细胞因子信号转导抑制因子在内毒素耐受大鼠肝组织中的作用

目的 研究内毒素耐受(endotoxin tolerance,ETT)及正常大鼠接受D-胺基半乳糖(D-galactosamine,D-GaiN)/脂多糖(lipopolysacharide,LPS)刺激后肝组织细胞因子信号转导抑制因子(SOCSs)基因表达的异同,探讨内毒素耐受的可能机制.方法 雄性SD大鼠随机分为急性肝功能衰竭模型组(acute liver failure,ALF组)和内毒素耐受组(ETT组).ETT组及ALF组先分别以0.1mg/kg LPS和生理盐水腹腔注射,每日1次,连续5次,于LPS或生理盐水第5次注射24 h后同时腹腔注射D-GaIN 800 ms/kg和LPS 8μg/只,分别在注射D-GaIN/LPS前(0 h)和注射后2.6、12、24和48 h 6个时间点留取大鼠血及肝脏标本.HE染色及透射电镜下观察肝组织病理及超微结构变化;RT-PCR法检测动物肝组织中SOCS1和SOCS3 mRNA表达;采用鲎试剂基质显色法测定血清内毒素水平,ELISA法检测TNF-α水平.结果 ETT组大鼠肝组织病理改变及超微结构变化明显轻于ALF组,其血清内毒素、TNF-α水平明显低于ALF组.内毒素:6 h组分别为1.11±0.38和0.74±0.22,24h组分别为1.12±0.24和0.86±0.21,均P<0.05,12 h组分别为1.88±0.35和0.62±0.16,48 h组分别为1.10±0.13和0.84±0.19,均P<0.01.TNF-α:6 h组分别为86.9±12.6和70.0±12.8,P<0.05,12 h组分别为77.0±18.1和48.8 ±12.8,24 h组分别为63.8±9.2和39.1±5.7,48 h组分别为53.2±8.3和38.2±9.9,均P<0.01.ALF组大鼠肝组织SOCS1和SOCS3 mRNA表达均明显上调,造模后2 h即明显高于对照组,分别于12 h、6 h达峰值,ETT组的SOCS1和SOCS3 mRNA表达较模型组明显上升.SOCS1:6 h组分别为0.955±0.186和1.349±0.390,48 h组分别为0.766±0.145和0.970±0.205,均P<0.05,2 h组分别为0.554±0.164和0.841±0.175,12 h组分别为1.130±0.181和1.888±0.573,24 h组分别为0.990±0.212和1.550±0.439,均P<0.01.SOCS3:6h组分别为0.914±0.054和1.039±0.109,12 h组分别为0.781±0.044和0.863±0.063,均P<0.05,2 h组分别为0.681±0.139和0.898±0.058,24 h组分别为0.700±0.065和0.811±0.055,均P<0.01.结论 内毒素耐受时,大剂量的D-GalN和LPS腹腔注射引起的肝脏损害减轻,内毒素、TNF-α释放减少,可能与肝组织SOCS1、SOCS3的高表达有关.     

细胞因子信号转导抑制因子2的研究进展

细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)是一类与广泛的细胞因子和生长相关因子信号有关的负性调节蛋白家族,特别是通过Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)通路的信号分子,有8个成员:SOCS1~SOCS7和CIS(细胞因子诱导的含SH2区域的蛋白)。其功能涉及到对机体正常组织的分化,器官的发育和细胞的凋亡等。SOCS2为该家族中含SH2结构域的SOCS成员之一,本文着重对其分子的结构、调节机制、生物学功能及其与多个组织系统关系作一综述。     

肝细胞移植联合肝再生增强因子治疗大鼠急性肝功能衰竭的研究

目的 探讨同种异体肝细胞腹腔移植联合肝再生增强因子(augmenter of liver regenration, ALR)对D-氨基半乳糖(D-gal)诱导的急性肝功能衰竭大鼠的治疗作用.方法 采用D-gal诱导大鼠急性肝功能衰竭,诱导后24 h,59只大鼠随机数字表法分成4组.Ⅰ组15只:腹腔注射生理盐水;Ⅱ组15只:经腹腔移植2×107肝细胞, 以后腹腔注射生理盐水;Ⅲ组15只:经腹腔移植2×107肝细胞,同时腹腔注射ALR 50 μg·kg-1·d-1;Ⅳ组14只:腹腔注射ALR50 μg·kg-1·d-1.观察大鼠的存活率、肝脏功能、移植肝细胞存活情况、病理变化.结果 Ⅱ组、Ⅲ组大鼠存活率(46.7%、66.7%)显著高于Ⅰ组(0.0%)(P=0.006;P=0.0002),Ⅲ组(66.7%)与Ⅳ组(14.3%)有显著差异(P=0.008),其他组间无明显差异(P＞0.05).移植后第1、2天Ⅱ组腹水AST高于Ⅲ组(P=0.001), Ⅱ组第1、2天腹水ALT高于Ⅳ组,Ⅱ组、Ⅲ组第1、2天腹水TBil高于Ⅰ组(P＜0.05).Ⅲ组肝脏病理改变轻于其他组.Ⅲ组大鼠腹腔移植的肝细胞存活数多于Ⅱ组.结论 同种异体肝细胞经腹腔移植联合ALR可明显改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率,促进移植肝细胞存活和增殖,促进肝组织及功能恢复.     

细胞因子信号转导抑制因子-3与缺血性脑血管病

SOCS蛋白家族中多个成员参与细胞因子信号内转导的调控,其中,细胞因子信号转导抑制因子-3（SOCS-3）在缺血性脑血管病特别是缺血后再灌注损伤中,对炎症细胞因子的表达起着负性调控的作用。SOCS-3在缺血性再灌注中表达的升高,有利于控制炎症因子的过度表达,防止神经功能损害,本文就SOCS-3与缺血性脑血管病的关系,及其在缺血性再灌注损伤的研究现状做一综述。     

增殖细胞核抗原在急性肝功能衰竭大鼠肝组织中的动态变化

目的:观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在急性肝功能衰竭大鼠肝组织中的动态变化及促肝细胞生长素(hepatocyte growth-promotingfactors,HGF)对PCNA表达的影响.方法:SD大鼠随机分为三组,即:正常对照组、D-氨基半乳糖(D-Galactosamine,D-GalN)组和D-GalN HGF组,以D-GalN1.2g/kg腹腔注射制备大鼠急性肝功能衰竭模型,2h后D-GalN HGF组大鼠每24h腹腔注射HGF 2mg/kg,分别于第1天、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第15天用S-P免疫组织化学技术检测肝组织中PCNA的表达.结果:D-GalN组大鼠肝组织PCNA标记指数(PCNAlabelingindex,PCNA-LI)在模型建立成功后第5天达峰值,以后急剧下降,在第15天时达到正常对照组水平(P＞0.05).D-GalN HGF组大鼠PC-NA-LI峰值于第3天出现,比D-GalN组早,持续时间长,且各时间点的PCNA-LI均明显高于D-GalN组(p＜0.01).结论:急性肝功能衰竭时,残存肝细胞仍有再生能力,但其再生过程受到抑制.HGF可以提高PCNA的表达,从而促进肝细胞的再生.     

细胞因子信号转导抑制因子2在乳腺癌中的表达

目的:检测细胞因子信号转导抑制因子2(supressors of cytokine signaling 2,SOCS2)蛋白在乳腺组织中的表达,探讨SOCS2的表达与乳腺癌临床病理资料之间的关系.方法:构建乳腺癌、癌旁组织及良性病变组织微阵列(tissue microarray);用免疫组织化学S-P法检测171例乳腺癌、18例癌旁乳腺组织、20例乳腺良性病变SOCS2、ER、PR、cerbB2、p53 和 Ki-67的表达.结果:乳腺癌中SOCS2阳性率为57.89%(99/171),癌旁乳腺组织为94.44%(17/18),乳腺良性病变为75%(15/20);乳腺癌组织中SOCS2的表达在不同TNM分期、不同组织学分级、淋巴结有无转移和Ki-67阳性及阴性表达下有显著差异(P＜0.05).结论: SOCS2的表达降低可能与乳腺癌发生和预后不佳相关.     

细胞因子信号转导抑制因子1基因甲基化在卵巢癌中的研究进展

细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)家族由细胞产生,是人体内的一种重要蛋白,与人类疾病有特殊关系。而卵巢癌是妇科恶性肿瘤之一,其病死率高,威胁着女性健康,同时有SOCS基因表达。由于SOCS-1基因在SOCS蛋白家族中占有重要地位,因此可抑制多种细胞因子的信号转导途径。此外,SOCS-1基因在恶性肿瘤细胞中表达减少,其甲基化、突变或缺失对肿瘤的发生、发展起重要作用。且SOCS-1基因的甲基化与卵巢癌的发生、发展有密切联系。因此,可以将SOCS-1基因甲基化作为今后卵巢癌研究的一个新方向。     

细胞因子信号转导抑制因子3在早产胎盘中的表达及临床意义

目的探索细胞因子信号转导抑制因子3在早产胎盘中的表达及临床意义。方法选取2013年4~10月解放军第三〇九医院收治的20例早产妇女作为实验组,20例足月妊娠妇女作为对照组,收集两组胎盘组织。应用Western blot法检测两组胎盘组织中SOCS3分子的表达水平,采用免疫组织化学法检测两组细胞因子白细胞介素(IL)10、肿瘤坏死因子(TNF)α的表达水平。比较2种因子在两组胎盘中的差异表达情况。结果与对照组相比,实验组胎盘组织中SOCS3阳性表达量明显增高(1.09±0.29比0.81±0.22,P<0.05),IL-10阳性表达率明显高于对照组(85.0%比45.0%;P<0.05),而实验组TNF-α表达阳性率则明显降低(25.0%比70.0%,P<0.05)。结论 SOCS3及IL-10在早产胎盘中表达较高,相反TNF-α表达降低,其是可能SOCS3是通过对Th1/Th2的平衡调节,导致了早产的发生重要原因之一。     

微囊化肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的研究

[目的 ]探讨微胶囊包裹肝细胞 (microencapsulatedhepatocyte)腹腔移植治疗急性肝功能衰竭的机制与可行性 ,评价生物膜功能。 [方法 ]D -氨基半乳糖 (D - gal)诱发急性肝功能衰竭大鼠模型 ,分成 4组 :Ⅰ组生理盐水组 ;Ⅱ组空微胶囊对照组 ;Ⅲ组促肝细胞生长素 (hepatocytegrowthfac tor ,HGF)组 ;Ⅳ组微囊化肝细胞组 ,观察 2周存活率、肝功生化指标的变化 ,2周后收集腹腔内微胶囊 ,观察其形态与功能。 [结果 ]Ⅳ组存活率较Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ组有明显改善 (分别为 6 6 .7%、2 0 .0 %、1 3.3%、2 0 .0 % ,P <0 .0 5 ) ,其他组间存活率无显著性差异 ;Ⅳ组自移植后 2 4h起白蛋白 (ALB)、总胆红素 (TBIL)、凝血酶原时间 (PT)较其他组有明显改善 (P <0 .0 5 )。 2周后收集的空微胶囊形态完整 ,微囊内肝细胞部分保持存活。 [结论 ]微囊化肝细胞移植可以明显改善肝功能衰竭大鼠的存活率 ,显著改善肝脏生化功能。生物微胶囊可以有效阻断免疫排斥作用 ,保护移植肝细胞 ,有利于其发挥生物功能。     

心肌营养素-1在急性肝衰竭大鼠中的动态变化

目的观察心肌营养素-1(CT-1)在急性肝衰竭大鼠中的动态变化及意义探讨。方法大鼠腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gal)建立急性肝衰竭模型,在造模后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、120 h、168 h分别留取肝组织,用RT-PCR法检测肝脏CT-1mRNA的表达,并用免疫组织化学方法检测环氧化酶-2(COX-2)蛋白的表达。结果 CT-1在正常大鼠中表达很少,造模后12 h开始表达增多(P0.05),于48 h时达高峰值,随后逐渐下降;COX-2在正常组未见蛋白表达,造模后6 h表达量逐渐增多,至48～72 h时达高峰。结论 CT-1参与了D-Gal诱导的肝衰竭模型的发生发展,有可能为急性肝衰竭的治疗提供一个新的治疗靶点。     

解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠Caspase-8、BID的影响

目的解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植对急性肝衰竭大鼠Caspase-8、Bid的影响。方法将急性肝衰动物模型随机分成模型组、裸肝细胞移植组、微囊化肝细胞移植组、解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植组。造模后24 h、48 h、72 h、120 h和168 h测定ALT、AST,免疫组化法检测Caspase-8、Bid表达。结果解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植组ALT、AST下降,48 h、72 h与裸肝组、微囊组比较差异有统计学意义(P<0.05);解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植组Caspase-8、Bid表达下降,48～168 h较裸肝组、微囊组有统计学意义(P<0.05)。结论解毒活血汤联合微囊化肝细胞移植显著改善肝衰大鼠肝功能及预后。     

不同剂量精氨酸对急性肝衰竭大鼠肝功能的影响

目的：探讨精氨酸对急性肝衰竭大鼠肝功能影响的剂量效应关系。方法：60只健康雄性Wistar大鼠按体重随机分为6组：A正常对照组,B肝衰竭对照组,C精氨酸强化Ⅰ组[0．4g/（kg·d）],D精氨酸强化Ⅱ组[0．8g/（kg·d）],E精氨酸强化Ⅲ组[1．6g／（kg·d）],F精氨酸强化Ⅳ组（3．2g／（kg·d）],观察给药14d后不同剂量精氨酸对肝衰竭大鼠肝功能的影响。结果：肝衰竭大鼠肝功能明显下降,转氨酶升高、血浆蛋白合成下降、凝血酶原时间延长。精氨酸强化后,各组肝功能指标均优于肝衰竭对照组,其中以0．8g／（kg·d）和1．6g／（kg·d）较好。结论：精氨酸剂量为1．6g／（kg·d）时对肝衰竭大鼠安全有效。     

粒细胞集落刺激因子对大鼠急性肝衰竭肝细胞凋亡的影响

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)抑制大鼠急性肝衰竭(ALF)肝细胞凋亡的作用及机制.方法 D-氨基半乳糖(D-GalN)制备SD大鼠急性肝衰竭模型.治疗组皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)50 μg/kg共3 d,安慰剂组皮下注射生理盐水共3 d.建模后观察动物生存率,分别于6 h、12 h、1 d、3 d取肝脏,流式细胞仪检测肝细胞凋亡率,免疫组化法检测肝脏Bcl-2、半胱氨酸蛋白水解酶(caspase)-3表达,图像分析系统半定量分析.结果 治疗组生存率高于安慰剂组(53.3% vs 33.3%,P=0.027).两组肝细胞凋亡率、肝组织Bcl-2、caspase-3表达量均随时间而升高.1 d时治疗组肝细胞凋亡率(29%±7%)低于安慰剂组(44%±12%),差异有统计学意义(P=0.026).治疗组12 h、1 d时肝组织Bcl-2灰度值均低于安慰剂组,差异有统计学意义(分别为152±37 vs 161±7,P=0.012;150±12 vs 159±9,P=0.018),表示Bcl-2表达量高于安慰剂组;治疗组1 d、3 d时肝组织caspase-3灰度值均高于安慰剂组,差异有统计学意义(分别为189.6±4.6 vs 169.6±15.7,P=0.000;184.7±4.8 vs 160.0±5.0,P=0.000),治疗组caspase-3表达量低于安慰剂组.结论 肝细胞凋亡在ALF发病过程中发挥了重要作用.G-CSF通过促进肝细胞Bcl-2表达和减少caspase-3表达,延缓并减少肝细胞凋亡的发生,提高ALF大鼠生存率.     

When the heart kills the liver: acute liver failure in congestive heart failure

Congestive heart failure as a cause of acute liver failure is rarely documented with only a few cases.Although the pathophysiology is poorly understood, there is rising evidence, that low cardiac output with consecutive reduction in hepatic blood flow is a main causing factor, rather than hypotension. In the setting of acute liver failure due to congestive heart failure, clinical signs of the latter can be absent, which requires an appropriate diagnostic approach.As a reference center for acute liver failure and liver transplantation we recorded from May 2003 to December 2007 202 admissions with the primary diagnoses acute liver failure. 13/202 was due to congestive heart failure, which was associated with a mortality rate of 54%. Leading cause of death was the underlying heart failure. Asparagine transaminase (AST), bilirubin, and international normalized ratio (INR) did not differ significantly in surviving and deceased patients at admission. Despite both groups had signs of cardiogenic shock, the cardiac index (CI) was significantly higher in the survival group on admission as compared with non-survivors (2.1 L/min/m² vs. 1.6 L/min/m², p = 0.04). Central venous - and pulmonary wedge pressure did not differ significantly. Remarkable improvement of liver function was recorded in the group, who recovered from cardiogenic shock.In conclusion, patients with acute liver failure require an appropriate diagnostic approach. Congestive heart failure should always be considered as a possible cause of acute liver failure.     

细胞因子信号转导抑制剂3在大鼠静脉移植物中的表达及意义

目的：检测细胞因子信号转导抑制剂3(SOCS3)在大鼠颈外静脉颈总动脉移植物和体外培养的动脉血管平滑肌细胞增殖模型中的表达,探讨其在静脉移植物再狭窄病理过程中的可能作用及机制。方法体内实验分两组,将36只雄性SD大鼠随机分成实验组和对照组,每组18只。实验组采用标准显微外科技术行颈外静脉颈总动脉翻转端吻合,对照组行假手术,分别于术后第1、3、7天取出移植静脉。体外培养的大鼠血管平滑肌细胞用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激,再用大鼠SOCS3基因重组腺病毒(pYrAd-rSOCS3)、对照病毒pYrAd-GFP转染,体外实验分四组：对照组,bFGF组,bFGF+pYrAd-GFP组,bFGF+pYrAd-rSOCS3组。应用Real time-PCR和Western boltting检测白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、信号转导与转录激活因子(STAT3)、磷酸化的信号转导与转录激活因子(P-STAT3)、SOCS3 mRNA和蛋白表达水平。结果体内实验表明,与对照组比较,实验组静脉移植物中IL-6[(3.60±0.51)比(1.00±0.00);(1.52±0.37)比(0.35±0.05)]、MCP-1[(2.08±0.38)比(1.00±0.00);(1.90±0.31)比(0.85±0.17)]、TNF-α[(4.86±0.74)比(1.00±0.00);(1.66±0.30)比(0.29±0.07)]、IL-1β[(2.73±0.52)比(1.00±0.00);(0.74±0.17)比(0.19±0.04)]、ICAM-1[(1.97±0.35)比(1.00±0.00);(1.02±0.39)比(0.21±0.02)]、SOCS3[(1.93±0.38)比(1.00±0.00);(0.82±0.18)比(0.42±0.12)]mRNA和蛋白表达水平以及STAT3[(1.50±0.36)比(0.21±0.05)]、P-STAT3[(1.54±0.39)比(0.37±0.10)]蛋白表达水平均在1周内明显升高(P<0.05或P<0.01)。体外实验结果表明,与对照组比较,bFGF组中上述指标mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与bFGF组比较,bFGF+pYrAd-rSOCS3组中SOCS3 mRNA和蛋白[(5.47±1.03)比(1.37±0.24);(1.79±0.38)比(1.28±0.32)]表达进一步上调(P<0.01、P<0.05),而IL-6[(1.28±0.25)比(1.57±0.31);(1.68±0.39)比(2.36±0.48)]、MCP-1[(1.17±0.23)比(2.08±0.37);(1.25±0.21)比(1.66±0.43)]、TNF-α[(1.37±0.23)比(3.06±0.52);(1.20±0.24)比(1.54±0.31)]、IL-1β[(1.48±0.21)比(1.71±0.19);(1.00±0.24)比(1.49±0.35)]、ICAM-1[(1.34±0.21)比(2.10±0.27);(0.99±0.21)比(1.41±0.32)]mRNA和蛋白表达水平以及STAT3[(0.77±0.13)比(1.30±0.27)]、P-STAT3[(1.18±0.36)比(1.74±0.36)]蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论 SOCS3在静脉移植物病变的早期病理炎性反应中,可能通过抑制其下游信号通路的关键转录因子STAT3的激活及其磷酸化而发挥负向调节作用,可为冠状动脉旁路移植术后静脉移植物再狭窄的理论研究和临床防治提供一种新思路和新靶点。     

子痫前期孕妇血清细胞因子信号转导负调控因子-3、肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-10水平变化的临床价值

目的 研究子痫前期孕妇血清细胞因子信号转导负调控因子(SOCS)3、肿瘤坏死因子(TNF)-α及白细胞介素(IL)-10水平及临床价值.方法 将2012年1月至2013年12月在上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院确诊的40例子痫前期孕妇纳入研究的观察组,同期在上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院分娩的无妊娠并发症的40例孕妇纳入研究的对照组,检测血清中SOCS3、TNF-α、IL-10的含量并分析其相关性.结果 (1)观察组与对照组孕妇血清中SOCS3的mRNA含量分别为38 ±6、100±16;IL-10的mRNA含量分别为41±7、100±15;TNF-α的mRNA含量分别为226±40、100±19;(2)观察组孕妇血清中SOCS3、IL-10的蛋白含量低于对照组孕妇(P＜0.05),TNF-α的蛋白含量高于对照组孕妇(P ＜0.05);(3) SOCS3的mRNA含量和蛋白含量分别与TNF-α的mRNA含量和蛋白含量呈负相关,分别与IL-10的mRNA含量和蛋白含量呈正相关.结论 子痫前期孕妇血清中SOCS3含量显著降低,进而导致抑制Th1型细胞因子TNF-α表达和促进Th2型细胞因子IL-10表达的作用减弱,在疾病的发生过程中发挥重要作用.