中药淡豆豉有效成分大豆异黄酮调节血脂的研究进展

大豆异黄酮是淡豆豉中一类重要的生物活性成分，笔者对MEDLINE and EMBASE(1993-September2001)发表的有关淡豆豉有效成分大豆异黄酮与血脂关系的最新资料进行了详尽的分析，综述了大豆异黄酮降血脂的有效性、有效成分及降血脂的作用机理。     

高速逆流色谱法分离制备淡豆豉中大豆素和染料木素

淡豆豉是经大豆Glycine maa T（L．）Merr．发酵而来的传统中药，其中所含的大豆异黄酮是该药主要活性成分之一。近年来的研究结果表明，大豆异黄酮是一类重要的生理活性物质，具有预防心血管疾病、防癌抗癌、治疗骨质疏松、降低妇女更年期综合症等功效。经发酵处理后大豆异黄酮中游离型苷元的质量分数明显提高，如大豆素和染料木素，而游离型大豆异黄酮比结合型大豆异黄酮具有更强的生物活性。因此，如何简便、快速从淡豆豉中分离制备大豆异黄酮苷元对进一步进行药效与作用机制研究、     

大豆与其生物发酵制品淡豆豉异黄酮含量研究

目的:探讨大豆与其生物发酵制品淡豆豉中异黄酮的含量变化。方法:大豆通过传统的发酵方法制备成淡豆豉,通过比色法测定了大豆和淡豆豉总黄酮含量;高效液相色谱法对大豆和淡豆豉中大豆黄素和染料木素含量进行测定。结果:大豆总黄酮含量0.637mg.g-1,游离苷元含量0.152mg.g-1;淡豆鼓中总黄酮含量0.731mg.g-1,游离苷元含量1.701mg.g-1。结论:大豆和淡豆豉总黄酮含量基本相当,淡豆豉中大豆异黄酮游离苷元含量是大豆中的10～40倍。     

大豆发酵制品中总异黄酮的含量测定

目的建立一种测定大豆发酵制品——淡豆豉中异黄酮类成分含量的紫外分光光度法分析方法。方法以染料木素为对照品，利用染料木素与氢氧化钠产生反应，在271nm波长处有最大吸收点，用紫外分光光度法测定淡豆豉中总异黄酮的含量。结果淡豆豉中总异黄酮的含量为9．884mg／g，加样回收率为99．3％，相对标准偏差为2．1％。结论方法简便、准确、重现性好，可作为测定淡豆豉中总异黄酮的含量的一种手段，适用于淡豆豉及其它豆制品的日常分析和质量控制。     

淡豆豉与黑豆提取物抗癌细胞增殖作用及4种异黄酮成分的含量测定

目的:探讨淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调节作用,并检测提取物中4种异黄酮成分的含量。方法:MTT法观察淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖率的影响,Annexin/PI法流式细胞仪分析检测细胞的早期凋亡,高效液相色谱法检测淡豆豉和黑豆提取物中4种异黄酮成分大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素的含量变化。结果:淡豆豉和黑豆提取物对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用且诱发癌细胞凋亡,但高浓度淡豆豉提取物的抑制癌细胞增殖作用明显高于黑豆(P0.05)。淡豆豉提取物中大豆苷、大豆苷元和染料木素的含量显著高于黑豆提取物(P0.01),但染料木苷的含量未见明显变化。结论:淡豆豉提取物与黑豆相比具有较强的抑制癌细胞增殖作用,淡豆豉中含量较高的异黄酮成分大豆苷、大豆苷元和染料木素,可能是其较强的抗癌细胞增殖作用的物质基础。     

淡豆豉药材发酵前后活性成分的变化研究

目的对淡豆豉药材发酵前后的异黄酮苷和苷元成分、总异黄酮、纤溶酶的含量进行测定,并对其含量变化进行比较。方法采用HPLC法测定淡豆豉中大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素的含量,紫外可见分光光度法测定淡豆豉中总异黄酮的含量,纤维蛋白平板法测定淡豆豉纤溶酶活力。结果原料大豆经过发酵后,大豆苷、染料木苷含量减少,大豆苷元、染料木素含量增加,总异黄酮无明显变化,黑大豆中苷元成分略高于黄大豆。发酵过程还产生一种具有溶栓作用的纤溶酶。结论淡豆豉发酵过程为结合型糖苷向游离型苷元转化的过程,同时产生原料大豆中没有纤溶酶活性,不同原料大豆的发酵,其活性成分也有差异。     

中药淡豆豉高效发酵菌株的筛选

目的：以大豆异黄酮的含量为指标,筛选淡豆豉的高效发酵茵株并进行初步鉴定.方法：将从自然发酵淡豆豉中分离出来的菌株在无菌条件下分别接种于大豆中进行纯种发酵实验,通过比较各个菌株发酵后淡豆豉中主要药效成分大豆异黄酮（染料木素和大豆黄素）的含量,筛选高效发酵菌株,并对菌株的菌落形态、菌体特征和生理生化特征进行鉴定.结果：从自然发酵淡豆豉中分离出两株高效的发酵菌株,经鉴定均为枯草芽孢杆菌.     

基于发酵原理的淡豆豉异黄酮分析方法

目的:探究淡豆豉中异黄酮合适的分析评价方法,分析《中国药典》方法(简称药典法)的科学性。方法:从发酵原理的角度,分析淡豆豉异黄酮不同分析方法的差异;应用高效液相色谱法,同时定量分析药典法淡豆豉与对照组淡豆豉发酵过程中3种异黄酮苷元的变化。结果:淡豆豉中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素3种苷元的线性、精密度、重复性、稳定性均良好,平均加样回收率分别为99.76%,99.96%,100.22%。与前酵制曲工序结束样品相比,两种方法经过后酵再闷工序后,苷元含量显著增加;与对照组相比,药典法工艺制备淡豆豉样品异黄酮苷元总量有显著优势,以后发酵再闷15 d作为发酵终点,异黄酮苷元总量可达1 212.23μg·g~(-1)。结论:历代以来,淡豆豉发酵制备讲究"发透"。从发酵原理分析,淡豆豉发酵制备过程中异黄酮总量略有下降,异黄酮苷元类化合物含量显著升高。采用HPLC法直接定量分析生物活性较高的异黄酮苷元类成分,该分析方法较为简单,灵敏度、准确度较高,建立合适的标准,可更有效控制淡豆豉的质量。药典法收载工艺发酵制备的淡豆豉,质量较佳。     

淡豆豉异黄酮对大鼠成骨细胞增殖及雌激素受体表达的影响

目的观察淡豆豉异黄酮对大鼠成骨细胞增殖及雌激素受体表达的影响。方法采用改良组织块法分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,分别给予不同质量浓度淡豆豉异黄酮(1、10、100、1 000μg/L)、1 000μg/L淡豆豉异黄酮+10 nmol/L雌激素受体拮抗剂ICI 182780、1 000μg/L大豆异黄酮进行干预,以1 nmol/L 17β-雌二醇作为阳性对照,MTT法检测成骨细胞增殖情况;RT-PCR和Western blot法分别检测成骨细胞ERβmRNA及蛋白表达水平。结果MTT结果显示,淡豆豉异黄酮在1~1 000μg/L范围内促进成骨细胞增殖;RT-PCR和Western blot结果显示,1~1 000μg/L淡豆豉异黄酮上调ERβmRNA及蛋白表达水平。而1 000μg/L淡豆豉异黄酮的上述作用能够被雌激素受体拮抗剂所拮抗。结论淡豆豉异黄酮能够促进大鼠成骨细胞的增殖,此作用可能是通过雌激素受体ERβ途径实现的。     

淡豆豉药材中大豆异黄酮质量评价法的研究

目的:建立淡豆豉药材中大豆异黄酮的质量评价法。方法:采用薄层色谱法,以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(20∶4∶2∶1)为展开剂对淡豆豉中大豆素进行定性鉴别;采用碱水解法,对淡豆豉提取液以浓氨水-甲醇-水(20∶75∶5)为碱解溶剂加热回流2 h,并采用高效液相色谱法,以Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,测定淡豆豉中葡萄糖苷类、丙二酰基葡萄糖苷类和苷元类成分共9种化合物的含量,流动相为水(0.5%冰醋酸)-甲醇(0.5%冰醋酸),梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,检测波长260 nm,柱温40℃。结果:在淡豆豉薄层色谱中,可清晰检出大豆素斑点;在上述水解条件下,丙二酰基葡萄糖苷类完全转化为相应的葡萄糖苷类,苷元类成分无变化;在淡豆豉高效液相色谱中,9种大豆异黄酮色谱峰完全分离。结论:本方法准确可靠,重现性好,可作为淡豆豉药材中大豆异黄酮的质量评价法。     

基于文献的淡豆豉发酵过程成分转化分析

该文通过系统检索并梳理大豆与淡豆豉已报道的成分基础上,对两者在发酵过程所发生的成分转化进行深入分析,对其成分转化的类型与可能机制进行了探讨,为淡豆豉的炮制工艺、药效成分及质量标准研究提供依据.经过分析可知,大豆发酵成淡豆豉的过程中,其营养物质(蛋白质、糖类、脂质等)、生物活性物质(异黄酮、皂苷、γ-氨基丁酸等)及其他物...     

基于传统品质评价的淡豆豉质量分析

目的：基于历代本草总结的淡豆豉“香美而浓者佳”的品质评价经验，对黑豆与淡豆豉所含化学成分进行系统对比分析，并对淡豆豉不同发酵时间的主要发酵产物进行定量分析，以明确炮制过程内在成分的转化规律，为淡豆豉现代质量控制提供科学依据。方法：采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）对黑豆及淡豆豉的化学成分进行结构鉴定，借助Progenesis QI v2.3软件，采用负离子模式进行主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA），绘制S-plot图，选取|P|>0.1的化合物作为备选差异性成分。采用UPLC测定淡豆豉发酵期间异黄酮类化合物含量，前酵期间每8 h取样，后酵期间每2 d取样，并分析不同发酵阶段异黄酮含量动态变化。采取异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生，利用高效液相色谱法（HPLC）检测淡豆豉不同发酵阶段样品及黑豆中氨基酸和核苷酸的含量，通过味道强度值（TAV值）探讨各呈味物质对淡豆豉“美”味的贡献度。结果：从黑豆和淡豆豉中共筛选出19种差异成分，以大豆皂苷类和异黄酮类成分为主，发酵后含量均显著减少甚至消失。淡豆豉前酵过程主要发生苷键...     

不同发酵条件对淡豆豉中总异黄酮含量及蛋白酶活力的影响

目的:建立淡豆豉中总异黄酮的含量测定方法,研究不同发酵条件对淡豆豉中总异黄酮及蛋白酶活力的影响。方法:采用UV法,以染料木素为标准品,在最大吸收峰261 nm处测定黑豆、自然发酵的淡豆豉、米曲霉发酵的淡豆豉、黑曲霉发酵的淡豆豉中总异黄酮含量;以福林法测定蛋白酶活力。结果:黑豆中的总异黄酮的含量为7.77mg·g~(-1),自然发酵淡豆豉总异黄酮为8.08 mg·g~(-1),米曲霉发酵淡豆豉总异黄酮为8.87 mg·g~(-1),黑曲霉发酵淡豆豉总异黄酮含量为10.99 mg·g~(-1)。平均加样回收率100.09%,100.34%,99.76%,99.87%,相对标准偏差为为1.10%,1.28%,1.22%,1.24%。酶活力测定结果为:黑豆190.7 U·g~(-1)、自然发酵淡豆豉309.4 U·g~(-1),米曲霉发酵淡豆豉474.9 U·g~(-1),黑曲霉发酵淡豆豉500.0 U·g-1。结论:UV法作为检验淡豆豉中异黄酮含量的一种手段,方法简便、准确、重现性好。单一菌种发酵淡豆豉异黄酮含量和酶活力均高于黑豆和自然发酵淡豆豉。     

大豆加工品大豆黄卷和淡豆豉的质量评价

目的对不同品种大豆(黑豆、青豆、黄豆、褐豆)为原料加工的大豆黄卷和淡豆豉进行含量测定,分析大豆黄卷和淡豆豉的实验室加工品和市售品中异黄酮含量的差异,为大豆黄卷和淡豆豉的制备研究及临床用药提供科学依据。方法以不同品种大豆为原料加工大豆黄卷和淡豆豉,采用紫外分光光度法测定总黄酮含量,使用HPLC法对药材中大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷含量进行测定。采用C_(18)色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-1%醋酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,检测波长260 nm,柱温30℃,流速1.0 ml·min~(-1)。结果黄豆加工成的大豆黄卷中结合型糖苷大豆苷和染料木苷总量最大,含量范围为0.1090%～0.1431%,黑豆加工成的淡豆豉中游离型苷元大豆苷元和染料木素总量最大,含量范围为0.0937%～0.1628%。结论黄豆适宜加工成大豆黄卷,黑豆适宜加工淡豆豉,这也是市售品大豆黄卷和淡豆豉质量参差的原因。     

纯种发酵淡豆豉异黄酮提取物对人乳腺癌细胞MCF-7的生长影响

目的:研究纯种发酵淡豆豉异黄酮提取物在体外对人乳腺癌细胞MCF-7的生长影响。方法:用不同剂量组对体外培养的MCF-7细胞分别干预12、24、36、48、72h后,用MTT法观察其对MCF-7细胞的生长影响。结果:1纯种发酵淡豆豉异黄酮提取物作用MCF-7细胞12、24、36h,其浓度5、10、20、40mg/L(除24h 10mg/L外)均表现出对MCF-7细胞稳定的抑制作用,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05);2纯种发酵淡豆豉异黄酮对人乳腺癌MCF-7细胞抑制作用,在一定浓度、作用时间有依赖关系,与大豆异黄酮抑制作用相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:纯种发酵淡豆豉有明确的抗乳腺癌的作用,其24h IC50为(7.58±1.57)mg/L。     

淡豆豉中豆豉多糖、大豆异黄酮的超声提取及含量检测

目的:提取中药淡豆豉中大豆异黄酮和豆豉多糖,并分别检测两种活性成分的含量。方法:采用超声提取大豆异黄酮和豆豉多糖;聚酰胺薄膜层析定性、HPLC定量检测大豆异黄酮;硫酸-苯酚法显色,在紫外分光光度计下对豆豉多糖的含量进行检测。结果:实验结果表明,聚酰胺薄膜层析法最佳展开剂系统为甲醇∶醋酸∶水(18∶1∶1)。HPLC最佳流动相:甲醇∶乙酸∶水(12∶1∶10),染料木苷、大豆苷元和染料木素在20 min内分离良好。中药淡豆豉含有染料木苷1076.8μg/g、大豆苷元310.48μg/g、染料木素141.93μg/g、豆豉多糖0.91%。结论:精密度实验和加样回收实验均RSD<3%,证明检测方法及结果准确、可靠。     

细菌型淡豆豉发酵底物及前酵、后酵工艺研究

目的:研究细菌型淡豆豉发酵底物及前酵、后酵工艺。方法:分别以黄豆和黑豆为底物,以枯草芽孢杆菌为发酵菌种,以4种异黄酮成分的含量为指标考察淡豆豉前酵和后酵工艺。结果:以黄豆和黑豆为底物前酵过程都出现大豆苷和染料木苷的含量下降,大豆苷元和染料木素含量上升的结果,后酵样品中除黄豆后酵组大豆苷元的含量继续升高外,其他异黄酮成分的含量均有不同程度的下降;发酵后黄豆组结合型糖苷含量低于黑豆组,苷元含量则高于黑豆组。结论:从结合型糖苷的降解和苷元的转化角度分析,生产细菌型淡豆豉不需要后酵过程,以黄豆为底物优于黑豆。     

21种不同产地中药淡豆豉中5种活性成分的对比

目的:对不同产地市售淡豆豉中总异黄酮、大豆皂苷、多糖、总蛋白、纤溶酶的含量进行测定,并进行聚类分析,为淡豆豉的工艺研究和质量评价应用提供科学依据。方法:采用紫外分光光度法,以染料木素为对照品,测定总异黄酮的含量,测定波长为260 nm,染料木素在0.996 4~14.946 mg·L-1呈良好线性关系;采用香草醛-高氯酸比色法,以齐墩果酸为对照品,测定大豆皂苷的含量,测定波长520 nm,齐墩果酸在2.2~11 mg·L-1呈良好线性关系;采用苯酚-硫酸比色法,以葡糖糖为对照品,测定多糖的含量,测定波长490 nm,葡糖糖在0.002 5~0.02 g·L-1呈良好线性关系;采用考马斯亮蓝法测定总蛋白的含量,测定波长595 nm;采用纤维蛋白平板法测定豆豉纤溶酶活力,以尿激酶为对照品,尿激酶在100~10 000 U·mL-1呈良好线性关系。使用SPSS 16.0以淡豆豉中5种有效成分的含量为参数组合对市售淡豆豉进行聚类分析。结果:各地市售淡豆豉主要活性成分含量有明显差异,这21种淡豆豉中总异黄酮的质量分数最低为0.518 mg·g-1,最高为4.511 mg·g-1;大豆皂苷的质量分数最低为0.873 mg·g-1,最高为8.623 mg·g-1;多糖的质量分数最低为0.28%,最高为1.81%;总蛋白的质量分数最低为4.675%,最高为36.133%;7号样品中淡豆豉无纤溶酶活性,其他有活性的产品,纤溶酶活性最低为15.49 U·g-1,活性最高为1 752.08 U·g-1。聚类分析的树状图结果与地理位置有明显的对应关系。结论:21批不同产地淡豆豉中活性成分存在明显差异。     

淡豆豉有效含量测定及对体外二肽基肽酶IV活性的比较

目的 通过淡豆豉有效成分含量及二肽基肽酶Ⅳ活性的比较研究，对挂霜与无挂霜淡豆豉进行品质评价。方法HPLC法对挂霜与无挂霜淡豆豉中大豆苷元、染料木素进行含量测定；建立二肽基肽酶Ⅳ体外模型，检测挂霜与无挂霜淡豆豉对二肽基肽酶Ⅳ的抑制率。结果 挂霜淡豆豉大豆苷元和染料木素的含量、对二肽基肽酶Ⅳ的抑制率均低于无挂霜淡豆豉。结论 表明无挂霜淡豆豉的品质较优。     

正交设计优选大豆中总异黄酮的提取工艺

大豆是由豆科植物大豆[Glycine max(L.)Merr.]的成熟种子,在华北地区分布广泛。大豆可以作为油料经济作物,亦可作为常用中药淡豆豉的原料。大豆含有12种异黄酮,分为游离型的苷元(aglycon)和结合型的糖苷(glucoside)两类[1],经发酵后部分苷转变为苷元[2],两种含量较高的苷元成分为:染料木素(genistein)和大豆素(daidzein)[。1]异黄酮具有增强免疫、抗氧化、延缓衰老、改善心功能状态、抗癌等广泛的药理作用[3-7]。对大豆提取工艺的研究应以异黄酮为主。本实验以大豆中染料木素为质量控制指标,采用正交设计,考察了药材粒度、乙醇浓度、提取…