纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄

背景:前期研究成果,纤维蛋白胶不仅是一种良好的非限制性、生物可降解血管外支架,能够预防移植静脉内膜和中膜增生,而且是一种良好的药物缓释系统,能够提高血管外膜基因转染效率.目的:验证应用纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄的作用.方法:建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,随机分为模型组、纤维蛋白胶支架组、纤维蛋白胶联合反义PNCA组.后两组分别给予纤维蛋白胶和纤维蛋白胶与携带PCNA反义寡核苷酸腺病毒的混合物于静脉桥外周均匀喷洒.结果与结论:移植后第28天模型组静脉移植物内膜和中膜增生明显,纤维蛋白胶外支架组静脉移植血管内膜和中膜增生程度明显减少(P < 0.01),纤维蛋白胶联合反义PNCA组内膜和中膜增生程度明显少于纤维蛋白胶外支架组(P < 0.05).纤维蛋白胶联合反义PNCA组PCNA基因mRNA及蛋白表达明显减少纤维蛋白胶外支架组(P < 0.05),纤维蛋白胶外支架组表达明显弱于模型组(P < 0.05).提示血管外膜反义PCNA转染可进一步抑制移植静脉管壁PCNA表达,纤维蛋白胶外支架联合反义PCNA对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用.     

组织工程血管支架材料

1可降解性聚乙醇酸血管外支架抑制移植静脉内膜的增生 2不同浓度细胞种植脱细胞血管基质上构建组织工程血管 3应用猪主动脉脱细胞基质制备新型组织工程血管支架：生物相容性及力学性能评价     

兔自体移植静脉内膜增生与缬沙坦的干预效应

目的:内膜增生是移植静脉再狭窄的主要原因,血管紧张素Ⅱ在血管组织增生中发挥着重要作用,缬沙坦作为AT1受体拮抗剂可在受体水平阻断血管紧张素Ⅱ的生物学作用.实验拟验证AT1受体拮抗剂缬沙坦对兔颈部静脉移植术后血管内膜增生的干预作用.方法:实验于2005-10/2006-10在南通大学动物实验中心完成.①实验分组:雄性新西兰大白兔20只,微生物控制级别Ⅰ级,兔龄16～18周,体质量(2.5±0.5)kg,随机排列表法分为对照组和治疗组,每组10只.②实验方法:所有动物行颈部自体静脉移植手术,对照组予普通饲料饲养;治疗组则予普通饲科 缬沙坦[10mg/(kg·d)]喂养.③实验评估:饲养4周后观察两组动物治疗前后的血压变化情况;取出静脉移植物行病理形态学检查;采用图像分析系统计算血管腔内膜的厚度、面积及中膜的厚度、面积;免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原的表达.结果:纳入大白兔20只,均进入结果分析,术后切口无感染,两组移植静脉无闭塞.①对照组和治疗组动物的血压在治疗前后无明显变化(P＞0.05).②对照组移植物内膜明显增厚,内膜下大量平滑肌细胞增殖,中膜稍有增厚:治疗组内膜增厚较对照组减弱,中膜平滑肌细胞向内膜下迁移、增殖较对照组明显减轻,中膜增厚不明显.③治疗组新生内膜厚度、面积及增殖细胞核抗原均低于对照组(P＜0.01),结论:缬沙坦可以显著抑制兔自体静脉移植后的再狭窄,并抑制移植静脉桥中增殖细胞核抗原的表达.     

纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄

背景：前期研究成果,纤维蛋白胶不仅是一种良好的非限制性、生物可降解血管外支架,能够预防移植静脉内膜和中膜增生,而且是一种良好的药物缓释系统,能够提高血管外膜基因转染效率。目的：验证应用纤维蛋白胶外支架转染PCNA基因反义寡核苷酸预防移植静脉再狭窄的作用。方法：建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,随机分为模型组、纤维蛋白胶支架组、纤维蛋白胶联合反义PNCA组。后两组分别给予纤维蛋白胶和纤维蛋白胶与携带PCNA反义寡核苷酸腺病毒的混合物于静脉桥外周均匀喷洒。结果与结论：移植后第28天模型组静脉移植物内膜和中膜增生明显,纤维蛋白胶外支架组静脉移植血管内膜和中膜增生程度明显减少（P〈0.01）,纤维蛋白胶联合反义PNCA组内膜和中膜增生程度明显少于纤维蛋白胶外支架组（P〈0.05）。纤维蛋白胶联合反义PNCA组PCNA基因mRNA及蛋白表达明显减少纤维蛋白胶外支架组（P〈0.05）,纤维蛋白胶外支架组表达明显弱于模型组（P〈0.05）。提示血管外膜反义PCNA转染可进一步抑制移植静脉管壁PCNA表达,纤维蛋白胶外支架联合反义PCNA对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用。     

小型猪颈动脉支架和球囊扩张的血管内超声研究

目的 应用血管内超声(IVUS)探讨小型猪颈动脉支架和球囊扩张后冉狭窄机制.方法 12只中国广西巴马小型猪高脂饲养后随机分两组,每组6只.一组于左侧颈动脉置入7枚支架,另一组于左侧颈动脉行球囊扩张,并于术前、术后即刻、术后13周进行一系列IVUS和DSA检查.结果 13周后IVUS显示支架组和球囊组血管面积分别狭窄(18.31±7.79)%和(37.28±7.89)%.支架内再狭窄与支架内膜增生明显相关(r=0.897,P<0.05);球囊扩张后再狭窄与外弹力膜面积减少显著相关(r=0.856,P <0.05).结论 支架再狭窄与血管内膜过度增生有关,球囊扩张再狭窄与外弹力膜减少有关.     

制备可缓释血管内皮生长因子的聚乳酸-聚乙醇酸支架及其与血管平滑肌细胞的生物相容性

目的:制备一种新型的可缓释血管内皮生长因子的可降解聚乳酸-聚乙醇酸支架,探讨其与血管平滑肌细胞的细胞相容性。方法:实验于2006-12/2007-05在解放军第四军医大学西京医院心内科实验室(省部级重点实验室)完成。以明胶微球作为缓释载体,加载血管内皮生长因子和聚乳酸-聚乙醇酸复合构建组织工程血管支架并考察体外释放效果。采用体外培养的兔血管平滑肌细胞种植在可缓释血管内皮生长因子的可降解聚乳酸-聚乙醇酸支架膜片上,用相差显微镜观察细胞的生长情况,绘制细胞生长曲线,并用MTT法测定细胞增殖情况。实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求。结果:血管内皮生长因子在体外释放14d以上,血管平滑肌细胞在可缓释血管内皮生长因子的可降解聚乳酸-聚乙醇酸支架膜片上生长良好;MTT法检测细胞增殖情况显示,可缓释血管内皮生长因子的可降解聚乳酸-聚乙醇酸支架组平滑肌细胞增殖较快,细胞较为活跃(P<0.05)。结论:可缓释血管内皮生长因子的可降解聚乳酸-聚乙醇酸支架制备方法简便易行,生长因子活性得以保存,对血管平滑肌细胞具有良好的相容性,可以用于组织工程血管的进一步构建。     

hVEGF165对下肢股浅静脉非体外循环下行冠状动脉旁路移植静脉术血管吻合口再狭窄的影响

目的：观察应用血管内皮细胞生长因子165（hVEGF165）基因治疗狗冠状动脉-主动脉旁路移植术吻合口再狭窄的疗效。方法构建 pcDNA3/VEGF165重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞 Kl 亚株（CHO-K1）,检测其基因、蛋白表达并转导冠状动脉架桥静脉移植术吻合口局部血管平滑肌细胞,观察其对吻合口内膜厚度、面积、狭窄率、新生内膜心肌血管内皮细胞（MEC）增殖及增殖细胞核抗原（PCNA）的影响。结果质粒构建及转染成功,pcDNA3/VEGF165能显著促进MEC增殖,并减少狗冠状动脉-主动脉旁路移植术吻合口再狭窄模型再狭窄血管的内膜厚度、面积、狭窄率。结论 VEGF165重组质粒可有效改善狗冠状动脉-主动脉旁路移植术吻合口再狭窄,为临床应用提供了前期研究基础。     

掺锶聚磷酸钙对成骨细胞分泌血管内皮生长因子的影响

背景:掺锶聚磷酸钙作为一种新型骨修复材料,具有良好的生物相容性和可控降解性.课题组前期研究表明其具有促进血管牛成的作用,但其机制尚不清楚.目的:将ROS17/2.8成骨细胞与掺锶聚磷酸钙支架在体外共培养,观察细胞增殖情况和促血管生成因子血管内皮生长因子的分泌情况.设计、时间及地点:对比观察实验,于2008-10/2009-06在四川大学组织工程研究室完成.材料:制备掺锶量为1%,2%,5%,8%,10%的掺锶聚磷酸钙和未掺锶聚磷酸钙骨组织工程支架材料.ROS17/2.8成骨细胞株购自于四川大学华西医院移植免疫与移植工程实验室. 方法:①制备细胞支架复合物:将材料置于24孔培养板中,每孔接种300 μL细胞悬液(细胞浓度为2×10~7L~(-1)),培养14 d,隔天换液.②分别于1,3,5,7,10,14 d行MTT法观察成骨细胞的增殖情况.③将培养7 d的细胞支架复合物,离心取上清液,用夹心ELISA法检测血管内皮生长因子的分泌情况.主要观察指标:观察掺锶聚磷酸钙和未掺锶聚磷酸钙支架上成骨细胞的增殖情况及血管内皮生长因子的分泌情况.结果:MTT法实验结果表明,与未掺锶聚磷酸钙组相比,掺锶聚磷酸钙组能促进成骨细胞的增殖,且8%掺锶聚磷酸钙效果最好;ELISA结果表明,与未掺锶聚磷酸钙组相比,掺锶聚磷酸钙组能上调血管内皮生长因子的蛋白分泌量,其中以8%掺锶聚磷酸钙促进作用最为明显(P<0.05).结论:锶能有效促进成骨细胞增殖,并能明显上调血管内皮生长因子的分泌,且以8%掺锶聚磷酸钙效果最好,在一定程度上揭示了其具有促血管化作用的机制.     

紫杉醇可降解内支架防治犬血管再狭窄的免疫组化分析

目的　评做携带抗增生药物紫杉醇的生物可降解性血管内支架 (BIS)防治血管再狭窄的效果。方法　以乙交酯 丙交酯共聚物 (PLLGA)为原料分别制备携带紫杉醇的BIS和未携带药物的BIS(裸BIS)。球囊扩张法建立犬双侧骼外动脉再狭窄动物模型 ,将 8对紫杉醇BIS和裸BIS分别植入到 8只犬的双侧骼外动脉内 ,6周后处死实验动物完整取出支架段血管行病理学观察及免疫组化评价。结果　裸支架组血管平均管腔面积小于紫杉醇支架组血管平均管腔面积 (775 86 μm2 vs113435 μm2 ,P <0 0 1)。裸支架组血管新生内膜平均增生面积大于紫杉醇组平均内膜增生面积(2 4 80 3μm2 vs 113435 μm2 ,P <0 0 1) ;裸支架组PCNA细胞阳性率高于紫杉醇支架组 (38%± 15 %vs 11%± 0 31% ,P <0 0 1) ,两组具有显著统计学差异。结论　生物可降解性血管内支架作为载荷和释放药物的有效平台 ,通过所携带抗增生药物紫杉醇可以显著地抑制VSMC增殖和血管内膜的增生是防治血管再狭窄的新策略和理想手段。对于BIS的精确释放速率、紫杉醇预防再狭窄的适合剂量以及BIS的远期效果还需进行大量深入的研究     

靶向超声介导VEGF基因转染防止血管再狭窄的实验研究

目的 探讨超声造影剂SonoVue携带血管内皮生长因子(VEGF)基因靶向释放、转染损伤血管防止其再狭窄的可行性.方法 构建真核表达质粒pCDNA3.1(-)/hVEGF165.建立兔股动脉的球囊损伤模型并随机分为两组:损伤后不干预的对照组;损伤后血管腔内注射携带VEGF基因质粒的造影剂并行超声辐照的实验组.4周后取损伤处血管,HE染色计算血管内膜/中膜面积比值,免疫组化及Western Blot了解血管壁平滑肌细胞的增殖情况和VEGF的表达.结果 实验组的血管内膜/中膜面积比值显著低于对照组(P<0.05),免疫组化显示实验组血管壁平滑肌细胞增殖核抗原(PCNA)表达明显减低,同时可见大量VEGF阳性反应的棕褐色颗粒,Western Blot提示实验组VEGF的表达量明显高于对照组(P<0.05).结论 超声介导的靶向释放可以实现VEGF基因的有效转染,减轻损伤内膜的病理增生,有效阻止血管再狭窄发生,提示靶向超声可以为防止血管再狭窄的基因治疗提供新途径.