非小细胞肺癌组织HK2、PKM2蛋白表达与术后复发的临床关系分析

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶M2型(PKM2)蛋白表达情况及其与术后复发的临床关系。方法 回顾性分析在本院行手术治疗的165例NSCLC患者的临床资料。采用免疫组化法检测NSCLC组织与癌旁组织标本HK2、PKM2蛋白表达情况。术后均随访24个月,比较NSCLC组织HK2、PKM2蛋白阳性表达患者与阴性表达患者术后复发情况,并采用Cox回归模型分析法分析NSCLC组织中HK2、PKM2蛋白表达与NSCLC患者术后复发的关系。结果 NSCLC组织中HK2、PKM2蛋白阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05)。术后随访24个月,患者复发率为41.21%(68/165);NSCLC组织HK2、PKM2蛋白阳性表达患者术后复发率高于阴性表达患者(P<0.05)。Cox回归模型分析显示,中/低分化、临床分期Ⅲ期、淋巴结转移、术后化疗周期≤4个周期、NSCLC组织中HK2及PKM2蛋白阳性表达均是NSCLC患者术后复发的独立危险因素(HR=3.615、4.909、6.443、4.166、3.904、3.773,P<0.05)。结论 HK...     

正常人 TCRγδ细胞系的建立及功能研究

本文以抗 Ｔ Ｃ Ｒγδ单克隆抗体固相法体外选择性扩增获得１０ 例高纯度（８４２ ％ ±５８ ％ ） 正常人 Ｔ Ｃ Ｒγδ细胞系。在体外功能研究时发现, 植物血凝素（ Ｐ Ｈ Ａ） 、结核分枝杆菌（ Ｍｔｂ ） 、阴道毛滴虫（ Ｔ Ｖ） 和人类６ 型疱疹病毒（ Ｈ Ｈ Ｖ ６ ） 的刺激对已处于高增殖和高肿瘤细胞（ Ｄａｕｄｉ 细胞） 细胞毒活性状态的 Ｔ Ｃ Ｒγδ细胞已无进一步增强活性的影响。结果表明, 抗体刺激已使γδ细胞处于活化状态, 其细胞增殖和细胞毒活性无需抗原的再刺激即可得到很好的维持。提示 Ｔ Ｃ Ｒγδ单抗活化的γδ Ｔ 细胞可能成为肿瘤过继治疗的一种候选效应细胞。抗体活化的γδ Ｔ细胞本身具有分泌 Ｉ Ｌ ２ 和 Ｉ Ｎ Ｆ γ的能力。在抗原刺激的条件下, 细胞内感染的微生物（ Ｍｔｂ 和 Ｈ Ｈ Ｖ ６ ） 刺激γδ Ｔ细胞产生 Ｔｈ１ 型细胞因子（ Ｉ Ｌ ２ 和 Ｉ Ｎ Ｆ γ） ; 而细胞外感染病原体 Ｔ Ｖ的刺激则无明显增加γδ Ｔ 细胞的 Ｔｈ１ 型细胞因子分泌。这一结果提示, 在抗胞内病原体中, γδ Ｔ 细胞可控制 Ｔｈ１ 细胞反应性炎症的发生与发展。     

表达结核特异性 Vγ9 Vδ2 TCR 双链单体的果蝇 S2恒定细胞系的构建和鉴定

目的：转染及筛选鉴定能够稳定表达和分泌V γ9Vδ2 T细胞受体（ TCR）双链单体的果蝇S2恒定细胞系。方法利用氯化钙转染法将TCR γ9-FB-pMT／V5-His B质粒、TCR δ2-JB-pMT／V5-His A质粒、pMT／Bip-BirA质粒和pCoHygro潮霉素质粒转染进S2细胞中,用潮霉素B筛选恒定细胞系后表达生物素化的结核特异性Vγ9Vδ2 TCR双链单体,并加以鉴定。结果斑点印迹试验、SDS-PAGE和Western blot表明细胞培养上清中有V γ9Vδ2 TCR单体,且已被成功生物素化。结论成功筛选出能稳定分泌表达Vγ9 V δ2 TCR的果蝇S2恒定细胞系,为研究γδ T细胞的免疫识别提供实验资料。     

肝癌组织中PKM2表达及与放疗敏感性的关系

目的检测肝癌组织中M2型丙酮酸激酶(M2 pyruvate kinase,PKM2)的表达,并分析其与放疗敏感性的关系。方法回顾性分析80例肝癌患者的临床资料,患者均实施肝脏穿刺活检,且均符合三维适形放疗指征。检测肝癌组织中PKM2蛋白的表达,对比不同PKM2蛋白表达患者放疗前后血清AFP水平,对比不同PKM2蛋白表达患者的放疗效果和敏感性。探讨肝癌组织中PKM2表达与放疗敏感性的关系。结果肝癌组织中PKM2蛋白阳性率为87.50%;放疗前后肝癌组织中PKM2蛋白阳性者血清AFP水平均高于阴性者(P<0.05),且放疗后肝癌组织中PKM2蛋白阳性和阴性者血清AFP水平均低于放疗前(P<0.05);PKM2蛋白阳性者缓解率(放疗敏感率)低于阴性者(P<0.05);临床分期Ⅲ期、Ⅳ期,低分化,PKM2蛋白阳性均是放疗不敏感的独立危险因素(OR=3.274、5.328、5.942、7.135,P<0.05)。结论肝癌组织中PKM2阳性率高,且与血清AFP水平、放疗敏感性均密切相关,PKM2蛋白阳性等均是放疗不敏感的独立危险因素。     

B-ALL患者外周血γδT细胞TCR亚家族谱系分布和增殖特点

目的了解急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者外周血T细胞的T细胞受体(TCR)Vγ和Vδ亚家族的T细胞谱系分布和克隆性增殖情况。方法利用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测14例B-ALL患者外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个TCR Vδ亚家族基因谱系的分布情况;进一步经荧光素标记和基因扫描分析TCR Vγ和TCR Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),以检测T细胞克隆性。10例健康成人外周血作为对照。结果 B-ALL患者外周血中TCR Vγ亚家族表达率降低,其中VγII亚家族表达率降低与健康对照组的差异具有统计学意义(P=0.006)。B-ALL患者外周血中Vδ1(57.1%)、Vδ2(42.9%)和Vδ3(14.3%)亚家族表达率均低于健康对照组,且差异有统计学意义(P=0.024,0.006,0.001)。此外,在B-ALL患者外周血中可以检测到在健康人中未检测到的Vδ4(14.3%)和Vδ5(14.3%)亚家族;且Vδ6(28.6%)、Vδ7(21.4%,)和Vδ8(35.7%)亚家族表达率也高于健康对照组。B-ALL患者外周血中存在克隆性增殖的Vγ和Vδ亚家族T细胞,其中,Vδ8亚家族T细胞寡克隆增殖的发生频率最高(35.7%),其次为Vδ6(28.6%)和Vδ7(21.4%)亚家族T细胞。结论 B-ALL患者外周血TCR Vγ和TCR Vδ亚家族T细胞出现限制性表达和克隆性增殖,其中高频率出现的寡克隆性增殖的Vδ亚家族T细胞可能与体内存在的白血病抗原相关。     

γδT细胞的生物学意义

<正>T淋巴细胞表面可分别表达两种与CD3分子相关联的T细胞抗原受体(T cell re-ceptor,TCR):由α链和β链(TCRαβ)或γ链和δ链构成的异质二聚体.人们一直对αβT细胞的结构和功能研究予以很大程度上的关注,而对于γδT细胞研究投入要少些.主要原因可能是人们认为TCRγδ细胞是一个外周淋巴细胞库中的数量较小的亚群,不大可能在免疫应答中起主要作用.γδT细胞约占正常人外周血淋巴细胞总数的3%～10%,在其表面表达CD3分子,但绝大多数不表达CD4及CD8分子.然而在长期进     

PKM2与头颈部鳞状细胞癌淋巴结转移及临床分期相关性的Meta分析

目的探讨PKM2与头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)淋巴结转移及临床分期的相关性。方法检索PubMed和EMBASE数据库,最终纳入5篇文献共611例HNSCC组织标本进行Meta分析,分析指标包括淋巴结转移和临床分期。结果 HNSCC组织中PKM2表达与淋巴结转移(OR=0.43,95%CI=0.29～0.64,P0.000 1)和临床分期(OR=0.33,95%CI=0.22～0.48,P0.000 01)呈显著性相关。结论 HNSCC组织中PKM2表达与淋巴结转移及临床分期具有相关性,提示PKM2可作为HNSCC淋巴结转移及临床分期的预测指标。     

磷酸脂配体体外激活人外周血γδT细胞的研究

人γδT细胞可识别非肽类的磷酸脂分子。本研究用非肽类磷酸脂配体MEP在体外选择性扩增人外周血γδT细胞。MEP激活的PBMC中主要为CD3+ CD45RO+ γδTCR+ 细胞群。激活的γδT细胞可分泌IFN γ ,但不分泌IL 4,因此激活的γδT细胞可能分泌Thl型细胞因子。MEP激活γδT细胞需要有辅佐细胞的存在 ,但不需要抗原的处理和递呈 ,并且激活的γδT细胞对多种肿瘤细胞具有非MHC限制性的细胞毒作用。以上结果提示MEP可有效激活γδT细胞 ,使其表现出独特的免疫学特征和生物学功能。     

特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞的构建及生物学功能鉴定

目的：建立特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台。方法：利用搭桥PCR的方法将已知的γδT细胞克隆DBS4.3特异性CDR3编码序列嵌入到γ9和δ2cDNA序列中,取代原有的CDR3区序列,获得的全长γ9和δ2链分别插入真核表达载体pREP7和pREP9中,共转染J.RT3-T3.5细胞,双压力抗生素筛选获得表达特异性γδTCR的转染细胞,通过ELISA和Re-altime PCR检测该转染细胞在接受抗原刺激后IL-2的分泌情况。结果：ELISA和Realtime PCR结果显示表达DBS4.3特异性γδTCR的转染细胞在DBS4.3特异性抗原仲丁胺和抗γδTCR抗体刺激作用下,活化分泌IL-2。结论：构建了特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台,为研究γδTCR识别抗原的机制奠定了基础。     

结核分枝杆菌抗原和TCRγδ抗体诱导人γδT细胞分化并产生IL-17

目的探讨结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)和抗T细胞受体γδ单克隆抗体(TCRγδm Ab)在刺激人γδT细胞诱导分化产生IL-17中的作用。方法健康人外周血单个核细胞经过免疫磁珠分选得到纯化的γδT细胞后,加入MTB-HAg或包被的TCRγδm Ab,再加或不加CD28 m Ab进行刺激,同时加或不加IL-17极化细胞因子组合(CK)(IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23),极化诱导培养10~12 d。然后收集诱导极化培养的γδT细胞,经佛波醇酯和离子霉素再刺激6 h后,用ELISPOT法检测产生IL-17的细胞数。结果经刺激和诱导分化培养的γδT细胞用ELISPOT法检测产生IL-17的细胞数发现,TCRγδm Ab联合CK组与TCRγδm Ab组相比明显增加,TCRγδm Ab联合CD28 m Ab组与TCRγδm Ab同时联合CD28 m Ab和CK组相比明显减少。TCRγδm Ab同时联合CD28 m Ab和CK组与TCRγδm Ab联合CK组相比明显增多。MTB-Hag同时联合CD28 m Ab和CK组与TCRγδm Ab同时联合CD28 m Ab和CK组相比显著减少,但与MTB-HAg联合CD28 m Ab组相比明显增多。结论诱导Th17分化的CK(IL-1β、IL-6、TGF-β和IL-23)也能诱导人γδT细胞分化产生IL-17,TCRγδm Ab刺激γδT细胞增殖后诱导分化产生IL-17的活性比MTB-HAg更强。另外,CD28在TCRγδm Ab激活γδT细胞诱导产生IL-17的过程中也有重要作用。     

沉默PKM2对乳腺癌他莫昔芬耐药MCF-7细胞系侵袭及迁移的影响

目的探讨PKM2下调对乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药MCF-7细胞系侵袭、迁移的影响。方法以浓度梯度法诱导获得乳腺癌他莫昔芬耐药细胞系(MCF-7R);细胞增殖与凋亡试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力;Western blot检测细胞PKM2的表达;将表达针对PKM2的shRNA慢病毒干扰载体感染耐药细胞系,RT-q PCR、Western blot验证干扰效果,分别用Transwell侵袭实验、划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力。结果与MCF-7细胞相比,MCF-7R细胞对他莫昔芬的抵抗能力显著增强(P0.01),PKM2的表达水平明显升高(P0.01)。稳定干扰PKM2的耐药细胞中PKM2的mRNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P0.01),PKM2干扰后可明显抑制MCF-7R细胞的侵袭、迁移能力(P0.01)。结论 MCF-7R细胞中PKM2表达明显高于MCF-7细胞,沉默PKM2可以抑制MCF-7R细胞的侵袭和迁移能力。     

γδT细胞的抗原识别机制

Ｔ细胞表面表达两类抗原受体（ＴＣＲ）：ＴＣＲαβ和ＴＣＲγδ。ＴＣＲαβ可特异地识别由抗原呈递细胞（ＡＰＣ）表面Ⅰ类或Ⅱ类ＭＨＣ分子呈递的抗原肽，而ＴＣＲγδ则主要以ＭＨＣ非限制方式识别各类抗原。最近对ＴＣＲγδ所识别的抗原类型及方式进行了较为深入的研究，本文就其进展作一述评。１　ＴＣＲγδ的多样性和分布特点提示其抗原识别的特殊性　　同ＴＣＲαβ和免疫球蛋白（Ｉｇ）类似，ＴＣＲγδ基因由重组的Ｖ、Ｄ、Ｊ和Ｃ区组成。虽然γ、δ位点的Ｖ区多样性不及α和β，但其连接区多样性则使ＴＣＲγδ存在甚至超过Ｔ…     

PI3K在TCR和CD28协同激发的γδT细胞活化信号转导中的作用

目的 探讨CD28协同结核杆菌（M.tb)低分子多肽激活人外周血γδ^ T细胞时，其胞内信号的传递经过磷酸肌醇3激酶（PI3K）的介导作用。方法 用激发型抗CD28单抗模拟第二信号，与M.tb抗原一起刺激纯化的T细胞，同时用特异性PI3K抑制剂LY294002阻断PI3K的活性，用流式细胞仪分析γδ^ T细胞上CD69分子的表达及γδ^ T细胞的增殖效应。结果 随着LY294002浓度的增加，γδ^ T细胞表面CD69分子的表达率降低，其增殖效应亦被不同程度地阻断。结论 抗CD28单抗可协同M.tb抗原激活γδ^ T细胞，綦知化信号在γδ^ T细胞内的转导经过PI3K的介导。     

γδT细胞在疾病中的作用

γδT细胞是皮肤表皮内淋巴细胞和粘膜组织上皮内淋巴细胞的主要成分之一,为非特异性免疫细胞。活化的γδT细胞具有较强的杀伤活性,具有抗感染、抗肿瘤作用;γδT细胞还可以维持免疫耐受,调节免疫应签,异常可导致自身免疫性疾病的发生。因此尽管γδT细胞在人类庞大复杂的免疫体系中数量较少,但却具有不可替代的重要功能。     

γδT淋巴细胞的抗肿瘤作用

粘膜免疫和固有免疫在对肿瘤的防御中起着重要作用。γδ型T细胞大量的分布于粘膜相关淋巴组织,其作用介于固有免疫和适应性免疫之间并且是MHC非限制性的。因此其在抗肿瘤免疫中的作用也是不可忽视的。以下将对其两个主要的功能亚群VγVδ2 T细胞和Vδ1 T细胞向肿瘤组织内浸润、对肿瘤细胞的识别及杀伤机制进行简要综述。     

含氮二膦酸盐/IL-2诱导肿瘤患者外周血γδT细胞增殖的作用

目的探讨药物（含氮二膦酸盐联合IL-2，N-BP／IL-2）诱导实体肿瘤患者外周血γδT细胞增殖作用。方法采用流式细胞仪测定103例肿瘤患者和43例健康人外周血总T细胞绝对值、御细胞绝对值和相对值，测定患者外周血经药物体外刺激后御细胞增殖指数和用药前后患者外周血总T细胞、γδT细胞绝对值和相对值。结果肿瘤患者和健康人外周血总T细胞绝对值、御细胞绝对值和御细胞相对值的中位数，分别为1306细胞/μl和1522细胞/μlP=0．003），64细胞/μl和162细胞/μl（P〈0．001），5％和11％（P〈0．001）。24例经药物体外扩增试验阳性的肿瘤患者治疗前后体内外周血总T细胞绝对值、γδT细胞绝对值和御细胞相对值的中位数，分别为1283细胞/μl和1552细胞/μl（P=0．001），54细胞/μl和107细胞/μl（P〈0．001），6％和8％（P=0．008）。全部肿瘤患者中外周血γδT细胞对药物体外诱导增殖反应阳性患者的百分率为68．9％。结论肿瘤患者外周血γδT细胞计数显著低于健康人。不同肿瘤患者外周血γδT细胞对药物刺激增殖的反应性不同。N-PB／IL-2在体内有显著增加御细胞数量的药理作用。体外增殖试验可作为N-PB／IL-2治疗患者的参考。