实时荧光PCR和RT—PCR方法检测登革病毒的比较研究

目的通过2种检测登革病毒方法的比较，以提高检测登革病毒的灵敏度和特异性。方法利用Taqman MGB技术，根据登革病毒3’端非编码区的一段高度保守序列，设计登革1～4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针，以登革热毒株作为标准，以乙脑毒株作对照，建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法。并对10份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT—PCR及荧光PCR扩增。结果RT—PCR检测10份临床血清标本，2份阳性，阳性率为20％。实时荧光PCR检测登革病毒与乙脑病毒无交叉反应，检测10份临床血清标本，5份阳性，阳性率为50％。从RNA提取到检测结果仅需4h。结论Taqman MGB实时PCR检测方法快速、敏感性高、特异性强，可作为登革病毒的快速检测方法，应用于登革热的临床早期诊断。     

实时荧光定量PCR技术在食源性细菌检测中的应用效果评价

【目的】探讨应用实时荧光定量PCR技术在食源性细菌检测中应用效果。【方法】分别应用细菌培养法,PCR检测法,实时荧光定量PCR方法对987例群体食源性食物中毒腹泻患者和疑似患者的粪便或呕吐物2084份样品进行食源性病原体检测。【结果】检测2084个感染性腹泻标本,细菌培养法阳性检出率45.2%,普通PCR检测法阳性检出率63.4%;采用实时荧光PCR技术阳性检出率90.1%。实时荧光定量PCR检测法阳性检出率显著高于细菌培养检测法和普通PCR检测法,相比较均有显著性差异（P〈0.05）。【结论】实时定量荧光定量PCR技术准确、快速、简便、特异性强,在食源性细菌检测中,能为突发食源性食物中毒事件提供更早的控制措施并争取时间。     

荧光定量PCR法在结核杆菌检测中的价值

目的探讨荧光定量PCR法检测技术在结核病诊断中的价值。方法采用荧光定量PCR法和抗酸染色法同时检测231例结核患者体液标本(121例痰标本、67例胸腹水及43例尿液标本),对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR法的检测灵敏度为102Copy/ml,是抗酸染色法方法检测灵敏度100倍,且对除结核杆菌外的其他呼吸道病原体检测结果均为阴性。本研究痰标本、胸腹水标本及尿液标本的荧光定量PCR法阳性率均要高于抗酸染色法阳性率,比较差异均有显著性(﹤0.01)。结论荧光定量PCR方法检测结核杆菌具有特异性强、灵敏度高、简便、快速的特点,明显优于抗酸染色法,可作为结核病诊断的常规方法。     

荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR（FQ-PCR）技术在结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、抗酸染色和改良罗氏培养三种方法同时检测156例结核患者标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为50%、25.64%、33.33%,以荧光定量PCR检测的阳性率最高。结论荧光定量PCR方法检测结核分枝杆菌具有灵敏度高、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的常规方法,在临床上有重要应用价值。     

实时荧光定皇PCR的研究进展及其应用

随着PCR（聚合酶链反应）技术的飞速发展，实时荧光定量PCR（real—time quantitative PCR）技术以其特异性强、灵敏度高、自动化和重复性好、定量准确、污染少等优点，成为分子生物学和其它领域的重要技术工具，并广泛应用于遗传病、病原体和肿瘤等方面的检测和诊断。本文就实时荧光定量PCR技术的主要原理、定量方法及目前在研究领域中主要的应用进行了概述。     

实时荧光定量PCR对社区暴露腹泻样本CA-CDI的诊断价值

目的评估实时荧光定量PCR检测技术对社区获得性艰难梭菌感染(CA-CDI)的诊断价值。方法选取具有社区暴露史的有效非重复腹泻标本329例,分别以实时荧光定量PCR粪便标本直接检测法与产毒培养+细胞毒性酶免疫分析法(EIA)对CA-CDI进行诊断,并以产毒培养+EIA为“金标准”,评估实时荧光定量PCR检测的效能。结果CA-CDI“金标准”检测阳性率为5.17%(17/329).艰难梭菌荧光PCR检测试剂盒诊断结果与“金标准”差异无统计学意义(P>0.05),检测一致性为0.831,灵敏度与特异度分为76.47%、99.68%。艰难梭菌荧光PCR检测试剂盒对tcd-B的检测结果与“金标准”差异无统计学意义(P>0.05),检测一致性为0.860,灵敏度与特异度为81.25%、99.68%。结论实时荧光定量PCR检测技术以快速、高敏感度、高特异度等特点,可对社区暴露腹泻样本CA-CDI进行独立检测。     

实时荧光定量PCR的研究进展及其应用

随着PCR(聚合酶链反应)技术的飞速发展,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术以其特异性强、灵敏度高、自动化和重复性好、定量准确、污染少等优点,成为分子生物学和其它领域的重要技术工具,并广泛应用于遗传病、病原体和肿瘤等方面的检测和诊断.本文就实时荧光定量PCR技术的主要原理、定量方法及目前在研究领域中主要的应用进行了概述.     

应用实时荧光PCR技术快速检测B群链球菌

目的 建立一种能够快速、准确、特异的检测B群链球菌的实时荧光PCR检测技术。方法 以B群链球菌cfb基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,然后优化反应条件和反应体系,建立检测B群链球菌的实时荧光PCR方法,通过检测实验菌株,对照菌株以及模拟血液,尿液标本对该方法的特异性、敏感性以及灵敏度进行评价。结果 实验结果表明实时荧光PCR方法检测7株B群链球菌均为阳性,其他对照实验菌株均为阴性,且当菌液浓度为 20cfu//ml时,也能获得阳性结果,说明荧光定量PCR法敏感性、特异性以及灵敏度均较高。对模拟尿液标本进行检测时,其敏感性为90%,特异性为100%,检测下限约为2cfu/反应体系。由于标本类型和处理方式的不同,对模拟血液标本进行检测时,其检测灵敏度约为100cfu/mL,低于模拟尿液标本的检测灵敏度。结论 建立的荧光定量PCR技术方法为GBS的快速诊断以及更加准确有效的进行抗生素预防提供了依据,也为在新生儿中进行早发型GBS感染的快速准确诊断提供了新的思路。     

多重巢式和定量PCR联合应用提高SARS病毒检测率

目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法.方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法,对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测.结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性.91份确诊和疑似病例标本经多重巢式PCR方法检测,阳性标本数53例,总阳性检测率58.24%;荧光实时定量PCR检测阳性标本数68例,阳性检出率74.73%;两种方法联合,阳性标本数76例,阳性检出率83.52%.结论多重巢式PCR联合荧光实时定量方法可进一步提高SARS病毒的阳性检出率,也为今后应对可能发生的其它突发性传染病病毒的检测提供分子诊断基础.     

荧光定量PCR在医学诊断中的应用

实时荧光定量PCR(Real time fluorescent quantitative PCR)是在PCR技术基础上发展起来的一种高度灵敏的核酸定量技术。该技术通过荧光信号的积累来实时监测整个PCR进程,使PCR扩增和终产物检测全部处在封闭的条件下进行,从而具有实时监测、无污染、快速、灵敏、精确、特异等特点,极大地克服了原有PCR技术的不足。目前该技术已经广泛应用于肿瘤学、遗传学、免疫学、微生物学、寄生虫学和基因治疗等领域。     

阴道念珠菌菌种鉴定及其耐药性分析

目的回顾2003～2006年，海南省人民医院妇科门诊念珠菌阴道炎的473株念珠菌的鉴定结果及药敏特点，为临床用药治疗提供参考。方法按常规霉菌培养分离菌株采用生物梅里埃Vitek—AMS-32及YBC鉴定卡全自动检测鉴定，药敏采用生物梅里埃ATB—FUNGUSTS试条，对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、酮康唑、制霉菌素、益康唑、咪康唑等6种药敏进行测定。结果检出473株念球菌中，共鉴定出8种念珠菌，其中白色念珠菌346株占73．1％，其次为光滑球拟酵母45株占9．5％，热带念珠菌44株占9、3％，季也蒙念球菌13株占2．7％，此外还有占份量较少的4种。药敏结果制霉菌素和两性霉素B对念珠菌的抑菌作用较强，耐药率较低，分别为5．3％和8．2％，对其余耐药率从低到高依次为酮康唑28．1％，益康唑38．1％较大的差异。结论白色念珠菌仍是妇科霉菌性阴道炎的主要病原菌，但其它念珠菌种构成比的增加应引起我们足够的重视，加强念珠菌药敏的测试，才能做到合理用药、科学治疗。     

Characterization of candida species isolated from cases of lower respiratory tract infection

Objectives: (1) To identify and characterize the Candida species isolates from lower respiratory tract infection. (2) to determine the rate of isolation of Candida species from sputum samples. Methods: This study was carried out in the Department of Microbiology, Manipal Teaching Hospital, Pokhara, Nepal from June 2002 to January 2003. A total of 462 sputum samples were collected from patients suspected lower respiratory tract infection. The samples were processed as Gram staining to find out the suitability of the specimen, cultured on Sabouraud's Dextrose Agar (SDA) and also on blood agar and chocolate agar to identify the potential lower respiratory tract pathogens. For the identification of Candida, sputum samples were processed for Gram stain, culture, germ tube test, production of chlamydospore, sugar fermentation and assimilation test. For the identification of bacteria, Gram stain, culture, and biochemical tests were performed by standardized procedure. Result: Out of 462 samples, 246 (53.24%) samples grew potential pathogens of lower respiratory tract. Among them Haemophilus influenzae 61(24.79%) and Streptococcus pneumoniae 57 (23.17%) were the predominant bacterial pathogens. Candida species were isolated from 30 samples (12.2%). The majority of Candida species amongst the Candida isolates were Candida albicans 21(70%) followed by Candida tropicalis 4(13.33%). Candida krusei 3(10%), Candida parapsilosis 1(3.33%) and Candida stellatoidea 1(3.33%). The highest rate of isolation of Candida was between the age of 71 and 80. Conclusion: Candida isolation from sputum samples is important as found in the present study in which Candida species were the third most common pathogen isolated from patients with lower respiratory tract infection. Key words: Candida albicans, Pulmonary candidiasis, Nepal.     

肺癌患者深部真菌感染病原菌种的变迁

目的 对肺癌患者深部真菌感染的病原菌种类进行分析。方法 以形态学、芽管试验、科玛嘉念珠菌显色培养基、API20CAUX仪对肺癌患者深部真菌感染的病原菌进行分类鉴定。结果 感染的病原真菌主要是白念珠菌，其次是光滑念珠菌和热带念珠菌。结论 白念珠菌仍然是最常见的致病真菌，但其所占的比例己下降，而非白念珠菌占的比例明显增加，存在着菌种变迁的趋势。     

念珠菌核型脉冲电泳分析及在分类鉴定中的应用

采用脉冲电泳技术分离了７种常见致病念珠菌标准株染色体ＤＮＡ，其染色体带数为４～１０条，大小范围０．５～２．８Ｍｂ。种特异性电泳带型的获得表明电泳核型可作为念珠菌种间基因型鉴定的依据。     

599株念珠菌感染的菌群分布及耐药性分析

目的 了解临床念珠菌感染类型、分布及其对常用抗真菌药物的敏感性,为临床诊断治疗提供可靠的用药依据.方法 采用常规方法 分离培养真菌,对新疆医科大学第五附属医院2010年1月-2011年12月培养出的599株念珠菌用科玛嘉念珠菌显色培养基进行鉴定,并用微生物药敏进行真菌药敏分析.结果 (1) 599株念珠菌标本来源构成比,念珠菌的检出率以痰液为主(89.8%),其次为尿液(4.5%),念珠菌的检出率在血液中最少(0.7%).(2) 599株念珠菌中,以白色念珠菌检出最多,为372株(62.1%),其次为热带念珠菌61株(10.2%)、光滑念珠菌59株(9.8%)、克柔念珠菌21株(3.5%)、近平滑念珠菌16株(2.7%)、其他念珠菌70株(11.7%).(3)药敏试验结果 表明念珠菌对5-氟胞嘧啶(5-FC)、伏力康唑(VRC)的敏感率较高;对氟康唑(FCA)、伊曲康唑(ITR)有不同程度的耐药.结论 念珠菌在医院内感染呈上升趋势.药敏监测非常必要,临床医生应根据药敏结果 合理使用抗真菌药物,有效预防真菌感染和耐药性发生.     

头颈部肿瘤术后放疗患者口腔假丝酵母菌感染检测

目的 对头颈部放疗患者口腔假丝酵母菌进行定性和定量检测.方法 选择29名头颈部放疗患者、29名老年精神科住院患者以及34名正常老年志愿者做为研究对象.在第10次放疗结束收集唾液样本,假丝酵母菌显色培养基（CHROMagar）进行分离、培养、鉴定和菌落计数.结果 92名受试者中,51 （55.4％）人假丝酵母菌检出率为阳性,而在放疗组和老年科住院患者组检出率为58.6％,明显高于正常老年对照组（P =0.334）.假丝酵母菌检出率与临床假丝酵母菌感染（P =0.031）、口干症（P=0.007）有关,与性别因素无明显相关（P =0.334）.CHROMagar显色培养结果显示,感染菌群为白色假丝酵母菌、杜氏假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、季力蒙假丝酵母菌、葡萄牙假丝酵母菌、乳酒假丝酵母菌.其中以白色假丝酵母菌最为常见,其次为热带假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌.老年对照组和老年科住院患者组中,白色假丝酵母菌为主要菌群,检出率分别为45.0％和41.2％;放疗组主要检出菌群为热带假丝酵母菌（27.0％）,其次为白色假丝酵母菌（16.2％）、近平滑假丝酵母菌（16.2％）.多变量统计分析发现,仅放疗与口腔假丝酵母菌感染相关.结论 头颈部放疗患者由于口腔内环境的改变,容易出现口腔假丝酵母菌感染,并呈现出菌群多样性以及非白色假丝酵母菌为主感染状态.     

Digestive fungal flora in asymptomatic subjects in Bobo-Dioulasso,Burkina Faso

ObjectiveTo identify Candida species in asymptomatic subjects in Bobo-Dioulasso (Burkina Faso) by the matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry.MethodsA cross-sectional study was conducted from January to February 2013 in Bobo-Dioulasso to collect fecal and urine specimens from voluntary donors. Fungal strains were isolated on Sabouraud dextrose agar and analyzed using matrix-assisted laser desorption ionisation-time-of-flight mass spectrometry.ResultsA total of 135 samples including stools (78.5%, 106/135) and urine (21.5%, 29/135) were analyzed. The results revealed that fecal specimens contained mainly Candida krusei (C. krusei) (42.5%) followed by Candida albicans (29.3%), Candida glabrata (18.0%) and Candida tropicalis (C. tropicalis) (4.7%). C. krusei (34.6%) was also found to be the most frequently identified in urine samples followed by Candida albicans (27.0%), C. tropicalis (15.4%) and Candida parapsilosis. However, uncommon species such as Candida nivariensis, Candida kefyr, Candida norvegensis, Candida parapsilosis, Candida lusitaniae and Candida robusta were also identified from fecal and urines samples.ConclusionsThis study noted the emergence of species such as C. krusei, Candida glabrata, Candida parapsiolosis, C. tropicalis, Candida nivariensis, Candida norvegensis, and others. It is an imperative to take into account the existence of these species in the therapeutic management of patients in Bobo-Dioulasso.     

164株念珠菌培养与药敏分析

目的分析念珠菌感染患者的菌种分离鉴定和药敏试验结果，为临床提供病原学诊断和合理运用抗真菌药物作依据。方法采集164例患者的分泌物、排泄物标本分离真菌，疑为酵母样真菌者均采用YBC卡进行鉴定，并对分离出的念珠菌做抗真菌药敏试验。结果164株念珠菌共有8个种株，以白色念珠菌为主，占67．1％。各种念珠菌对制霉菌素等9种抗真菌药物均有不同程度的耐药性。结论各种念珠菌对临床常用抗真菌药物的敏感性程度明显不同，为合理使用抗菌药物以减少真菌感染，特别是耐药菌株感染的发生提供重要依据。     

ICU患者肺部感染病原性真菌的分布及白色念珠菌基因分型

目的 旨在了解梅州地区ICU患者侵袭性肺部真菌感染（IPFI）的物种分布、药物敏感及白色念珠菌RAPD-PCR指纹图谱特征和不同基因型菌株耐药性差异。方法 收集ICU中149例IPFI患者的呼吸道标本,采用法国梅里埃VITEK 2-Compact和API鉴定系统进行菌株鉴定和药敏试验,运用RAPD 技术对分离的62 株白色念珠菌进行分析。结果 该地区IPFI的物种以白色念珠菌占比最高为38.51%（62/161）,其次为热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌和季也蒙念珠菌等非白念珠菌,非白念珠菌整体占比为48.45%（78/161）;它们对常用抗真菌药物具有较好的敏感性,但是出现了近平滑念珠菌对卡泊芬净的耐药菌株和光滑念珠菌对唑类药物敏感性相对较低的情况;白色念珠菌P2 随机引物扩增条带数量1~5条,条带大小在300 bp~1.8 kb ,以300 bp、400 bp 和600 bp 3 个主条带为主;利用聚类分析将这些菌株分为A~D 4个基因群, 其中A基因群11株,B基因群42株,C基因群7株和D基因群2株;不同基因型白色念珠菌对各药物敏感性的差异无统计学意义。结论 白色念珠菌、热带念珠菌和近平滑念珠菌等念珠菌属是广东梅州地区ICU患者 IPFI的最常见病原体,白色念珠菌存在丰富的基因多态性,RAPD 技术对于白色念珠菌的基因型鉴定具有重要意义。     

Prevalence and species distribution of yeast in mammary glands of dairy cows in Minnesota

A study of the prevalence of yeast-like fungi in the mammary glands of dairy cattle was conducted in Minnesota. Quarter samples from 6,020 cows were cultured for yeast. Growth of organisms was obtained from 3.2% of the quarter milk samples. The rate of yeast infection for Minnesota dairy cattle in this study was 2.0%.The majority of the yeast isolated belonged to one of four species of the Candida genus. Candida krusei, Candida parakrusei, Candida guilliermundi, and Candida tropicalis, comprised 89% of the yeasts isolated. All of these species have been reported to cause clinical mastitis (1, 7, 9, 10, 12, 13, 15, 16).It would appear that yeast-like fungi are of sufficient prevalence in mammary glands that yeast infection would be considered in the differential diagnosis in cases of clinical mastitis.