人参皂甙Rg1对颅脑损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响

目的:研究人参皂甙Rgl对颅脑损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响.方法:Wistar大鼠60只,用Feeney自由落体法制作颅脑损伤模型.随机分为正常组(n=10)、模型组即病理对照组(n=10)与人参皂甙Rgl治疗组(n=40).以普通光镜和荧光显微镜进行神经细胞凋亡的形态学观察并以流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测. 结果:人参皂甙Rgl能减少神经细胞凋亡且随着人参皂甙剂量的增加,凋亡率呈下降趋势.结论:人参皂甙与细胞凋亡关系密切,人参皂甙Rgl能降低颅脑损伤大鼠神经细胞的凋亡率,且呈剂量依赖性其发挥脑保护作用可能与此有关.     

人参皂甙Rb1与Re抗大鼠实验性缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达

目的　观察人参皂甙Rb1和Re对缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因蛋白表达的影响 ,探讨人参皂甙Rb1和Re抑制心肌细胞凋亡的可能机制。方法　结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支(LAD) ,建立大鼠缺血再灌注动物模型 ;采用透射电镜、缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞 ,利用光学显微镜进行细胞计数 ;免疫组织化学检测Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因蛋白表达 ,并利用图象分析系统测量平均光密度值进行定量分析。结果　①假手术组未发现心肌凋亡细胞 ;缺血再灌注组心肌凋亡细胞数为 13 4.45± 45 .61个 /视野 ,Rb1治疗组为 5 1.65± 13 .71个 /视野 ,Re治疗组为 90 .66± 19.2 2个 /视野 ,3组间有显著差异 (P <0 .0 1) ;②缺血再灌注组、Rb1治疗组及Re治疗组Bcl 2、Bax、Bad、Fas基因的表达均较假手术组明显增加 (P <0 .0 5 ) ,Rb1治疗组和Re治疗组Bcl 2的表达与缺血再灌注组比较无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,而Bax、Bad、Fas的表达明显下降 (P <0 .0 5 ) ,Rb1抑制Bax基因蛋白表达的效应较Re更为明显 (P <0 .0 5 )。Rb1治疗组和Re治疗组Bcl 2 /Bad、Bcl 2 /Bad以及Bcl 2 /Fas比值均较假手术组及缺血再灌注组明显增加 ,Rb1治疗组Bcl 2 /Bax比值较Re治疗组增大。结论　心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡 ,人参     

水蛭提取物抗新生大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的研究

目的:研究水蛭提取物对体外缺氧性新生大鼠大脑皮层神经细胞凋亡的保护作用。方法:实验设正常对照组、模型组、药物组及阳性对照组,采用MTT法观察水蛭提取物对神经细胞缺氧性坏死的影响,HE染色及Ho-chest 33342荧光染色法观察其对缺氧性神经细胞凋亡的保护作用。结果:水蛭提取物在500μg/mL~2 mg/mL浓度范围有抗神经细胞缺氧性坏死作用,使神经细胞坏死亡率明显下降,与凋亡模型组比较具有显著性差异(P<0.05);HE染色结果显示,水蛭提取物可明显减轻缺氧引起的神经细胞凋亡的形态学改变;Hochest 33342荧光染色除水蛭提取物组250μg/mL组外,各组神经细胞凋亡率明显降低,与模型组相比较差异有显著性(P<0.01)。结论:水蛭提取物具有明显保护脑神经细胞的作用。     

人参皂甙Rg1和Rb1对骨髓粒—巨噬系祖细胞增殖的作用

用体外造血祖细胞集落形成技术,观察人参皂甙Rg1和Rb1对正常人粒巨噬系祖细胞(CFU-GM)的刺激增殖作用.实验结果表明Rg1浓度为2.5,5,10和50μg/ml时CFU-GM集落产率均显著高于对照组(P＜0.01),提高率分别为(39.8±3.6)%,(70.6±6.8)%,(63.0±6.4)%和(60.8±5.9)%.Rb1浓度为0.5,2.5,5,10和50 μg/ml时CFU-GM集落产率均明显高于对照组(P＜0.05),提高率分别为(24.5±2.3)%,(45.6±4.7)%,(54.6±6.1)%,(65.1±6.3)%和(58.3±5.7)%.高浓度(50μg/ml)不显示抑制作用.上述结果说明,Rg1和Rb1对CFU-GM具有明显的刺激增殖作用,且高浓度时亦不抑制.     

人参皂甙对大鼠慢性颈髓损伤中神经细胞凋亡的影响

【目的】探讨大鼠慢性颈髓损伤后人参皂甙对神经细胞凋亡的影响。【方法】4月龄SD大鼠随机分为3组：A组（对照组）,切开颈椎后方皮肤后即缝合;B组（模型组）,破坏大鼠颈椎后柱稳定性建立慢性颈髓损伤模型,造模后立即腹腔注射生理盐水2μg／kg,以后每周注射一次;C组（人参皂甙干预组）,建立模型后立即腹腔注射人参皂甙100mg／kg,以后每周注射一次;在此基础上另设D组（人参皂甙＋IL-10干预组）,建立模型后立即腹腔注射人参皂甙100mg／kg和IL-10 5μg／kg,以后每周注射一次。腹腔麻醉取C4～C6脊髓行组织学切片,苏木素伊红（HE）染色观察形态学变化,TUNEL免疫荧光法测定颈脊髓神经细胞凋亡情况,免疫组化法测定颈脊髓IL-10的表达。【结果】成功建立大鼠慢性颈髓损伤模型,光镜下C、D组较B组病理改变明显改善,3个月及5个月时,相同时间点B、C组IL-10的表达与A组比较均明显增高,C组高于B组有显著统计学差异（P〈0．01）;且A、B、C各组内比较5个月的表达高于3个月时的表达,有显著统计学差异（P〈0．01）。5个月时,A组大鼠脊髓组织TUNEL阳性细胞极少,B组有大量的阳性细胞,C、D组有少量的阳性细胞,D组最少,但均多于A组。【结论】人参皂甙都能抑制慢性颈脊髓损伤中神经细胞的凋亡,促进脊髓神经功能恢复,其作用可能与增高IL-10表达相关,联合运用IL-10可显著提高其疗效。     

人参皂甙单体Rb1对大鼠在体心脏收缩性能的影响

背景作者前期实验以左室内压及其最大升降速率等 8项心肌力学与血流动力学参数为指标 , 观察到人参二醇和三醇组皂甙均能使离体大鼠工作心脏收缩性能减弱. 目的探讨人参皂甙单体 Rb1对大鼠心率、动脉压、左室内压( left ventricular pressure,LVP)、左室舒末压 (left ventricular end- diastolic pressure, LVEDP)、室内压最大上升与最大下降速率 (maximal rising and falling rate of ventricular pressure, ± dp/dtmax)6项指标的影响. 设计完全随机、空白对照的双盲法实验. 地点、材料和干预在吉林大学基础医学院动物实验室完成本实验,室温 20 0C. Wistar大鼠购于吉林大学动物部,雌雄不拘.按随机抽签法将动物分为 5组,即对照组、 Rb1 95 mg/kg组、 Rb1 190 mg/kg组、 Rb1 285 mg/kg组、维拉帕米(异搏定) 36 mg/kg 组.在 Wistar大鼠在体心脏上观察给予大鼠 Rb1 95, 190, 285 mg/kg,维拉帕米 36 mg/kg对大鼠心率、动脉压、 LVP、 LVEDP, + dp/dtmax,- dp/dtmax 6项指标的影响,并与对照组进行比较.整个过程由高级实验师操作完成. 主要观察指标 静脉注入维拉帕米与 95,190,285 mg/kg 浓度 Rb1后大鼠心率、动脉压、 LVP、 LVEDP, + dp/dtmax,- dp/dtmax 6项指标的比较结果. 结果 Rb1浓度在 95, 190, 285 mg/kg范围内均使心率、动脉压、左室收缩压、左室舒张压、室内压最大上升与最大下降速率 6项指标下降,且具有剂量依赖性.与对照组 [(9.98± 5.90) kPa]相比,给药组能明显降低左室收缩压 ,使其从 95 mg/kg的( 6.65± 2.30) kPa、 190 mg/kg的( 5.32± 1.90 ) kPa降至 285 mg/kg时的( 5.00± 1.50) kPa; 与对照组〖 (312.00± 25.00) kPa〗相比 , 给药组能明显降低室内压最大上升与最大下降速率 ,使最大上升速率从 95 mg/kg时的( 305.00± 23.00) kPa、降至 285 mg/kg时的( 252.5± 30.00) kPa;最大下降速率从 95 mg/kg时的 (166.25± 18.00) kPa、降至 285 mg/kg时的 (146.00± 15.60) kPa.应用 36 mg/kg Ca2+通道阻断剂异搏定出现了与 Rb1相似的结果. 结论 Rb1对心机收缩有抑制作用;作用的机制与 Ca2+ 通道有关.     

人参皂甙单体Rb1对大鼠在体心脏收缩性能的影响

背景：作者前期实验以左室内压及其最大升降速率等8项心肌力学与血流动力学参数为指标，观察到人参二醇和三醇组皂甙均能使离体大鼠工作心脏收缩性能减弱。目的：探讨人参皂甙单体Rb1对大鼠心率、动脉压、左室内压(left ventricular preassure，LVP)、左室舒末压(1eft ventricular end-diastolic pressure．LVEDP)、室内压最大上升与最大下降速率(maximal rising and falling rate of ventricular pressure，&;#177;dp／dtmax)6项指标的影响。设计：完全随机、空白对照的双盲法实验。地点、材料和干预：在吉林大学基础医学院动物实验室完成本实验，室温20℃.Wistar大鼠购于吉林大学动物部，雌雄不拘。按随机抽签法将动物分为5组，即对照组、Rb1 95mg／kg组、Rb2 190mg／kg组、Rb1 285mg／kg组、维拉帕米(异搏定)36mg／kg组。在Wistar大鼠在体心脏上观察给予大鼠Rb1 95，190，285mg／kg，维拉帕米36mg／kg对大鼠心率、动脉压、LVP、LNEDP，+dp／dtmax，-dp／dtmax 6项指标的影响，并与对照组进行比较。整个过程由高级实验师操作完成。主要观察指标：静脉注入维拉帕米与95，190，285mg／kg浓度Rb1后大鼠心率、动脉压、LVP、LVEDP，+dp／dtmax，-dp／dtmax 6项指标的比较结果。结果：Rb1浓度在95，190，285mg／kg范围内均使心率、动脉压、左室收缩压、左室舒张压、室内压最大上升与最大下降速率6项指标下降，且具有剂量依赖性。与对照组[(9，98&;#177;5．90)kPa]相比，给药组能明显降低左室收缩压，使其从95mg／kg的(6．65&;#177;2．30)kPa、190mg／kg的(5．32&;#177;1．90)kPa降至285mg／kg时的(5．00&;#177;1．50)kPa；与对照组l(312．00&;#177;25．00)kPaⅠ相比，给药组能明显降低室内压最大上升与最大下降速率．使最大上升速率从95mg／kg时的(305．00&;#177;23．00)kPa、降至285mg／kg时的(252．5&;#177;30．00)kPa；最大下降速率从95mg／kg时的(166.25&;#177;18．00)kPa、降至285mg／kg时的(146．00&;#177;15.60)kPa。应用36mg／kg Ca^2+通道阻断剂异搏定出现了与Rb。相似的结果。结论：Rb1对心机收缩有抑制作用；作用的机制与Ca^2+通道有关。     

人参皂甙Rg1、Rb1对SVZa-NSCs增殖的影响及其与STAT3的关系

目的：研究人参皂甙Rg1、Rb1对体外培养大鼠SVZa-NSCs（室管膜前下区神经干细胞）增殖的影响及其与STAT3（信号转导与转录激活因子3）的关系。方法：采用体外细胞培养法对大鼠SVZa-NSCs分离、培养,用细胞计数法和MTT法测定人参皂甙Rg1、Rb1对NSCs增殖的影响,并寻找促进NSCs增殖的人参皂甙Rg1、Rb1最佳浓度和最佳时间;用免疫细胞化学法检测STAT3的表达和阳性细胞百分比,NSCs增殖与JAK/STAT通路的关系。结果：人参皂甙Rg1、Rb1能够促进SVZa-NSCs的增殖,其最佳浓度为40μM、最佳时间为4d。与对照组比较,人参皂甙Rg1、Rb1明显促进STAT3的表达和阳性细胞百分比增加（P〈0.01）。结论：人参皂甙Rg1、Rb1对内源性NSCs的增殖、分化有较大价值,为中枢神经系统损伤修复提供实验基础理论。     

参麦注射液对大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的以缺氧/缺糖再给氧为模型,观察参麦注射液对神经细胞凋亡的抑制作用。方法流式细胞术检测凋亡细胞百分率,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内Ca2+浓度,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果缺氧/缺糖5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加细胞内Ca2+浓度和LDH的释放。与对照组相比有显著性差异(P<0.01)参麦注射液能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,降低细胞内Ca2+浓度,减少LDH的释放,其作用随剂量增加而增加。结论参麦注射液具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与其能降低细胞内Ca2+浓度有关。     

纳洛酮对体外培养的缺氧大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响

目的 :观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞凋亡的影响及纳洛酮的保护作用。方法 :取体外培养 12 d的Wistar大鼠皮质神经元细胞 ,随机分为正常对照组、缺氧组、缺氧加纳洛酮组。缺氧 6h后在常氧下继续培养2 4h,用原位末端标记 (TUNEL)法和流式细胞仪检测不同时间段神经元细胞凋亡率。结果 :缺氧能诱导神经元细胞凋亡显著增加 ,纳洛酮可以降低凋亡率 ,与缺氧组相比差异显著 (P<0 .0 1)。结论 :纳洛酮可抑制缺氧诱导的大鼠皮质神经元细胞凋亡 ,对神经元细胞具有保护作用     

人参皂苷Rb1、Rg1对胎鼠体外神经干细胞促增殖分化作用的研究

目的:探索人参皂苷Rb1、Rg1不同浓度对体外培养神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化的影响。方法:对胎鼠大脑皮质源性NSCs进行体外培养、鉴定;用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)掺入法测定不同浓度的人参皂苷Rb1、Rg1及对照组(空白组)对NSCs增殖的影响,通过计算Brd U/DAPI比值,确定其促增殖的适宜浓度;荧光免疫细胞化学技术检测各组Tuj1、GFAP及DAPI(4′,6-diamidino-2-phenylindole)的表达,计算Tuj1/DAPI、GFAP/DAPI百分比,比较人参皂苷Rb1、Rg1对NSCs分化为神经元和神经胶质细胞的效率。结果:(1)所培养的细胞经鉴定为NSCs后,增殖实验中除人参皂苷0.1μmol/L Rg1(P0.05)外,其余各组Rg1和Rb1的Brd U/DAPI比值均显著性增加(P0.05),Rb1和Rg1均能促进体外培养的NSCs增殖,其适宜浓度Rb1、Rg1分别为1μmol/L、10μmol/L。(2)人参皂苷Rb1(10μmol/L)组GFAP/DAPI百分比与对照组相比显著增高(P0.05),而人参皂苷Rg1组GFAP/DAPI百分比及两种人参皂苷Tuj1/DAPI比值与对照组相比无显著性差异(P0.05)。结论:人参皂苷Rg1、Rb1在一定浓度范围内可促进体外NSCs增殖。Rb1能促进NSCs分化为星形胶质细胞。     

Calphostin C对培养神经元缺氧后Bcl-2表达及神经元凋亡的研究

目的探讨蛋白激酶C(PKC)对神经元缺氧凋亡的影响及作用机制.方法建立体外培养孕Wister大鼠皮层神经元模型及培养神经元缺氧模型,在此基础上观察神经元存活率、Bcl-2和凋亡DNA表达的规律;然后用3种不同浓度的PKC催化亚基特异性抑制剂CalphostinC预孵育培养神经元后进行缺血处理,观察神经元上述指标的改变.结果随着缺氧时间的延长和CalphostinC浓度的增加,培养神经元的存活数显著下降、Bcl-2免疫组化阳性细胞数明显减少、TUNEL荧光染色平均荧光强度显著升高.结论(1)PKC和Bcl-2均参与了缺氧神经元凋亡;(2)PKC抑制剂CalphostinC可加重缺氧神经元凋亡;(3)PKC的激活在缺氧神经元的凋亡中起保护作用,且该作用可能是通过促进Bcl-2表达实现的.     

三七皂甙单体Rb1对大鼠脑缺血再灌注时脑细胞凋亡及cPLA2蛋白表达的影响

目的：观察三七皂甙单体Rb1对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑细胞凋亡和胞浆型磷脂酶A2（cPLA2）及相关蛋白表达的影响。方法：用线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注（MCA—IR）模型，用原位末端标记（TUNEL）法检测脑细胞凋亡，用免疫组织化学法检测cPIA2、c—fos和c—jun在脑细胞中的表达，用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。结果：在大鼠MCA—IR脑损伤时，三七Rb1明显降低凋亡细胞数和血清中TNF-α水平及cPLA2、c—fos和c—jun在脑细胞中的表达，与对照组比较，差异有显著性意义（P〈0．01）。结论：三七Rb1通过抑制cPLA2及相关蛋白表达,对大脑中动脉缺血再灌注脑损伤有良好的保护作用。     

人参皂苷Rb1对川崎病小鼠心肌损伤及血管炎症严重程度的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1对川崎病小鼠心肌损伤及血管炎症严重程度的影响。方法 选择40只5周龄无特定病原体级C57BL/6小鼠,按照随机数字表分为空白对照组、川崎病模型组、Rb1低剂量组和Rb1高剂量组,每组各10只。采用单次腹腔注射干酪乳酸杆菌细胞壁提取物(LCWE)建立川崎病模型,空白对照组和川崎病模型组进行等量0.9%氯化钠溶液灌胃,Rb1低剂量组和Rb1高剂量组分别灌胃30 mg/kg和60 mg/kg人参皂苷Rb1,1次/d,连续21d。分别于干预前1 d以及干预后7、14、21 d对各组小鼠进行称重并记录。干预结束后,苏木精-伊红染色观察各组小鼠心肌组织病理情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测心肌组织匀浆中内皮素-1(ET-1)水平,总一氧化氮(NO)检测试剂盒检测心肌组织匀浆中NO水平;采用ELISA法检测小鼠血清中促炎因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及抗炎因子IL-10的水平;采用全自动凝血仪检测各组小鼠血浆纤维蛋白原水平,D-二聚体检测试剂盒(免疫荧光法)检测D-二聚体水平,小鼠ELISA试剂盒检测小鼠血浆AT-Ⅲ水平。结果 干预后1...     

纳洛酮对缺氧大鼠皮层神经元细胞的保护作用

目的　观察缺氧对大鼠皮层神经元细胞的影响及纳洛酮的保护作用。方法　取体外培养 12d的Wistar大鼠皮层控经元细胞 ,随机分为正常对照组、缺氧组、纳洛酮组 (缺氧前 2 4h加纳洛酮预处理 ) ;缺氧 6h后在常氧下继续培养 2 4h。观察各种条件下神经元细胞的存活率和形态学的改变 ,测定培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)含量。结果　缺氧后可见神经元胞体肿胀、细胞死亡 ,LDH渗出量增多 ,细胞存活率减少 (P <0 0 1)。经纳洛酮预处理的神经元 ,缺氧后神经元胞体肿胀、细胞死亡程度轻于缺氧组 ,LDH渗出显著低于缺氧组 (P <0 0 1) ,而存活率明显高于缺氧组 (P <0 0 1)。结论　缺氧能诱导皮层神经元损伤 ,而纳洛酮对神经元的缺氧损伤具有明显的保护作用     

人参皂甙Rg1对大鼠海马神经元缺糖氧/复糖氧后氧化损伤的保护作用

目的观察人参皂甙Rg1 对大鼠海马神经元缺糖氧/复糖氧后谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的影响。方法海马神经元培养8~10 d,随机分为正常对照组、模型组、人参皂甙Rg1 低、中、高剂量组(5 μmol/L, 20 μmol/L, 60 μmol/L)。建立大鼠海马神经元缺糖氧/复糖氧模型,复糖氧后6 h 以生物化学法观察各组海马神经元GSH含量和GPx活性的变化;复糖氧后24 h 以Hochest 染色法检测细胞凋亡,并检测各组海马神经元四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率。结果与模型组相比,人参皂甙Rg1中、高剂量组海马神经元GSH含量、GPx活性显著升高,凋亡显著减少,MTT代谢率显著提高(P<0.001),人参皂甙Rg1 低剂量组变化不明显(P>0.05)。结论人参皂甙Rg1 可通过提高缺糖氧神经元GSH含量和GPx活性,发挥脑保护作用。     

乳酸升高对体外原代培养大鼠皮质神经元存活率的影响

背景:中枢疲劳机制目前不完全清楚,乳酸蓄积可能在中枢疲劳中发挥重要作用,乳酸蓄积是否影响神经元功能?目的:观察乳酸对原代的皮质神经元存活率的影响。设计:单一样本观察。单位:解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所细胞生物学实验室。材料:新生(第1天)Wistar乳鼠40只(解放军军事医学科学院实验动物中心)。方法:实验于2003-10/2004-05在解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所细胞生物学实验室完成。体外原代大鼠大脑皮质神经元,将神经元分为两部分:①添加不同浓度乳酸(0,5,10,20mmol/L)使培养液pH值分别降至7.35,7.15,6.95和6.00,观察神经元存活率。②添加不同浓度乳酸(0,5,10,20mmol/L)后,保持培养液pH值为7.35,分别观察神经元存活率,分析乳酸对神经元的作用是通过下调pH值还是乳酸本身的作用。主要观察指标:①不同浓度乳酸调节pH值的变化对神经元存活率的影响。②不同乳酸浓度,相同pH值对神经元存活率的影响。③乳酸下调pH与乳酸本身对神经元的毒性作用比较。结果:①神经元存活率随pH降低而降低,pH值为7.35,7.15,6.95和6.00神经元存活率由100%分别降至68%,69%,53%(P<0.05)。②当乳酸浓度分别为0,5,10,20mmol/L,pH值均为7.35时,神经元存活率由100%降至88%,82%,81%。与对照组相比差异明显(P<0.05)。③pH下调组神经元存活率显著低于相应乳酸作用组。结论:乳酸升高造成pH降低与神经元存活率关系密切,过量乳酸亦可不依赖下调pH值的作用发挥神经毒性。