制备细胞因子诱导的杀伤细胞的方法比较

生物治疗是目前国内外治疗恶性肿瘤常规方法即手术治疗、化疗和放疗之外的一种新型疗法.过继性细胞免疫治疗(adaptive cellular immunotherapy,ACI)是生物治疗的一种,它是一种通过将具有抗肿瘤活性的、能直接或间接介导抗肿瘤效应的免疫细胞输注肿瘤宿主体内进行肿瘤治疗的方法[1].对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病变及骨髓净化都具有良好效果[2].细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK细胞)是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞,具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广等优点[3-4],已广泛应用于临床,但疗效差异很大,原因可能与制备CIK细胞的方法、所使用细胞因子的种类和剂量密切相关.本研究拟采用3种方法制备CIK细胞,并比较用这3种方法制备的CIK细胞的生物学特性及其杀瘤活性,为制备高活性的CIK细胞提供方法,以提高CIK细胞临床应用的疗效.     

细胞因子诱导的杀伤细胞的研究进展

正常人或患者外周血、骨髓单个核细胞中定期加入IFN-γ、IL-1、IL-2、CD3mAb经2-4W的诱导可获得大量的新型肿瘤杀伤细胞—细胞因子诱导的杀伤细胞CIK,此细胞增殖旺盛杀伤活性高。CIK在体内和体外都具有非MHC限制抗肿瘤活性,在临床上已经用于治疗多种恶性肿瘤表现出强大的杀瘤活性,是一种很好的免疫治疗方法。     

γ氨基丁酸对人IL-2和IFN-γ诱导的杀伤细胞的作用研究

为研究γ氨基丁酸(GABA)及A受体激动剂(THIP)对人细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)的增殖、T细胞亚群和杀瘤活性的影响和作用机制;在体外用不同浓度的GABA和THIP与人CIK细胞作用后,用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)以及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测人CIK细胞的增殖能力、T细胞亚群和杀伤活性的变化。结果显示,GABA能显著的抑制CIK细胞的生长(P<0.01),并具有浓度依赖性,THIP对GABA的抑制细胞增殖有明显促进作用;GABA显著降低CIK细胞表面分子CD28分子的表达,降低CD8+T细胞的百分比,抑制CIK细胞对人结肠癌细胞株SW480的杀伤活性,THIP能够增强GABA的作用。上述结果提示,GABA能显著抑制CIK细胞的增殖,降低其细胞表面CD28分子的表达,降低CD8+T细胞的百分比,抑制CIK细胞的杀伤活性,这些作用主要是通过T淋巴细胞上的GABAA受体介导。     

IL-15转染人CIK细胞对HT-29的杀瘤效果探究

目的 探讨白细胞介素15(IL-15)基因（IL-15）转染人细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞对HT-29[人结肠癌（CRC）细胞株]的杀瘤效应。方法 从血液样本制备CIK细胞后，用含IL-15的慢病毒感染CIK细胞，制备转基因CIK细胞（IL-15-CIK细胞）。将IL-15-CIK细胞、CIK细胞分别与HT-29细胞共培养，按效靶比5︰1、10︰1、20︰1、25∶1培养14 d。分别评估IL-15-CIK细胞、CIK细胞对HT-29细胞的IL-15、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量变化和杀瘤效应。结果 成功制备CIK细胞及IL-15-CIK细胞。效靶比25∶1,IL-15-CIK细胞与CIK细胞对CRC细胞的杀伤最高（72.56%±5.66%、52.33%±3.46%），且两种细胞差异有统计学意义（P <0.05）。即IL-15-CIK细胞对HT-29细胞的杀伤能力强于CIK细胞。在IL-15-CIK细胞及CIK细胞培养7 d、11 d、14 d中，两种细胞上清液中IL-15、IFN-γ及TNF-α的含量均随着时间的增加而升高，杀瘤后任何两组间比较，差...     

探究PHA-L共诱导的CIK细胞的生物学特性及其联合苦参碱体外抗胃癌效应

目的探讨植物血凝素-L(PHA-L)共诱导制备细胞因子活化的杀伤细胞(CIK)的方法,同时探究新型PHA-CIK细胞联合苦参碱体外对胃癌MGC-803细胞的杀瘤活性效应。方法通过PHA-L共诱导制备新型CIK细胞即PHA-CIK细胞,并比较分析新型CIK细胞与普通CIK细胞的生物学特性;同时采用CCK-8法分别检测普通CIK细胞组、PHA-CIK细胞组、苦参碱组以及PHA-CIK细胞联合苦参碱组(联合组)体外对胃癌MGC-803细胞的杀瘤活性。结果制备新型CIK的方法更能促进细胞增殖(P0.05),且细胞活率保持在90%以上。与普通方法相比,新方法在CD3~+CD8~+比例方面存在显著差异(P0.05),且杀伤活性增强(P0.05)。联合组对胃癌MGC-803细胞的杀伤率明显高于PHA-CIK组和苦参碱组,分别是1.6倍和2.3倍,联合组与PHA-CIK组及苦参碱组相比差异具有显著统计学意义(P0.01)。结论新型PHA-CIK联合苦参碱可显著提高对胃癌细胞的杀伤活性,为中药联合过继性细胞免疫治疗综合治疗肿瘤提供一种新方法。     

外周血和脐血CIK细胞杀伤机制、效果研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)是一种由多种细胞因子诱导的以表达CD3+和CD56+细胞为主的异质性细胞群,对多种肿瘤细胞均有明显的细胞毒活性。临床常用的CIK主要来源于人脐血和外周血,其杀瘤机制不同,前者以诱导肿瘤细胞的坏死为主,后者通过诱导肿瘤细胞的凋亡而发挥作用。它们均通过表达CD56分子促进细胞间的黏附和结合,能释放穿孔素、细胞溶解素等使靶细胞产生渗透性溶解。当效靶细胞比为30∶1时,抑瘤效果较好。     

CIK细胞临床应用技术规范探讨

 细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokin induced killer cells，CIK细胞）因具有体外增殖倍数高、抗瘤谱广、杀瘤活性强、副作用极小等特点而受到关注。研究表明，CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用是LAK细胞的100倍[1]。CIK细胞过继性免疫治疗是肿瘤治疗中的一项新技术，目前已逐步在临床上应用，因此，制订科学、严格的技术规范对该技术的正确使用及推广意义重大。但迄今国内还没有关于CIK细胞培养和临床应用的统一技术规范。无锡旺庄医院生物治疗中心参考国家食品药品监督管理局1999年制订的《新生物制品审批办法》和美国FDA 1998年制订的《人体细胞治疗和基因治疗指导原则》，结合数年的CIK细胞临床应用经验，制订出我们的CIK细胞临床应用技术规范，现介绍如下，供同行切磋和讨论，以期促成全国性统一技术规范的早日制定。     

脐血CIK细胞诱导K562细胞的凋亡作用

探讨脐血CIK细胞对K562细胞的杀伤活性及诱导凋亡作用。通过第1天在脐血淋巴细胞中加入IFN-r，第2天再加入IL-2和CD3单抗进行细胞培养获得多种细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokines induced killer cells)即脐血CIK细胞。用MTT法测定其抗肿瘤活性，原位末端标记法进行凋亡分析，台盼蓝拒染法计数细胞。脐血CIK细胞及培养上清抗K562活性明显优于CD3AK细胞，短期培养后其增殖活性低于CD3AK细胞；但是加入G-CSF可以提高CIK细胞的增殖活性，且CIK细胞的抗K562活性仍高于CD3AK细胞。CIK细胞诱导K562细胞凋亡率大于CD3AK细胞，G-CSF能部分抑制CIK细胞诱导的K562细胞的凋亡。脐血CIK细胞是一种有效的杀伤活化细胞，脐血在多种细胞因子适当组合的诱导下可提高杀瘤活性。     

抗原负载的DC诱导CIK对MDA-MB-231细胞的杀伤活性研究

探讨乳腺癌相关抗原负载后树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对MDA-MB-231乳腺癌细胞株的杀伤效应。采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC),常规法诱导DC、CIK细胞;流式细胞技术分析测定细胞表型;用反复冻融法制备MDA-MB-231细胞的相关抗原,并测定抗原浓度;MTT法分别测定在四个不同效靶比时CIK、DC+CIK和抗原负载的DC+CIK三组效应细胞对MDA-MB-231乳腺癌细胞的杀伤活性。结果:CIK细胞分别与DC和Ag-DC共培养后,可见CD3+CD56+双阳性表达细胞较培养前显著增加(P<0.05);将负载肿瘤相关抗原的DC与CIK共培养后,杀瘤活性明显提高(P<0.05)。提示,抗原负载的DC与CIK细胞共同孵育培养后,在相同效靶比时,对MDA-MB-231乳腺癌细胞杀伤效应与CIK细胞和DC-CIK两组效应细胞相比有显著提高,表明抗原负载后可提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,为乳腺癌临床生物免疫治疗提供实验室基础。     

CIK细胞的体外培养与细胞毒作用

CIK(cytokine-induced killer)细胞在体外可以快速扩增,具有高效的非MHC限制性杀瘤活性,被认为是抗肿瘤过继细胞免疫治疗的新希望。随着细胞操作及基因修饰技术的日益精进,人们正逐渐改进CIK细胞的体外培养和处理方法,以便进一步提高CIK细胞的增殖率及特异杀伤力,使其更好地应用于临床。