兔下颌骨牵张成骨与骨切开上徙术成骨中一氧化氮合酶表达的比较研究

目的通过对兔下颌骨牵张成骨与骨切开上徙术成骨过程中一氧化氮合酶（NOS）表达的对比研究,探讨其不同转归的分子生物学机制。方法将日本大耳白兔36只随机分为牵张组、骨切开上徙术组和空白对照组,前2组分别于术后1 d,1、2、4周处死实验动物,取下颌骨标本进行大体观察、X线片、HE染色检查,用免疫组化方法检查NOS的表达情况,对诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）阳性表达进行比较。结果免疫组化观察结果可见,正常骨组织NOS仅有少量的阳性表达。在牵张组,iNOS在术后1 d表达高于空白对照组,且达到峰值;eNOS在术后1周达到峰值。在骨切开上徙术组,iNOS表达在术后2周达到峰值,eNOS表达在术后1周达到峰值。神经型一氧化氮合酶（nNOS）在牵张成骨组和骨切开上徙术组均无明显表达。结论在下颌骨牵张术时,按常规进行牵张可达到良好的骨再生,断端间如有大的间隙存在,将严重影响骨再生进程。     

一氧化氮及一氧化氮合酶与骨折愈合

一氧化氮(NO)是一种活性很强的自由基气体,它的生物合成主要受一氧化氮合酶(NOS)调节。人体内的NOS主要有三类:nNOS、eNOS和iNOS。它们在骨折愈合的不同时期表达的强弱有所不同。NO和NOS与骨折愈合的关系密切,调节NO水平可能是促进骨折愈合的新途径。     

体外牵张新生大鼠颅骨缝组织培养液一氧化氮的表达变化

目的：探讨一氧化氮（nitric oxide,NO）在机械力调节骨缝生长改建过程中早期表达变化的意义。方法：取实验组和对照组体外器官培养的培养液,用NO试剂盒,检测牵张实验组和对照组新生大鼠颅骨骨缝组织在1h、6h、24h、48h生成NO的表达变化。实验组和对照组标本进行常规HE染色和组织形态学观察。结果：实验组的骨缝被显著扩宽,缝细胞计数结果显著高于对照组。实验组在受力1h后,NO含量开始明显增加,到48h最为明显。生成的NO量明显高于对照组。结论：NO在机械力促进颅骨缝组织改建中具有重要的作用。     

修复性牙本质形成过程中一氧化氮的功能——Ⅰ:一氧化氮合成酶的表达

目的：观察大白鼠磨牙窝洞制备后,修复性牙本质形成过程中一氧化氮合酶NOS的表达。方法：大白鼠磨牙窝洞制备后制作冰冻切片,免疫组化染色观察成牙本质细胞与牙髓细胞中一氧化氮合酶的表达。结果：正常大白鼠磨牙中,内皮型一氧化氮合酶（eNOS）呈阳性反应,而诱导型一氧化氮合酶（iNOS）呈阴性反应。牙体制备后即刻,损伤的成牙本质细胞中两种一氧化氮合酶均呈弱阳性反应;制备1d后,在牙髓牙本质界中浸润的中性粒细胞中表现为诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的强阳性反应,并在制备3d后,扩展至全部牙髓细胞;同阶段,内皮型一氧化氮合酶（eNOS）在上述细胞中,均呈弱阳性反应。制备7d后,修复性牙本质深部成牙本质细胞中,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）呈阴性反应,而内皮型一氧化氮合酶（eNOS）呈阳性反应。结论：一氧化氮参与了修复性牙本质形成过程中成牙本质细胞的分化与功能调节。     

离心作用下人牙周膜细胞内诱导型一氧化氮合酶和胱硫醚分解酶的表达

目的研究在离心力作用下人牙周膜细胞内的诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）和硫化氢合酶胱硫醚分解酶（cystathionine-γ-lyase,CSE）的表达变化。方法采用组织块一酶消化联合法培养人牙周膜细胞,对细胞施加离心力（167g）,SABC法染色及胞浆透光度检测iNOS和CSE在10、30、60、90、120和240min不同加力时间点的表达变化。结果正常人牙周膜细胞内几乎无iNOS和CSE表达;加力10min,iNOS和CSE有表达（Pd0．01）;之后两种酶表达逐渐加强,加力60min,iNOS和CSE表达达到高峰（P〈0．01）;之后逐渐减弱,加力240min,iNOS和CSE恢复到基础水平。结论离心力可诱导人牙周膜细胞内iNOS和CSE的表达短暂性升高,提示一氧化氮（NO）和硫化氢（Hzs）可能参与了牙周组织改建中的力学信号转导过程。     

一氧化氮合酶在犬下颌骨牵张成骨过程中的表达和意义

目的研究一氧化氮合酶（NOS）在犬下颌骨牵张成骨及骨创伤修复过程的表达和意义。方法28只犬随机分成牵张组和直接延长组各12只及正常对照组4只,用免疫组化法检测牵张第6天、牵张后固定2周和8周NOS表达水平的变化。结果牵张第6天牵张组可见牵开区组织内炎性细胞浸润,血管周围和间质内较多红细胞漏出。牵张及固定早期,牵张组和直接延长组诱导型NOS（iNOS）与内皮型NOS（eNOS）阳性表达均明显高于正常对照组,直接延长组的iNOS和eNOS阳性表达低于牵张组,差异均有统计学意义（P<0.05）;牵张后固定8周iNOS和eNOS阳性表达3组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论NOS在牵张早期表达升高,结合在牵张早期组织内红细胞漏出,提示牵张成骨过程中存在某种程度的微创伤,这种微创伤可能是牵张成骨的重要启动因素之一。     

iNOS在大鼠正畸牙牙周膜中的表达

[摘要] 目的 观察诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthasesi,NOS)在大鼠正畸牙移动牙周膜中的表达分布,探讨iNOS在正畸牙牙周组织改建中的意义。方法 通过正畸力牵引大鼠左上颌第一磨牙近中移动,建立大鼠正畸牙移动模型。随机分为9组,每组5只,分别为:实验加力0 h、3 h、6 h、12 h2、4 h和3 d5、d7、d1、4 d。大鼠右上颌第一磨牙不加力设为自身对照组。制备大鼠正畸牙移动不同时间牙周组织切片,免疫组化方法检测iNOS表达分布。结果对照组有少量iNOS表达,实验组压力区iNOS阳性表达大于张力区,且随牙齿移动时间不同表达分布发生变化。3 d时iNOS即开始表达增强,7 d时iNOS阳性表达达到最高峰值1,4 d时iNOS表达值开始减少。结论 iNOS参与正畸牙移动牙周组织改建。     

eNOS在大鼠正畸牙移动中的表达

目的：观察内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）在大鼠正畸牙移动中的表达分布,探讨eNOS在正畸牙牙周组织改建中的意义。方法：通过正畸力牵引大鼠左上颌第一磨牙近中移动,建立大鼠正畸牙移动模型。随机分为9组,每组5只,分别为：实验加力0、3、6、12、24 h和3、5、7、14 d。大鼠右上颌第一磨牙不加力设为自身对照组。制备大鼠正畸牙移动不同时间牙周组织切片,免疫组化方法检测eNOS表达分布。结果：对照组有少量eNOS表达,实验组张力区eNOS阳性表达,且随牙齿移动时间不同表达分布发生变化。3 h组eNOS即开始表达增强,5 d组eNOS阳性表达达到最高峰值,7 d组及14 d组eNOS表达值开始减少。结论：eNOS参与正畸牙移动牙周组织改建。     

一氧化氮合酶在兔下颌骨牵张成骨过程中的表达

目的：利用种植型牵张器增高兔下颌牙槽嵴，观察成骨过程中一氧化氮合酶（NOS）的表达。方法：日本大耳白兔20只，随机分为5组，分别为空白对照组，牵张后1d组、1周组、2周组和4周组，每组4只，随机选取一侧下颌骨行牵张成骨术。术后延迟4d开始牵张，每天牵张2次，共4d。处死各组兔子，游离下颌骨进行大体观察、X线观察、组织学观察和免疫组化观察，通过细胞图像分析仪测定阳性面积，利用SPSS13．0统计软件包分析诱导型NOS（iNOS）、内皮型NOS（eNOS）和神经型NOS（nNOS）的阳性表达。结果：X线及组织学检查显示，牵张间隙内新骨逐渐形成。免疫组化观察，正常骨组织NOS仅有少量的阳性表达；iNOS在间充质细胞、成骨细胞中有阳性染色，牵张后1d、1周、2周组的阳性面积显著高于正常组（P〈0．05）；eNOS在间充质细胞、增生血管内皮细胞中有阳性染色，牵张后1d、1周、2周组的阳性面积显著高于正常组（P〈0．05）；而nNOS在各实验组均无明显的阳性表达。结论：iNOS和eNOS在牵张成骨过程的不同时期具有不同的表达，提示可能对牵张成骨的新骨形成起一定的调节作用。     

正畸牙齿移动过程中iNOS的表达及意义

目的:观察诱导型一氧化氮合酶(induc ib le n itric oxide synthase,iNOS)在大鼠正畸牙齿移动引发牙周组织改建过程中的表达,探讨NO/iNOS在正畸牙齿移动中的作用机制。方法:56只雄性SD大鼠随机分为8组。分别在正畸加力1,3,5,7,14,21,28 d后进行免疫组化染色和图像分析。结果:正畸加力3 d后,牙周组织细胞iNOS表达增强,7 d iNOS表达达到高峰(P<0.01),以后iNOS表达下降。结论:NO/iNOS参与了正畸牙周组织改建过程。     

NOS与TGF—β1在牵张成骨中的相关性研究

目的：利用种植型牵张器增高兔下颌牙槽嵴,研究一氧化氮合酶（NOS）与转化生长因子-β1（TGF-β1）在牵张成骨过程中的相关性。方法：雄性日本大耳白兔24只,随机分为牵张术后1天、1周、2周、4周、6周组和空白对照组,每组4只。随机选取一侧下颌骨行牵张成骨术。分离处死后的兔下颌骨,行免疫组化观察。对免疫组化染色切片通过高清晰彩色病理图像分析仪测量灰度值,计算染色强度。利用SPSS13．0软件包进行方差分析和Spearman相关分析,并拟合曲线关系,建立相关回归方程。结果：在牵张成骨中,eNOS与TGF-β1呈正相关（P〈0．01,r=0．538）,iNOS与TGF一8。不存在相关性（P〉0．05,r=0．283）;eNOS与TGF—β1的曲线拟合回归方程为YeNOS=24．246-1．914XTGF-β1＋0．182XTGF-β1^2-0．004XTGF-β1^3。结论：TGF—β1在牵张成骨过程中可能起调控作用,对eNOS起正性调控作用,通过调控eNOS来完成对iNOS的调控,iNOS又通过NO浓度的变化完成对TGF-β1的反作用。     

Masseter inflammation differentially regulates three nitric oxide synthases in the rat trigeminal subnucleus caudalis

ObjectiveThe aim of the present study was to evaluate changes in expression levels of three nitric oxide synthases (NOSs), namely inducible NOS (iNOS), neuronal NOS (nNOS) and endothelial NOS (eNOS), in the subnucleus caudalis of the trigeminal sensory nuclear complex (Vc) under experimental myositis conditions.DesignMale Sprague Dawley rats were injected with an inflammatory agent, complete Freund's adjuvant (CFA), or capsaicin in the masseter muscle. The brainstem region containing the Vc was extracted at both immediate (30 and 60 min) and longer (1, 3, 7 days) time points to examine the changes in the three NOS protein levels via the Western blot technique. Subsequently, the RT-PCR experiments were carried out to verify the changes in iNOS mRNA.ResultsFollowing the injections of CFA, there were no significant changes in the level of the three NOS proteins at the immediate time points. However, there was a significant upregulation of iNOS mRNA and protein 3 days after CFA-induced inflammation. Neither nNOS nor eNOS showed significant changes in the protein level at any of the longer time points. Capsaicin injection in the masseter, which we recently reported to upregulate all three NOS at the immediate time points, did not result in significant changes at longer time points.ConclusionAcute and chronic muscle inflammation differentially modulates the expression of the three NOS in the Vc. These data suggest that the contribution of each NOS in craniofacial muscle pain processing under inflammatory conditions may be anticipated with distinct temporal profiles.     

KGF对口腔黏膜上皮细胞中增殖相关基因PCNAmRNA的作用

目的：检测不同浓度角质细胞生长因子（KGF）对体外培养的口腔黏膜上皮细胞形态学及对上皮细胞增殖相关基因PCNAmRNA表达的影响。方法：体外培养的口腔黏膜上皮细胞加入含不同浓度KGF（0ng／mL,5ng／rnL,25ng／mL,50ng／mL）的D—KFSM,分别培养12h、24h、48h后观察细胞形态改变并用荧光实时定量检测各组细胞内增殖相关基因PCNAmRNA的表达。结果：①相同时间段实验组较对照组上皮细胞贴壁明显,培养48h实验3组（50ng／mL）较其他组细胞核仁明显;②12h时,实验组较对照组上皮细胞内PCNAmRNA表达增加,但各实验组间PCNAmRNA表达逐渐降低（P〈0．05）;③24h时实验组较对照组PCNAmRNA表达增加,但各实验组间无统计学差异护〉0．05）：④48h时,实验组较对照组PCNAmRNA表达增加,且呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论：外源性KGF可上调口腔黏膜上皮细胞增殖相关基因PCNAmRNA的表达,且在不同时间段、不同浓度调控作用存在差异。     

NF-κB信号通路在放射线诱导的腺样囊性癌细胞凋亡中的实验研究

目的:探讨NF-κB信号转导通路在放射线诱导的人唾液腺腺样囊性癌(ACC)-2细胞凋亡中的变化规律。方法:采用脂质体2000将pBabe-SR-IκBa质粒瞬时转染入ACC-2细胞,Western blot法检测转染后IκBa蛋白表达的变化,将转染后的ACC-2细胞进行6种剂量(0、2、4、6、8、10 Gy)的高能X线照射,在照射后不同时间点(1、3、6、10、24、48 h)应用免疫细胞化学检测ACC-2细胞NF-κB p65的表达情况,应用Image Pro-Plus图像分析软件测其细胞核平均灰度值,并用SPSS 16.0软件对数据进行方差分析。结果:与转染pBabe空白质粒组和未转染质粒组比较,转染pBabe-SR-IκBa质粒ACC-2细胞不仅表达内源性IκBa,同时也表达SR-IκBa;接受相同放射线剂量照射后3 h细胞核平均灰度值升高(P<0.05)。SR-IκBa质粒组中,不同剂量组的细胞核平均灰度值均低于0 Gy组;约在接受照射后6～10 h,细胞核平均灰度值达到最低值;相同时间点上,3 h组细胞细胞核平均灰度值随放射剂量增加而降低(P<0.05)。结论:转染突变的IκBa基因可特异性抑制NF-κB信号通路,经放射线照射诱导凋亡后,NF-κB p65蛋白的表达量具有一定的时间-剂量效应规律。     

Effect of nitric oxide on the recovery of the hypofunctional periodontal ligament

The relationship between occlusal stimuli and a hypofunctional periodontal ligament (PDL) structure has been reported, though changes in occlusal recovery conditions were still unclear. Nitric oxide (NO) produced by NO synthase (NOS) is considered a factor for vascular and immune system control, and it increases according to mechanical stimuli. The objective of this study was to examine the relationship between NOS and occlusal stimuli in PDL by comparing hypofunction with occlusal recovery. The study focused on the expression of endothelial NOS (eNOS) and inducible NOS (iNOS). Their expression significantly decreased in occlusal hypofunction compared with the control group and increased close to normal in an occlusal recovery group. The change in the immunopositive area was more dramatic than the immunopositive cell number. Moreover, the rate of iNOS increase was higher than that of eNOS. This study suggests that NO plays an important role in the recovery of the hypofunctional PDL.     

胰岛素样生长因子Ⅱ对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1一氧化氮合酶基因表达的影响

目的　探讨胰岛素样生长因子Ⅱ (IGF Ⅱ )调节成骨细胞一氧化氮 (NO)水平及诱导型(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)mRNA转录的作用。方法　不同浓度和不同时间IGF Ⅱ作用于小鼠成骨样细胞株MC3T3 E1细胞后 ,采用噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞增殖、硝酸还原酶法测定细胞培养物上清NO浓度、逆转录聚合酶链式反应检测细胞的iNOS和eNOSmRNA转录水平。结果 1μg/LIGF Ⅱ作用 72h ,10和 10 0 μg/LIGF Ⅱ分别作用 2 4、4 8和 72hMC3T3 E1细胞 ,其MTT值均明显升高 (P <0 0 5、P <0 0 1)。 10 0 μg/LIGF Ⅱ分别作用 4 8和 72h ,细胞iNOSmRNA水平及其上清液中NO水平均显著下降 (P <0 0 1) ,但IGF Ⅱ以不同浓度及时间作用的细胞eNOSmRNA水平均无明显改变 (P >0 0 5 )。结论　 1～ 10 0 μg/LIGF Ⅱ均能促进MC3T3 E1细胞增殖 ,此作用可能与IGF Ⅱ维持细胞低水平NO有关。较高浓度的IGF Ⅱ (10 0 μg/L)可在转录水平上下调MC3T3 E1细胞iNOS基因表达 ,但不影响eNOSmRNA的转录 ,这可能是MC3T3 E1细胞维持低水平NO的机制之一。     

VEGF在脱细胞骨基质复合富血小板血浆修复颅骨缺损中的表达

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）在脱细胞骨基质（acellular bone matrix,ABM）复合富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）修复兔颅骨缺损时的表达及分布,探讨富血小板血浆促进成骨的机制。方法：雄性新西兰大白兔24只,体质量1.5～2.0kg。在兔颅骨两侧分别建立一个1cm×0.5cm全层骨缺损区,同时去除该区骨膜,注意勿伤及硬脑膜。随机选择一侧骨缺损作实验侧,植入复合PRP的ABM;另一侧为对照侧,仅植入ABM。术后第2、4、8、12周末分别处死6只兔取材。免疫组织化学法测定骨缺损修复区血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达;应用Image-proplus 5.0图像分析软件测量VEGF表达强度的灰度值。采用SSPS16.0软件包进行t检验。结果：术后2周,实验组VEGF呈强阳性表达,随后急剧下降,以后趋于平缓。对照组在术后2、4周呈阳性表达,以后平缓下降。两组相比,在第2、4周时差异均有显著性（P〈0.05）。第8、12周时,2组表达差异无显著性。结论：VEGF在实验组早期阶段的强阳性表达,说明血管形成活跃。PRP促进骨修复的作用发生在植入后早期,启动了早期活跃的成骨。