哮喘时豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位Trk A的表达以及神经生长因子对其影响

目的：探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制。方法：应用免疫组织化学方法检测豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位 NGF 高亲和力受体酪氨酸激酶 A(TrkA),用 Western blot 蛋白印迹方法检测豚鼠肺、脊神经节和脊髓背角 NGF 和 TrkA 的表达。结果：(1)与对照组相比,哮喘豚鼠气道上皮、肺内炎性细胞、血管平滑肌内的神经末梢、C_7～T_5段脊神经节及相应节段脊髓背角内 TrkA 阳性反应产物的平均灰度值均明显降低;哮喘 NGF 抗体组则明显高于哮喘组。(2)哮喘组豚鼠肺、C_7～T_5段脊神经节及相应节段脊髓样品中 TrkA 或 NGF 目标带的 IDV 与内参照 IDV 的比值均明显升高,而哮喘 NGF 抗体组则明显低于哮喘组。结论：NGF 可上调 TrkA 的表达,TrkA 介导的细胞内信号传导系统可能是 NGF 参与哮喘发病的主要途径之一。     

神经生长因子对哮喘豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2表达的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在哮喘豚鼠内脏感觉传入部位的表达及神经生长因子(NGF)对MMP-2的调节作用。方法应用免疫组织化学方法检测豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2免疫反应的变化。用W estern b lot蛋白印迹方法检测豚鼠C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角NGF和MMP-2的表达。用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析。结果①免疫组织化学结果显示:豚鼠C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角内MMP-2阳性免疫反应产物的平均灰度值(0-深色,255-浅色),生理盐水组(175.50±4.67、166.47±6.20)与单纯致敏组(172.63±9.51、165.20±5.14)比较没有显著差异(P>0.05);哮喘组(139.87±4.88、125.93±4.49)明显低于生理盐水组和单纯致敏组(P<0.01);哮喘+NGF抗体组(鼻腔吸入NGF抗体,169.73±6.24、152.37±8.67)则明显高于哮喘组(P<0.01)。②W estern b lot结果显示:与生理盐水组和单纯致敏组比较,哮喘组豚鼠C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中MMP-2和NGF阳性产物的IDV(Integrated Density Value)与β-actin IDV的比值均明显升高(P<0.01),而哮喘+NGF抗体组则明显低于哮喘组(P<0.01),表明NGF可上调豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2的表达。结论C7~T5段脊神经节以及相应节段脊髓背角内的MMP-2可能也参与哮喘的发病过程,NGF诱发MMP-2的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时MMP-2的表达有可能延缓气道重塑的发生,可能是治疗哮喘的新途径。     

NGF对哮喘豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位IL-1β表达的影响

为探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制,本研究应用免疫组织化学方法检测各组豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位白介素-1β(IL-1β)免疫反应的变化。用Western blot方法分别检测各组豚鼠肺、C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角NGF和IL-1β的表达。用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析。免疫组织化学结果显示(染色反应强度用灰度值表示):生理盐水组与单纯致敏组豚鼠IL-1β阳性免疫反应产物的平均灰度值没有显著差异(P>0.05);与这两个对照组相比,哮喘豚鼠气道上皮、肺内炎性细胞、血管平滑肌内的神经末梢、C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓背角内IL-1β阳性反应产物的平均灰度值均明显降低(P<0.01);在哮喘+NGF抗体组(鼻腔吸入NGF抗体),上述部位内IL-1β阳性反应产物的平均灰度值均明显高于哮喘组(P<0.01)。Western blot结果显示:与生理盐水组和单纯致敏组比较,哮喘组豚鼠肺、C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中IL-1β或NGF目标带的IDV(integrated density value)与内参照IDV的比值均明显升高(P<0.01),而哮喘+NGF抗体组上述部位样品中IL-1β或NGF目标带的IDV与内参照IDV的比值均明显低于哮喘组(P<0.01),表明NGF可上调IL-1β的表达。这些结果提示NGF诱发IL-1β的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时下呼吸道和内脏感觉传入部位IL-1β的表达可能是治疗哮喘的新途径。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺内、脊神经节及脊髓背角内蛋白激酶C表达的抑制作用

目的探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺内、C7～T5脊神经节及对应节段脊髓背角内蛋白激酶C（PKC）表达的抑制作用。方法利用免疫组织化学和Western blotting方法。研究哮喘豚鼠肺内、C7～T5脊神经节及对应节段脊髓背角内PKC的免疫反应变化。结果哮喘组豚鼠肺内、C—L脊神经节及对应节段脊髓背角内PKC平均光密度值明显高于对照组（P〈0．01）,而地塞米松组则明显低于哮喘组（P〈0．01）。结论PKC可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠PKC的表达可能是其治疗哮喘的作用机制之一。     

NGF对哮喘豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位TNF-αmRNA表达的上调作用

目的　探讨神经生长因子 (NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制。　方法　应用原位杂交方法结合显微图像分析 ,研究实验性哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位肿瘤坏死因子 αmRNA(TNF αmRNA)表达的变化以及NGF抗体对其的影响。　结果　生理盐水组与单纯致敏组TNF αmRNA的表达没有显著差异 (P >0 0 5 ) ;与这两个对照组相比 ,哮喘豚鼠TNF αmRNA的表达在气道上皮、肺内炎性细胞、C7～T5段脊神经节及脊髓后角内均明显上调 (P <0 0 1) ;在哮喘 +NGF抗体组 ,上述部位内TNF αmRNA的表达明显低于哮喘组 (P <0 0 1)。　结论　NGF诱发TNF α的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一 ,NGF抗体抑制哮喘时下呼吸道和内脏感觉传入部位TNF αmRNA的表达可能是治疗哮喘的新途径。     

实验性哮喘豚鼠内脏感觉传入部位SP免疫反应的研究

用免疫组织化学方法结合显微图像分析 ,观察哮喘豚鼠脊神经节、结状神经节、脊髓和孤束核内 P物质的变化。正常豚鼠 C7～ T5 脊神经节及结状神经节内存在 SP阳性反应细胞 ,其细胞质内充满棕色阳性反应颗粒 ,并可见大量的阳性反应纤维。 P物质免疫反应也见于 C7～ T5 脊髓后角板层 、板层 、中间带外侧核 ,呈点状分布 ,偶见阳性纤维。孤束核内可见大量的 P物质阳性反应。哮喘豚鼠结状神经节、C7～ T5 脊神经节和相应节段脊髓后角、孤束核内 P物质阳性反应的密度明显增多而平均灰度值却明显地低于对照组。上述结果表明 ,哮喘豚鼠内脏感觉传入部位 P物质表达增强 ,提示这些部位的 P物质可能参与哮喘的发病过程     

实验性哮喘时神经生长因子对P物质的上调作用

目的：探讨实验性哮喘时神经生长因子（NGF）对P物质（SP）的调节机制。 方法： 应用放射免疫分析方法检测了NGF缺失时（鼻腔吸入NGF抗体）哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位SP含量的变化。 结果： NGF缺失时哮喘豚鼠气管、支气管、肺、C7-T5段脊神经节及相应节段脊髓后角、结状神经节和孤束核区SP含量明显低于哮喘组和对照组（P<0.01）。 结论： 实验性哮喘时NGF可上调下呼吸道和感觉神经节等内脏感觉传入部位的P物质水平，两者共同参与支气管哮喘的发病过程。     

降钙素基因相关肽在哮喘豚鼠内脏传入系统的定量分析

本文应用放射免疫分析方法研究了实验性哮喘豚鼠与下呼吸道有关的内脏传入系统内降钙素基因相关肽含量的变化 ,藉以探讨降钙素基因相关肽在哮喘发病时的作用机制。结果表明 ,哮喘豚鼠与下呼吸道有关的内脏传入系统 (结状神经节、C7～T5 节段脊神经节和脊髓后角、孤束核等处 )中的降钙素基因相关肽含量明显高于各对照组 ( P<0 .0 5)。本研究提示 ,下呼吸道和肺的内脏传入成分中的降钙素基因相关肽可能参与哮喘发病的病理生理过程。     

实验性哮喘时神经生长因子对神经激肽A的上调作用

目的:探讨实验性哮喘时神经生长因子(NGF)对神经激肽A(NKA)的调节机制。方法: 应用放射免疫分析方法检测了NGF缺失时(鼻腔吸入NGF抗体)哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位NKA含量的变化。结果:NGF缺失时哮喘豚鼠气管、支气管、肺C₇-T₅段脊神经节及相应节段脊髓后角、结状神经节和孤束核区NKA含量明显低于哮喘组和对照组(P＜0.01)。 结论: 实验性哮喘时NGF可上调下呼吸道和感觉神经节等内脏感觉传入部位的神经激肽A水平,二者可能参与支气管哮喘的发病过程。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺内脏感觉传入部位TrkA表达的抑制作用

为了探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺内脏感觉传入系统(C7T5脊神经节及对应的脊髓后角)TrkA表达的影响,我们利用免疫组织化学和Westernblot方法,研究了哮喘豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角TrkA的免疫反应变化。结果显示:哮喘组豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角TrkA表达明显高于对照组(P<0.01),而地塞米松组则明显低于哮喘组(P<0.01)。结果提示TrkA可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠TrkA的表达可能是其治疗哮喘的作用机制之一。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传入系统神经生长因子表达的抑制作用

目的：探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)神经生长因子(NGF)表达的影响。方法：利用免疫组织化学和Westem印迹方法,观察生理盐水组、单纯致敏组、哮喘组和地塞米松组豚鼠肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)NGF表达的变化。结果：哮喘组豚鼠NGF在肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)表达明显高于对照组,而地塞米松组则明显低于哮喘组。结论：NGF可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠NGF的表达可能是其治疗哮喘的机制之一。     

哮喘豚鼠初级传入神经元ERK的表达及NGF的调节作用

目的　探讨细胞外信号调节蛋白激酶 (ERK)在哮喘豚鼠初级传入神经元 (C7 T5脊神经节 )的表达及神经生长因子 (NGF)对ERK的调节作用。方法　利用免疫组织化学结合显微图像分析 ,研究哮喘豚鼠C7 T5脊神经节活化的ERK免疫反应变化。结果　与对照组相比 ,哮喘组豚鼠活化ERK免疫反应在C7 T5脊神经节神经元核内明显上调 (P <0 .0 1) ,其阳性细胞比率明显高于对照组。Anti NGF组豚鼠活化ERK免疫反应在C7 T5脊神经节神经元的核中明显低于哮喘组 (P <0 .0 1)。结论　C7 T5脊神经节神经元活化的ERK可能参与哮喘的发病过程 ,NGF可上调哮喘豚鼠C7 T5脊神经节神经元活化的ERK表达