黄芪甲苷对糖尿病KKAy小鼠肾组织TGF-β1、SMAD2/3及α-SMA表达的影响

目的 观察黄芪甲苷对糖尿病KKAy小鼠肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、SMAD2/3、q-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其延缓肾脏纤维化的可能机制.方法 雄性C57BL/6J小鼠10只作为对照组,20只2型糖尿病模型KKAy小鼠予以高脂饮食至14周,随机数字法分为模型组和黄芪甲苷组,每组10只,黄芪甲苷组给予黄芪甲苷40 mg·kg-·d-1,模型组与对照组给予等量生理盐水.实验期间,各组动物自由饮食、饮水.血糖仪测量16、20、24周龄时各组小鼠的血糖水平.24周时处死,观察各组小鼠肾的病理学变化,免疫组织化学法测定TGF-β1、SMAD2/3、α-SMA的表达.结果 (1)血糖:与对照组相比,14周龄的KKAy小鼠血糖明显升高,模型组血糖在16、20、24周时血糖明显升高(P＜0.05),黄芪甲苷组与其相比,血糖下降(P＜0.05).(2)肾组织形态学:对照组肾小球及肾小管结构清晰,未出现肾间质纤维化,模型组肾小球系膜基质增宽,系膜细胞增多,肾小管上皮细胞细胞质空泡样变性,肾间质炎性细胞增多,黄芪甲苷组肾小管上皮细胞细胞质较少,未呈现明显的纤维化.(3)肾组织TGF-β1、SMAD2/3、α-SMA的表达:对照组TGF-β1表达微弱,而模型组TGF-β1显著表达于肾小管上皮细胞细胞质(P＜0.01);与模型组相比,黄芪甲苷组TGF-β1、α-SMA表达明显下调(P＜0.05);对照组肾小管与肾小球细胞核有少量磷酸化的SMAD2/3表达,模型组表达增加(P＜0.01),与模型组相比,黄芪甲苷组表达减少(P＜0.05).结论 黄芪甲苷通过影响TGF-β/SMADS信号通路,下调TGF-β1、α-SMA表达,改善糖尿病小鼠肾脏纤维化.     

利巴韦林对呼吸道合胞病毒感染哮喘加重小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素分泌的影响

目的 明确利巴韦林(RIB)在呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘加重治疗中的作用.方法 (1)细胞试验:人支气管上皮细胞16HBE随机分为RSV组、RSV/RIB组、RIB组和对照组,每组8瓶.感染细胞用RSV病毒液的感染复数(MOI)为2;RIB浓度为50 μg/ml.蛋白质印迹法检测各组细胞胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)蛋白表达.(2)动物实验:雌性BALB/c小鼠随机分为卵清蛋白(OVA)组、OVA/RSV组、OVA/RSV/RIB组和对照组,每组8只.应用OVA腹腔注射致敏、OVA雾化吸入结合RSV病毒液滴鼻激发哮喘,RIB 10 mg/kg肌内注射.动物肺功能分析系统检测各组小鼠气道反应性;酶联免疫吸附试验检测小鼠血清白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13、干扰素γ(IFN-γ)和支气管肺泡灌洗液(BALF)TSLP浓度;取肺组织观察炎症反应和气道上皮细胞TSLP表达水平.结果 细胞试验显示RSV、RSV/RIB、RIB和对照组TSLP蛋白表达量分别为1.97±0.22、1.16±0.19、0.99±0.17和0.89±0.08,RSV/RIB组明显低于RSV组(P＜0.01).动物实验显示OVA/RSV/RIB组小鼠气道反应性明显低于OVA/RSV组(P＜0.01);血清IL-4、IL-5、IFN-γ和BALF中TSLP浓度分别为(109.7±41.9)、(220.8±30.9)、(13.0±3.4)和(1945±82)pg/ml,均明显低于OVA/RSV组[分别为(274.2±103.7)、(293.3±46.1)、(30.1±5.7)、(2127±46)pg/ml,均P＜0.01];气道炎症细胞浸润和气道上皮细胞TSLP表达均明显少于OVA/RSV组.结论 RIB可以抑制RSV感染引起的TSLP分泌增加和哮喘加重.     

黄芪甲苷、β-榄香烯对小鼠树突状细胞免疫功能的影响

目的:通过观察黄芪甲苷、β-榄香烯对小鼠树突状细胞(DC)免疫功能的影响,探讨黄芪甲苷、β-榄香烯是否能够通过增强小鼠DC功能从而提高机体的免疫功能,为阐明黄芪、莪术的抗肿瘤机制提供实验依据.方法:将小鼠DC细胞株D2SC细胞分5组:空白对照组、脂多糖(LPS)组、黄芪甲苷组、β-榄香烯组、黄芪甲苷组+β-榄香烯组,分别加入相应药物,LPS组及中药组药物终浓度为10μg·ml-1.采用流式细胞仪和ELISA法分别检测小鼠DC细胞株D2SC细胞表面分子(MHCⅡ、MHCⅠ、CD40、CD80、CD86)及细胞因子(IL-6、 IL-12)的表达.结果:黄芪甲苷组、β-榄香烯组细胞表面分子MHCⅡ、MHCⅠ、CD40、CD80、CD86的表达水平均高于空白对照组及LPS组,其中黄芪甲苷组MHCⅡ水平明显高于空白对照组(P <0.05),β-榄香烯组CD80、CD86表达明显高于LPS组(P <0.05);黄芪甲苷组+β-榄香烯组MHCⅡ和CD40表达明显高于LPS组(P <0.05),MHCⅠ和CD86表达明显高于空白对照组( P <0.05).黄芪甲苷、β-榄香烯处理D2SC细胞后,其上清IL-12和IL-6水平均高于空白对照组及LPS组,其中黄芪甲苷组和β-榄香烯组IL-12、IL-6水平明显高于空白对照组(P <0.05);黄芪甲苷+β-榄香烯组IL-12和IL-6表达均明显高于LPS组(P<0.05).结论:黄芪甲苷、β-榄香烯及其联合应用可以增强DC细胞表面MHC分子和免疫共刺激因子表达,并促进IL-12、IL-6等细胞因子的分泌,以发挥抗原提呈及诱导T细胞应答的功能,这为临床黄芪和莪术配伍的益气活血法治疗消化道肿瘤提供了免疫学依据.     

布地奈德抑制支气管哮喘小鼠TSLP及Th2优势免疫作用的研究

目的:研究布地奈德抑制哮喘小鼠Th2优势应答的作用及其机制?方法:选择24只6周龄SPF级BALB/c小鼠,随机分为3组:正常对照组?哮喘模型组?布地奈德组,每组8只?卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型?小鼠末次雾化吸入激发24 h后,采用小鼠肺功能仪检测气道对乙酰胆碱(Ach)的阻力;苏木精-伊红(HE)染色观察气道炎症浸润情况;支气管肺泡灌洗液(BALF)瑞氏染色计数嗜酸性粒细胞百分比;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清总IgE?BALF液中白细胞介素4(IL-4)和IL-13;免疫印迹(Western blot)测定肺组织胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)表达水平?结果:与正常对照组比较,哮喘模型组气道阻力?气道炎症?血清总IgE?BALF中Th2细胞因子(IL-4?IL-13)以及肺组织TSLP蛋白表达明显增高(P < 0.05)?与哮喘模型组比较,布地奈德组各项观测指标均明显降低(P < 0.05)?结论:布地奈德通过降低肺组织TSLP表达?抑制Th2细胞因子水平而降低哮喘气道炎症和气道高反应性,可能是糖皮质激素治疗哮喘的重要机制?     

轻、中度持续哮喘患者治疗前后气道高反应性及致气道重塑细胞因子变化研究

目的 探讨轻、中度持续哮喘患者气道高反应性及细胞因子TGF-β1、T-bet、GATA-3表达在治疗前后的变化.方法 对28例轻、中度持续哮喘患者治疗前及吸入布地奈德治疗12个月后气道黏膜中TGF-β1、T-bet、GATA-3表达量及肺功能参数进行测定,并与对照组10名健康体检者进行比较.结果 治疗前哮喘组TGF-β1、GATA-3的表达均高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01),T-bet的表达及引起第1 s用力呼气容积(FEV1)下降20%的激发剂浓度(PC20)(FEV1＜16 mg/ml)低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).治疗12个月后,上述指标与治疗前相比均有显著改善,差异均有统计学意义(P＜0.05),与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗前PC20与GATA-3呈负相关(r=-0.836,P＜0.01),T-bet的表达与TGF-β1呈负相关(r=-0.697,P＜0.01),GATA-3的表达与TGF-β1呈正相关(r=0.618,P＜0.01).结论 哮喘患者气道黏膜中TGF-β1表达紊乱,T-bet、GATA-3表达失衡,长期吸入小剂量布地奈德可有效改善轻、中度持续哮喘患者肺功能指标,降低气道高反应性,抑制致气道重塑细胞因子的表达,调节T-bet、GATA-3表达失衡.     

昆布多糖对哮喘小鼠气道炎症及肺泡灌洗液相关细胞因子水平影响

目的探讨昆布多糖对哮喘小鼠气道炎症、肺泡灌洗液（BALF）内白细胞介素-12（IL-12）、白细胞介素-13（IL-13）及转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。方法 40只SPF级昆明种小鼠随机分为对照组、哮喘模型组、布地奈德组、昆布多糖组,每组10只。哮喘模型组腹腔注射卵清蛋白（OVA）及雾化OVA吸入激发2周建立哮喘小鼠模型,昆布多糖和布地奈德治疗组每次OVA雾化吸入前分别给予昆布多糖灌胃（50mg/kg）、布地奈德雾化吸入（每只200μg）进行干预。苏木精-伊红染色观察各组哮喘小鼠肺组织病理学形态的变化,用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定小鼠BALF中IL-12、IL-13、TGF-β1的水平。结果哮喘模型组小鼠经2周过敏原激发后肺组织病理检查出现较典型的哮喘样改变;昆布多糖组和布地奈德组小鼠肺部组织病理改变较哮喘模型组减轻。与对照组比较,哮喘模型组小鼠BALF中IL-12水平明显降低,IL-13、TGF-β1表达水平明显增高（F=18.01～52.51,q=9.93～17.12,P〈0.05）;与哮喘模型组比较,昆布多糖组和布地奈德组小鼠BALF中IL-12水平明显升高,IL-13、TGF-β1表达明显降低,但后两者仍高于正常对照组（q=2.91～12.59,P〈0.05）;昆布多糖组与布地奈德组相比,各细胞因子水平差异均有显著性（q=3.06～3.54,P〈0.05）。结论昆布多糖可在一定程度上抑制哮喘小鼠BALF内IL-13、TGF-β1表达,升高IL-12表达,拮抗哮喘呼吸道炎症,为哮喘的治疗提供了新的方法。     

转化生长因子-β1在哮喘血管重构中的作用

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在哮喘血管重构中的作用。方法40只小鼠随机均分为对照组、早期布地奈德治疗组(早期组)、延迟布地奈德治疗组(晚期组)和哮喘组4组。常规检测各项反映气道炎症、气道重构和血管重构的参数,采用Western印迹法测定肺组织中TGF-β1的表达水平。结果哮喘组气道血管的管壁厚度和胶原纤维面积均较对照组明显提高(P值均<0．01),且分别与气道平滑肌厚度和气道周围胶原纤维面积呈正相关(r=0．83、0．92,P值均<0．01)。早期治疗能明显降低上述指标;而晚期治疗仅能降低气道炎症反应,对气道和血管重构无明显改善。3组致敏小鼠肺组织中TGF-β1的表达均较对照组明显增多(P值均<0．01),TGF-β1的表达水平与血管厚度和血管周围胶原纤维面积呈正相关(r=0．75、0．82,P值均<0．01)。结论在哮喘的重建过程中有明显的血管重建——管壁增厚和血管旁胶原纤维增生,这一过程与TGF-β1的表达增加有关。早期糖皮质激素治疗能通过抑制TGF-β1表达水平改善哮喘的血管重构。     

雾化吸入布地奈德对肺纤维化大鼠的干预效果

目的 研究雾化吸入布地奈德对博莱霉素致大鼠肺纤维化模型的干预作用.方法 45只SD雌性大鼠随机分成3组(每组15只):模型组、对照组和布地奈德吸入组.各组大鼠分别于干预后第7、14、28天用随机数字表法处死5只,HE和Masson染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清和肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluid,BALF)中转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的含量.结果 ①HE和Masson染色结果证实成功复制经典肺纤维化模型,肺纤维化主要发生在肺组织局部,同时伴有不同程度全身反应.②布地奈德吸入组和模型组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较对照组严重(P＜0.05),且布地奈德吸入组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较模型组有明显改善(P＜0.05).③ELISA法显示各组大鼠血清和BALF中TGF-β和CTGF表达水平不同,BALF中TGF-β和CTGF表达水平较血清水平高.④与对照组比较,模型组和布地奈德吸入组大鼠血清和BALF中TGF-β和CTGF明显增加(P＜0.05),布地奈德吸入组中TGF-β和CTGF水平较模型组明显降低(P＜0.05).结论 雾化吸入布地奈德能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能与肺泡灌洗液和血清中TGF-β和CTGF表达有关.     

柴朴汤对肝郁型哮喘小鼠CADM1、MAL、IL-33、TSLP表达的影响

目的探讨柴朴汤对肝郁型哮喘小鼠细胞黏附分子1(CADM1)、T细胞成熟相关蛋白(MAL)、白细胞介素-33(IL-33)、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)表达的影响。方法将18只Balb/c小鼠随机均分为正常组、肝郁型哮喘组、柴朴汤组。按照文献复制肝郁型哮喘模型,使用柴朴汤干预。采用免疫印迹法检测小鼠肺组织中CADM1、MAL、IL-33、TSLP的蛋白表达量,定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测各组CADM1、MAL、IL-33、TSLP的信使核糖核酸(mRNA)表达情况。结果肝郁型哮喘组CADM1、MAL蛋白及mRNA表达量均低于正常组(P＜0.05)和柴朴汤组(P＜0.05)。肝郁型哮喘组IL-33、TSLP蛋白及mRNA表达量均高于正常组(P＜0.05)和柴朴汤组(P＜0.05)。结论柴朴汤能上调肝郁型哮喘小鼠CADM1、MAL的表达,且下调IL-33、TSLP的表达。     

呼吸道合胞病毒感染促进哮喘小鼠气道分泌TSLP和Th2炎症反应

目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)对哮喘小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)分泌的影响,以探索RSV对哮喘小鼠Th1/Th2免疫反应的调节作用.方法 雌性BALB/c小鼠32只.随机分成4组,分别为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、鸡卵白蛋白(OVA)组、RSV组、OVA/RSV组;应用OVA腹腔注射致敏、OVA气道雾化结合RSV滴鼻激发哮喘;无创肺功能检测小鼠气道反应性,ELISA法检测小鼠血清IL-4、IFN-γ、IL-5、IL-13水平;ELISA法检测气管灌洗液(BALF)TSLP含量并进行细胞分类计数;小鼠肺组织病理观察炎症反应,免疫组化观察小鼠气管上皮细胞TSLP表达水平.结果 RSV感染促进哮喘小鼠呼吸道分泌TSLP增加,OVA/RSV组小鼠TSLP浓度达(2.13±0.05)ng/ml,高于其他组(P<0.01);同时促进IL-4、IL-5、IL-13等Th2型细胞因子的分泌,并增加IFN-γ分泌;0VA/RSV组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、淋巴细胞数与其他各组比较均明显增加;无创肺功能检测显示OVA/RSV组小鼠气道反应性明显增高,乙酰甲胆碱浓度达6.25 mg/ml时,Penh值(318.66±50.87)明显增加,与其他各组比较具有统计学意义(P<0.01);病理观察显示RSV感染明显加重哮喘小鼠气道炎症细胞浸润;免疫组化染色证实RSV/OVA组小鼠气道上皮细胞TSLP表达量较高.结论 RSV感染可以增加小鼠气道上皮细胞表达TSLP,促进Th2细胞因子的表达,加重哮喘小鼠肺部Th2炎症反应.     

早期药物干预对慢性阻塞性肺疾病大鼠转化生长因子β1的表达影响

目的:观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型的TGF-β1的表达变化和早期药物干预对其表达的影响.方法:利用烟薰和气道内多次滴入脂多糖(LPS)建立大鼠COPD模型(B组).早期给予冬虫夏草(C组),红霉素(D组),吸入布地奈德(E组)等分组干预.小动物肺功能仪测定气道阻力(RL)和动态顺应性(Cdyn).采用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TGF-β1蛋白及mRNA.结果:模型组基本符合人类COPD病理生理变化.外周细支气管平滑肌层和细胞外基质胶原较正常组(A组)大鼠明显增多.C组与B组比RL减少(P＜0.01),D组、E组与B组比RL亦减少,但Cdyn增加(P＜0.01).B组细支气管上皮、肺泡巨噬细胞和小动脉内皮的TGF-β1蛋白及mRNA的表达高于A组(P<0.01),C组与B组无明显差异,而D组、E组与B组相比,TGF-β1蛋白及mRNA的抑制明显,主要表现在细支气管上皮,但两者抑制程度并无明显差异(P>0.05).气道阻力与细支气管黏膜上皮TGF-β1蛋白,支气管肺组织的TGF-β1mRNA均呈正相关(r＝0.510、P＜0.01,r＝0.367、P＜0.05).结论:慢性烟薰和气道内滴入LPS能构建含有气道重塑特征的COPD大鼠模型.早期应用红霉素,吸入布地奈德可明显抑制气道TGF-β1的表达,影响COPD大鼠气道重塑的发生发展,而冬虫夏草未见此作用.     

mIL-12质粒对哮喘模型抑制性细胞因子的影响

目的 研究小鼠白介素12(mIL-12)基因表达质粒对小鼠支气管哮喘模型抑制性细胞因子TGF-β、IL-10以及Th2相关细胞因子IL-4和IL-5等的影响,并探讨其可能机制.方法 卵白蛋白(OVA)致敏复制小鼠哮喘模型.BALB/c小鼠48只,随机分为8组,每组6只.8组小鼠分别是哮喘模型组、正常对照组、模型对照组、阳性药对照组、空质粒预防对照组、空质粒治疗对照组、mIL-12质粒预防组和mIL-12质粒治疗组.末次雾化处理24 h后,测定所有小鼠支气管-肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β、IL-10、IL-4、IL-5水平以及血清中TGF-β、IL-10水平.结果 ①哮喘模型组BALF中的TGF-β、IL-10、IL-4和IL-5等各细胞因子水平明显高于正常对照组和模型对照组(P＜0.05).而mIL-12质粒预防组和mIL-12质粒治疗组BALF中的TGF-β、IL-10、IL-4和IL-5等各细胞因子水平则明显低于哮喘模型组(P＜0.05).②血清中的TGF-β和IL-10水平各组之间差异无统计学意义.结论 TGF-β、IL-10、IL-4、IL-5等各细胞因子水平与哮喘的发病机制密切相关,推测mIL-12质粒可以抑制小鼠哮喘的发展,其对哮喘的治疗作用可能部分是通过抑制性细胞因子而发挥的.     

葛根素抑制支气管哮喘小鼠气道炎症和TSLP介导的Th2免疫作用的研究

目的：研究葛根素对慢性哮喘小鼠模型气道炎症和Th2免疫的影响及其机制。方法：将BALB/c小鼠32只随机均分为正常组、哮喘组、葛根素组和布地奈德组,每组8只。除正常组外,其余各组采用卵白蛋白(ovabumin,OVA)致敏和激发,连续12周,建立慢性哮喘小鼠模型。末次激发24 h后,使用小鼠肺功能仪进行气道反应性测定,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织炎性细胞浸润情况,过碘酸雪夫(PAS)染色观察杯状细胞增生情况,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测4组小鼠血清总 IgE和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中Th2细胞因子(白介素-4、白介素-13)水平。Western blot观察肺组织胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)的蛋白表达。结果：与正常组比较,葛根素组、布地奈德组、 哮喘组气道阻力、气道炎症,血清总IgE,BALF中白介素-4、白介素-13以及肺组织TSLP蛋白表达明显增高(P ＜ 0.05)。与哮喘组比较,葛根素组、布地奈德组各项观测指标均明显降低(P ＜ 0.05)。葛根素组和布地奈德组气道PAS阳性上皮细胞数/支气管较哮喘组下降(P ＜ 0.05)。结论：葛根素抑制慢性哮喘小鼠气道炎症、气道高反应性和Th2免疫,这可能与抑制TSLP的表达有关。     

小青龙汤对哮喘模型小鼠气道上皮细胞表达TSLP的影响研究

目的 探讨小青龙汤对哮喘模型小鼠气道上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的影响.方法 将30只健康雌性BALB/C小鼠分为空白对照组、哮喘模型组、小青龙汤组,每组10只.各组采取相应干预措施后取支气管、肺组织,免疫荧光检测支气管TSLP的表达水平,qRT-PCR和Western blot分别检测肺组织TSLP mRNA和蛋白表达水平.结果 小鼠支气管上皮细胞膜上TSLP荧光染色在哮喘模型组呈强阳性,小青龙汤组呈弱阳性,空白对照组呈阴性.小青龙汤组与空白对照组小鼠肺组织 TSLP mRNA表达水平较哮喘模型组降低(P<0.05),小青龙汤组略高于空白对照组,但组间差异无统计学意义(P>0.05).小青龙汤组与空白对照组小鼠肺组织TSLP蛋白表达水平均低于哮喘模型组(P<0.05),小青龙汤组较空白对照组略高,但组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 小青龙汤对哮喘模型小鼠气道上皮细胞表达TSLP有明显抑制作用.     

黄芪甲苷对局灶节段性肾小球硬化小鼠尿蛋白的影响

目的 观察黄芪甲苷对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)小鼠尿蛋白的影响.方法 将30只雄性BALB/c小鼠采用抽签法随机分为对照组、模型组和黄芪甲苷组,每组10只.采用球后注射阿霉素建立FSGS小鼠模型,黄芪甲苷组从造模后第2周开始每天灌胃给药,共给药8周.10周时检测各组小鼠尿清蛋白/肌酐(ACR)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及纤维蛋白原(Fg).肾组织行过碘酸雪夫反应、苏木精-伊红染色,并计算肾小球硬化指数(GSI).结果 与对照组比较,模型组小鼠第10周末ACR明显升高,黄芪甲苷治疗后小鼠ACR较模型组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与模型组比较,黄芪甲苷组小鼠TC、TG、LDL-C水平明显降低,PT、APTT明显延长,Fg明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).模型组小鼠可见多处肾小球硬化,GSI明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),黄芪甲苷组小鼠GSI较模型组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 黄芪甲苷可降低FSGS小鼠尿蛋白量,同时降低FSGS小鼠血脂水平,改善FSGS小鼠的高凝状态,减轻肾小球硬化程度,发挥肾脏保护作用.     

哮喘大鼠HIF-1α、转化生长因子-β的表达及调控

目的 探讨HIF-1α、TGF-β1在哮喘急性发作期中的作用及两者间的相关性.方法 选取健康清洁级雄性SD大鼠48只,随机均分为4组：正常对照组、哮喘组、地塞米松治疗组（地塞米松组）、布地奈德治疗组（布地奈德组）.制备大鼠哮喘模型,观察各组大鼠肺组织病理变化、分析支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞总数和分类计数,并采用免疫组织化学法和原位杂交法测定各组大鼠肺组织中HIF-1α、TGF-β1的表达情况,并作相关性分析.结果 正常对照组大鼠气道及肺实质无异常改变,细胞结构完整;哮喘组大鼠气道腔内有大量炎症细胞及分泌物充塞,形成黏液栓,气道上皮细胞损伤、脱落、基底膜增厚且形态不规则、平滑肌肥大增生;布地奈德组和地塞米松组大鼠气道腔内无明显分泌物,其它症状亦较哮喘组明显减轻.哮喘组细胞总数及EOS、PMN、Lym计数比例均显著高于正常对照组（P〈0.01）,Mφ计数比例显著低于正常对照组（P〈0.01）;布地奈德组和地塞米松组细胞总数及EOS、Lym计数比例均显著低于哮喘组（P〈0.01）,Mφ计数比例显著高于哮喘组（P〈0.01）.哮喘组大鼠肺组织HIF-1α及TGF-β1的表达均显著高于正常对照组（P〈0.01）,地塞米松组和布地奈德组HIF-1α的表达均明显高于正常对照组（P〈0.05）,布地奈德组和地塞米松组大鼠肺组织HIF-1α及TGF-β1的表达均显著低于哮喘组（P〈0.01）.哮喘大鼠肺组织中HIF-1α与TGF-β1的表达呈显著正相关（P〈0.01）.结论 哮喘急性发作期HIF-1α及TGF-β1的表达显著增加,两者间呈现显著正相关;糖皮质激素干预可以降低HIF-1α及TGF-β1的表达,减轻哮喘气道炎症.     

百草枯中毒小鼠肺组织转化生长因子β和缺氧诱导因子1α的表达

目的 探讨百草枯中毒小鼠肺组织转化生长因子β (TGF-β)和缺氧诱导因子1α(HIF-1 α)的表达变化.方法 将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=10)和百草枯组(n=20).百草枯组腹腔注射百草枯20 mg/kg,对照组腹腔注射等体积生理盐水.在染毒后第7天处死10只百草枯组小鼠,第28天处死其余小鼠.通过苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色进行肺组织病理学观察;免疫组织化学法检测肺组织TGF-β和HIF-1α蛋白的表达.采用Pearson相关分析法分析TGF-β蛋白与HIF-1α蛋白表达的相关性.结果 HE染色和Masson染色结果均显示:在染毒后第7天,百草枯组可见肺纤维化表现;染毒后第28天,肺纤维化程度加重.染毒后第7天百草枯组小鼠肺组织TGF-β蛋白的表达明显高于对照组,染毒后第28天TGF-β蛋白的表达高于染毒后第7天,差异均有统计学意义(P＜0.05).染毒后第7天和第28天,百草枯组小鼠肺组织HIF-1α蛋白的表达均明显高于对照组(P＜0.05);染毒后第28天的HIF-1α蛋白的表达高于第7天,但差异无统计学意义(P＞0.05).在染毒后第7天和第28天,百草枯组TGF-β蛋白与HIF-1α蛋白的表达均无相关性(r=0.295,P=0.630;r=0.218,P=0.725).结论 百草枯中毒可上调小鼠肺组织的TGF-β和HIF-1α蛋白,TGF-β和HIF-1α可能通过不同途径参与了肺纤维化的形成.     

黄芪甲苷对人成纤维细胞光老化的抑制作用

目的：观察黄芪甲苷对长波紫外线（ultraviolet A,UVA）辐射导致的人成纤维细胞衰老的抑制作用,以及对基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1,MMP-1）和金属蛋白酶组织抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）等老化相关基因表达的影响。方法：分离培养人原代成纤维细胞,将亚融合状态的培养细胞分为空白对照组、黄芪甲苷组、UVA组和UVA＋黄芪甲苷组,以10J/cm2UVA进行照射,并加入20μg/mL黄芪甲苷干预处理。采用组织化学染色法检测衰老相关β半乳糖苷酶表达,以酶联免疫吸附法检测上清液中转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的含量,实时聚合酶链反应法检测MMP-1和TIMP-1的mRNA表达水平变化。结果：空白对照组及黄芪甲苷组β半乳糖苷酶阳性细胞均较低,UVA组β半乳糖苷酶阳性细胞数则显著升高,加入黄芪甲苷处理可使β半乳糖苷酶阳性细胞比率明显降低（P〈0.05）。黄芪甲苷处理可以促进成纤维细胞分泌TGF-β1;UVA照射成纤维细胞后TGF-β1分泌量明显降低,UVA照射前加入黄芪甲苷可增加TGF-β1分泌量（P〈0.05）。此外,UVA能够诱导MMP-1和TIMP-1的mRNA表达水平升高,而黄芪甲苷可在一定程度上抑制MMP-1mRNA表达,并诱导TIMP-1mRNA表达（P〈0.05）。结论：黄芪甲苷可有效延缓人成纤维细胞光老化进程,其机制可能与促进TGF分泌和抑制胶原降解相关。     

TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖的影响研究

目的：探究TGF-β1对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响,进一步揭示哮喘的发病机制。方法建立大鼠慢性哮喘模型,原代分离培养大鼠ASMC,将细胞分为正常组、哮喘组、TGF-β1组和TGF-β1＋PD-98059组,以CCK-8法检测细胞增殖,Western blot法检测caveolin-1和p- ERK1/2蛋白表达。结果 TGF-β1组细胞增殖较正常组和哮喘组明显（均P＜0.01）;TGF-β1＋PD-98059组细胞增殖较TGF-β1组减低,但较哮喘组仍明显（均P＜0.05）。TGF-β1组p- ERK1/2表达量较正常组和哮喘组增加;TGF-β1＋PD-98059组p- ERK1/2表达量较TGF-β1组减少,但较哮喘组表达量仍有所增加（均P＜0.05）。TGF-β1组caveolin-1表达量较正常组和哮喘组减少（均P＜0.05）;TGF-β1＋PD-98059组caveolin-1表达量较TGF-β1组增加（P＜0.05）。结论 TGF-β1可以下调caveolin-1蛋白的表达量,激活ERK通路,从而促进哮喘大鼠ASMC的增殖,引起气道重塑。     

雷公藤甲素对哮喘小鼠气道重塑及 转化生长因子-β1表达的影响

  【目的】 探讨雷公藤甲素对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠气道重塑的影响。【方法】 40只雌性SPF级BABL/c小鼠,随机数字表法分为4组,每组10只、A组为生理盐水对照组;B组为卵蛋白(OVA)哮喘组;C组为雷公藤甲素治疗组;D组为地塞米松治疗组。在末次激发24 h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,过碘酸-雪夫(PAS)染色,Masson三色染色以及抗转化生长因子β1(TGF-β1)抗体免疫组化染色。测定支气管管壁厚度(WAt/Pbm),支气管平滑肌厚度(WAm/Pbm)?取右肺组织行RT-PCR检测TGF-β1 mRNA表达。【结果】 B组小鼠支气管管壁厚度、杯状细胞百分数、气道平滑肌厚度、胶原纤维面积、TGF-β1的转录和表达水平均显著高于A组(P < 0.01)。C组小鼠上述各指标依次均显著低于B组(P < 0.05),D组小鼠上述指标显著低于B组(P < 0.05)。但C组和D组上述各指标间差异无统计学意义(P > 0.05)?肺组织的TGF-β1的蛋白表达水平与支气管的管壁厚度,平滑肌厚度,杯状细胞比,胶原纤维含量成正相关(相关系数分别为0.755?0.815?0.898?0.837;P < 0.01)。【结论】 雷公藤甲素可抑制BABL/c哮喘小鼠气道重塑的发生,其机制有可能是通过抑制TGF-β1的表达而实现的。