白细胞介素-1β促人视网膜色素上皮细胞分泌血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的研究

目的 观察炎前因子白细胞介素-1β(IL-1β)对培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响.方法 采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定IL-β浓度为0、1、10、20 ng/ml和时间为24、36、48 h作用下RPE细胞的VEGF和bFGF分泌量变化;采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定10 ng/ml IL-1β作用48 h后RPE细胞的VEGF和bFGFmRNA变化;噻唑蓝(MTT)比色法测定IL-1β刺激后RPE细胞的增生状态.结果 相同刺激时间即36 h作用下,终浓度为1、10 ng/ml的IL-1β促进RPE细胞VEGF的分泌(q=32.79,42.56;P<0.01);10 ng/ml的IL-1β促进bFGF的分泌(q=7.514,P<0.01);与浓度为10 ng/ml的IL-1β刺激相比,增加IL-1β刺激浓度至20 ng/ml使RPE细胞VEGF和bFGF分泌量下降(q=9.35,6.92;P<0.01).相同浓度即10 ng/ml的IL-1β作用下,IL-1β作用时间与RPE细胞VEGF和bFGF分泌量具有正性时间-效应关系;浓度为10 ng/ml的IL-1β作用48 h可促进RPE细胞的VEGF和bFGF mRNA水平;MTT结果 证明IL-1β未明显影响RPE细胞的增生状态(F=0.317,P>0.05).结论炎前因子IL-1β可影响人RPE细胞VEGF和bFGF的分泌量,在一定的作用浓度和作用时间范围内具有显著的促进效应.     

白细胞介素-1β对视网膜色素上皮细胞产生白细胞介素-6的影响

目的观察重组人白细胞介素1β(interleukin1β,IL1β)对培养的视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelial,RPE)细胞产生白细胞介素6(interleukin6,IL6)的影响。方法在人RPE细胞的培养液中分别加入终浓度为0μg·L-1、10μg·L-1、50μg·L-1、100μg·L-1、200μg·L-1的重组人IL1β,作用12h、24h、48h后,用酶联免疫吸附实验测定细胞上清液中IL6的质量浓度。结果50μg·L-1IL1β作用于RPE细胞48h内,RPE细胞产生IL6的量随时间延长而增加;在同一作用时间点,RPE细胞产生IL6的量随IL1β浓度的增高而增高。与对照组相比,当IL1β浓度达10μg·L-1时,二者之间即出现显著性差异(P<0.05),当IL1β浓度达100μg·L-1时,RPE细胞产生IL6的量呈平台高峰,不再升高,24h和48h组均有相同趋势。结论重组人IL1β促人RPE细胞分泌IL6在48h内具有时间和浓度依赖性。     

LED光源对人视网膜色素上皮细胞分泌单核细胞趋化因子-1和白细胞介素-8的影响

目的　观察ＬＥＤ光源对人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＲＰＥ）细胞增生及分泌单核细胞趋化因子-１（ｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ-１,ＭＣＰ-１）和白细胞介素-８（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ-８,ＩＬ-８）的影响。方法　传代培养的ＡＲＰＥ细胞分别置于５００ｌｕｘ、１０００ｌｕｘ的ＬＥＤ白光、蓝光、绿光中分别照射６ｈ、１２ｈ、２４ｈ,并分别设置对照组避光培养。采用ＭＴＴ法检测ＲＰＥ细胞的增生值（Ａ４６０）,分别使用Ｒｅａｌ-ｔｉｍｅＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ法检测各组ＲＰＥ细胞ＭＣＰ-１和ＩＬ-８的表达水平。结果　ＭＴＴ法检测细胞增生值显示:蓝光、白光各组比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,白光５００ｌｕｘ２４ｈ和１０００ｌｕｘ１２ｈ、２４ｈ,蓝光各照度６ｈ、１２ｈ、２４ｈ,ＲＰＥ细胞增生值均较对照组低,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,细胞增生值随着白光和蓝光光照强度及光照时间的增加逐渐下降。ＲＴ-ＰＣＲ结果显示,各组ＲＰＥ细胞中ＭＣＰ-１和ＩＬ-８的ｍＲＮＡ比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。其中白光５００ｌｕｘ２４ｈ和１０００ｌｕｘ２４ｈ,蓝光５００ｌｕｘ１２ｈ、２４ｈ和１０００ｌｕｘ１２ｈ、２４ｈ,绿光５００ｌｕｘ２４ｈ和１０００ｌｕｘ２４ｈ,各组ＲＰＥ细胞中ＭＣＰ-１和ＩＬ-８的ｍＲＮＡ表达水平较对照组高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。ＥＬＩＳＡ结果显示,白光５００ｌｕｘ２４ｈ和１０００ｌｕｘ１２ｈ、２４ｈ,蓝光５００ｌｕｘ１２ｈ、２４ｈ和１０００ｌｕｘ１２ｈ、２４ｈ,绿光５００ｌｕｘ２４ｈ、１０００ｌｕｘ２４ｈ,与对照组相比, ＲＰＥ细胞ＭＣＰ-１、ＩＬ-８分泌量增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;蓝光在５００ｌｕｘ２４ｈ和１０００ｌｕｘ１２ｈ、２４ｈ,ＭＣＰ-１和ＩＬ-８分泌量较白光、绿光增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＬＥＤ白光、蓝光和绿光能以照度和时间依赖性影响ＡＲＰＥ细胞增生及分泌ＭＣＰ-１和ＩＬ-８,以蓝光更为显著。     

白细胞介素-6反义寡核苷酸抑制人视网膜色素上皮细胞表达白细胞介素-6

目的　观察人视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞表达白细胞介素 6(interleukine 6 ,IL 6 )和IL 6反义寡核苷酸 (antisenseoligonucleotide ,ASON)从基因水平阻断RPE细胞表达IL 6的效应 ,为增生性玻璃体视网膜病变的防治寻找新的药物。方法　将培养的人RPE细胞以IL 1β刺激后 ,用酶联免疫吸附试验 (enzymelinkedimmunosorbentassay ,ELISA)、免疫组化染色及原位杂交等方法 ,观察RPE细胞表达IL 6蛋白质和mRNA的情况。结果　在IL 1β介导下 ,RPE细胞对IL 6蛋白质的表达呈时间和剂量反应关系。用IL 1β刺激 8h ,对照组RPE细胞培养上清液中IL 6蛋白质含量为 2 0 0× 10 6g/L ;IL 6ASON (浓度为 2 0 0× 10 5mol/L)组的IL 6蛋白质含量明显降低 ,为 5 5 0×10 7g/L ;两组比较差异有显著意义 (t=4 5 18,P <0 0 1)。免疫组化染色结果显示 ,对照组RPE细胞胞浆中IL 6蛋白质的表达呈深浅不一的棕黄色 ,IL 6ASON组染色则较浅 ;两组比较差异有显著意义(t=2 32 5 ,P <0 0 5 )。原位杂交结果表明 ,对照组RPE细胞胞浆中IL 6mRNA的表达呈紫蓝色 ,而IL 6ASON组染色较淡 ;图像分析结果显示 ,两组灰度值差异有显著意义 (t=3 74 6 ,P <0 0 1)。结论在IL 1β刺激下 ,人RPE细胞可明显表达IL 6蛋白     

白细胞介素1受体拮抗剂对白细胞介素1α诱导的眼眶成纤维细胞表达细胞间黏附分子1及其与外周血单个核细胞黏附的抑制作用

目的 研究白细胞介素1受体拮抗剂（IL-1ra)对白细胞介素1α（IL-1α）诱导的眼眶成纤维细胞表达细胞间黏附分子1（ICAM-1）及眼眶成纤维细胞与外周血单个核细胞（PBMC）黏附的抑制作用。方法 实验组标本为取自5例Graves‘眼病（GO）患者的球后结缔组织和眼外肌标本,对照组标本取自2例外伤引起的角膜葡萄肿行眼球摘除术者和2例斜视矫正术患者术中所取眼眶结缔组织和眼外肌标本。两组标本分别应用不同浓度的IL-1α或（和）IL-1ra处理培养的眼眶成纤维细胞。应用细胞免疫组化法检测IL-1ra对IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞表达ICAM-1的影响;应用荧光显微镜检测预先标记的PBMC与培养的眼眶成纤维细胞的黏附能力。应用抗ICAM-1单克隆抗体中和抗体检测ICAM-1在IL-1α诱导的黏附过程中的作用。结果 IL-1ra培养后,IL-1α诱导的两组眼眶成纤维细胞表达ICAM-1均减弱;且IL-1ra呈浓度和时间依赖性抑制IL-1α诱导的PBMC与眼眶成纤维细胞的黏附。抗人ICAM-1单克隆抗体呈浓度依赖性抑制PBMC与眼眶成纤维细胞的黏附。结论 IL-1ra可抑制IL-1α诱导的眼眶成纤维细胞表达ICAM-1及其与PBMC的黏附,IL-1α诱导眼眶成纤维细胞表达ICAM-1可能在促进PBMC黏附到成纤维细胞的过程中起重要作用。IL-1ra可望用于GO的治疗和预防。     

兔视网膜色素上皮细胞移植后白细胞介素2活性变化

目的：探讨ＲＰＥ移植后排斥反应发生的免疫指标。方法：以经巩膜移植方法行同种异体家兔间视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞移植术，术后定期检测外周血中白细胞介素２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２，ＩＬ－２）活性变化及免疫抑制剂的影响。结果：单纯移植组血中ＩＬ－２活性术后第１天开始升高，第３天时达到峰值，至７、１０天时持续高值、１４天时仍明显高于对照组，而加用免疫抑制剂组手术后第１天时与对照组无明显差别，第３天时略有升高，第７天时基本恢复正常。结论：ＲＰＥ移植后检测外周血中ＩＬ－２活性变化，可作为判定及监测排斥反应发生的重要指示。     

高浓度葡萄糖对培养的人视网膜色素上皮细胞细胞表面黏附分子-1的影响

目的:研究高浓度葡萄糖对体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:用免疫荧光法检测5.6mmol/L和30.0mmol/L葡萄糖作用1,2,3d后hRPE细胞表面ICAM-1表达量,MTT方法检测两种浓度葡萄糖作用下48hhRPE表面黏附白细胞的数量。结果:30.0mmol/L葡萄糖作用1,2,3d后hRPE细胞表面荧光着色密度分别为5.6mmol/L葡萄糖作用下荧光着色的2.4,3.8,4.0倍。30.0mmol/L葡萄糖作用48h后hRPE细胞表面黏附的白细胞数量是5.6mmol/L葡萄糖组的2.34倍,有统计学显著性差异(P<0.05)。结论:高糖可以促进体外培养hRPE细胞的ICAM-1表达,提示RPE细胞在高糖作用下可能参与了糖尿病视网膜病变的早期病理反应。     

曲安奈德对高糖培养人视网膜色素上皮细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:观察曲安奈德(TA)对高浓度葡萄糖条件下体外培养人视网膜色素上皮(hRPE)细胞细胞间黏附分子-1(I-CAM-1)表达的影响。方法:用MTT方法检测不同浓度(0.01,0.10和1.00g/L)的TA对hRPE细胞增生的影响,用免疫荧光法检测加用和未加用0.10g/LTA的30.0mmol/L葡萄糖作用1,2和3d后hRPE细胞表面ICAM-1的表达强度。结果:在0.01～1.00g/L浓度TA的作用下,hRPE细胞生长受到抑制,呈剂量依赖性和时间依从性。加用0.10g/LTA的30.0mmol/L葡萄糖作用1,2和3d后,hRPE细胞表面荧光染色密度分别比未加用TA的30.0mmol/L葡萄糖作用下荧光着色减弱20%,25%和50%,有统计学显著性差异(P<0.05)。结论:TA可以抑制体外高浓度葡萄糖培养的hRPE细胞的增生,也抑制高糖作用下hRPE细胞表面的ICAM-1表达。     

剪切力对视网膜色素上皮细胞syndecan-1,血管细胞黏附分子-1,E-选择素蛋白表达和肌动蛋白的影响

目的:研究剪切力对视网膜色素上皮(RPE)细胞synde-can-1,血管细胞黏附分子(VCAM)-1和E-选择素(se-lectin)表达和细胞骨架的影响。方法:体外培养人RPE细胞,应用2dyns/cm2大小的剪切力干预0,0.25,0.5,0.75,1,1.5,3h后,用免疫荧光染色法观察RPE细胞syndecan-1,VCAM-1和E-selectin表达和肌动蛋白的变化。结果:静态下的RPE细胞呈多角形和不规则形。2dyns/cm2剪切力作用0.75h后,细胞间隙加大,部分细胞形状变圆、变小;作用后1.5h,细胞极性改至与剪切力作用方向一致。静态条件下,肌动蛋白呈黄绿色丝状分布于中央细胞内,排列松散不规则且微丝较细;剪切力作用3h后,肌动蛋白增多增粗,且沿切力方向排列于中央和远周边细胞。剪切力作用后,RPE细胞syndecan-1的表达在0.5h时最弱,1h时最强;VCAM-1的表达在0.5h时最弱,1.5h时最强;E-selectin的表达在0.75h时最低,3h时最高。结论:剪切力可引起RPE细胞syndecan-1,VCAM-1和E-selectin及细胞骨架蛋白发生变化,它们之间的相互协作对RPE细胞的形态、黏附和力学信号转导起重要作用。     

甲状腺相关眼病患者血清可溶性细胞间黏附分子-1和可溶性血管细胞黏附分子-1的检测及临床意义

目的 观察甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)患者血清中可溶性细胞间黏附分子-1(soluble intracellular adhesion molecule-1,sICAM-1)和可溶性血管细胞黏附分子-l(soluble vascular cell adhesion molecule-1,sVCAM-1)的水平与TAO活动性及严重程度的关系.方法 对72例TAO患者,按照临床活动性评分及眼病严重程度进行分期和分度(即活动期和非活动期,轻度、中重度和极重度),采用酶联免疫吸附法,检测其血清中sICAM-1和sVCAM-1的水平并与20例正常人比较.结果 TAO活动期组血清slCAM-1和sVCAM-1的水平[分别为(272.78±33.82)μg·L-1和(452.06±45.91)μg·L-1]显著高于非活动期组和正常对照组[分别为(166.78 ±22.31) μg·L-1和(231.95±31.71)μg· L-1,(165.59±21.06) μg· L-1和(230.65±28.17) μg·L-1,均为P＜0.05],且随TAO严重程度的加重而增加.TAO非活动期组血清sICAM-1和sVCAM-1的水平与正常对照组的差异均无统计学意义(均为P ＞0.05),不随TAO严重程度的加重而增加.结论 血清sICAM-1和sVCAM-1的水平与TAO活动性及严重程度相关,可作为TAO诊断、分期分级、监测病情变化和观察疗效的一项指标.     

过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞转录和表达促红细胞生成素的研究

目的研究不同浓度的过氧化氢诱导人视网膜色素上皮（RPE）细胞转录和表达促红细胞生成素（EPO）的现象并探讨其发生机制。方法原代培养人胚胎RPE细胞,经鉴定后,分别应用0、200、400、600、800μmol／L浓度的过氧化氢作用6h,造成RPE细胞不同程度的氧化应激,测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量;采用半定量RT-PCR法检测RPE细胞氧化应激中EPO在转录水平的表达变化;免疫组织化学法检测EPO在RPE细胞中的表达部位和表达变化。结果过氧化氢导致RPE细胞内SOD含量下降,MDA含量升高。半定量RT-PCR法检测结果显示过氧化氢诱导EPOmRNA表达量增加,并在一定范围内随着过氧化氢浓度的增高而增加,在600μmol／L过氧化氢组EPOmRNA表达量达最高值,之后随着浓度的上升而下降。免疫组织化学染色法检测结果显示过氧化氢可以诱导人RPE细胞EPO表达增强,并在一定范围内随着过氧化氢浓度的增高而增强,在600μmol／L过氧化氢组EPO表达量达到高峰。结论过氧化氢导致的氧化应激可以诱导人RPE细胞转录和表达EPO,EPO的表达量与RPE存活和耐受程度有关。     

兔后发性白内障房水中白细胞介素-1β和白细胞介素-6的含量

目的:探讨白内障囊外摘除术后房水中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的含量与后发性白内障的关系.方法:28只兔均行白内障晶状体囊外手术,分别于术后1、3、7、14、30 d和90 d对术眼进行裂隙灯和眼底检查,并抽取房水于-80 ℃中保存.用酶联免疫吸附试验对术后兔房水中的IL-1β和IL-6含量进行测定.结果:兔房水IL-1β和IL-6含量于术后3、7、14 d和30 d明显升高,术后7～14 d达最高值,且与后囊混浊程度呈正相关.结论:IL-1β和IL-6可能参与后发性白内障的形成.     

表皮生长因子诱导人视网膜色素上皮细胞整合素α5表达对细胞增生和迁移的影响

目的 观察表皮生长因子(EGF)诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞整合素α5表达对细胞增生和迁移的影响.方法 在0.1、1.0、10.0、20.0、100.0 ng/ml EGF浓度条件下,体外培养人RPE细胞.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及流式细胞术观察不同浓度组整合素α5mRNA和蛋白的表达.后将实验分为Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)/F12、DMEM/F12+10.0 ng/ml EGF、DMEM/F12+10.0ng/ml EGF+兔抗人整合素α5多克隆抗体(1:100)及DMEM/F12+10.0 ng/ml EGF+兔抗人波形蛋白抗体(1:100)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法和Boyden小室法检测细胞增生及迁移.结果 RT-PCR检测显示,细胞培养12 h,EGF对人RPE细胞整合素α5mRNA合成无明显影响(F-0.618,p=0.687);细胞培养24、48 h,EGF能刺激人RPE细胞合成整合素α5mRNA,并呈浓度依赖性(F=465.303,212.340;P=0.000,0.000).流式细胞术检测显示,10.0 ng/ml组整合素α5荧光强度最强,与空白对照组和0.1 ng/ml组比较,差异有统计学意义(P<0.01).MTT比色法和Boyden小室法检测显示,整合素α5的表达促进人RPE细胞增生和迁移.结论 EGF促进整合素α5mRNA和蛋白的表达,整合素α5的表达促进人RPE细胞增生和迁移.     

巨噬细胞条件培养液及重组人IL-1β对RPE细胞产生MMP-2及MMP-9的影响

目的 观察巨噬细胞条件培养液（MφM）及白细胞介素-1β（IL-1β）对视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌基质金属蛋白酶（MMP）-2及MMP-9的影响,探讨巨噬细胞与RPE细胞之间的相互关系.方法 在人RPE细胞培养液中加入50%体积分数的人MφM作用48 h;加入终质量浓度为10、50、100、200 ng/ml重组人IL-1β作用12、24、48 h.用酶谱法检测RPE细胞培养液中MMP-2及MMP-9,凝胶图像扫描分析仪定量.结果 MφCM促RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9,促MMP-9分泌尤其明显;48 h内IL-1β促RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9具有时间和质量浓度依赖性.结论 MφCM中含有促RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9的因子,IL-1β是巨噬细胞产生的主要炎性因子,提示巨噬细胞可能通过分泌细胞因子调节RPE细胞分泌MMP-2和MMP-9,参与细胞增生、迁移等病理过程.     

重组人促红细胞生成素对人视网膜色素上皮细胞光化学损伤保护性作用的研究

目的研究重组人促红细胞生成素（rhEPO）在人视网膜色素上皮（RPE）细胞光化学损伤中的保护作用及其作用机制,为年龄相关性黄斑变性等眼部病变的药物治疗和预防提供理论依据。方法为实验研究。取成人ARPE-19细胞株传代培养的2～5代细胞建立光损伤模型,光照12h后再培养24h终止培养,采用噻唑蓝比色法和AnnexinV-FITC／PI流式双染法检测不同浓度的rhEPO干预治疗前后RPE细胞活性的变化及细胞凋亡的变化,采用酶联免疫吸附实验和免疫组织化学法定量检测不同含量rhEPO干预治疗前后RPE细胞caspase-3表达的变化,并添加AG490（Jak2激酶抑制剂）探讨重组人EPO对人RPE细胞光化学损伤的保护性作用和途径及其保护性机制。结果rhEPO可明显增强RPE细胞的活性,以40U／mLEPO组结果最明显;明显减少光化学损伤诱导的人RPE细胞的凋亡,以40U／mLrhEPO组结果最明显。在加入AG490组,rhEPO对细胞活性的增强作用和抑制凋亡作用均被阻止。结论rhEPO对人RPE细胞的光化学损伤有保护治疗作用,主要通过EPO的受体后保护作用机制起作用,即通过与受体结合,激活Jak2激酶的途径实现的。（中华眼科杂志,2008,44：50-55）     

毒蕈碱1型受体在人视网膜色素上皮细胞表达的研究

目的探讨正常人眼视网膜色素上皮(RPE)细胞毒蕈碱1型(M1)受体的表达情况和M1受体对维持RPE细胞功能的作用及其与近视发生、发展的关系。方法采用已建立的RPE细胞的分离和培养方法建立细胞培养株。取传3~5代生长良好的细胞,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、间接免疫荧光法(IIF)检测培养的RPE细胞中M1受体的表达情况。结果培养的RPE细胞呈多边形,平均分裂时间约2~3d,细胞内含有棕黄色素颗粒,随着细胞的分裂,细胞内的色素颗粒稀释和变少。RT-PCR和间接免疫荧光法检测,显示体外培养的人RPE细胞有M1受体表达。结论人RPE细胞有M1受体的分布。M1受体对维持RPE细胞的功能起重要作用。M1受体拮抗剂玻璃体腔注射以延缓近视的发生、发展机制可能与其抑制RPE细胞功能有关。     

血小板反应蛋白-1在缺氧人视网膜色素上皮细胞中的表达

血小板反应蛋白-1(TSP-1)的生物学功能复杂,在血管生成及肿瘤的研究中发现TSP-1可以降低细胞的黏附,诱导凋亡,抑制血管新生,抑制肿瘤牛长[1-3];同时也有一些相反的报道,认为TSP-1具有促进细胞黏附、增生、血管新牛及肿瘤生长的作用[1].然而其在眼部血管生成中的研究较少.缺氧是眼部血管新生件疾病的一个主要病理过程[4,5],我们观察了常氧和缺氧状态下TSP-1在体外培养视网膜色素上皮(RPE)细胞的表达情况,现将结果报道如下.     

蓝光致人视网膜色素上皮细胞凋亡与线粒体膜电位和细胞色素C的关系

目的探讨蓝光光照对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞凋亡及对线粒体膜通透性转运功能的影响。方法用蓝光光照体外培养的人RPE细胞。实验分为三部分。第一部分:不同光照度,分为3组,第1组光照度(500±100)lx,第2组光照度(2000±500)lx,第3组光照度(3000±500)lx;光照RPE细胞时间6h,光照结束后24h终止培养。第二部分:同一光照度、不同光照时间,检测RPE细胞亚型时分为3组,第1组光照时间6h,第2组光照时间12h,第3组光照时间24h,光照度均为(2000±500)lx;检测线粒体膜电位时也分为3组,第1组光照时间3h,第2组光照时间6h,第3组光照时间12h,光照度均为(2000±500)lx。第三部分:同一光照度和光照时间,光照度(2000±500)lx,光照RPE细胞时间6h;不同细胞培养终止时间分为4组,第1组终止细胞培养时间为光照后6h,第2组为光照后12h,第3组为光照后24h,第4组为光照后36h。利用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)染色、荧光素标记的AnnexinV-FITC和PI双染流式细胞检测、透射电镜等手段观察RPE细胞凋亡情况。罗丹明123荧光染料孵育人RPE细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位,酶联免疫法测定细胞色素C活性,比色测定法测定Caspase-3的活性。结果第二部分第1组TUNEL染色阳性细胞的体积缩小变圆,胞核浓缩,边聚成新月形或帽状,细胞核碎裂成数个,细胞膜出胞。透射电镜观察发现细胞内线粒体肿胀,线粒体内膜嵴消失,粗面内质网扩张,溶酶体增加。第一部分(500±100)lx光照未引起明显的RPE细胞损伤,但线粒体膜电位明显下降;随着光照度增加,RPE细胞出现凋亡、凋亡继发性坏死及坏死,同时线粒体膜电位逐渐下降。第二部分光照6和12h,凋亡细胞百分比增加,荧光强度明显下降;光照24h凋亡继发性坏死细胞、坏死细胞百分比增加。第三部分光照后6和12h,RPE细胞凋亡百分比逐渐增加;光照后24、36h凋亡继发性坏死细胞和坏死细胞百分比明显增加,光照后各时间点RPE细胞荧光强度明显下降。以光照度(2000±500)lx照射6和12h,可见光照后24和36h两组的细胞色素C浓度明显升高,未检测到Caspase-3活性变化。结论蓝光照射可导致体外培养的人RPE细胞凋亡、凋亡继发性坏死及坏死,其损伤程度与光照度和时间相关;蓝光照射导致培养的人RPE细胞损伤过程与线粒体膜电位降低、细胞色素C释放有关;线粒体膜电位可作为检测蓝光致人RPE细胞凋亡的早期指标。     

白细胞介素-2对高糖状态下人视网膜色素上皮细胞的影响

目的研究白细胞介素-2(IL-2)对高糖状态下人视网膜色素上皮(RPE)细胞的增殖及其分泌和表达血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响。方法MTT自动比色法观察IL-2浓度对高糖状态下RPE细胞增殖的作用;ELISA法测RPE细胞分泌VEGF的变化;免疫组化观察RPE细胞表达VEGF的变化。结果0.1～10μg/L的IL-2均能明显促进高糖状态下RPE细胞的增殖,并能明显提高RPE细胞分泌VEGF的水平及提高VEGF在细胞中的表达。结论高糖状态下,IL-2可明显促进人RPE细胞的增殖并能提高RPE细胞分泌VEGF的水平和提高VEGF在RPE细胞中的表达,IL-2可能在增殖性糖尿病视网膜病变中起一定的作用。     

人类白细胞抗原DR分子和细胞间粘附分子-1在正常和病变角膜的表达及意义

目的　探讨正常及病变角膜中人类白细胞抗原ＤＲ 分子和细胞间粘附分子１ 的表达及其在角膜炎症和移植排斥反应中的作用和影响。方法　应用免疫组化技术对１０ 例正常人及４８ 例患者的病变角膜标本进行人类白细胞抗原ＤＲ分子和细胞间粘附分子１ 的表达的检测。结果　正常人角膜无或轻微表达人类白细胞抗原ＤＲ 分子和细胞间粘附分子１ ;病变角膜,尤其是炎症角膜及角膜移植术后发生排斥反应的角膜,其阳性表达率明显增高。结论　人类白细胞抗原ＤＲ 分子和细胞间粘附分子１ 的异常表达与角膜炎性反应有关,并可促进移植排斥反应的发生