究nm23-H1蛋白在鼻咽癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法对30例鼻咽癌患者和22例慢性鼻咽炎患者的鼻咽部组织nm23-H1蛋白表达进行分析。结果nm23-H1蛋白在鼻咽癌组中的阳性率为（53．30％）低于慢性鼻咽炎组（90．91％，P〈0．05）；在鼻咽癌患者中，转移组的阳性率为（40．91％）低于非转移组（87．50％，P〈0．05）；nm23-H1蛋白表达未显示与患者年龄、性别相关。结论nm23-H1蛋白表达可能与鼻咽癌的发生、转移有关；nm23-H1蛋白的表达在鼻咽癌的早期诊断和预后观察有一定的参考价值。     

初诊鼻咽癌患者临床证型与外周血淋巴细胞核蛋白差异表达相关性的初步分析

目的探讨初诊鼻咽癌患者临床证型与其外周血淋巴细胞核蛋白差异表达的相关性。方法采用二维电泳差异蛋白质表达鉴别策略,在与健康对照者进行差异表达点鉴别分析的基础上,对不同证候初诊鼻咽癌患者的临床证型与外周血淋巴细胞核蛋白差异表达特点的相关性进行初步探讨。结果不同证型初诊鼻咽癌患者与健康对照者的外周血淋巴细胞核蛋白二维电泳图谱匹配分析结果表明,不同临床证型存在大量的差异表达蛋白斑点。结论不同证型初诊鼻咽癌患者外周血淋巴细胞核蛋白具有各自的差异蛋白质表达模式,这些差异蛋白质的功能特性以及与临床证型的病理关联性值得进一步深入探讨。     

蛋白质组学筛选抑癌基因CCDC19在鼻咽癌中的调控蛋白

目的本研究利用蛋白质组学筛选抑癌候选基因CCDC19在鼻咽癌中可能调控蛋白。方法提取CCDC19稳定高表达的鼻咽癌3D8和对照鼻咽癌C6细胞蛋白,并采用双向凝胶电泳(2D-PAGE)技术进行有效分离,图像扫描后获得高分辨率的2D-PAGE图谱。选用差异蛋白质组学技术筛选差异蛋白位点,然后用肽质量指纹谱(peptide mass fingerprinting,PMF)和数据库检索技术给予鉴定。荧光定量PCR和Western blot验证差异基因表达水平。结果质谱分析显示,FASN、CTSD和PGK1在CCDC19过表达的3D8细胞中表达下调,分别为-3.28、-1.64和-6.97倍。荧光定量PCR在mRNA水平验证了FASN、CTSD和PGK1以及Western blot在蛋白水平验证CTSD蛋白在3D8细胞中表达下调。结论 FASN、CTSD和PGK1可能是CCDC19在鼻咽癌中调控的靶基因。     

应用激光捕获显微切割及蛋白质组学技术筛选鼻咽癌间质相关蛋白

目的筛选与鼻咽癌（NPC）发生发展相关的特异性间质蛋白。方法采用激光捕获显微切割技术（LCM）,获取高纯度的NPC间质和正常鼻咽黏膜（NNM）间质,二维凝胶电泳（2-DE）及质谱技术,分离鉴定间质相关蛋白。Western blot及组织芯片免疫组织化学技术,验证差异蛋白S100A9在鼻咽癌间质和正常鼻咽黏膜组织中的表达水平。结果建立了鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的2-DE图谱,高通量筛选与肿瘤发生相关的间质蛋白,质谱鉴定得到60个差异蛋白。Western blot及免疫组织化学技术验证结果与蛋白质组学结果一致。结论这些差异表达的蛋白将有助于揭示鼻咽癌细胞和周围间质的关系。对间质蛋白功能的进一步研究,将有助于解析间质在肿瘤发生发展中的作用机制,从间质途径寻找肿瘤治疗的靶标。     

nm23基因与鼻咽癌的转移及预后的相关性

目的:探讨nm23-H1蛋白与鼻咽癌的转移及预后的相关性。方法:应用免疫组化法对180例鼻咽癌患者鼻咽癌组织nm23-H1蛋白表达进行分析。结果:nm23-H1蛋白在鼻咽癌患者中,表达阳性者转移发生率为49.8%,低于表达阴性者转移发生率为88.6%,两组比较差异有统计学意义(χ2=6.68,P<0.01)。nm23-H1蛋白表达未显示与患者年龄、性别相关。结论:nm23-H1蛋白表达可能与鼻咽癌的转移有关,对鼻咽癌预后观察有一定的意义。     

CDK6 在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨CDK6在鼻咽癌中的表达及临床意义。方法利用免疫组化检测CDK6在鼻咽以及鼻咽癌组织中表达,并利用
统计学方法分析CDK6在鼻咽与鼻咽癌中表达差异。利用统计学方法分析CDK6与鼻咽癌患者临床参数之间的相关性。结果
分析了101例鼻咽癌组织和30例鼻咽组织中CDK6表达。免疫组化结果显示,CDK6是一个核浆共表达因子。在鼻咽组织中,
CDK6主要在胞浆表达。而在鼻咽癌组织中,主要为核浆共表达。与非癌鼻咽组织相比,CDK6 蛋白在鼻咽癌组织中表达明显
上调（P=0.009）。此外,CDK6调的表达与鼻咽癌组织大小（P=0.020）及临床分期（P=0.039）呈明显的正相关。CDK6表达越高,
患者肿瘤越大,临床分期越晚。结论CDK6表达下调作为不利因素促进了鼻咽癌的发生发展。