AG490对谷氨酸诱导PCI2细胞磷酸化STAT3活性上调的抑制作用

目的研究AG-490拮抗谷氨酸对PCI2细胞中P-STAT3活性的上调作用及其抗凋亡意义。方法谷氨酸诱导PCI2细胞凋亡。Hoehest荧光染色观察PCI2细胞形态。流式细胞仪（FCM）分析评价凋亡百分率。Westernblot测定P-STAT3蛋白表达量，M，丌检测PCI2细胞存活率。结果谷氨酸诱导PCI2细胞中STAT3蛋白表达上调（P：0．000），如予Jak/STAT3信号通路阻断剂AG-490预处理，则其表达被下调（P=0．002），细胞凋亡率减低（P=O．000），细胞存活率升高（P=0．000）。结论AG-490拮抗谷氨酸诱导的PCI2细胞凋亡，其机制可能与STAT3活化有关。     

氯化锰致PC12细胞凋亡作用及其机制

目的 探讨氯化锰诱导PC12细胞凋亡的作用机制.方法 以PC12细胞为多巴胺能神经元的细胞模型,采用MTT比色法检测细胞生长情况,流式细胞术(FCM)及DNA琼脂糖凝胶电泳(AGE)检测PC12细胞的凋亡情况,免疫组化法检测PC12细胞HSP70、Survivin、Bcl-2和Bax表达情况.结果 锰能抑制PC12细胞的增殖,呈时间-剂量效应关系;并能诱导其凋亡,呈浓度依赖性;凋亡过程中Bax的表达呈浓度依赖性增强,且与凋亡之间呈正相关关系(R1=0.972,P＜0.01),而HSP70、Survivin和Bcl-2的表达呈浓度依赖性下调,且与凋亡之间呈负相关关系(R2=-0.990,R3=-0.976,R4=-0.980,p均＜0.01).结论 锰对PC12细胞的凋亡具有诱导作用,而上调Bax的表达和下调HSP70、Survivin及Bcl-2的表达可能是其诱导PC12细胞凋亡的作用机制之一.     

锰诱导PC12细胞凋亡与P53、MDM2蛋白表达

目的 探讨锰对嗜铬细胞瘤细胞(PC12 cells)凋亡的诱导作用及与抑癌基因P53、原癌基因MDM2蛋白表达的关系.方法 以PC12细胞作为多巴胺能神经元的模型细胞,取对数生长期的PC12细胞,用含200,400,800μmol/L MnCI2的培养液分别染毒培养24,36,48 h.四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞的生长情况,流式细胞仪(FMC)和原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡状况;用免疫细胞化学法检测细胞P53、MDM2蛋白表达强度.结果 氯化锰可呈时间和剂量依赖性抑制PC12细胞的增殖和诱导细胞凋亡,抑制率为11.8%～73.6%,凋亡率为8.72%～53.60%.免疫化学法检测结果显示,随锰浓度的增高,P53蛋白的表达增加(P<0.01),而MDM2蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.01),且呈剂量依赖关系.结论 锰可诱导PC12细胞凋亡,上调P53基因的表达和下调MDM2基因的表达可能在其诱导PC12细胞凋亡中起着重要的作用.     

肿瘤相关巨噬细胞通过JAK2/STAT3途径调控肝癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)通过JAK2/STAT3途径对肝癌细胞凋亡的影响。方法培养人单核巨噬细胞(THP1),加入佛波酯(PMA)及白介素4(IL-4)诱导分化为TAMs,RT-PCR检测TAMs表面分子标记物CD206和CD163的表达;TAMs与肝癌细胞(Hep G2、SMMC7721)在Transwell小室内共培养48h,通过western blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase 3、抗凋亡蛋白Bcl-2、信号通路JAK2/STAT3以及p-STAT3的表达;加入JAK2/STAT3通路特异性阻断剂AG490进行阻断后,检测相关凋亡蛋白、抗凋亡蛋白表达情况以及JAK/STAT信号通路活化情况。结果人单核巨噬细胞(THP1)经PMA及IL-4分化诱导72h,RT-PCR检测其细胞表面CD206和CD163的表达显著增加(P0.05);肝癌细胞(Hep G2、SMMC7721)与TAMs共培养48h,Western Blot检测肿瘤细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bax表达明显降低,抗凋亡蛋白Bcl-2以及信号通路JAK2、STAT3、p-STAT3表达显著升高;AG490阻断JAK2/STAT3通路后,加AG490组肿瘤细胞p-STAT3表达降低,凋亡相关蛋白Caspase3、Bax的表达明显升高,抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达显著降低;结论肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)通过激活JAK2/STAT3信号途径调控肝癌细胞的凋亡。     

西红花苷对Aβ_(25-35)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞凋亡的影响

目的研究西红花苷对Aβ_(25-35)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)凋亡的影响。方法体外培养的PC12细胞,分为5组:正常对照组、阿尔茨海默病(AD)模型组、西红花苷(低、中、高)剂量组。CCK-8法检测细胞存活率,Hoechst 33258检测细胞凋亡状况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot实验检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3的表达。结果与模型组比较,西红花苷各剂量组细胞的存活率均明显升高(q值分别为3.455、6.975、7.078,P值分别0.05、0.01、0.01),凋亡率显著性下降(q值分别为4.609、13.460、13.679,P值均0.01),Bcl-2蛋白表达增加(q值分别为7.642、14.577、16.983,P值均0.01),Caspase-3表达减少(q值分别为4.236、8.210、7.555,P值分别0.05、0.01、0.01)。与西红花苷低剂量组比较,西红花苷中、高剂量组细胞存活率均升高(q值分别为3.544、5.462,P值均0.05),细胞凋亡率呈显著性减低(q值分别为8.849、9.064,P值均0.01),但中、高剂量组之间无统计学差异。结论西红花苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用,其机制可能与增加Bcl-2的表达、抑制Caspase-3依赖性凋亡信号通路有关。     

STAT5基因对人膀胱癌细胞顺铂化疗敏感性的影响及作用机制

目的研究STAT5基因高表达及沉默对人膀胱癌细胞系5637和T24顺铂化疗敏感性的影响及分子机制。方法冲击诱导方法构建顺铂耐药细胞株T24-cisplatin和5637-cisplatin,Western bolt法检测STAT5的表达;构建STAT5过表达载体,应用脂质体转染5637和5637-cisplatin细胞,用针对STAT5基因的特异性sh RNA转染T24和T24-cisplatin细胞,MTT法和流式细胞凋亡法检测转染前后膀胱癌细胞顺铂化疗的细胞生存率和凋亡率,及Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3表达。结果顺铂耐药细胞株5637-cisplatin和T24-cisplatin STAT5表达明显高于顺铂敏感株5637和T24(P=0.004;P=0.001),而5637-cisplatin和T24-cisplatin细胞沉默STAT5其化疗敏感性显著升高(P=0.003,P=0.001)。5637细胞过表达STAT5其化疗敏感性显著下降(P=0.021),顺铂化疗的细胞凋亡率明显下降(P=0.002),Bax、Caspase-3表达水平显著降低(P=0.014;P=0.033),Bcl-2表达水平显著升高(P=0.001)。T24细胞STAT5被沉默后其化疗敏感性显著增强(P=0.011),顺铂化疗的细胞凋亡率明显上升(P=0.001),Bax、Caspase-3表达水平显著升高(P=0.001;P=0.007),Bcl-2表达水平显著降低(P=0.020)。结论STAT5表达情况与膀胱癌细胞顺铂化疗敏感性具有相关性,其可能分子机制为调控凋亡基因Bax、Bcl-2、Caspase-3介导细胞顺铂耐药。     

水翁花对过氧化氢诱导神经细胞凋亡的影响

目的探讨水翁花对过氧化氢(H2O2)诱导神经细胞PC12凋亡的影响及其作用机制。方法构建PC12氧化应激损伤模型,不同浓度的水翁花干预H2O2诱导的PC12细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测细胞SOD水平。qRT-PCR法检测水翁花对miR-422a表达的影响;过表达miR-422a或抑制miR-422a表达对H2O2诱导的PC12细胞凋亡及SOD活性的影响。Western blot法测定细胞中Bcl-2、Bax的表达变化。结果 H2O2诱导的PC12细胞凋亡率升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),抑制miR-422a表达(P<0.05),而水翁花处理后,PC12细胞凋亡率降低(P<0.05),SOD活性增强(P<0.05),促进miR-422a表达(P<0.05),Bcl-2表达上调(P<0.05),Bax表达下调(P<0.05);过表达miR-422a可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡(P<0.05),增强SOD活性(P<0.05);抑制miR-422a表达可逆转水翁花对H2O2诱导的PC12细胞凋亡、SOD活性的影响。结论水翁花可通过上调miR-422a表达对H2O2诱导的PC12细胞损伤发挥保护作用,其可能作用机制与抗细胞凋亡及抗氧化作用相关。     

Janus激酶抑制剂AG490对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察Janus激酶(JAK)抑制剂AG490对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化以及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKC),分别给予高糖和高糖 AG490干预,Western印迹检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘素(E-Cadherin)及信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化STAT1(phospho-STAT1,p-STAT1)和p-STAT3的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌。结果与低糖组比较,高糖培养的HKC中α-SMA、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调;E-Cadherin表达明显下调;TGF-β1mRNA表达增加;细胞培养上清液中TGF-β1、Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显下调p-STAT1和p-STAT3表达的同时,明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E-Cadherin表达下降程度;降低TGF-β1mRNA表达及TGF-β1、Ⅰ型胶原的分泌。结论JAK参与高糖诱导的HKC转分化,并刺激TGF-β1和细胞外基质的分泌,JAK抑制剂AG490能有效的拮抗其作用。     

活性氧在氯化锰致PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨活性氧（ROS）在氯化锰（MnCl2）诱导PC12细胞凋亡中的作用机制.方法 构建MnCl2诱导的PC12细胞模型,MTT法检测细胞存活率,流式细胞分析PC12细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化程度;分光光度法检测培养基中活性氧（ROS）生成量变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷（ATP）生成量和Caspase-3表达量的变化;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-xl和bax的表达.结果 PC12细胞存活率与MnCl2诱导浓度和诱导时间呈负相关（P＜0.01）;2 mmol/L MnCl2诱导PC12细胞36 h,细胞凋亡率明显上升（P＜0.01）;核DNA发生明显片段化;细胞ROS生成量明显增加（P＜0.001）,细胞ATP生成量受到明显抑制（P＜0.01）;基因bcl-xl表达被抑制,bax表达上升（P＜0.01）;Caspase-3在细胞凋亡中被激活（P＜0.01）.结论 MnCl2诱导的PC12细胞凋亡与ROS升高、线粒体功能破坏和激活Caspase-3有关.     

阿魏酸钠对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及p53蛋白表达的影响

[目的]探讨阿魏酸钠(SF)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞株(HUVECCRL1730)凋亡的抑制作用及可能机制.[方法]体外ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤,用阿魏酸钠进行干预.采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率;Hoechst33258细胞核荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率:Western-blot检测内皮细胞p53蛋白表达.[结果]ox-LDL可明显抑制人脐静脉内皮细胞生长和增殖,诱导细胞发生凋亡,上调p53蛋白表达水平;阿魏酸钠干预后细胞存活率明显上升(P<0.05),细胞凋亡率明显下降(P<0.05),p53蛋白表达水平明显下调(P<0.05).[结论]ox-LDL可通过上调p53蛋白表达诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,阿魏酸钠可通过下调p53蛋白表达抑制内皮细胞凋亡.     

电磁辐射诱导PC12细胞凋亡中丝裂原活化蛋白激酶的差别激活

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统的差别激活与电磁辐射诱导PC12细胞凋亡的关系。方法以65mWcm2电磁波辐照离体培养PC12细胞20min,分为辐照后即刻及3、12、24h共4个观察时相点,采用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率,采用蛋白质免疫印迹法检测ERK12、JNK、P38MAPK蛋白质磷酸化水平。结果电磁波辐照后即刻PC12细胞凋亡开始增加;3h后凋亡细胞进一步明显增多,凋亡率约为23.5%;12h后细胞凋亡率与3h相比,差异无统计学意义(P>0.05);24h后细胞凋亡再次明显增加,并达到高峰。电磁辐射后PC12细胞ERK12和JNK蛋白质磷酸化都明显增加,但ERK12的增加持续到3h,JNK蛋白磷酸化水平增高一直持续到12h,24h后两者都较对照组明显降低。P38MAPK蛋白质磷酸化水平在辐照后一直处于较高水平,其变化趋势呈双峰状,即在3h和24h出现2次磷酸化高峰。结论电磁辐射可以激活MAPK信号转导系统,但ERK12、JNK、P38MAPK表现为差别激活。MAPK信号转导系统可能参与了电磁辐射诱导的PC12细胞凋亡,正是MAPK这种差别激活才导致PC12细胞出现特有的凋亡变化形式。     

雌孕激素对STAT3在小鼠子宫内膜表达的调控

目的:探讨雌、孕激素对STAT3在小鼠子宫内膜表达的影响。方法:将小鼠卵巢切除,随机分为对照组(腹腔注射油)、E2组(腹腔注射苯甲酸雌二醇)、P组(腹腔注射黄体酮)和E2+P组(腹腔注射苯甲酸雌二醇和黄体酮)。用RT-PCR方法检测STAT3 mRNA在各组小鼠子宫内膜的表达。同时用免疫组化方法检测STAT3和磷酸化STAT3蛋白在各组小鼠子宫内膜的表达。结果:STAT3 mRNA在E2组和E2+P组有明显的表达,而在P组和对照组无表达。STAT3蛋白在E2组和E2+P组有明显的表达,而在P组和对照组无表达。P-STAT3蛋白在E2组有强表达;在P组和E2+P组也有明显的阳性表达;而在对照组则无表达。结论:在小鼠子宫内膜,雌激素促进STAT3 mRNA和蛋白的表达;孕激素无促进STAT3 mRNA和蛋白表达的作用,但可以促进STAT3的磷酸化。在胚胎种植的过程中,STAT3的表达和活化受到雌、孕激素的调控。     

电磁辐射急性辐照致PC12细胞的损伤效应

目的探讨电磁辐射急性辐照对PC12细胞的影响.方法对离体培养的PC12细胞以65mW/cm2电磁波急性照射20min,于辐照后即刻、3、12、24h四个时相点检测细胞存活率、乳酸脱氢酶释放率,并采用Annexin-V-FITC及PI双标记流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率.结果电磁波辐照后即刻PC12细胞存活率和LDH释放率变化不明显(P＞0.05),辐照后3h细胞存活率明显降低,而LDH释放率明显增加(P＜0.05),到24h后达到峰值(P＜0.01).电磁波辐照后即刻PC12细胞凋亡开始增加(P＜0.05),3h后凋亡细胞进一步明显增多,凋亡率约为20%,24h后细胞凋亡再次显著增加(P＜0.01).结论电磁辐射急性辐照后早期即可引起PC12细胞损伤,而在辐照后24h出现一种"继发损伤反应",细胞凋亡可能是电磁辐射辐照诱导PC12细胞损伤的主要原因之一.     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在电磁辐射诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统的差别激活与电磁辐射诱导PC12细胞凋亡的关系.方法 经MAPK特异性抑制剂SB203580、U0126预处理的PC12细胞接受65mW/cm2电磁波辐照20min,在辐照后3、24h2个观察时相点,采用蛋白质免疫印迹方法检测ERK1/2、JNK、P38 MAPK蛋白质磷酸化水平,采用Annexine-V-FITC标记流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率.结果 电磁辐射后,PC12细胞ERK1/2的激活可以被U0126明显抑制,而SB203580对其无抑制作用.U0126和SB203580对辐照后JNK的活性无明显影响.SB203580可以明显抑制P38 MAPK的激活,而U0126对P38 MAPK激活的抑制作用不明显.SB203580可以明显减轻电磁辐射诱导的PC12细胞凋亡,而U0126预处理对细胞凋亡无明显影响.结论 电磁辐射诱导PC12细胞凋亡主要通过P38 MAPK信号通路的激活调控,而ERK通路对电磁辐射诱导的细胞凋亡无明显影响,JNK可能对辐照后早期的细胞凋亡有一定促进作用.     

核因子-κB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NFκ-B、p53、Bcl-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理。结果PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性。差异有显著性(P<0.05)。RT-PCR结果显示NFκ-B p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性。Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NFκ-B及p53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关。     

Study on the roles of nuclear factor-kappaB, p53 and Bcl-2 gene in lead acetate induced apoptosis in PC12 cells

OBJECTIVE: To investigate the roles of nuclear factor-kappaB (NF-kappaB), p53 and Bcl-2 gene in lead acetate induced apoptosis in PC12 cells. METHODS: Cell culture, Flow cytometry, RT-PCR and Western Blot were employed to analyze the expression of NF-kappaB, p53 and Bcl-2 gene, and clarify the effect of lead acetate on apoptosis in PC12 cells and related molecular mechanisms. RESULTS: The PC12 cells were exposed to lead acetate at varied concentrations (100 micromol/ L, 200 micromol/L and 400 micromol/L) for 24 hours, Flow cytometry detected that the apoptosis rate of groups treated with lead acetate are higher than that of blank control groups with a dose-effect relationship (P < 0.05). RT-PCR results show that the mRNA expression level of NF-kappaB p65, p53 increased accordingly. Western Blot results show that the protein expression of Bcl-2 gene decreased. CONCLUSION: lead acetate induces apoptosis in PC12 cells, which may be related to activation of NF-kappaB and p53 gene and depression of Bcl-2 gene.     

STAT3在小鼠胚胎围着床期子宫内膜的表达与活化

目的:探讨信号传导子和转录活化子3(STAT3)在小鼠胚胎围种植期子宫内膜的表达和活化及其与胚胎种植的关系。方法:应用免疫组化SABC法检测昆明小鼠胚胎围种植期(D0、D1、D3、D4、D5和D6天)STAT3在小鼠子宫内膜和腺体的表达与活化情况。结果:STAT3和活化状态的STAT3(P-STAT3)只在妊娠的D4午夜在宫腔上皮细胞有强表达,而在其他的时间无表达或有弱表达。将STAT3和P-STAT3在D4组的灰度值与其他各组的灰度值进行比较,差异均有统计学意义(P<0·05)。结论:STAT3在小鼠子宫内膜的表达和活化的时间正好和胚胎在子宫内膜黏附种植的时间相一致。STAT3和P-STAT3可能参与了胚胎的种植和子宫内膜容受性建立的过程。     

抑制JAK/STAT通路对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血/再灌注损伤的作用

目的研究抑制Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路对乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用体外培养的新生大鼠心肌细胞造成缺血再灌注(I/R)模型,随机分为正常对照组,缺血再灌注组,JAK抑制剂-AG490治疗组,STAT抑制剂-RMP治疗组。采用MTT法检测心肌细胞活性,检测以上不同条件下细胞上清液中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,并检测各组细胞的凋亡率。结果与正常对照组相比,缺血再灌组心肌细胞成活率明显降低(P<0.01),细胞上清液中LDH、MDA含量明显升高(P<0.01),SOD活力则显著降低(P<0.01),缺血再灌组凋亡率升高明显(P<0.01)。AG490及RMP处理后,心肌细胞成活率明显升高(P<0.01),LDH、MDA显著低于缺血再灌组(P<0.01),SOD则高于缺血再灌组(P<0.01)。结论抑制JAK/STAT通路有助于减轻缺血再灌注所致心肌损伤。     

单唾液酸神经节苷脂对2,5-己二酮诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的研究单唾液酸神经节苷脂(GM1)对2,5-己二酮(2,5-HD)诱导PC12细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,2,5-HD、GM1及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)抑制剂LY294002单独或联合处理细胞,MTT法检测细胞存活率,Giemsa染色法观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,免疫印迹检测蛋白激酶B(Akt)和磷酸化-Akt(P-Akt)蛋白的表达。结果GM1可以有效地改善凋亡引起的细胞形态学改变,提高细胞存活率(P<0.05),最高可提高36.35%;降低DNA断裂程度,减少凋亡率(P<0.001),最明显可降低69.36%。GM1能够促进Akt磷酸化,LY294002可以阻断这种作用。结论GM1对2,5-HD诱导的PC12细胞凋亡有保护作用。该保护作用可能是通过启动PI3-K信号通路,激活Akt及其下游信号而产生的。