复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞株增殖抑制作用研究

目的 探讨复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞株增殖的抑制作用.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞48 h增殖抑制作用,并求出其48 h半数抑制浓度(IC50);用流式细胞仪分析技术及琼脂糖凝胶电泳检测复方苦参注射液对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响.结果 复方苦参注射液能明显抑制人胃癌BGC-823细胞增殖并呈浓度依赖性,IC50为9/250原液稀释倍数;人胃癌BGC-823细胞经复方苦参注射液(终浓度为1/25.0原液稀释倍数)作用24 h、48 h及72 h后,流式细胞仪分析结果显示,其早期凋亡细胞率分别为(9.58±0.88)%、(20.41±0.77)%及 (60.30±3.19)%,明显高于空白对照组的(4.17±0.11)%,差异均有统计学意义(P＜0.05),并发现明显的细胞凋亡峰(Sub-G1);人胃癌BGC-823细胞经复方苦参注射液(终浓度为1/25.0原液稀释倍数)作用48 h和72 h后,可见明显的梯状条带形成.结论 复方苦参注射液可抑制人胃癌BGC-823细胞增殖,并诱导其凋亡.     

复方苦参注射液联合放化疗治疗晚期食管鳞癌临床观察

目的:观察复方苦参注射液联合放化疗治疗晚期食管鳞癌的临床疗效.方法:80例随机分治疗组及对照组各40例,治疗组采用复方苦参注射液20ml+生理盐水200ml静滴,1次/日,连用10天,并联合放化疗,间隔2周后重复,共用3～4个疗程,放化疗同对照组.对照组采用6MV/15MV2X线LCAHR治疗,化疗采用PF:顺铂+氟尿嘧啶方案.结果:CR 9例,PR 21例,SD 6例,PD 4例,总有效率(CR+PR)75%;与对照组相比,治疗组临床症状,生活质量的改善均优于对照组且不良反应更小,有显著差异(P＜0.01).结论:复方苦参注射液联合放化疗治疗晚期食管鳞癌有较好的疗效.     

复方苦参注射液对PC-3细胞凋亡的影响

目的：研究复方苦参注射液对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响。方法：用复方苦参注射液对体外培养的人前列腺癌PC-3细胞进行药物处理，采用MTT比色分析法测定复方苦参注射液不同剂量组对PC-3细胞生长的调控作用；采用流式细胞仪分析复方苦参注射液对PC-3细胞周期分布的影响。结果：复方苦参注射液可抑制PC-3细胞的增殖，诱导其凋亡，改变细胞周期分布，使GdG，期PC-3细胞比例增高。结论：复方苦参注射液可诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡，改变细胞周期分布，从而抑制细胞增殖。     

复方苦参注射液对鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用

目的：观察复方苦参注射液对人鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法：常规体外培养人鼻咽癌CNE-2细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度复方苦参注射液分别处理CNE-2细胞24、48和72 h后时细胞增殖抑制率,计算复方苦参注射液对CNE-2细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）。CNE-2细胞分为对照组（不照射、不给药）、放射组（给予剂量为2和4 GyX射线照射）和联合组（给予不同浓度复方苦参注射液处理后再接受X射线照射）。MTT法检测各组CNE-2细胞增殖抑制率,流式细胞术检测各组CNE-2细胞凋亡率,克隆形成试验检测各组CNE-2细胞存活率。结果：不同浓度复方苦参注射液处理CNE-2细胞24、48和72 h后,细胞增殖抑制率较未经复方苦参注射液处理的CNE-2细胞升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性;复方苦参注射液处理48 h时细胞增殖抑制率高于24 h时（P<0.05）。放射组CNE-2细胞凋亡率高于对照组（P<0.05）,联合组CNE-2细胞凋亡率较放射组升高（P<0.05）;联合组CNE-2细胞存活率低于放射组（P<0.05）。结论：复方苦参注射液能促进放射线诱导的鼻咽癌CNE-2细胞凋亡,从而对CNE-2细胞具有放射增敏作用。     

复方苦参注射液对胃癌细胞SGC-7901凋亡的诱导作用及机制

目的探讨复方苦参注射液对胃癌细胞SGC-7901凋亡的诱导作用及其作用机制。方法采用MTT法观察复方苦参注射液对胃癌细胞SGC-7901增殖抑制作用;应用免疫组织化学法观察复方苦参注射液作用后对凋亡相关蛋白Bak、Caspase-3表达的影响。结果复方苦参注射液作用于SGC-7901细胞增殖的抑制呈时间浓度依赖性。作用24 h后,100μL/mL复方苦参注射液作用于SGC-7901细胞的活力是对照组(不含药的培养液)的81.0%,而300μL/mL时是70.2%;作用48 h后,100μL/mL复方苦参注射液对SGC-7901细胞的活力是对照组的53.3%,而300μL/mL时仅为40.9%。100μL/mL复方苦参注射液作用于SGC-7901细胞48 h后,免疫组化检测示凋亡相关蛋白Bak、Caspase-3表达均增加,且以表达于细胞质中为主。结论复方苦参注射液能诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡,其诱导凋亡的机制可能与Bak、Caspase-3蛋白表达增强有关。     

复方苦参注射液防治头颈鳞癌化疗不良反应临床观察

目的:观察复方苦参注射液在防治头颈鳞癌化疗不良反应的临床作用.方法:41例中晚期头颈鳞癌患者随机分成观察组(化疗+复方苦参注射液)18例,对照组(单纯化疗)23例,比较两组的化疗的疗效及不良反应.结果:观察组缓解率72.2%,对照组缓解率69.5%,两组无显著差异,但观察组生活质量明显提高,不良反应明显减轻.结论:复方苦参注射液虽未能提高化疗疗效,但能减轻化疗不良反应.     

RNA干扰对EC9706细胞mTOR表达及细胞生长与凋亡的影响

目的:探讨RNA干扰技术对人食管癌EC9706细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达及细胞生长与凋亡的影响.方法:设计合成mTOR siRNA,采用低、中、高浓度(50、100与150 nmoL/L)的mTOR siRNA分别转染EC9706细胞24、48与72 h.同时设无义对照组(转染无义对照siRNA)、空白对照组(转染空脂质体)及正常对照组(不转染).采用免疫细胞化学与原位杂交法分别检测各组EC9706细胞中mTOR蛋白与mRNA的表达;应用MTT法检测细胞增殖,计算细胞生长抑制率;应用TUNEL法检测转染24 h时细胞凋亡,计算凋亡指数(AI).结果:转染24、48与72 h,6组细胞mTOR蛋白和mRNA的表达差异均有统计学意义(mTOR蛋白:F=24.14,45.78,59.19,P均＜0.001;mTOR mRNA:F=41.42,69.74,43.71,P均＜0.001),细胞生长抑制率差异亦有统计学意义(F=143.85,172.98,155.01,P均＜0.001);低、中、高浓度组转染不同时间点间比较,mTOR蛋白(F=42.23,29.46,50.22,P均＜0.001)、mTOR mRNA(F=6.48,8.50,4.80,P均＜0.05)及细胞生长抑制率(F=78.77,76.14,52.28,P均＜0.001)差异均有统计学意义.mTOR siRNA转染组EC9706细胞mTOR蛋白与mRNA的表达均低于各对照组,且mTOR蛋白及mRNA的表达随mTOR siRNA浓度的增加及转染时间的延长而减弱(P＜0.05).不同浓度mTOR siRNA转染组EC9706细胞生长抑制率均高于各对照组,且细胞生长抑制率随mTOR siRNA浓度的增加和转染时间的延长而升高(P＜0.05).转染24 h,6组细胞AI相比,差异有统计学意义(F=442.96,P＜0.001),mTOR siRNA转染组AI均高于各对照组,且高浓度转染组AI高(P＜0.05).结论:mTOR siRNA可有效抑制EC9706细胞mTOR蛋白与mRNA的表达,且能抑制EC9706细胞的增殖并促进其凋亡.     

复方苦参注射液联合放化疗治疗中晚期头颈鳞癌疗效观察

目的 观察复方苦参注射液联合放化疗治疗中晚期头颈鳞癌的近期临床疗效.方法 156例不宜手术的中晚期头颈鳞癌志者随机分成观察组(复方苦参注射液联合放化疗)76例.对照组(单纯放化疗)80例,两组均接受放化疗治疗,观察组同时加用复方苦参注射液,评价疗效及不良反应. 结果观察组总缓解率(CR+PR)为69.7%,对照组总缓解率为65%,两组无量著差异,但观察组生活质量明显提高,不良反应明显减轻.结论 复方苦参注射液虽未能提高放化疗疗效,但能减轻放化疗不良反应.     

上调stathmin基因表达对食管鳞癌EC9706细胞的作用

目的 构建stathmin基因真核表达载体,研究上调stathmin基因表达对食管癌细胞EC9706的作用.方法 采用RT-PCR扩增stathmin cDNA,克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体.重组载体经脂质体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染细胞株.显微镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞stathmin蛋白的表达.选取稳定转染的细胞株,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验观察细胞克隆形成,流式细胞仪分析细胞周期,裸鼠移植瘤实验研究转染细胞的成瘤性.结果 RT-PCR扩增获得450 bp的cDNA编码序列;克隆至pcDNA3.1(+)载体,获得pcDNA3.1-stathmin重组表达载体.Western印迹法证实重组载体上调EC9706细胞stathmin蛋白表达,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组细胞比较,pcDNA3.1-stathmin转染细胞形态变大、多核、有丝分裂障碍;pcDNA3.1-stathmin转染细胞倍增时间延长(25～28 h)、增殖活性降低、细胞克隆形成率下降(34.5%±6.9%),细胞分裂阻滞于G2/M期(21.7%±3.4%),裸鼠体内致瘤性降低,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 重组质粒pcDNA3.1-stathmin上调stathmin基因表达能够抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖和致瘤性,stathmin可能成为食管鳞癌患者治疗的理想靶点.     

小白菊内酯诱导人食管癌细胞凋亡的研究

目的 探讨小白菊内酯(Parthenolide,PN)对人食管癌细胞EC9706增殖和凋亡的影响及PN的作用机制.方法 MTT法检测PN(20、40和80μmoL/L)作用EC 970624、48和72 h细胞增殖活性的变化;流式细胞术和免疫细胞化学法分别检测PN处理的EC9706细胞凋亡和NF-K Bp65蛋白表达的变化.结果 ①PN抑制EC 9706的增殖活性,呈时间和剂量依赖性.②PN作用EC 970648 h后,NF-κ Bp65蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).③PN作用EC 970672h后,细胞早期和晚期凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 PN抑制EC9706细胞的增殖,诱导其凋亡,作用机制与抑制NF-κB有关.     

丁酸钠对食管癌细胞增殖的影响

目的:观察丁酸钠对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期及NDRG1蛋白表达的影响.方法:采用0.5 mmol/L丁酸钠作用于食管癌EC9706细胞,用MTT法检测处理不同时间时细胞增殖的变化,采用流式细胞仪检测细胞周期的变化,采用免疫组化方法检测NDRG1蛋白表达的变化.结果:①MTT实验结果显示,丁酸钠作用1～5 d时各组吸光度均低于对照组,经统计学处理差异有显著性意义(P＜0.05);丁酸钠不同作用时间的细胞增殖抑制率分别为:1 d组21.2%,3 d组23.5%,5 d组25.6%,且随作用时间延长抑制率升高.②细胞周期检测结果为(%):G1期细胞:对照组57.00±1.10,1 d组63.10±0.78,3 d组67.20±0.58,5 d组69.70±0.64;S期细胞:对照组25.30±0.27,1 d组20.20±0.66,3 d组20.40±0.82,5 d组20.90±0.50;M期细胞:对照组17.20±1.00,1 d组16.70±0.69,3 d组12.10±0.41,5 d组9.40±0.23.各组G1期结果分别与对照组结果比较,差异有显著性意义(P＜0.01).③丁酸钠可上调NDRG1蛋白表达水平,随作用时间增长蛋白表达增强.结论:丁酸钠可抑制食管癌细胞增殖,这一作用可能与NDRG1蛋白表达增加有关.     

体外hEGF对食管癌EC9706细胞增殖影响的研究

目的:研究人表皮生长因子(hEGF)对食管癌EC9706细胞增殖的影响作用,探讨hEGF不同浓度、不同时间对食管癌细胞生长的影响。方法:体外正常条件培养EC9706食管鳞癌细胞株,无血清饥饿细胞,加入hEGF,通过镜下形态观察、MTT染色、流式细胞技术等观察细胞增殖变化情况。结果:hEGF在200ng/ml浓度、24h作用时间点,对EC9706细胞有明显刺激增殖作用;倒置显微镜下观察,hEGF刺激细胞呈长梭形改变,细胞连接紧密;细胞周期分析,hEGF刺激细胞30.03%处于增殖活跃的S期,较之对照组15.52%,有极显著性差异。结论:hEGF能够刺激食管癌EC9706细胞增殖,其对细胞增殖的刺激作用呈量效、时效关系。     

复方苦参注射液联合化疗治疗晚期肺腺癌临床疗效观察

目的:观察复方苦参注射液联合化疗治疗晚期肺腺癌患者的疗效。方法:87例晚期肺腺癌患者随机分为复方苦参注射液联合化疗组(观察组)44例和单纯化疗组(对照组)43例。临床观察终点指标包括有效率、至病情进展时间和生活质量。结果:观察组总有效率36.4%,对照组总有效率30.2%,2组疗效差异无统计学意义(P>0.05);观察组至病情进展时间与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。观察组生活质量评分显著优于对照组(P<0.01)。观察组不良反应发生率低于对照组(P<0.05~P<0.01)。结论:复方苦参注射液无法提高治疗反应和延长生存期,但能改善患者的生活质量,并能减轻化疗的不良反应。     

靶向CXCR4的siRNA对人食管鳞癌EC9706细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨CXCR4 siRNA对人食管鳞癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 建立人食管鳞癌细胞株EC9706裸鼠移植瘤动物模型,瘤旁注射化学合成CXCR4 siRNA,同时以瘤旁注射阴性对照siRNA和PBS为对照.监测肿瘤生长变化,测量瘤质量.HE染色观察肿瘤病理学变化,RT-PCR、免疫组化方法检测CXCR4 mRNA和蛋白变化.结果 裸鼠体内实验结果显示,与对照组比较,CXCR4 siRNA组肿瘤生长受到明显抑制,瘤质量下降;HE染色显示对照组肿瘤体积大、异形明显;RT-PCR、免疫组化结果表明CXCR4 siRNA处理组CXCR4 mRNA和蛋白表达下调.结论 CXCR4 siRNA能抑制人食管鳞癌EC9706细胞株裸鼠皮下移植瘤的形成,且能在体内有效下调CXCR4 mRNA和蛋白的表达.     

人食管癌相关基因4在食管癌中的抑癌功能

目的 探讨人食管癌相关基因4(ECRG4)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的抑癌功能及其机制.方法 利用DNA重组技术,构建ECRG4真核表达质粒pcDNA3.1-ECRG4,在ESCC细胞系EC9706细胞中转染表达ECRG4蛋白,检测细胞生长状态、细胞黏附、迁移、侵袭能力和裸鼠成瘤能力的改变.Western印迹检测ECRG4表达诱导P53和P21蛋白表达的变化.结果 ECRG4基因转染组裸鼠成瘤的最后体积和重量分别为(264±43)mm3和(0.39±0.09)g,对照组裸鼠分别为(464±128)mm3和(0.76±0.13)g,差异均有统计学意义(均P＜0.05).ECRG4基因转染组肿瘤细胞与基质的黏附性、迁移和侵袭能力均低于对照组,但差异均无统计学意义(均P＞0.05).ECRG4基因转染组P53和P21蛋白表达均高于对照组(100.00±3.87和35.71±2.36比16.6±1.92和1.09±0.11,均P＜0.05).结论 ECRG4是ESCC的候选抑癌基因,ECRG4可能通过参与P53通路调控P21蛋白表达来发挥其抑癌功能.     

Insulin enhances apoptosis induced by cisplatin in human esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells related to inhibition of autophagy

Background Chemoresistance is common among patients with esophageal squamous cell carcinoma （ESCC）.We investigated the effect and mechanism of insulin on enhancing anticancer functions of cisplatin in human esophageal cancer cell line EC9706.Methods The viability of EC9706 cells exposed to cisplatin was assessed using MTT assay.The times T1,when the number of living cells reached a plateau and T2,when the number of living cells reached a new plateau after the addition of insulin were found.T1 and T2 plateau cells were stained by Annexin V-FITC/PI and monodansylcadaverin （MDC）.Fluorescent microscopy was used to observe the expression of apoptosis and autophagy intuitively.Apoptotic ratio and fluorescent intensity were analysed by flow cytometry （FCM） quantitatively.Western blotting analysis was used to estimate the protein expression levels of AKT,mTOR,PI3K,PTEN,autophage related indicator LC3-Ⅱ and autophage related protein Beclin1 changes that occurred in the course of treatment.Results A larger number of typical autophagosomes were detected in EC9706 cells exposed to cisplatin.Insulin can increase the apoptosis induced by cisplatin.Apoptotic ratio of T1 plateau cells （（32.6±4.3）％） is significantly less than T2 plateau （（47.5±5.6）％）.MDC fluorescent intensity at T1 plateau （104.9±13.2） was significantly higher than intensity at T2 plateau （82.6±10.3）.After cotreatment with insulin,the expression level of LC3-Ⅱ,Beclin1 and PTEN in T2 plateau cells were significantly downregulated,but AKT,mTOR and PI3K expressions significantly upregulated compared with T1 plateau.Conclusions Insulin could enhance cisplatin-induced apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells related to inhibition of autophagy.The activation of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway induced by insulin resulted in the suppression of autophagy in EC9706 cells,which may be attributed to the anticancer effects of cisplatin.     

食管鳞状细胞癌中p16蛋白的表达及其临床意义

目的研究p16蛋白与食管鳞状细胞癌（ESC）生物学行为的关系。方法应用LSAB免疫组织化学方法检测65例ESC中p16蛋白表达的情况,探讨它与病理组织学分级、临床分期、淋巴结转移和预后的关系。结果64例ESC中p16蛋白的阳性率为47．7％,在53例癌旁鳞状上皮的阳性率为67．9％;高、中、低分化ESC中p16蛋白的阳性率分别为64．8％、45．5％和25．0％;在早中期和晚期ESC中p16蛋白阳性率分别为84.6％和38．5％;20例伴淋巴结转移的病例p16蛋白的阳性率为25．0％,而45例不伴淋巴结转移病例p16蛋白的阳性率为60．0％;生存期1a及以上组p16蛋白阳性率为63．0％,显著高于1a以下组的26．7％（P＜0．05）。结论p16基因的丢失或突变与ESC发生关系密切,而且p16蛋白与ESC的病理组织学分级、临床分期、淋巴结转移和预后有关。p16蛋白的检测可作为ESC生物学行为和预后评价的参考指标。     

应用蛋白质组技术筛选人食管癌细胞系9706顺铂耐药相关蛋白

目的应用蛋白质组技术筛选人食管癌(esophageal cancer,EC)顺铂耐药相关蛋白。方法采用顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)浓度递增法、间歇作用方式建立EC9706顺铂耐药细胞系(EC9706/CDDP),应用细胞培养稳定同位素标记(cell culture and stable isotope labeling,SILAC)、质谱(mass spectrometry,MS)筛选和鉴定食管癌耐药相关的蛋白。结果共鉴定出耐药相关的74种差异表达蛋白,其中53种在EC9706/CDDP中表达显著升高和21种表达明显降低。结论筛选的EC9706/CDDP耐药相关蛋白对进一步阐明肿瘤多药耐药分子机制具有重要理论意义和应用价值,并为逆转多药耐药表型的药物设计提供了新的分子靶点。