黄芪多糖抑制缺氧/复氧损伤乳鼠心肌细胞凋亡与自噬机制研究

目的:探讨黄芪多糖(APS)对缺氧/复氧(H/R)所致乳鼠心肌细胞凋亡与自噬抑制作用的相关机制.方法:分离并体外培养乳鼠心肌细胞3 d后制备H/R损伤细胞模型,设正常对照组、H/R组、APS低、中、高剂量(20、40、80μmol/ml)组,各组于造模前30 min给药处理.复氧2 h后,CCK-8法检测细胞增殖抑制率...     

黄芩茎叶总黄酮对缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨黄芩茎叶总黄酮（ Scuttellaria baicalensis steams-leaf total flavonoids,SSTF）对纯化培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。     

马齿苋总黄酮对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制研究

目的: 研究马齿苋总黄酮(PTF)对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制。 方法: 利用体外培养的H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧模型。将培养的心肌细胞分为5组:正常对照组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤加10 mg·L^-1 PTF组、 缺氧/复氧损伤加20 mg·L^-1 PTF组、缺氧/复氧损伤加40 mg·L^-1 PTF组。MTT法检测心肌细胞存活率,荧光分光光度法测定心肌细胞内钙离子浓度,比色法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率、RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因Caspase-3 mRNA的表达。 结果: 与A/R组比较,PTF组(终质量浓度为10,20,40 mg·L^-1)均可明显提高缺氧/复氧损伤的心肌细胞存活率,降低NO浓度、细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率[(18.25±2.64,P<0.05),(13.83±1.52,11.21±1.76, P<0.01)],PTF组可有效减少缺氧/复氧损伤心肌细胞内Caspase-3 mRNA的表达。 结论: PTF可通过抑制心肌细胞内钙超载、减轻过量NO的细胞毒性作用、下调Caspase-3表达,从而保护心肌细胞。     

薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的:研究薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,以不同剂量的薯蓣皂苷进行干预。实验分为5组:空白对照组、缺氧/复氧组、薯蓣皂苷低、中、高剂量(10,20,40μmol/ml)干预组。MTT法检测心肌细胞存活率;TUNEL法检测心肌细胞凋亡百分率;Fluo-3负载激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化;硝酸还原酶法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度。结果:与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,心肌细胞[Ca2+]i荧光强度明显减弱,心肌细胞培养液中NO浓度降低。结论:薯蓣皂苷能有效抑制缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞的凋亡,其可能与减轻细胞内钙超载,抑制受损心肌细胞NO升高,减轻过量NO的细胞毒性作用有关。     

迷迭香酸对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用研究

目的：研究迷迭香酸对大鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。 方法：体外培养大鼠原代心肌细胞,复制心肌细胞缺氧复氧损伤模型,分别观察细胞活力和LDH漏出的改变,采用化学发光法检测细胞ATP含量变化,利用荧光探针技术检测细胞内ROS产生的变化,采用流式细胞术及Western blot法进一步考察迷迭香酸对心肌细胞凋亡,cleaved-caspase 3,Akt和p-Akt蛋白表达的影响。 结果：实验结果显示,25,50,100 mg·L^-1迷迭香酸均能显著抑制缺氧复氧导致的细胞活力下降,LDH漏出及ROS的过度产生,并能维持细胞内ATP水平;50,100 mg·L^-1迷迭香酸显著抑制缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡和下调cleaved-caspase 3 蛋白表达,并且100 mg·L^-1迷迭香酸能够明显上调p-Akt 蛋白的表达。 结论：迷迭香酸具有显著的抗心肌细胞缺氧复氧损伤作用,能够改善心肌细胞能量代谢和减少细胞凋亡,其保护作用可能是通过激活Akt通路实现的。     

栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制研究

[目的]探讨栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制。[方法]体外培养H9C2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。实验分为正常对照组,缺氧/复氧模型组,栀子苷预处理组。分光光度法测定细胞培养液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量以及过氧化物歧化酶(SOD)活性,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术测定细胞凋亡率。[结果]与模型组比较,栀子苷预处理组能明显减少心肌细胞CK、LDH的漏出量,提高SOD活力,降低MDA含量,同时提高心肌细胞的存活率,减少心肌细胞的凋亡。[结论]栀子苷预处理对H9C2心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与增强心肌抗氧化能力、清除氧自由基以及抑制心肌细胞凋亡有关。     

维拉帕米对缺氧复氧心肌细胞自噬的影响

目的 观察维拉帕米对缺氧/复氧心肌细胞的自噬相关基因Beclin-1及抗凋亡基因Bcl-2 基因的影响,探讨钙离子拮抗剂维拉帕米对心肌细胞的保护作用机制.方法建立心肌细胞的缺氧/复氧（ H/R）模型,用噻唑蓝染色法（MTT法）检测心肌细胞的存活率,实时荧光定量法（RT-PCR法）测自噬相关基因Beclin-1、LC-3 mRNA的表达量及凋亡相关基因Bcl-2 mRNA的表达量.结果与正常对照组相比,缺氧/复氧组心肌细胞存活率降低,同时Beclin-1及LC-3 mRNA的表达量增加,Bcl-2 mRNA的表达量降低（P＜0.05）.维拉帕米组可抑制Beclin-1 mRNA的表达量,提高Bcl-2 mRNA的表达量（P＜0.05）,明显提高缺氧/复氧心肌细胞的存活率.结论维拉帕米可通过抑制Bcl-2/Beclin-1途径保护缺氧/复氧心肌细胞.     

葛花总黄酮对缺氧/复氧心肌细胞的抗氧化作用研究

目的 研究葛花总黄酮预处理对缺糖缺氧/复氧复糖(A/R)损伤心肌细胞的抗氧化作用.方法 连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立乳鼠心肌细胞A/R损伤模型,不同剂量葛花总黄酮(10,30,100 mg·L-1)预处理24h后,运用比色法测定细胞内SOD活性及MDA含量和上清液中iNOS活力;运用Annexin V/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡变化.结果 与A/R模型组比较,葛花总黄酮预处理组能显著提高SOD活性(P＜0.05),降低培养液中iNOS释放量及胞内MDA含量,同时使细胞凋亡率显著降低(P＜ 0.05或P＜0.01).结论 葛花总黄酮预处理对A/R损伤心肌细胞具有明显的保护作用,此作用可能与增加SOD活性、清除自由基的产生、增强心肌抗氧化能力有关.     

瓜蒌皮提取物基于PI3K/Akt/NO信号通路保护缺氧/复氧损伤心肌细胞的机制

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/一氧化氮(PI3K/Akt/NO)信号通路在瓜蒌皮提取物保护心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法:以2.5 mmol·L~(-1)Na_2S_2O_4诱导心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常组、模型组、瓜蒌皮提取物组及抑制剂组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心肌细胞中一氧化氮(NO)的释放量及内皮型一氧化氮合酶(e NOS),诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的活性水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中Akt,e NOS,i NOS mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Akt,磷酸化Akt(p-Akt),e NOS,i NOS蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组心肌细胞活力明显下降(P0.01),心肌细胞NO释放量减少(P0.01),心肌细胞中p-Akt,Akt及e NOS mRNA和蛋白表达显著降低(P0.01),而i NOS mRNA和蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,瓜蒌皮提取物预处理24 h后能改善心肌细胞形态,明显提高心肌细胞活力(P0.01)。瓜蒌皮提取物能促进p-Akt,Akt及e NOS mRNA和蛋白表达(P0.01),抑制i NOS mRNA和蛋白的表达(P0.01),增加心肌细胞NO的释放量(P0.01)。PI3K抑制剂LY294002与瓜蒌皮提取物联合处理后,逆转了瓜蒌皮提取物对心肌细胞的上述作用,导致细胞存活率下降。结论:瓜蒌皮提取物可能通过激活PI3K/Akt信号通路上调e NOS,下调i NOS的表达,增加内源性NO的基础含量水平,发挥抗凋亡作用,从而改善缺氧/复氧损伤诱导的心肌细胞损伤。     

基于PI3K/AKT信号通路的谷红注射液抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制研究

目的基于PI3K/AKT信号通路,探讨谷红注射液(guhong injection,GHI)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法培养H9c2心肌细胞,CCK-8比色法筛选GHI实验剂量。将细胞随机分为8组:正常组、模型组、GHI低、中、高剂量组(30、60和90μL·mL^-1)、阳性药组(维拉帕米注射液7.5μL·mL^-1)、GHI+LY294002(PI3K抑制剂)组和LY294002组。除正常组外,其他组均建立缺氧4 h复氧16 h的H/R损伤模型。ELISA检测各组细胞内肌酸激酶同工酶(CKMB)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,Western blot法检测各组细胞内p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT及GSK-3β蛋白表达水平。结果与模型组相比,各给药组LDH、CK-MB均降低(P<0.05),MDA降低(P<0.01)、SOD升高(P<0.01)。p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及GSK-3β蛋白表达水平均升高(P<0.01)。给予LY294002后,与模型组相比,LDH、CK-MB、MDA及SOD无显著性差异,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及GSK-3β蛋白表达水平均降低(P<0.01)。结论GHI可以明显减轻H/R对H9c2心肌细胞造成的损伤,表现出抗氧化应激与抗凋亡的作用,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

乙酰葛根素对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨脑缺血再灌注后乙酰葛根素的脑保护作用及其机制。方法:线栓法制作脑缺血再灌注模型,为假手术组、脑缺血再灌注组、胞磷胆碱组(0.6 mg·kg-1)、乙酰葛根素低、中、高剂量(10,50,250 mg·kg-1)i,g 10 d干预组。采用TUNEL法检测脑组织细胞凋亡情况,采用免疫组化方法观测各组大鼠脑内PI3-K(磷脂酰肌醇-3-激酶)和Akt(丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶)的表达情况并进行神经功能缺损评分。结果:乙酰葛根素3个剂量组神经功能评分比模型组显著改善(P<0.01),凋亡细胞数也显著下降(P<0.01),脑组织PI3-K和Akt表达显著升高(P<0.01),且呈量效关系,高剂量组较胞磷胆碱组疗效显著(P<0.05)。结论:激活PI3-K/Akt信号通路可能是乙酰葛根素减少神经细胞凋亡、起到神经保护作用的机制之一。     

迷迭香酸干预PI3K/Akt信号通路保护缺氧/复氧损伤血脑屏障功能的影响

[目的]考察迷迭香酸对缺氧/复氧损伤血脑屏障功能的影响并探讨作用机制.[方法]通过单层血脑屏障体外模型,考察药物对细胞活力、乳酸脱氢酶漏出率、跨细胞间电阻值、异硫氰酸荧光素-葡聚糖透过率的变化,同时分析相应关键信号分子的变化.[结果]与正常对照组比较,缺氧/复氧损伤可导致细胞活力降低,乳酸脱氢酶漏出增加,跨细胞间电阻值...     

山柰酚和槲皮素对乳鼠心肌缺氧复氧及过氧化损伤的保护作用

目的:观察山柰酚和槲皮素对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的干预作用并探讨其作用机理。方法:取大鼠新生乳鼠心肌细胞做原代培养,MTT法检测细胞活力,确定药物作用安全范围;考察药物对心肌细胞缺氧复氧损伤模型LDH漏出的改变;复制心肌细胞过氧化氢损伤模型,观察药物对细胞活力及上清液中LDH含量的影响。结果:山柰酚和槲皮素125μg/ml以下对心肌细胞活力无明显影响。山柰酚或槲皮素100、50、25、12.5μg/ml均可以降低缺氧复氧损伤后心肌细胞的LDH漏出率(P<0.01或P<0.05),其中山柰酚100、50、25μg/ml浓度,槲皮素以50、25、12.5μg/ml浓度作用较佳。山柰酚、槲皮素对心肌细胞过氧化氢损伤均有显著的抑制作用,均呈浓度依赖性,并可显著降低过氧化氢损伤所致的LDH释放。结论:山柰酚和槲皮素具有显著的抗心肌细胞缺氧损伤的能力,与其抗氧化的药理作用有关。     

川芎内酯A预处理对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:观察川芎内酯A预处理对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用。方法:单纯低氧/再给氧为心肌细胞低氧2小时、复氧1小时。低氧预处理为心肌细胞低氧25min/复氧30min后,再低氧2小时、复氧1小时。川芎内酯A预处理为心肌细胞经药物孵育55min后,低氧2小时,复氧1小时。实验结束后取上清液测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD);β液体闪烁计数仪测心肌细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活性。结果:川芎内酯A预处理可使上清液中LDH漏出明显减少,MDA含量降低,SOD活性提高。还可降低心肌细胞内MAPK活性与H/R组比较。结论:川芎内酯A预处理对体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,MAPK信号传导途径可能参与这一保护作用。     

基于PI3K／Akt信号转导通路的通脉醒脑滴丸治疗脑缺血的机制研究

目的：探讨中药复方制剂通脉醒脑滴丸防治脑缺血卒中的作用机理。方法：选用线栓阻断大鼠大脑中动脉法复制脑缺血再灌注模型,采用荧光定量PCR方法测定脑组织PI3K、Akt和PTEN的表达,并通过免疫组化方法测定脑组织HIF-1a和VEGF的表达,考察通脉醒脑滴丸对PI3K／Akt信号通路的作用。结果：通脉醒脑滴丸能上调脑组织PI3K、Akt、HIF-1a以及VEGF的表达,下调PTEN的表达。结论：研究初步证实通脉醒脑滴丸对脑缺血损伤具有保护作用,其机制可能与介导PI3K／Akt细胞存活通路的激活或上调有关。     

心肌细胞缺氧／复氧损伤模型研究与应用进展

心肌细胞缺氧,复氧损伤模型是体外筛选抗心肌缺血,再灌注损伤活性物质的模拟模型,有效建立该模型是筛选结果可靠的保证。本文从心肌细胞缺氧,复氧损伤模型建立的一般程序,心肌细胞种类的选择与培养,心肌细胞缺氧腹氧损伤模型建立的方法等方面就近年来国内外心肌细胞缺氧,复氧损伤模型的研究与应用情况进行了综述,并就模型建．立中需要注意的相关问题进行了探讨。为有效复制该模型提供参考。     

参元丹含药血清对缺氧复氧心肌细胞自噬的影响

目的:观察参元丹含药血清对缺氧复氧心肌细胞自噬的影响,探讨参元丹心肌保护作用机制。方法:建立缺氧复氧心肌细胞损伤模型,采用免疫细胞化学法观察心肌细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)和磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法测定自噬相关基因(Beclin-1)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达量。结果:与正常对照组相比,缺氧复氧组LC3和PI3K荧光表达增强,参元丹含药血清组与相应浓度空白血清组相比,细胞LC3和PI3K荧光表达强度减弱,其中参元丹含药血清10%组PI3K荧光强度明显降低,具有统计学意义(P0.05);缺氧复氧组细胞Beclin-1和Caspase-3 mRNA表达量明显升高,与相应浓度空白血清组相比,参元丹含药血清组Beclin-1 mRNA表达水平明显降低;参元丹含药血清5%组Caspase-3 mRNA表达量降低。结论:参元丹含药血清对缺氧复氧细胞自噬具有抑制作用,可能与抑制PI3K,下调Beclin-1和Caspase-3基因有关。