基于寡核苷酸芯片的β-地中海贫血DNA甲基化的研究

目的 通过寡核苷酸芯片寻找和分析β-地中海贫血DNA甲基化相关的基因位点,进一步探讨产前筛查及诊断β-地中海贫血的新方法.方法 利用含有人30 178个DNA甲基化探针的寡核苷酸芯片,对2例β地中海贫血患儿脐血与2例正常脐血分别配对检测差异基因DNA甲基化情况,并用甲基化特异PCR(methylation-specific PCR,MSP)和荧光定量PCR(RT-PCR)验证芯片结果.采用非监督聚类(hierarchical clustering)等方法发现统计学意义上差异表达的基因.结果 两组芯片结果显示,差异基因共209条(ratio≥2.0,ratio≤0.5);其中上调基因共113条,下调基因共96条.验证结果显示,DNA甲基化相关基因成红细胞增多型白血病致病因子(erythroblastie leukemia viral,v-erb-a)与正常血样比较呈高甲基化状态.结论 利用DNA甲基化芯片及甲基化特异PCR技术检测并验证出成红细胞增多型白血病致病因子(v-erb-a)在地中海贫血中呈高甲基化.     

惠州市新生儿α地中海贫血发病情况调查

目的 了解惠州地区α地中海贫血（地贫）的发病率情况。方法 对2006年1月至2006年12月在本院出生的1571例新生儿进行α地贫筛查。采用全自动琼脂糖凝胶电泳的方法进行血红蛋白（Hb）电泳。结果 检出异常区带Hb Bart＇s共157例，阳性率9．99％，根据Hb Bart＇s含量推算出静止型、标准型α地贫、HbH病，分别为2．74％、6．75％和0．38％。结论 惠州地区为α地贫高发区，应大力开展人群筛查和防治工作。     

单细胞水平β地中海贫血诊断膜芯片检测技术的探讨

目的 对在单细胞水平β地中海贫血诊断膜芯片检测技术进行探讨。方法 采用15个碱基的随机引物对单个细胞的基因组进行引物延伸预扩增(Primer extension preamplification,PEP)，取其产物5μl分别对β地中海贫血的目的基因片段进行巢式或半巢式扩增，然后来用反向斑点杂交(Reverse dot blot,RDB)技术检测β地贫突变型。结果 将这些技术应用于4例已经确定突变基因型的β地贫患者及1例正常女性，检测结果与预料的相符。结论 结合我们的实验结果，提示在单个细胞或微量DNA模板水平运用基因芯片技术进行遗传病检测是可行的，而且将来在胚胎植入前基因诊断和无创性产前诊断领域可能有一定的实用价值。     

α-地中海贫血早期产前诊断

目的：探索α－地中海贫血早期产前诊断的方法；方法：利用聚合酶链反应技术对8例高危妊娠者采用绒毛取样进行缺失型α－地中海贫血的早期产前诊断；结果：检测出胎儿水肿综合症2例，杂合子4例．正常胚胎2例，其中3例孕中期行羊水检查，证实了绒毛诊断的准确性；结论：绒毛取样是诊断缺失型α－地中海的一种安全可靠的孕早期产前诊断方法。     

中山市α-地中海贫血的新生儿筛查

目的调查中山市被筛查的新生儿中脐血Hb Bart水平及α-地中海贫血(简称α-地贫)的基因携带率。方法以分层抽样采集2 500例中山市户籍新生儿脐血,采用高效毛细管电泳(HPCE)进行Hb Bart定量测定,并对所有样品进行α-地贫基因型分析。结果在2 500例脐带血样本中,检出Hb Bart阳性样品183例,阳性率为7.32%,此外,还检出异常Hb 14例。经基因分析,255例被确诊为α-地贫基因型。有83例α3.7/αα、α4.2/αα和2例--SEA/αα基因携带者检出自Hb Bart阴性样品中。中山市户籍人群中α-地贫基因携带率为10.32%。结论中山市是α-地贫基因高发区,普遍开展新生儿α-地贫筛查对α-地贫的预防工作具有重要意义。Hb Bart水平不宜作为诊断静止型α-地贫的筛查指标。     

缺铁性贫血与α-地中海贫血的血液学鉴别

目的探讨α-地中海贫血与缺铁性贫血的血液指标的区别。方法选取2015—2017年我院诊断为α-地中海贫血患者129例(剔除合并其他类型地中海贫血患者、合并缺铁性贫血患者、合并其他血红蛋白病患者)。选取同时期明确诊断为缺铁性贫血患者191例,健康对照组47名。回顾性分析比较血常规、血红蛋白电泳检测结果。结果α-地中海贫血组、缺铁性贫血组血红蛋白、血细胞比容(Hct)、平均红细胞体积(MCV)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、血红蛋白A2值明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。α-地中海贫血组MCV、MCH、血红蛋白A值明显低于缺铁性贫血组,血红蛋白、Hct明显高于缺铁性贫血组,差异有统计学意义(P<0.05);血红蛋白A、血红蛋白A2、MCHC差异无统计学意义(P>0.05)。结论α-地中海贫血和缺铁性贫血均属于小细胞低色素性贫血,二者在血红蛋白电泳筛查上,差异无统计学意义。但在红细胞的相关指数上存在差异,可通过血红蛋白、Hct、MCV、MCH区分两者。因此在基层,实验室条件不足时,可以通过红细胞的相关指数,粗略地区别缺铁性贫血和α-地中海贫血,协助临床诊疗。     

β-地中海贫血患者与其父母地中海贫血基因检测结果分析

目的 检测β-地中海贫血患者及其父母地中海贫血基因型，了解其遗传规律，提倡产前检测地中海贫血基因，同时时重症地中海贫血胎儿进行出生前缺陷干预。方法 收集29例β-地中海贫患者及其父母血样，提取DNA，采用寡核苷酸探针反向斑点杂交法时β-地中海贫血基因突变点进行分析。结果 29例β-地中海贫血患者中地贫基因型以CD41／42位点突变杂合子、CD41／42和IVSI-Ⅱ-654位点突变双重杂合子为主，其父母均为杂合子。结论 β-地中海贫血患者基因突变符合遗传规则；产前基因诊断是控制重症地中海贫血患者出生及疾病遗传的有效手段。     

脐血干细胞移植治疗重型β地中海贫血1例报告

患儿,男,3岁9个月,体质量14 kg.3年前因面色苍白、脾肿大入我院,查Hb 50 g/L,HbF 75%,诊断为重型β地中海贫血,基因检查为β地贫基因纯合子(基因型为CD41-42/IVS-II654),其母为CD41-42/N 杂合子,其父为IVS-II654/N杂合子.     

两省交界地区β地中海贫血复合缺失型α地中海贫血的发生率及基因诊断

目的 研究两省(广东、广西)交界地区β地中海贫血杂合子复合缺失型α地中海贫血的基因型及发生率.方法 采用RDB/PCR技术检测17种中国人较常见β地中海贫血基因突变位点.采用单管多重PCR技术检测3种缺失型α地中海贫血(左缺失-α4.2缺失,右缺失-α3.7缺失,东南亚型缺失__SEA).结果 在217例β地中海贫血杂合子标本中共检出30例复合缺失型α地中海贫血,检出率为13.82%.其中β地中海贫血杂合子合并__SEA/αα 20例(9.21%),合并-α3.7/αα 7例(3.22%),合并-α4.2/αα 2例(0.92%),合并__SEA/-α4.2 1例(0.46%).检出的30例β地中海贫血基因突变类型共有8种,分别是CD41-42(-TCTT)、TATAboxnt-28(A→G)、CD17(A→T)、CD71-72(+A)、IVS-Ⅱnt654(C →T)、βE (G→A)、TATAboxnt-29(A→G)、CD43(G→T).结论 两省交界地区人群β地中海贫血杂合子复合缺失型α地中海贫血的发生率为13.82%,β地中海贫血基因突变类型呈现多样性.在遗传咨询和产前诊断中应引起重视.     

β-地中海贫血杂合子携带α-地中海贫血1基因发生率

【目的】研究广东地区人群中β-地中海贫血（β-地贫）杂合子携带α-地中海贫血（α-地贫）1基因的发生率。【方法】采用反向点杂交法检测β-地贫基因。采用跨越缺失区断裂点PCR法检测α-地贫1基因。【结果】在500例β-地贫杂合子DNA标本中,共检出43例合并α-地贫1,检出率为8.6%。【结论】广东地区β-地贫杂合子中合并α-地贫1的发生率为8.6%,在遗传咨询和产前诊断过程中需要引起重视。     

地中海贫血诊断方法研究进展

目的:地中海贫血实验室诊断技术主要包括血液学筛查及基因检测两大类。前者主要以红细胞形态及其理化特性为诊断依据,包括红细胞形态分析、血常规分析、红细胞渗透脆性试验、血红蛋白组分分析等;后者主要是以PCR为基础的各种基因检测技术来进行诊断,包括Southern印迹杂交、PCR反向点杂交法、实时荧光PCR的探针溶解曲线分析、基因芯片、DNA测序等。本文就近年来地中海贫血的部分诊断方法及其研究进展作一综述。     

α-地中海贫血88例基因诊断结果分析

目的分析α-地中海贫血患者α-地中海贫血基因的携带率,以预防地中海贫血重症患儿的出生。方法采用α-地中海贫血检测试剂盒对88例α-地中海贫血患者进行基因诊断。结果-SEA缺失型杂合子（--SEM/αα）52例占59．09％,未检测到-α3．7、-α4．和-αSEA缺失型31例占35．23％,-α3．7缺失型杂哈子（αα／-α3．7）2例占2．27％,Bart’s水肿胎2例占2．27％,HbH（-SEA,-α3．7）1例占1．14％。结论基因诊断对优生优育、干预地贫儿出生有着重要作用。     

α地中海贫血研究进展

α地中海贫血是一组常染色体隐性遗传病,由α球蛋白链合成减少或缺失致病。好发于地中海、东南亚、非洲和中东等国家,在我国长江以南地区发病率最高,是全球影响最广泛的单基因遗传病之一。缺失1、2、3、4个α地贫基因可呈现不同程度的地中海贫血临床表型。地中海贫血患者有不同程度的贫血,因此,临床上可先进行血清学筛查红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白（MCH）及血红蛋白（Hb）。缺失型和非缺失型的α地贫基因诊断技术日新月异,本文就α地中海贫血的流行病学、分子机制、血液学筛查及其基因诊断技术进展进行了综述。     

新生儿脐血血红蛋白Bart定量技术筛查α地中海贫血研究现状

地中海贫血（thalassemia,地贫）是一种遗传性、慢性溶血性疾病。根据WHO统计,全世界约有18亿人携带地贫基因,每年约有20万以上各类重症地贫新生儿出生,严重影响人类健康。国外,地中海沿岸国家、非洲、东南亚是地贫高发区;国内,以广西、广东的发生率最高,海南、香港次之。     

液态芯片技术在β地中海贫血基因检测中的应用研究

目的探讨液态芯片技术在检测β地中海贫血基因突变常见类型的应用价值。方法采用液态芯片技术,使用Luminex100多功能悬浮点阵检测仪及Lumi2 nex Data Collector Version1.7数据收集软件检测并通过突变标本与正常标本的荧光强度比值（Mutan/Normal）分析100份正常人标本及68份PCR反向杂交技术确认的β地中海贫血基因突变标本。结果100份正常标本检测结果正常。68份β地贫基因突变检测结果为密码子CD41/42（TCTT）突变37例（54.41%）,IVS2-654（C→T）突变杂合12例（17.65%）,-28（A→G）突变10例（14.71%）,-17（A→T）突变5例（7.35%）,CD71/72（＋A）2例（2.94%）,-29（A→G）突变杂合1例（1.47%）。密码子71/72（＋A）复合IVS2-654（C→T）突变杂合1例,-28（A→G）复合密码子CD41/42-TCTT突变2例,单位点突变β地贫病人为95.59%（65/68）,多位点突变为4.41%（3/68）。7种突变杂合类型与常用方法PCR-RDB检测结果为100%符合率。结论液态芯片技术能准确区分β地贫基因突变杂合复合突变,可提供快速、敏感的临床β地贫基因突变检测技术平台。     

两种α-地中海贫血检测方法的应用探讨

目的 探讨血红蛋白电泳试验和PCR基因确证试验在α-地中海贫血临床诊断上的优劣.方法 先用红细胞渗透脆性试验筛查新生儿、产检、婚检三类人群血液标本.阳性者重采标本,做血红蛋白电泳试验和PCR基因试验确证试验,比较两种方法的α-地贫检出率.结果 共筛查血液标本7 820例,其中获得红细胞脆性试验阳性1526例,占总人数的19.51％(包含α-地贫和β-地贫患者).1 526例阳性血液经用血红蛋白电泳试验,诊断为α-地贫者822例,占阳性人数的53.87％;分别同时进行PCR基因试验和三种广东地区最常见的缺失型α-地贫检测,获得确证患者785例,占阳性人数的51.44％.两种方法经统计比较,x2=1.80,P＜0.25,差异没有统计学意义,说明两种方法对α-地贫患者的检出率相近,有较理想的可比性.结论 血红蛋白电泳试验是一种既经济便宜又简单快捷的α-地贫诊断方法,其优越特性值得在临床实验室推广普及使用.     

地中海贫血内分泌学改变探讨

利用放射免疫法对33例地中海贫血病人进行多项内分泌功能测定.结果表明,血清铁蛋白、血清皮质醇明显增高,血清T_3 、T_4显著减低,血清TSH、胰岛素改变无明显差异.提出及时纠正贫血,防治感染和降低铁负荷,对预防本病内分泌功能改变同样重要     

β-地中海贫血与先天性软骨发育不全诊断性基因芯片的构建

目的建立一种能同时快速、准确地检测β-地中海贫血与先天性软骨发育不全常见基因突变的技术。方法将针对2种疾病常见突变的特异性氨基修饰寡核苷酸探针点样于醛基修饰的玻片上，制成基因芯片，对β-地中海贫血、先天性软骨发育不全的病例和正常样本进行基因诊断。结果该基因芯片成功检测到相应的突变位点。结论该芯片制作成本低，重复性好，特异性高，能满足临床标本检测的要求，具有良好的临床应用前景。     

α-地中海贫血并发妊娠1例报告

报道我院遇到的 1例α -地中海贫血 (ＨｂＨ病 )并发妊娠 ,提出对来自ＨｂＨ病高发区的妇女 ,怀孕后出现黄疸、进行性贫血应高度怀疑本症 ,早期作出诊断。通过产前诊断减少患儿出生 ,做好优生。1　病例报告患者女 ,2 3岁 ,广西壮族人 ,现住江苏昆山。患者因停经 37 2 周 ,头晕乏力 5个多月 ,合并重度贫血于 2 0 0 0年 8月7日由昆山人民医院转入。ＬＭＰ :1999年 11月 19日 ,停经40 天 ,尿妊娠试验 ( ) ,孕中期出现头晕乏力 ,血红蛋白38ｇ/Ｌ ,经铁剂等药物及间断输血治疗均无好转。孕 30周起出现双下肢浮肿 ,血压 140 / 95ｍｍＨｇ。近日…