大鼠TNF-α对大鼠睾丸Leydig细胞作用的研究

目的 探讨大鼠TNF-α对大鼠Leydig细胞分泌功能的影响。方法 Leydig细胞纯化后进行原代培养。加入不同浓度的大鼠TNF-α(0．1、1、10ng／m1),hCG(50IU／ml)处理。放免方法测定上清液的睾酮含量。结果 TNF-α在0．1、1、10ng／ml浓度时,能够以剂量及时间依赖性地抑制睾丸kydig细胞睾酮的基础分泌及hCG刺激的分泌,差异显著。结论 大鼠TNF-α对睾丸Leydig细胞睾酮的基础分泌及hCG刺激引起的分泌均具有抑制作用。     

骨质疏松骨折愈合过程中IGF-I mRNA的基因表达

目的 探讨骨质疏松性骨折愈合过程中IGF－ⅠmRNA基因表达的细胞定位及基因表达模式。方法 利用去势SD大鼠造成Ⅰ型骨质疏松及其骨折模型,通过原位杂交及斑点杂交的方法,检测正常及骨质疏松性骨折骨痂局部IGF－ⅠmRNA的基因表达。结果 骨质疏松骨折与正常骨折愈合过程中IGF－ⅠmRNA基因表达的细胞定位无差别;骨质疏松骨折愈合过程中IGF－ⅠmRNA表达在骨折后第9天,且较正常组高。结论 IGF－I在骨质疏松骨折愈合中起重要的调节作用。     

去势大鼠睾丸间质细胞移植的实验研究

目的：探讨对去势大鼠动物模型行睾丸间质细胞（Leydig细胞）移植的可行性。方法：随机选择SD大鼠离体睾丸进行Leydig细胞的体外培养及同种异体去势鼠大腿内侧肌群Leydig细胞移植，并进行绒毛膜促性腺激素（hCG)激发试验，监测其血清睾酮分泌情况的变化，结果：体外培养的Leydig细胞对hCG的刺激敏感，能分泌大量睾酮，而一旦进入机体后虽然短期内仍然成活，但分泌功能明显受阻，结论：通过施行同种异体睾丸Leydig细胞移植以提高血清睾酮含量的前景值得商榷。     

重组人胰岛素样生长因子I(rhIGF-I)对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响

目的:观察胰岛素样生长因子I(IGF鄄I)对体外培养的大鼠成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶(ALP)的合成和钙化结节形成的影响。方法:不同浓度IGF鄄I分别刺激培养的大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力;采用对硝基酚磷酸盐法测定细胞裂解液中ALP活性;VonKossa染色测定钙化结节数目。结果:一定浓度IGF鄄I能明显增加大鼠成骨细胞数量(P<0.05),在0.1～100.0ng/ml这种作用与IGF鄄I的浓度呈正相关;经IGF鄄I刺激,大鼠成骨细胞ALP合成明显高于对照组(P<0.05);经IGF鄄I刺激,大鼠成骨细胞钙化结节数目明显高于对照组(P<0.001)。结论:IGF鄄I能增加体外培养的大鼠成骨细胞数量,促进成骨细胞ALP合成和钙化,提示IGF鄄I可能直接促进骨形成。     

酪氨酸抗hCG诱导的大鼠离体Leydig细胞睾酮生成与蛋白质合成的关系

近年来我室的实验结果证明,酪氨酸除具有抗hCG 致孕酮生成作用外,对LH/hCG 诱导的雄激素和cAMP 生成也有一定的抑制作用,而且,酪氨酸还能拮抗外源cAMP 诱导大鼠离体Leydig 细胞的睾酮生成。据文献报道,hCG 能促进大鼠离体Leydig 细胞蛋白质合成,并认为新合成的蛋白质在hCG 诱导睾酮生成的过程中起重要作用。为了探讨酪氨酸抗hCG 致睾酮生成的作用机理,本文观察     

妊娠期染毒PFOS对子代成年雄鼠生殖毒性作用及机制探讨

目的 探讨妊娠期染毒全氟辛烷磺酸盐（perfluorooctane sulfonate,PFOS）对子代成年雄鼠Leydig细胞（adult Leydig cell,ALC）合成睾酮的影响。方法 对妊娠第12 d的SD大鼠采用灌胃方式染毒PFOS（5 mg/kg),1次/d,连续8 d。仔鼠出生后第70 d (PND70),观测子代雄鼠体质量、睾丸系数、精子数量、血清睾酮浓度,并采用实时荧光聚合酶链式反应检测睾酮合成途径中相关因子 mRNA 的相对表达量。结果 与对照组相比,染毒组子代雄鼠体质量降低（P<0.001）;睾丸系数增高（P<0.001）;精子数量及血清睾酮浓度降低（P<0.05）;ALC中睾酮合成相关基因类固醇能急性调控因子（Star基因）、清除因子受体类 B 成员1（Scarb1基因）、P450scc编码基因（Cyp11a1）、17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD3）编码基因（Hsd17b3）的mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P<0.05),而胰岛素样生长因子-1基因（Igf1）和胰岛素样因子-3基因（Insl3）的mRNA表达差异无统计学意义。结论 妊娠期染毒PFOS可抑制子代雄鼠睾酮合成途径中相关基因的表达,降低子代雄鼠睾丸ALC合成睾酮的功能。     

罗格列酮对油酸诱导慢性胰腺炎大鼠肝脏细胞GLUT2mRNA表达的影响

目的:观察葡萄糖载体2(GLUT2)在油酸诱导慢性胰腺炎(CP)大鼠肝脏细胞的表达,以及罗格列酮对其mR-NA表达的影响,以进一步探讨罗格列酮防治继发性糖尿病的可能机制。方法:将用油酸诱导的CP大鼠分为模型组、对照组、治疗组,以罗格列酮灌胃治疗6周。RT-PCR法检测各组肝细胞GLUT2 mRNA表达量。结果:模型组GLUT2mRNA表达较对照组明显降低(P<0.05),使用罗格列酮治疗6周后GLUT2 mRNA的表达较模型组明显升高(P<0.05)。结论:慢性胰腺炎可于转录水平阻碍GLUT2的基因表达,这可能是慢性胰腺炎时GLUT2影响肝脏葡萄糖代谢机制之一,罗格列酮在防治继发性胰源性糖尿病动物模型方面具有一定治疗作用。     

hCG调节原代培养小鼠睾丸Leydig细胞Atrn mRNA和Atrn蛋白的表达及与睾酮分泌的相关性

目的探讨hCG刺激的Leydig细胞睾酮分泌与Atrn mRNA和Atrn蛋白表达的关系。方法将原代培养的Leydig细胞分为5组,分别在培养液中加入0、0．1、1、10、100ng／mLhCG,培养24h后吸取培养液用于测定睾酮分泌量。同时提取细胞mRNA和总蛋白,用实时定量RT—PCR和Westernblot方法分别检测Leydig细胞中AtrnmRNA和Atrn蛋白表达量。结果刺激24h后,与0ng／mLhCG剂量组相比较,0．1,1,10,100ng／mLhCG剂量组睾酮生成量都明显增加,统计学差异较大（P〈0．01）。Leydig细胞AtrnmRNA表达量增加（0．1ng／mLhCG组P〈0．05,其余剂量组P〈0．01）。睾酮生成量与Atrn蛋白表达量（r=0．987,P〈0．01）和AtrnmRNA表达量（r=0．982,P〈0．01）呈正相关。结论原代培养的Leydig细胞在hCG刺激下,睾酮生成量、AtrnmRNA和Atm蛋白表达量都呈现hCG剂量依赖性的增加。     

非酶糖基化终末产物介导的ERK1/2信号转导通路在大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌中的作用

目的：探讨非酶糖基化终末产物(AGEs)对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及其潜在机制。方法首先,原代培养大鼠睾丸间质细胞,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定;其次,MTT法测定不同浓度的AGEs (25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)及200μg/mL BSA作用Leydig细胞后的细胞活力;最后,用不同浓度的AGEs及200μg/mL BSA预处理Leydig细胞12 h,之后更换含相应浓度AGEs或BSA的培养基并加入终浓度为4 U/mL的hCG,其中对照组不含AGEs和BSA,ELISA法和Western blot分别检测睾酮分泌量和p-ERK1/2的表达量。结果 MTT法表明AGEs (≤200μg/mL)对Leydig细胞的活力在本实验所研究的时间内没有影响;ELISA法和Western blot结果显示,不同浓度AGEs处理后,hCG诱导的Leydig细胞睾酮合成量和ERK1/2蛋白的磷酸化都呈现浓度依赖性下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 AGEs通过抑制ERK1/2的磷酸化降低大鼠Leydig cells睾酮的分泌。     

电离射辐致大鼠离体Leydig细胞对hCG反应性变化机理的初探

本实验采用幼年雄性大鼠睾丸Leydig细胞离体单层培养法,研究hCG对Leydig细胞睾酮和cAMP生成的影响,并探讨了不同剂量X线对Leydig细胞辐射效应的发生机理。实验结果表明,hCG能明显促进Leydig细胞睾酮和cAMP生成。细胞预培养24h接受不同剂量X线照射,停照后加入外源性hLCG(0.05IU/ml)继续培养48h,小剂量辐射(25～250mGy,剂量率12.5mGy/min)在25,50mGy剂量组引起Leydig细胞对hCG反应性增高,睾酮生成量明显高于对照组,细胞内cAMP含量也发生相应变化;大剂量辐射后(0.5～8.0Gy,剂量率0.5Gy/min),Leydig细胞在各剂量组对hCG反应性均降低,睾酮生成量和cAMP含量变化一致,并与照射剂量呈线性负相关。     

人骨髓间充质干细胞向Leydig细胞或产类固醇激素细胞体外诱导分化的研究

目的探讨体外诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)向睾丸Leydig细胞分化,并确定诱导条件。方法将分离培养所获得的第3代MSCs细胞经含黄体生成素(LH)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、血小板衍化生长因子(PDGF)及白介素-1α(IL-1α)的诱导液诱导,按诱导液中各因子浓度不同分为A、B、C组和对照组,分别于7d、14d、21d时观察细胞形态变化,并行3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)免疫细胞化学染色和免疫荧光染色,检测各组细胞3β-HSD的表达。以人睾酮ELISA试剂盒检测诱导细胞分泌类固醇的功能情况。结果诱导10～14d后,细胞具有Leydig细胞的形态特点;免疫细胞化学染色及免疫荧光染色显示,本研究条件下,随着诱导液中各因子浓度加大及诱导时间延长,诱导细胞3β-HSD表达阳性数和阳性率逐渐增多,以A组浓度及21d为最佳诱导浓度及时间(P<0.05),并且A组诱导21d分泌睾酮量最高(P<0.05)。结论人骨髓MSCs经体外诱导后可以分化为Leydig细胞或产类固醇细胞。     

地塞米松对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响及机理研究

目的 观察地塞米松(dexamethasone，DEX)以及DEX和RU486共同作用时对hCG诱导的大鼠间质细胞睾酮分泌的影响和间质细胞中原癌基因c-myb表达的情况，从而探讨DEX的作用机制。方法 用放射免疫方法测定离体大鼠间质细胞的睾酮分泌量；用S-P免疫组织化学方法观察离体大鼠间质细胞中c-Myb蛋白表达的变化。结果 10^-8mol／L的DEX可降低hCG诱导的离体大鼠间质细胞睾酮分泌．并使间质细胞c-Myb蛋白免疫组织化学染色明显下降。上述DEX作用可被糖皮质激素受体功能阻断剂RU486(10μmol／L)所阻断。结论 DEX很可能通过降低间质细胞中c-Myb蛋白表达而抑制hCG诱导的间质细胞睾酮分泌。     

Regulation of the expression and function of glucose transporter-1 by TGF-β1 and high glucose in mesangial cells

Objective To study the effects of high glucose and transforming growth factor-β1 (TGF-β1) on the expression and function of glucose transporter-1 (GLUT1) in mouse mesangial cells.Methods Cultured mouse mesangial cells were used.The expression of GLUT1 mRNA was detected by Northern Blot; glucose uptake and its kinetics were determined with a 2-Deoxy-［(3)H］-D-glucose uptake assay.Results Mesangial cells exposed to enriched glucose medium (20 mmol/L) for 72 hours demonstrated a decrease in both GLUT1 mRNA and V(max) for uptake of the glucose analog, 2-deoxy-D-glucose　(2DOG), as compared to mesangial cells cultured in physiologic glucose concentrations(5.5 mmol/L).In contrast, hypertonic mannitol had no effect on GLUT1 mRNA levels.TGF-β1 treatment for 10 hours stimulated 2DOG uptake, both in 5.5 mmol/L and 20 mmol/L glucose medium, by approximately 4.28-fold in a dose-dependent manner (2 ng/ml maximum).Kinetic analysis of 2DOG uptake revealed an increase in V(max) and a decrease in K(m) in the presence of TGF-β1. TGF-β1 also up-regulated the expression of GLUT1 mRNA in mesangial cells.The addition of anti-TGF-β neutralizing antibody (30 μg/ml) in mesangial cells cultured in enriched glucose medium (20 mmol/L) led to a 40% decrease in 2DOG uptake.Conclusions The expression of GLUT1 can be suppressed by exposure of mesangial cells to high glucose medium, which may serve as a protective mechanism against possible adverse effects of excessive glucose flux into cells.TGF-β1 stimulates glucose uptake by enhancing the expression and function of GLUT1 in mesangial cells.This effect is independent of the glucose milieu in the cultured medium.     

雷公藤红素对高糖诱导的H9C2细胞损伤的保护作用

目的：通过高糖条件培养大鼠心肌H9C2细胞模拟糖尿病心肌病（DCM）体外细胞模型,并探讨雷公藤红素对H9C2细胞的保护作用及机制。方法：实验设立低糖组（5.6 mmol/L低糖培养）、等渗组（甘露醇等渗培养）、高糖组（30 mmol/L高糖培养）和雷公藤红素组（高糖培养并加入10 ng/mL和100 ng/mL雷公藤红素干预）。采用MTT法分析高糖组和雷公藤红素组H9C2细胞的活力;应用活性氧簇荧光探针染色法和流式细胞术分析低糖组、等渗组、高糖组和100 ng/mL雷公藤红素组H9C2细胞中ROS产生水平;RT-PCR和Western blot实验技术分析低糖组、等渗组、高糖组和雷公藤红素组H9C2细胞中NF-κB、TGF-1β和IL-1β的mRNA和蛋白表达水平。结果：高糖组中高糖培养条件对H9C2细胞活力有抑制作用,与低糖组和等渗组比差异有统计学意义（P＜0.05）,雷公藤红素干预可以降低高糖培养对H9C2细胞的生长抑制作用;高糖组细胞内的ROS水平明显高于低糖组和等渗组（P＜0.05）,100 ng/mL雷公藤红素可抑制细胞内ROS产生;RT-PCR和Western blot结果显示,与低糖组和等渗组相比,高糖组细胞中NF-κB、TGF-1β和IL-1β mRNA和蛋白表达上调,差异有统计学意义（P＜0.05）;与高糖组相比,10 ng/mL和100 ng/mL雷公藤红素组细胞中的NF-κB、TGF-1β和IL-1β基因mRNA和蛋白表达水平均出现下调,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：雷公藤红素可以明显抑制H9C2细胞在高糖培养条件下ROS的产生水平并降低高糖培养对细胞的生长抑制作用,发挥对心肌细胞的保护作用,其机制可能与抑制炎症因子相关基因的表达有关。     

血糖安对2型糖尿病大鼠小肠上皮GLUT2 mRNA表达的影响

目的观察葡萄糖转运蛋白2(GLul2)在2型糖尿病大鼠小肠上皮细胞的表达与分布,以及血糖安对其mRNA表达的影响,以进一步探讨血糖安抗高血糖的作用机制。方法用高脂饲料灌胃正常大鼠,引起肥胖,然后给大鼠腹腔注射四氧嘧啶(120mg／kg),连续造模两天后稳定72h,筛选空腹血糖值大于16．7mmol／L大鼠为2型糖尿病模型组,根据组间差异小于1．11mmol／L将其分组。连续给药1周后,尾静脉采血测定空腹血糖值及糖耐量,并从大鼠小肠取材,应用原位杂交技术检测GLul2的mRNA表达。结果GLul2在糖尿病大鼠小肠上皮细胞中表达增多;血糖安可减少2型糖尿病大鼠小肠上皮细胞中GLUT2mRNA的表达。结论血糖安可能通过减少糖尿病大鼠小肠上皮细胞GLUT2mRNA的表达而发挥降血糖作用。     

Annexin5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中StarD7表达的影响

目的先前研究发现annexin 5刺激大鼠睾丸间质细胞后,3β-羟类固醇脱氢酶(3βbeta-hydroxysteroid dehydro-genase,3β-HSD)及睾酮水平都增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在联系。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中的StarD7(START domain containing 7)表达的影响,探讨annexin 5影响睾酮分泌的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,1nmol/L的annexin 5处理间质细胞24h,分别提取细胞总mRNA和总蛋白。RT-PCR检测StarD7的mRNA表达改变。Western blotting方法分析睾丸间质细胞中StarD7的蛋白表达变化。收取细胞爬片,利用免疫细胞化学的方法对StarD7在睾丸间质细胞中进行定位。结果与对照组相比,在mRNA水平上,加药组StarD7 mRNA的表达增加了44.5%(1.10±0.02 vs 1.59±0.09,P<0.05)。在蛋白水平上,加药组StarD7蛋白的表达增加了44.3%(1.49±0.10 vs 2.15±0.16,P<0.05)。StarD7主要定位在大鼠睾丸间质细胞的胞浆内,加药组的染色强度明显强于对照组。结论 StarD7在基因和蛋白水平均受annexin 5的调控,结合先前发现annexin 5可调控睾丸间质细胞睾酮合成的结果,提示annexin 5调控睾酮合成可能是通过调控StarD7的表达来实现的。     

胰岛素与低血流缺血刺激犬心肌GLUT4基因表达呈相加作用

目的：观察胰岛素与低血糖缺血刺激心肌葡萄糖转运子4（GLUT4）基因是否呈相加作用。方法：采用North-ernblot法分析心肌GLUT4mRNA,采用免疫印迹法分析心肌GLUT4基因表达。结果：输注胰岛素使局部低血流心肌GLUT4mRNA和GLUT4基因表达增加2.3-2.5倍,同时伴随心肌葡萄糖摄取明显增多达4倍.结论:胰岛素与低血流缺血刺激心肌致GLUT4mRNA和GLUT4表达呈相加作用,其结果使GLUT4数量明显增加,进而使心肌葡萄糖摄取量增加,此机制在缺血心肌能量代谢过程中起着重要的代谢性调节作用。