老年急性淋巴细胞白血病分子生物学改变的初步观察

目的 研究老年急性淋巴细胞白血病(ALL)的分子生物学特征。方法 应用多聚酶链反应技术(PCR)检测了16例老年ALL患者的bcr／abl融合基因、TCRγ基因重排(TCRγRA)以及IgH基因重排(IgHRA)。结果 16例患者中IgHRA11例，TCRγRA4例，两类基因重排均阴性1例；bcr／abl融合基因阳性9例，阳性率56．25％。结论 老年ALL以B—ALL为多，bcr／abl融合基因阳性率较高，可能是其治疗效果较差的原因之一。     

应用RT-nest-PCR法检测慢性髓细胞白血病非亲缘异基因骨髓移植后微小残留病变

目的：应用筑巢式RT—PCR（RT—nest-PCR）法检测慢性髓细胞性白血病（CML）患者非亲缘异基因骨髓移植（URD）后微小残留病变（MRD），并探讨它与复发的相关性。方法：分别采用RT-nest—PCR法和常规细胞遗传学方法检测bcr／abl融合基因和Ph染色体。结果：20例CML行URD患者术前Ph染色体和bcr／abl融合基因检测均为阳性，移植术后30dPh染色体皆转为阴性，bcr／abl融合基因完全转阴时间为1～3个月，中位时间2个月；在随防的18例CML患者中，有16例患者bcr／abl融合基因完全转阴后没再转为阳性。在1例复发的CML患者中可见到血型、Ph染色体和bcr／abl融合基因动态变化，另1例CML患者在移植成功后的21个月和36个月检测到bcr／abl融合基因，经随访未见临床和血液学复发征象。结论：检测bcr／abl融合基因是目前观察CML患者非亲缘异基因骨髓移植后微小残留病变最敏感的方法之一，非亲缘异基因骨髓移植能最大限度地消除CML患者体内残留病变，患者能长期无病生存。     

以降钙素基因高度甲基化为分子基因标志检测白血病微量残留病

目的 探讨以降钙素（CT）基因高度甲基化为白血病克隆的分子基因标志,检测白血病微量残留病（MRD）,并预测预后的可能性。方法 用限制性内切酶消化DNA〈应用聚合酶链反应（PCR）技术检测载9例急性白血病（AL）,其中急性淋巴细胞白血病（ALL）14例,急性非淋巴细胞白血病（ANLL）15例和8例慢性粒细胞白血病（CML）急变患者的CT基因的甲基化程度,对CT基因高度甲基化阳性者,以CT基因高度甲基化为白血病克隆的分子基因标志,应用PCR技术定期追踪检测骨髓MRD。结果 ALL中CT基因高度甲基化阳性率为857%（12/14）,ANLL为60%（9/15）,CML急变为100%（8/8）,而对照组无一例阳性,20例AL和CML急变患者完全缓解（CR）后均存在MRD,CR后MRD持续阳性或转阴后再次出现阳性,提示将发生骨髓复发,能提早2-11个月预示疾病的复发,MRD较早转阴并持续长期阴性者可能获得长期自下而上度。结论 以CT基因高度甲基化为白血病克隆的分子基因标志,应用PCR技术能起到监测白血病MRD的作用。为预测白血病的预后开辟了一条新途径。     

实时定量RT-PCR检测慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因的临床意义

目的：建立实时定量RT-PCR方法检测慢性粒细胞白血病(CML)bcr／abl mRNA的方法；探讨CML bcr／abl融合基因的表达水平与疗效的关系。方法：可同时检测b2a2和b3a2两种亚型．GAPDH的mRNA作为内参照。检测14例CML患者的22个外周血和骨髓样本中bcr／abl融合基因表达水平．并对2例异基因造血干细胞移植后复发的患者进行动态监测。结果：bcr／abl及GAPDH标准曲线的相关系数均为0．999；灵敏度为10^-6；14例初诊患者的mRNA表达水平范围为2．81～145；2例异基因造血干细胞移植后复发患者的bcr／abl mRNA表达水平随临床治疗而变化。结论：实时定量PCR检测CML患者的bcr／abl融合基因，敏感可靠，重复性好；其融合基因表达水平的改变与临床疾病进展关系相一致，有助于反映白血病细胞负荷、评价疗效及判断疾病预后。     

巢式聚合酶链反应检测慢性粒细胞白血病bcr／abl融合基因

目的 探讨Ph染色体和bcr/abl融合基因在慢性粒细胞白血病（CGL）的发病机制、诊断、治疗、预后判断的价值。方法 对46例CGL患者作巢式逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测bcr/abl融合基因,同时对其中28例作细胞遗传学检查。结果 46例CGL患者中,44例bcr/abl融合基因阳性,阳性率为95.7%;28例CGL患者作细胞遗传学检查。26例Ph染色体阳性,阳性率为92.9%;2例Ph染色体阴性的CGL患者,用RT-PCR检测出ber/abl融合基因。结论 巢式RT-PCR是一种快速、敏感而准确的检测方法,可以为部分Ph染色体阴性的CGL患者提供分子生物学的诊断依据。     

bcr—abl融合基因在慢性粒细胞白血病诊治中的意义

目的探讨定量检测bcr-abl融合基因在慢性粒细胞白血病（CML）诊断、治疗及微小残留病变监测中的意义。方法应用实时定量PCR（RQ—PCR）方法检测145例CML患者bcr—abl融合基因的表达情况。结果abl和bcr-abl的标准曲线相关系数均大于0．99,批内差及批间差均小于4％;11例不同分期的CML患者同时检测外周血和骨髓中bcr—abl水平,8例外周血较骨髓低,3例较骨髓高;急变期的bcr—abl表达情况较加速期和慢性期均明显增高。结论RQ—PCR技术检测bcr—abl融合基因准确可靠,对于评价疗效、监测微小残留病变以及预测疾病进展具有重要的临床应用价值。     

格列卫治疗Ph染色体阳性慢性粒细胞白血病疗效分析

目的　研究格列卫 (STI 5 71)治疗慢性粒细胞白血病的疗效 ,探讨STI 5 71联合小剂量高三尖杉酯碱 (HHT)和阿糖胞苷 (Ara C)治疗时的疗效及其副作用的耐受性。方法　选自 2 0 0 1- 0 2 2 0 0 3- 0 8第一军医大学南方医院住院37例成年人患者的骨髓细胞Ph染色体阳性或FISH双标双融合bcr/abl基因异位探针 (FISH bcr/abl)阳性率均 >90 %。其中慢性粒细胞白血病慢性期 (CML CP) 14例 ,加速期 (CML AP) 5例 ,急变期 (CML BP) 18例 ,全部接受STI5 7每天 0 3～ 0 6g ,早晨空腹顿服 ,4例CML AP和全部CML BP患者联合HHT每天 12mg和Ara C每天 30 5 0mg静脉滴注 (VD) ,714d为 1疗程 ,疗程中位数 1 5个 ,STI 5 71治疗时间的中位数 2 5个月 ,治疗满 3个月者全部复查染色体和FISH bcr/abl。结果　CML CP和AP患者的HCR 10 0 % ,主要细胞遗传学反应率 84 3% ;18例CML BP患者的HCR 38 8% ,HPR 2 7 7% ,总有效率 6 6 5 % ,主要细胞遗传学反应率 10 5 % ,骨髓抑制 90 %。CML CP、AP患者的HCR和细胞遗传学主要反应率明显高于CML BP患者 ,P <0 0 1。结论　STI5 71治疗CML显示较高的HCR和细胞遗传学反应率 ,CML CP早期效果最好 ,CML BP患者疗效最差 ,与HA联合的毒性可以耐受     

造血干细胞移植后白血病细胞染色体核型和bcr/abl融合基因表达观察

目的：探讨造血干细胞移植(HSCT)后白血病细胞染色体核型和基因表达观察的意义。方法：用骨髓细胞短期培养法和直接法G显带分析染色体；双色荧光原位杂交检测bcr／abl融合基因。结果：2例供者为女性的男性急性髓细胞白血病(AML)患者异体外周血干细胞移植(allo-PBSCT)后染色体检测持续46，XX。最长生存50个月。4例慢性髓细胞白血病(CML)经allo-PBSCT后，Ph染色体和bcr／abl融合基因阳性1例，经供者淋巴细胞输注加干扰素治疗，已生存70个月。Ph染色体阴性bcr／abl融合基因阳性2例，最长生存27个月。Ph染色体阳性bcr／abl融合基因阴性1例，已生存14个月。2例AML自体造血干细胞移植后检测出非特征性染色体畸变，复发后再化疗达完全缓解，最长生存期达81个月。结论：造血干细胞移植后白血病细胞遗传学检测可观察近期疗效，指导后续治疗选择。     

慢性粒细胞白血病树突状细胞激活的特异性抗白血病免疫反应的体外研究

树突状细胞 (DC)是目前发现的抗原递呈功能最强的抗原递呈细胞 (APC)。本实验从慢性粒细胞白血病 (CML)患者外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导生成既具有特异抗原 ,又表达共刺激分子的DC ,探索其在诱导特异性抗CML免疫反应中的作用。一、材料和方法1 样本来源 :初诊的CML患者 11例 ,经逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,检测bcr/abl融合基因均为阳性。2 DC的培养与鉴定 :CML患者PBMNC以 10 6/ml浓度 ,在含有重组人粒细胞巨噬细胞集落生长因子 (rhGM CSF) 10 0 μg/L、白细胞介素 4 (IL 4 ) 5 0 0U/ml、肿瘤坏死因子α(TNFα)…     

甲磺酸伊马替尼在慢性粒细胞白血病异基因造血干细胞移植治疗前的应用

目的:动态观察甲磺酸伊马替尼(商品名:格列卫)在2例加速期BCRABL阳性的慢性粒细胞白血病(CML)患者异基因外周血造血干细胞移植(AlloPBSCT)前的应用。方法:应用PCR技术,对接受甲磺酸伊马替尼的BCRABL阳性的CML患者选择不同时间定性检测bcr/abl基因,同时进行骨髓形态学及染色体分析。结果:①甲磺酸伊马替尼治疗1个月后2例均达到血液学完全缓解,病例2达到细胞遗传学完全缓解;②移植后中性粒细胞>0.5×109/L,血小板>20×109/L病例1为13d,病例2为20d;③病例1于+32d血型转为供者型,病例2于+40d供受细胞稳定嵌合,目前2例患者血液学持续完全缓解。结论:化疗可以动员G0期bcr/abl阳性克隆进入增殖周期,表现对甲磺酸伊马替尼敏感,在CML尤其是进入加速期、急变期的患者行PBSCT前应用甲磺酸伊马替尼,有助于体内的bcr/abl白血病细胞清除,达到肿瘤净化作用。     

Prognostic efficacy for measurement of real-time quantitative PCR-based major bcr/abl mRNA in patients with Philadelphia chromosome-positive leukemia

Evaluation of minimal residual disease (MRD) provides prognostic information on various hematological malignancies. We describe here the prognostic efficacy of real-time quantitative polymerase chain reaction (RQ-PCR)-based analysis of major bcr/abl mRNA in cases of Philadelphia chromosome-positive leukemia (Ph-leukemia). Twenty-one patients with Ph-leukemia were enrolled as subjects to determine the usefulness of RQ-PCR-based measurement of bcr-abl/abl ratios. Imatinib mesylate (imatinib) was administered to seven of the 21 patients before allogeneic stem cell transplantation (SCT). Hematological relapse or failure of treatment with SCT was observed in 2 of those patients who showed bcr-abl/abl ratios of more than 0.002%, and 5 of the 7 patients showed both RQ-PCR and RT-PCR negativity immediately after SCT. All of the 5 patients who did not receive imatinib before allogeneic SCT showed RQ-PCR negativity immediately after SCT, but the results of RT-PCR were positive in 3 patients at the same time points, and those became negative after donor lymphocyte infusion or the appearance of graft-versus-host disease. Administration of imatinib before SCT was thought to induce an early remission. On the other hand, 8 patients who received imatinib without SCT showed a remarkable decrease in bcr-abl/abl ratios. The ratio gradually rose in one patient with Ph+ALL, enabling prediction of the hematological relapse preceding detection by fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis. Standardization of RQ-PCR analysis of bcr-abl mRNA will help to predict early hematological relapse in patients with MRD. In conclusion, it is thought that measurement of RQ-PCR-based major bcr/abl mRNA in patients who were given imatinib and were treated with SCT is useful for the evaluation of MRD and in deciding additional treatment.     

Squamous cutaneous epithelial cell carcinoma in two CML patients with progressive disease under imatinib treatment

Imatinib (glivec), formerly known as STI571) effectively blocks the ATP-binding site of the bcr/abl fusion protein thereby inactivating selectively the tyrosine kinase activity of bcr/abl. Therefore, it is a promising drug in Philadelphia chromosome positive chronic myeloid leukemia showing high hematologic and cytogenetic response rates combined with a mild toxicity profile. Here we report two cases of squamous cell carcinoma of the skin, which appeared in the photo-exposed areas in two elderly patients treated for advanced chronic myeloid leukemia with imatinib. The role of chemotherapy, chronic sun exposure and of possible additional risk factors such as human papillomavirus infection is discussed.     

慢性中性粒细胞白血病5例临床分析

目的：探讨慢性中性粒细胞白血病（CNL）的诊断，治疗和预后。方法：对5例CNL患者的临床表现，实验室特点，治疗方法和预后进行分析。结果：5例CNL患者中，4例脾脏肿大；所有患者血液中中性粒细胞持续增多，骨髓粒系增生并以成熟中性粒细胞为主，中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）积分增高，Ph染色体或bcr/abl融合基因阴性；使用马利兰及羟基脲治疗后患者症状有所改善，脾脏缩小及血液中白细胞数下降；1例患者诊断后7年发生急性变。结论：CNL是一种少见类型的慢性白血病，其特点与慢性髓细胞白血病不同；马利兰及羟基脲对其有一定疗效；预后具有异质性。     

The coiled-coil domain and Tyr177 of bcr are required to induce a murine chronic myelogenous leukemia-like disease by bcr/abl

The bcr/abl fusion in chronic myelogenous leukemia (CML) creates a chimeric tyrosine kinase with dramatically different properties than intact c-abl. In P210 bcr/abl, the bcr portion includes a coiled-coil oligomerization domain (amino acids 1-63) and a grb2-binding site at tyrosine 177 (Tyr177) that are critical for fibroblast transformation, but give variable results in other cell lines. To investigate the role of the coiled-coil domain and Tyr177 in promoting CML, 4 P210 bcr/abl-derived mutants containing different bcr domains fused to abl were constructed. All 4 mutants, Delta(1-63) bcr/abl, (1-63) bcr/abl, Tyr177Phe bcr/abl, and (1-210) bcr/abl exhibited elevated tyrosine kinase activity and conferred factor-independent growth in cell lines. In contrast, differences in the transforming potential of the 4 mutants occurred in our mouse model, in which all mice receiving P210 bcr/abl-expressing bone marrow cells exclusively develop a myeloproliferative disease (MPD) resembling human CML. Of the 4 mutants assayed, only 1-210 bcr/abl, containing both the coiled-coil domain and Tyr177, induced MPD. Unlike full-length P210, this mutant also caused a simultaneous B-cell acute lymphocytic leukemia (ALL). The other 3 mutants, (1-63) bcr/abl, Tyr177Phe bcr/abl, and Delta(1-63) bcr/abl, failed to induce an MPD but instead caused T-cell ALL. These results show that both the bcr coiled-coil domain and Tyr177 are required for MPD induction by bcr/abl and provide the basis for investigating downstream signaling pathways that lead to CML.     

反义bcr—abl寡核苷酸对K562细胞的体外作用

目的 研究b3a2型反义bcr-abl寡核苷酸（ASO）体外对慢性髓细胞性白血病（CML）细胞株K562的抑制作用,为反义技术用于CML患者体内基因治疗和体外骨髓净化提供依据。方法 采用体外细胞培养技术及四唑盐（MTT）比色法、免疫组织化学染色法观察b3a2-ASO体外对K562细胞的生长、克隆形成及P210 bcr-abl蛋白表达的影响。结果 经b3a2-ASO(110μm/ml)作用40h后,K562细胞生长抑制率达66．12％,集落抑制率为65．44％;作用15h后P210bcr-abl蛋白合成抑制率可达60％。而无义寡核苷酸（NSO）对前述三个指标均无显著影响;b3a2-ASO及NSO对bcr-abl阴性细胞株HL60的细胞生长和存活率亦无显著影响。结论 b3a2-ASO对K562细胞有序列特异性抑制作用,提示其可以作为CML反义基因治疗,尤其是骨髓净化的有力措施之一。