糖尿病大鼠尿nephrin的检测及意义

目的:建立糖尿病大鼠模型,探讨糖尿病大鼠尿中nephrin的检测、动态变化及意义。方法:SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素制成糖尿病模型,正常对照组注射等量枸橼酸缓冲液,动态检测各组大鼠24 h尿微量白蛋白及肾功能,以Western-Blot方法动态检测尿中nephrin。结果:正常大鼠尿中无nephrin排泄,而糖尿病大鼠尿中可检测出nephrin,诱模早期(2周)即可出现,随着病程的延长,nephrin逐渐增多,8周达高峰后,nephrin的排泄又逐渐减少。结论:糖尿病肾病早期nephrin即可从尿中排泄,尿nephrin可作为糖尿病肾病的早期诊断指标之一,还将有助于监测、判断糖尿病肾病的病程进展。     

缬沙坦对小鼠足细胞GPSD核心蛋白在高糖环境下表达的影响

目的通过观察缬沙坦体外干预高糖环境培养的小鼠足细胞nephrin、podocin和CD2AP的表达,探讨RAS抑制剂治疗糖尿病肾病蛋白尿的机制。方法用不同浓度的缬沙坦干预高糖(25mmol/L的葡萄糖)培养24h后的小鼠足细胞,以RT-PCR方法检测干预前后足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA的表达水平;以间接免疫荧光法检测2×10-5mol/L缬沙坦干预后nephrin、podocin蛋白的表达。结果①与对照组相比,高糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA表达显著减弱(P<0.01);②缬沙坦能显著上调高糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP mRNA的表达(P<0.05或P<0.01);③2×10-5mol/L缬沙坦能显著上调高糖对足细胞nephrin和podocin(P<0.05)蛋白表达的抑制。结论缬沙坦显著上调髙糖诱导的足细胞nephrin、podocin和CD2AP的表达,可能是其独立于降压作用以外的降低糖尿病肾病蛋白尿的机制之一。     

替米沙坦对糖尿病肾病患者尿nephrin排泄的影响

目的 探讨糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）患者尿nephrin排泄的变化及替米沙坦干预对其的影响.方法 62例DN患者经2周洗脱期后给予替米沙坦40 mg/d＆#215;4周,继以替米沙坦80 mg/d＆#215;4周.另有20例健康志愿者作为正常对照组.采用ELISA法检测尿nephrin蛋白.结果 正常对照组尿液中未检测到nephrin,DN患者组尿液中可检测到nephrn排泄,随DN病情的进展,大量白蛋白尿组比微量白蛋白尿组尿nephrin排泄增加.经替米沙坦治疗后,微量白蛋白尿组患者尿nephrin下降较为明显,大量自蛋白尿组患者治疗前后尿nePhrin 变化无统计学意义.结论 尿nephrin检测可预测DN肾病病情进展,替米沙坦可减少尿nephrin排泄,具有肾脏保护作用.     

益气活络方对糖尿病肾病大鼠nephrin表达的影响

目的观察益气活络方对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏组织中nephrin蛋白及mRNA表达的影响。方法将50只SD大鼠随机抽取10只作为空白对照组(A组);剩余大鼠行单侧肾脏摘除术后,链尿佐菌素(STZ)诱导糖尿病,维持长期(8周)高糖状态的方法进行DN大鼠模型复制,将模型复制成功的大鼠随机分为两组,分别为模型对照组(B组);益气活络方治疗组(C组),每组11只。C组大鼠连续给药6周进行治疗,实验结束后,检测各组大鼠24 h尿微量白蛋白;采用免疫荧光方法检测各组大鼠肾脏组织中nephrin蛋白表达水平;采用RT-PCR方法检测各组大鼠肾脏组织中nephrin mRNA表达水平。结果 B、C组大鼠的24 h尿蛋白量均明显高于A组(P<0.01),而C组则明显低于B组(P<0.05)。A组大鼠肾小球中nephrin阳性表达的细胞数显著多于B、C组(P<0.01),与B组比较,C组大鼠肾小球中nephrin阳性细胞显著增多(P<0.05)。A组大鼠肾皮质中nephrin mRNA表达水平显著高于B、C组(P<0.01),与B组比较,C组大鼠肾皮质中nephrin mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。结论上调nephrin基因及蛋白的表达水平可能是益气活络方减少尿蛋白的机制之一。     

糖尿病大鼠AGEs与nephrin表达的研究

目的：探讨终末期糖基化产物（AGEs）、肾病蛋白（nephrin）在糖尿病大鼠肾脏组织中的表达及其在糖尿病肾病发生、发展中的作用。方法：用免疫组化方法检测链脲佐菌素诱发糖尿病及正常对照SD大鼠肾脏中AGEs、nephrin的表达,并计算其阳性指数,同时测定各组大鼠24 h尿蛋白定量及肾功能等一般生化指标,并对大鼠肾脏AGEs、nephrin与蛋白尿进行相关分析。结果：与对照组相比,糖尿病组大鼠肾小球上AGEs表达明显增加（P〈0.01）,nephrin表达明显减少（P〈0.01）,24 h尿蛋白排泄量明显增加（P〈0.01）,大鼠肾小球AGEs的表达和nephrin的表达呈负相关（r=-0.921,P〈0.01）;nephrin蛋白表达与24 h尿蛋白排泄量呈负相关（r=-0.904,P〈0.01）;AGEs表达与24 h尿蛋白排泄量呈正相关（r=0.974,P〈0.01）。结论：AGEs可能介导了nephrin的表达缺失,进而导致足细胞损伤并加速了糖尿病肾病的进展。     

Nehrin在微小病变型肾病大鼠模型中的表达

目的:观察nephrin在大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型(PAN)中的表达变化,探讨其在蛋白尿发生中的作用。方法:通过建立大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型,应用光镜、电镜观察肾脏病理改变,应用免疫组织化学技术和RT鄄PCR观察nephrin在不同时间点肾病模型大鼠蛋白水平和mRNA水平表达改变情况。结果:①PAN注射后第1天和第3天,大鼠24h尿蛋白的排泄量较对照组无显著差异;第10天达高峰,较对照组有显著差异(P<0.01);第20天,尿蛋白排泄量逐渐下降,较对照组仍有显著差异(P<0.05);②在PAN肾病模型第3和第10天,透射电镜显示足细胞足突融合;③nephrin蛋白和mRNA水平的表达在大鼠PAN肾病模型第1天即出现下降,第3天出现明显下降,第10天下降到最低点,第20天,随着蛋白尿的恢复nephrin的表达也逐渐恢复;④肾小球足细胞nephrin表达的变化与肾病模型大鼠24h尿蛋白定量的变化呈负相关。结论:①nephrin表达的改变与大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型蛋白尿的发生密切相关;②nephrin是判断肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标。     

糖尿病肾病MKR小鼠蛋白尿与尿中nephrin、PCX含量相关性分析

目的 通过检测糖尿病肾病（DN）MKR小鼠足细胞结构蛋白nephrin 与足细胞标记蛋白（PCX）在肾组织中的表达量及尿中的含量,分析尿微量白蛋白(UmAlb)与尿中nephrin、PCX蛋白含量的相关性。方法 取30只8周龄MKR小鼠随机分为2组（空白组和DN组）,空白组以普通饲料喂养,将DN组小鼠单肾切除并加以高脂喂养2个月复制DN模型;另取15只同龄C57野生鼠为正常对照组,以普通饲料喂养。造模前1 d、喂养4周及8周后,采用电化学法检测各组小鼠空腹血糖(FBG);喂养8周后,取各组小鼠肾脏组织,用电镜观察肾组织足细胞形态结构;Western blot检测肾组织中nephrin、PCX蛋白表达含量;ELISA 法测定尿中UmAlb含量及nephrin、PCX蛋白表达含量。结果 电镜结果显示:喂养8周后,与C57组比较,DN组小鼠肾小球足细胞结构损伤明显,DN组FBG升高( P<0.01),且肾组织中nephrin、PCX蛋白表达下调,而尿中nephrin、PCX蛋白含量及UmAlb 含量均升高( P<0.01)。相关分析显示,尿UmAlb与尿中nephrin和PCX蛋白含量呈正相关（相关系数r=0.920,决定系数R 2=0.829, P<0.05)。结论 尿中nephrin、PCX蛋白含量与UmAlb含量呈正相关,足细胞结构蛋白丢失可能是导致糖尿病肾病蛋白尿的机制之一。     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞 nephrin mRNA表达的影响

目的：观察阿霉素肾病(AN)大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达及祛风通络方对其表达的影响。方法：清洁级SD大鼠140只,随机抽取32只作为空白组,余108只建立AN大鼠模型,90只大鼠模型成功后随机分为模型组、祛风组、祛风+激素组、激素组和苯那组,给予相应干预,电镜检测超微结构变化,第0,3,5,7周应用间接免疫荧光技术、RT-PCR分别检测nephrin蛋白荧光表达分布和nephrin mRNA表达并进行组间比较。结果：模型成功时,透射电镜示AN大鼠肾小球足突呈部分或弥漫性融合。7周时与模型组相比,祛风组和激素组nephrin蛋白的荧光分布呈连续性或斑片状分布,荧光强度明显增强(P＜0.01);祛风组和激素组nephrin mRNA的表达明显上调(P＜0.01)。结论：Nephrin的表达异常是AN大鼠蛋白尿发生发展的重要分子机制,祛风通络方可上调AN大鼠足细胞nephrin的表达和分布而起保护肾小球滤过屏障的作用。     

nephrin和ZO-1在糖尿病大鼠肾组织中的表达及其与足细胞数目的相关关系

目的 探讨糖尿病肾病发展过程中nephrin及ZO-1的表达变化及其与足细胞数目的相关关系.方法 建立STZ诱导的糖尿病大鼠模型,应用免疫组织化学及RT-PCR方法观察在糖尿病肾病发展过程中nephrin、ZO-1蛋白及mRNA表达变化,以及应用WT-1来标记足细胞核,观察足细胞数目的变化.结果 8周时,糖尿病组nephrin和ZO-1染色强度较正常组明显降低(P<0.05),12周时变化更为明显(P<0.01),足细胞数目在两个时间点较正常组均明显减少.足细胞数目与nephrin及ZO-1表达呈正相关(r=0.93 P=0.0024;r=0.923,P=0.0086),而与尿蛋白呈负相关(r=-0.9508 P=0.0036).结论 nephrin和ZO-1在糖尿病肾病发展过程中表达减低,并与足细胞数目呈正相关.nephrin和ZO-1的表达减低与足细胞数目减少以及尿蛋白的发生密切相关.     

阿霉素肾病大鼠肾脏nephrin、podocin mRNA表达

目的检测阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin、podocin mRNA表达，探讨nephrin、podocin在阿霉素肾病蛋白尿发生中的可能作用，为进一步阐明蛋白尿的产生机制提供一定的实验基础。方法建立大鼠阿霉素肾病模型，采用逆转录聚合酶链反应检测阿霉素肾病大鼠肾组织内nephrin、podocin mRNA水平。结果与正常对照组相比，阿霉素组大鼠注药后14d（蛋白尿高峰前）及42d（蛋白尿高峰时）nephrin mRNA下调70％及78％（P〈0．001），podocin mRNA水平注药后14d上调2．7倍，注药后42d仍在上调水平（较对照组升高2倍）。结论阿霉素肾病蛋白尿的发生和进展与nephrin、podocin转录异常密切相关。     

阿霉素肾病大鼠肾小球中足细胞数量及nephrin、VEGF的表达变化

目的 探讨足细胞的数量及nephrin、VEGF 在阿霉素(ADR)肾病大鼠肾小球中的表达变化及意义.方法 建立ADR诱导的大鼠肾病模型,于不同实验时间点检测血尿生化指标;光镜、电镜观察肾脏病理学改变;免疫组化技术观察足细胞数量、nephrin、VEGF的表达变化.结果 肾病模型组大鼠在第2次注射ADR后1周末足细胞nephrin表达减弱(P<0.05);8周末肾小球VEGF表达增强(P<0.05)、足细胞数量减少(P<0.05);nephrin、足细胞数量与24 h尿蛋白定量、尿素氮、血肌酐呈负相关;VEGF与24 h尿蛋白定量、尿素氮、血肌酐呈正相关.结论 足细胞nephrin的表达减少和分布方式改变可能是大量蛋白尿发生的重要因素,VEGF既参与蛋白尿的产生,又参与肾小球硬化.     

2型糖尿病大鼠肾组织nephrin蛋白的表达及影响

目的 研究2型糖尿病大鼠肾组织中nephrin蛋白表达以及应用罗格列酮治疗后nephrin蛋白表达的影响.方法 将28只清洁级雄性Wistar大鼠随机分为普通饲料组(8只)和高脂饲料组(20只),高脂饲料组喂养满6周后给予STZ注射,2周后行葡萄糖耐量试验,根据美国糖尿病协会1997年标准,高脂饲料组18只符合糖尿病,再将其分为糖尿病组和罗格列酮治疗组各9只.用Western Blot方法研究肾脏组织中nephrin蛋白表达水平的变化,用SPSS 11.5软件进行医学统计和相关分析.结果 采用产物和内参(β-actin)的光密度比值作为表达强度并记录结果.糖尿病组大鼠nephrin表达较对照组明显降低,罗格列酮治疗组则较糖尿病组明显升高. 结论 nephrin在糖尿病肾脏损害及糖尿病肾病的早期监测中可作为一项重要的指标.罗格列酮可能通过诱导nephrin表达增加减轻蛋白尿,从而治疗糖尿病肾损害.     

阿霉素肾病大鼠肾组织中nephrin和CD2AP的表达及意义

【目的】 动态观察nephrin。CD2相关蛋白(CD2AP)在阿霉素肾病大鼠肾小球中的表达变化,探讨其在蛋白尿发生发展过程中的作用。【方法】 72只大鼠分为2组,模型组36只和对照组36只,模型组大鼠尾静脉一次性注射盐酸阿霉素,对照组大鼠尾静脉一次性注射等容积生理盐水,分别于注射后3。5。7。14。28。42 d各杀检6只大鼠。采用实时荧光定量PCR。免疫组织化学检测大鼠肾小球中nephrin。CD2AP的表达和分布变化。【结果】 ①模型组大鼠7 d时nephrin mRNA表达增加,14 d时其蛋白表达(9.44 ± 0.49)亦显著增加;CD2AP表达增加时间较晚,28 d时其mRNA和蛋白表达(7.88 ± 1.01)才显著增加。②与对照组相比,模型组nephrin。CD2AP出现分布异常,从沿着毛细血管袢线样分布逐渐转变为不连续性颗粒样或斑片状分布。③肾小球nephrin mRNA。CD2AP mRNA表达量与24 h尿蛋白量均呈正相关关系(r = 0.878, P < 0.01; r = 0.945, P < 0.01)。【结论】 ①nephrin早期出现表达增加及分布异常,可能是导致蛋白尿的原因及判断肾小球足细胞损伤的一个早期重要指标。②CD2AP在后期出现表达增加,可能是足细胞抵抗损伤的一种代偿反应。     

祛风通络方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达的影响

目的：观察阿霉素肾病（AN）大鼠肾小球足细胞nephrin mRNA表达及祛风通络方对其表达的影响。方法：清洁级SD大鼠140只,随机抽取32只作为空白组,余108只建立AN大鼠模型,90只大鼠模型成功后随机分为模型组、祛风组、祛风＋激素组、激素组和苯那组,给予相应干预,电镜检测超微结构变化,第0,3,5,7周应用间接免疫荧光技术、RT-PCR分别检测nephrin蛋白荧光表达分布和nephrinmRNA表达并进行组间比较。结果：模型成功时,透射电镜示AN大鼠肾小球足突呈部分或弥漫性融合。7周时与模型组相比,祛风组和激素组nephrin蛋白的荧光分布呈连续性或斑片状分布,荧光强度明显增强（P〈0.01）;祛风组和激素组nephrin mRNA的表达明显上调（P〈0.01）。结论：Nephrin的表达异常是AN大鼠蛋白尿发生发展的重要分子机制,祛风通络方可上调AN大鼠足细胞nephrin的表达和分布而起保护肾小球滤过屏障的作用。     

罗格列酮对糖尿病大鼠肾组织nephrin表达的影响

目的:探讨糖尿病大鼠肾组织nephrin的表达以及罗格列酮干预后对其表达的影响。方法:链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,将糖尿病大鼠随机分为糖尿病非干预组(DM组)和罗格列酮干预组(DR组),并以正常组(NC组)作对照。干预8周后,观察各组大鼠尿蛋白、血糖、血脂、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)变化;用免疫组化及实时荧光定量PCR检测肾组织nephrin蛋白及mRNA的表达。结果:①DM组大鼠尿蛋白、血BUN,Cr较NC组明显升高,肾组织nephrin蛋白及mRNA表达降低;与DM组相比,DR组大鼠尿蛋白、血BUN,Cr降低,nephrin蛋白及mR-NA表达上调。②DM组血糖、血脂与NC组相比,差异有统计学意义,与DR组比较差异无统计学意义。结论:罗格列酮可能通过上调糖尿病大鼠肾组织nephrin表达,发挥不依赖糖脂代谢的直接肾保护作用。     

辛伐他汀对糖尿病鼠肾nephrin基因表达的影响

目的探讨辛伐他汀（simvastatin）对糖尿病鼠肾nephrin基因表达的影响。方法以SIZ诱导大鼠发生糖尿病（DM），以辛伐他汀灌胃，不同病程取标本测定尿白蛋白排泄率（UAE）、尿β2-微球蛋白（β2-MG）排泄率，测定血浆胆固醇浓度，以免疫组化及荧光定量RT—PCR法定性及定量测定肾脏nephrin mRNA的表达。结果DM非治疗组UAE及β2-MG排泄率高于对照组，而辛伐他汀治疗组则明显低于DM8周非治疗组；DM8周非治疗组nephrin mRNA的表达量较正常对照组及辛伐他汀治疗组明显减少。结论DM大鼠UAE及尿β2-MG排泄率均明显升高，辛伐他汀可阻断这一改变；DM大鼠nephrin mRNA的表达量逐渐减少，辛伐他汀可能通过降低DM大鼠血浆胆固醇浓度影响nephrin mRNA的表达进而减少UAE。     

足细胞分子分布和表达与足突形态变化和蛋白尿发生的关系

目的:探讨裂孔隔膜分子nephrin、podocin和足细胞骨架蛋白α-actinin及足突形态变化与蛋白尿发生的关系.方法:建立嘌呤霉素(PAN)大鼠肾病模型,用体视学方法检测足突形态改变;用免疫荧光染色、图像分析和实时定量PCR方法动态观察PAN注射后不同时间点各分子蛋白及mRNA表达量及分布变化.结果:蛋白尿出现前,PAN注射2 d时,足突肿胀、nephrin和podocin分布改变、podocin蛋白减低;5 d时,上述改变进一步加重、nephnn 蛋白及mRNA表达量下降.第10天尿蛋白显著升高[(130.8±30.7)mg/d,P=0.02],足突弥漫融合、nephrin和podocin分布明显异常、蛋白表达量显著减低、mRNA表达量回复至对照组水平.蛋白尿恢复时,足突形态学指标明显恢复、podocin蛋白水平回复至对照组水平、nephrin蛋白水平仍低于对照组、α-actinin蛋白水平显著增加伴分布异常.nephrin和podocin蛋白表达量与足突体积密度呈负相关(rnephrin=-0.78,P=0.000 1;rpodocin=-0.76,P=0.000 1).结论:足突肿胀、足细胞分子nephrin、podocin分布异常及podocin蛋白表达量减低发生在蛋白尿发生前,提示nephrin和podocin的分布及表达量变化和足突形态变化与蛋白尿的发生密切相关.     

原发性肾病综合征患者尿液中podocalyxin、 nephrin的表达及意义

目的探讨不同病理类型的原发性肾病综合征患者尿中podocalyxin、nephrin的表达及意义。方法将80例原发性肾病综合征患者,按照病理分为微小病变性肾病(MCN)组22例、系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)组11例、膜性肾病(MN)组36例、局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)组11例,另设20例健康人为对照组。通过酶联免疫吸附法检测各组尿中podocalyxin、nephrin的表达,并分析其与24小时尿蛋白、血清白蛋白、血脂、肌酐的相关性。结果 FSGS组尿podocalyxin、nephrin高于其他肾病综合征组和正常对照组(P<0.05),其他肾病综合征组高于正常对照组(P<0.05);MsPGN组尿podocalyxin、nephrin低于其他肾病综合征组(P<0.05),其在MCN、MN组表达差异无统计学意义(P>0.05);不同病理类型肾病综合征组尿podocalyxin、nephrin的表达与血清白蛋白呈负相关,与24小时尿蛋白、血脂、肌酐水平呈正相关(P均<0.05)。结论尿podocalyxin、nephrin的表达水平与肾病综合征病理类型及疾病严重程度相关,可作为判断肾病综合征病理类型和预后的参考指标。     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞podocin及nephrin表达的影响

[目的] 探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞podocin及nephrin表达水平的变化,及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用。[方法] 将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组)、高糖组(B组)、左归降糖益肾方含药血浆组(C组)、4-苯基丁酸含药血浆组(D组).采用间接免疫荧光细胞化学法鉴定足细胞podocin及nephrin蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)自动比色法检测足细胞活力,蛋白质印迹法,逆转录-聚合酶链反应法分别检测podocin及nephrin蛋白或mRNA表达水平的变化。[结果] 与A组相比,B组足细胞活力,podocin及nephrin蛋白或mRNA的表达水平均降低(P <0.01);与B组相比,C组、D组足细胞活力,podocin及nephrin蛋白或mRNA的表达水平均升高(P <0.01);与C组相比,D组足细胞活力升高(P<0.05).[结论] podocin及nephrin蛋白或mRNA表达水平的降低,是足细胞损伤的分子机制之一;左归降糖益肾方含药血浆可以通过升高podocin及nephrin蛋白或mRNA的表达水平,从而保护足细胞。     

楂芪降糖汤对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用

目的探讨楂芪降糖汤对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏的保护作用及其可能机制。方法60只SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、优降糖组、楂芪降糖汤高、中、低剂量组。除正常组外,余各组腹腔注射链脲佐菌素建立DN模型。成模后各组按相应药物及剂量灌胃。10周末,取肾组织观察病理形态和超微结构改变;RT-PCR检测nephrin mRNA表达、Western blot检测nephrin蛋白表达。结果模型组肾组织病理形态和超微结构变化显著、nephrin mRNA和蛋白表达明显低于正常组(P<0.01),各治疗组中以楂芪降糖汤高、中剂量组及优降糖组较模型组改善显著(P<0.05)。结论楂芪降糖汤对DN大鼠肾脏有一定的保护作用,其作用机制可能是通过上调nephrin的表达,减轻足细胞损伤来实现的。