加减柴平汤对慢性乙型病毒性肝炎肝纤维化及肝星状细胞凋亡的影响

目的观察加减柴平汤对慢性乙型病毒性肝炎（以下简称乙肝）肝纤维化及肝星状细胞（HSC）凋亡的影响。方法将60例慢性乙肝患者随机分为2组,均予甘草酸二胺注射液、门冬氨酸钾镁注射液治疗,治疗组30例加用柴平汤加减治疗;对照组30例加用复方鳖甲软肝片口服治疗。2组均4周为1个疗程,6个疗程后观察生化指标、血清肝纤维化指标、肝脏病理学改变及肝星状细胞凋亡率的变化。结果治疗组治疗后丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TB iL）、血清透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）及层粘连蛋白（LN）均低于本组治疗前（P〈0.05）;对照组治疗后ALT、AST、TB iL均低于本组治疗前（P〈0.05）;治疗组治疗后AST、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ-C均低于对照组治疗后（P〈0.05）。2组治疗后肝组织炎症计分、肝组织纤维化计分均较本组治疗前降低（P〈0.05）,治疗组治疗后肝组织炎症计分、肝组织纤维化计分均低于对照组（P〈0.05）。治疗组治疗后HSC凋亡率较本组治疗前、对照组治疗后均升高（P〈0.01）。结论加减柴平汤具有明显的保肝降酶、改善血清肝纤维化及促进肝星状细胞凋亡的作用。     

肝星状细胞的凋亡机制研究进展

大量研究发现激活状态的肝星状细胞(HSC)减少主要通过凋亡.而凋亡机制到目前为止仍然未清楚.其凋亡机制非常复杂,而很多的研究都提示HSC的凋亡与细胞因子及细胞外基质,NF-kB及其他因素有关.而控制细胞的生死程序以基因的形式存储于细胞中.当凋亡诱导因素作用细胞时按死亡程序凋亡.笔者就其机制作一综述.     

肝星状细胞的凋亡与肝纤维化的研究进展

<正>肝星状细胞(HSC)是肝脏的一种间质细胞,肝纤维化(HF)是肝脏对各种原因所致肝损伤的创伤愈合反应,由于损伤引起HSC激活及其转化为肌成纤维细胞(MF),从而大量合成各种细胞外基质(ECM)沉积于肝脏,最终导致HF。激活状态HSC减少主要通过HSC的凋亡来实现,抑制HSC激     

肝星状细胞(HSC)凋亡机制研究进展

肝星状细胞是一种肝脏非实质性细胞,它的活化、增殖与凋亡在肝纤维化过程中起着核心作用。HSC的凋亡是减少活化的HSC的主要途径,其凋亡机制非常复杂,主要与一些细胞因子、相关基因和蛋白、粘附分子等有关。     

垂盆草总黄酮影响肝星状细胞凋亡的作用机制研究

目的:研究垂盆草总黄酮(SSTF)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响及其作用机制。方法:将不同质量浓度的SSTF与HSC-T6细胞共培养不同时间后,MTT法检测SSTF对HSC-T6细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪Annexin-V/PI双染方法检测SSTF对HSC-T6细胞凋亡的影响;应用Western blotting和Real-time PCR方法观察药物对凋亡相关细胞因子Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白及mRNA表达的影响。结果:SSTF能显著抑制HSC-T6细胞增殖、诱导细胞凋亡,且呈剂量和时间依赖;Western blotting结果显示,SSTF通过抑制Bcl-2,促进Bax和Caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡;进一步采用Real-time PCR研究发现,Bcl-2能够从mRNA水平抑制Bcl-2、促进Bax和Caspase-3表达。结论:SSTF具有促进HSC-T6凋亡的作用,这种作用的发挥主要是通过抑制Bcl-2、促进Bax和Caspase-3蛋白和mRNA的表达实现的。     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的:观察壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠肝组织中肝星状细胞凋亡的影响,从细胞凋亡的角度探讨本方治疗肝纤维化的作用机理.方法:将100只Wistar大鼠随机分为正常对照组20只、观察组80只,参照相关文献复制大鼠肝纤维化模型,造模过程中,于第4周末随机处死正常对照组及观察组大鼠各5只,证实肝纤维化形成后,将观察组其余大鼠随机分为模型组、壮肝逐瘀煎大、中、小剂量组及秋水仙碱对照组,分别予生理盐水、壮肝逐瘀煎大、中、小剂量及秋水仙碱灌胃,日1次;12周后处死大鼠,观察肝脏组织病理学变化,采用免疫组化TUNEL、a-SMA 双标记检测肝星状细胞的凋亡情况.结果:壮肝逐瘀煎能加速活化肝星状细胞的凋亡,改善肝组织的纤维化程度.结论:壮肝逐瘀煎能有效抗大鼠肝纤维化,其作用机制是通过诱导星状细胞凋亡来实现的.     

乙肝散对肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的通过观察中药乙肝散的药物血清对肝星状细胞(HSC/T6)的增殖及凋亡的影响,从细胞学和分子生物学水平探讨中药乙肝散的抗纤维化的作用机制,为临床用药提供理论依据。方法①MMT法测定细胞增殖。②用流式细胞仪测定各组各浓度药物血清对HSC/T6作用后的DNA含量,低于G1期DNA含量主峰(亚G1期峰)的细胞为凋亡细胞。结果5%,10%和20%浓度的乙肝散的药物血清均对HSC/T6的增殖有显著的抑制作用,对HSC/T6的凋亡率分别为8.63%,14.56%和21.95%。结论中药乙肝散能抑制HSC/T6的增殖,诱导HSC/T6的凋亡,因此促进活化的HSC的凋亡可能是乙肝散抗肝纤维化的细胞分子学重要机制之一。     

中药诱导肝星状细胞凋亡的研究进展

概述近年来中药诱导肝星状细胞（HSC）凋亡的研究进展。诱导HSC凋亡是减少活化的HSC、逆转肝纤维化的主要途径,中药以其多路径、多环节、多靶点的作用方式,在诱导HSC凋亡、治疗肝纤维化方面显示出确切的疗效。     

积雪草酸诱导大鼠肝星状细胞凋亡

目的 探讨积雪草酸诱导大鼠肝星状细胞系 HSC-T6 凋亡的作用。方法 用乳酸脱氢酶 (LDH) 法和 MTT 法检测积雪草酸对 HSC-T6 细胞的细胞毒性和增殖的影响。不同浓度积雪草酸作用外源性β-转化生长因子 (TGF-β) 激活的 HSC-T6 细胞,通过 Western blotting 方法检测 HSC-T6 细胞凋亡信号分子 Caspase-3 以及Ⅰ型胶原蛋白表达。结果 积雪草酸 (≤30 μmol/L) 对 HSC-T6 细胞无显著的细胞毒性且对细胞增殖无明显作用。积雪草酸可上调 HSC-T6 细胞 cleaved-caspase-3,同时抑制Ⅰ型胶原蛋白表达。结论 积雪草酸可通过诱导 HSC-T6 细胞凋亡达到抑制肝纤维化的作用。     

红景天苷对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的观察红景天苷对乙醛刺激的肝星状细胞(HSC)凋亡的诱导作用,以及此过程中c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)活性的变化.方法体外培养大鼠HSC株;用不同浓度的红景天苷(1.0、1.5、2.0 mg/mL)对乙醛(200μmol/L)刺激的大鼠HSC进行处理,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Westernblot法检测磷酸化JNK(p-JNK)蛋白水平.结果不同浓度的红景天苷对乙醛刺激的HSC中p-JNK的水平有明显下调作用(平均光密度比值分别为35.8±3.4、24.9±2.7、3.4±0.9),强度呈剂量依赖关系,同乙醛组(MVI值为48.6±4.8)相比有显著性差异(P＜0.05);同时具有促进细胞凋亡的作用:空白对照组及乙醛组中细胞凋亡率为2.0±0.5%、11±2.0%,两者有极显著性差异(P＜0.01),经红景天苷处理后细胞凋亡率均上升(分别为27±3.2%;33±2.5%;53±3.5%),与乙醛组相比有显著性差异(P＜0.05).结论红景天苷可以诱导乙醛刺激的HSC凋亡,下调JNK活性可能是其诱导HSC凋亡的机制之一.     

保肝宁对肝星状细胞的促凋亡作用

目的:采用血清药理学方法观察保肝宁对肝星状细胞(HSC)凋亡的影响。方法:给正常Wistar大鼠灌胃保肝宁煎剂7 d,制备含药血清,以HSC为研究对象,采用荧光染色、琼脂糖凝胶电泳法、WesternBlot法观察其对HSC凋亡的影响。结果:保肝宁能显著促进体外培养的HSC的凋亡,随着作用时间的延长,HSC的凋亡明显增多;保肝宁可显著抑制NF-kB、IkB的表达。结论:凋亡是活化的肝星状细胞减少的主要途经,保肝宁对HSC的促凋亡作用是抗肝纤维的主要机制之一。     

复方六月青诱导肝星状细胞凋亡的研究

目的:研究复方六月青(CLYQ)对肝星状细胞(HSC)凋亡的影响。方法:采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测CLYQ对细胞的毒性。采用吖啶橙荧光染色和流式细胞术检测CLYQ对HSC凋亡的影响。结果:CLYQ对HSC毒性很低。吖啶橙荧光染色法结果显示,与空白对照组相比较,CLYQ对HSC-T6凋亡细胞比例的影响有统计学差异(P<0.01),其凋亡率细胞比例有明显的剂量依赖性。流式细胞术结果显示,空白对照组凋亡细胞比例为4.82,CLYQ 3.6mg/mL浓度组凋亡细胞比例为10.10,1.8mg/mL浓度组凋亡细胞比例为6.76,0.9mg/mL浓度组凋亡细胞比例为5.18。结论:CLYQ通过诱导HSC细胞凋亡,从而发挥抗肝纤维化作用。     

丹参对肝星状细胞增殖和凋亡影响的实验研究

应用肝星状细胞系观察丹参对体外培养的肝星状细胞增殖和凋亡的影响。ＭＴＴ比色法检测表明，丹参可以抑制体外培养的肝星状细胞增殖；采用电镜观察、ＴＵＮＥＬ法和流式细胞仪检测细胞凋亡表明，丹参可以显著促进其凋亡，并呈剂量依赖关系（Ｐ〈０．０５），因此，丹参对活化的肝星状细胞有抑制作用。     

抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞整合素信号及凋亡的影响

目的：探讨抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及整合素信号通路的下游信号分子FAK在其中的作用。方法：将传代培养的大鼠肝星状细胞系（HSC—T6）与中药复方抗纤软肝颗粒药物血清（5％、10％、20％）共同培养48h后，应用MTT法测定细胞增殖；应用流式细胞仪测定细胞凋亡；采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测FAKmRNA的表达。结果：抗纤软肝颗粒药物血清，均能显著抑制HSC—T6增殖，20％药物血清组作用最强（P〈0．05）；流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物血清均可诱导HSC凋亡（P〈0.05）；抗纤软肝颗粒药物血清能够使HSC的FAKmRNA的表达下调。结论：抗纤软肝颗粒能够抑制HSC增殖及诱导凋亡HSC。其作用可能与其抑制整合素信号通路下游信号分子FAKmRNA的表达有关。     

罗汉果甜苷对体外人肝星状细胞活化和凋亡的影响

目的研究罗汉果甜苷对体外培养人肝星状细胞LX-2活化及凋亡的影响。方法体外培养LX-2,将其分为空白对照组、不同质量浓度的罗汉果甜苷干预组(80、160、240、320μg/mL),每组8瓶细胞,药物与细胞共同孵育24 h后,采用CCK-8试剂检测细胞增殖状态,用酶联免疫吸附法测定转化生长因子-β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原的蛋白分泌,用RT-PCR法检测TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA的表达。用流式细胞仪双染法检测细胞凋亡。结果 CCK8结果显示罗汉果甜苷各剂量组作用LX-2细胞24 h后,细胞增殖均明显降低(P<0.05);ELISA和RT-PCR结果表明,与空白对照组比较,罗汉果甜苷各剂量组可抑制LX-2中TGF-β1和Ⅰ型胶原的蛋白分泌;并能抑制TGF-β1和α-SMA的mRNA表达(P<0.05)。流式细胞检测结果显示罗汉果甜苷各剂量组亦可剂量依赖性显著增加LX-2凋亡率。结论罗汉果甜苷可通过抑制TGF-β1和I型胶原的蛋白及TGF-β1和α-SMA的mRNA的表达来抑制肝星状细胞活化,还能促进肝星状细胞凋亡,从而发挥抗肝纤维化的作用。     

草苁蓉乙醇提取物对大鼠肝星状细胞体外增殖与凋亡的影响

目的:探讨草苁蓉乙醇提取物对体外培养的大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)生长抑制及诱导凋亡的影响.方法:选用大鼠HSC-T6进行体外培养,用MTT法测定0.25,0.5,0.75,1.0 g·L-1草苁蓉乙醇提取物作用12,24,36,48 h后对细胞增殖的抑制作用;应用Annexin V与碘化丙啶(PI)双染色荧光显微镜及透射电镜技术观察药物作用后细胞形态学改变;应用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率的变化.结果:①MTT实验表明草苁蓉乙醇提取物能抑制HSC-伪细胞增殖,并显出量效和时效关系.0.75 g·L-1草苁蓉刺激12,24,36,48 h对HSC-T6增殖的抑制率分别为(44.58 ±1.42)％,(51.56±1.34)％,(63.83±0.99)％,(74.77±3.40)％(P＜0.05).②荧光显微镜及透射电镜观察发现草苁蓉乙醇提取物作用于HSC -T6细胞后呈现出典型的细胞凋亡形态学改变,细胞表面微绒毛消失,细胞体积变小,细胞质浓缩,核染色质边集、细胞核固缩、核碎裂、出泡等.③草苁蓉处理后HSC-T6被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率上升,且表现出明显量效关系.0.75 g·L-1草苁蓉乙醇提取物改变HSC-T6周期分布,使G0/G1期细胞由(50.33±0.80)％增至(61.46±1.07)％,表现出G0/G1期阻滞;同时诱导HSC-T6凋亡,凋亡率由(1.44±0.43)％增至(14.20±0.98)％(P＜0.05).结论:草苁蓉乙醇提取物可明显抑制HSC-T6细胞增殖,其作用可能与诱导细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

参七内金散对四氯化碳肝纤维化模型大鼠肝星状细胞活化与凋亡的影响

目的：观察参七内金散抗大鼠肝纤维化的作用机制。方法：雄性SD大鼠30只随机分为3组：正常组、模型对照组、参七内金散组。以CCl4皮下注射造模,首次注射100%CCl45mL/kg体重,之后40%CCl4 橄榄油溶液3mL/kg皮下注射,2次/周,连续注射6周。造模成功后以0.8g/kg的参七内金散灌胃模型大鼠共2周,正常组与模型对照组则予以等量生理盐水灌胃,共2周。以盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸含量,分别以HE、天狼猩红染色观察肝组织的炎症与纤维化病理。免疫印迹及免疫组化检测α-SMA的表达,观察肝星状细胞活化;连续切片,依次TUNEL染色与α-SMA免疫组化双染色,观察肝星状细胞凋亡。结果：与正常大鼠比较,模型大鼠肝组织可见大量肝组织脂肪变性及胶原病理沉积,并可见纤维间隔形成;参七内金散显著能改善模型大鼠肝组织脂肪变性与胶原病理沉积,降低肝组织Hyp含量。正常大鼠仅表达少量α-SMA,主要分布于血管壁,未见凋亡星状细胞;模型组大鼠可见大量α-SMA表达,可见少量凋亡星状细胞;与模型组比较参七内金散组肝组织α-SMA表达显著减少（P≤0.01）,但凋亡肝星状细胞显著增多。结论：参七内金散具有抗肝纤维化作用;抑制肝星状细胞活化、促进活化的肝星状细胞凋亡是参七内金散抗肝纤维化的机理之一。     

调肝理脾方药血清对大鼠离体肝星状细胞相关凋亡基因产物的影响

目的:探讨中药复方调肝理脾方诱导大鼠肝星状细胞凋亡的环节及作用.方法:培养大鼠肝星状细胞,给予乙醛的干预,免疫细胞化学和图象半定量分析的方法测定各肝星状阳性细胞的平均灰度值.结果:中剂量和高剂量组方药血清可以通过减少Bcl-2和FasL的表达与增加p53和Fas的表达,促进活化的肝星状细胞凋亡(P＜0.01,P＜0.05),并且其诱导凋亡作用中Bcl-2的表达是高度敏感的.结论:调肝理脾方药血清可以通过减少Bcl-2和FasL的表达与增加p53和Fas的表达的环节干预大鼠肝星状细胞凋亡.     

苦参碱对人肝星状细胞系LX-2凋亡影响的研究

肝纤维化是肝病研究领域的一大热点,目前认为诱导活化的肝星状细胞(HSC)凋亡是治疗肝纤维化的有效方法。肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)是TNF超家族的新成员[1]。研究表明TRAIL通过与死亡受体(death receptor,DR)的功能受体DR4、DR5结合,能诱导活化型HSC凋亡,如何提高靶细胞DR4、DR5表达水平成为此类研究的热点问题之一。近年研究表明,苦参碱有抗肝纤维化作用,但其作用机制尚未明确。本研究通过观察苦参碱对体外培养HSC的DR4、DR5表达的影响,探讨苦参碱抗肝纤维化的可能机制。     

四逆散加丹参对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨中药复方四逆散加丹参抗肝纤维化,对肝星状细胞(HSC)的增殖、凋亡的影响。方法:采用中药复方四逆散加丹参对体外培养的HSC进行干预,通过MTT法、电镜、流式细胞术等方法,对HSC增殖与凋亡进行研究。结果:四逆散加丹参组HSC细胞增殖率明显低于空白对照组(P<0. 05),并呈剂量效应关系。电镜下四逆散组中的凋亡HSC染色质固缩,聚集于核膜下呈境界分明的块状或半月形小体,细胞浆浓缩或裂解成质膜包绕的凋亡小体。结论:中药四逆散加丹参具有抑制HSC增殖,促进HSC凋亡的作用,这可能是四逆散抗肝纤维化的作用机制之一。