TNF-α联合奥沙利铂对胃癌细胞SGC-7901抑制作用的研究

目的:探讨TNF-α联合奥沙利铂对人胃癌细胞株SGC-7901生长抑制、凋亡的影响及其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度的TNF-α、奥沙利铂及两者联合应用对SGC-7901细胞抑制率;采用Hoechst检测SGC-7901细胞凋亡情况。结果:浓度为20、40、80和160μg/mL的奥沙利铂对SGC-7901的细胞生长抑制率为(29.11±0.63)%、(41.05±0.97)%、(47.69±1.03)%和(56.26±0.93)%,均可抑制细胞增殖(P<0.01);浓度为25 mg/L的TNF-α对SGC-7901细胞的生长抑制率为(2.39±0.65)%,抑制作用不明显,浓度为50、100、150 mg/L的TNF-α对SGC-7901细胞的生长抑制率为(4.51±0.86)%、(4.63±0.53)%和(4.75±1.05)%,可抑制细胞增殖(P<0.05);奥沙利铂(20μg/mL)与25、50、100和150 mg/L的TNF-α联合应用时对SGC-7901的细胞生长抑制率为(36.34±0.76)%、(45.51±0.83)%、(51.47±0.67)%和(58.78±0.97)%,与单用TNF-α(100mg/L)或奥沙利铂(20μg/mL)比较,细胞生长抑制率增加(P<0.01);Hoechst检测结果显示,单独应用100 mg/L TNF-α、单独应用20μg/mL奥沙利铂及两者联合应用均有细胞凋亡现象,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01)。结论:TNF-α可增强奥沙利铂对人SGC-7901细胞的促凋亡作用,其机制可能为TNF-α、奥沙利铂分别激活不同的Caspase,并级联和放大有关凋亡信号,因而对细胞凋亡产生了协同作用。     

肿瘤坏死因子-α对肿瘤抑制基因RECK在HepG2细胞中表达的调节作用

目的 探讨肿瘤坏死因子（TNF）-α对人肝癌细胞HepG2肿瘤抑制基因RECK表达的影响，检测核转录因子（NF）-κB在RECK基因表达的调控中的作用。方法 将培养的细胞分为3组，A组用4种浓度的TNF-α（1、5、50、100μg／L）作用人肝癌细胞HepG2细胞株6h，B组用浓度为50μg／L的TNF-α分别作用HepG2细胞1、6、12、24h，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RECK mRNA的表达；C组将NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡硌烷（PDTC，10mol／L）与TNF-α（50μg／L）同时作用以及TNF-α（50μg／L）单独作用于HepG2细胞6h，凝胶滞留电泳实验（EMSA）DNA结合反应检测NF-κB出的活性，RT-PCR和Western blot分别检测RECK基因mRNA和蛋白的表达。明胶酶谱试验检测细胞MMP-9的活性。结果HepG2细胞中RECK基因无表达。TNF-α作用后RECK的表达显著增高，作用呈时间和剂量依赖关系（P〈0．01），TNF-α能激活NF-κB并能显著抑制HepG2细胞MMP-9的活性（P〈0．01），而PDTC能显著的抑制这种作用（P〈0．01）。结论TNF-α能上调RECK基因在肝癌细胞系HepG2中的表达同时抑制细胞MMP-9的活性。而NF-κB可能参与了这一过程。     

金雀异黄素与5-氟尿嘧啶对SGC-7901细胞的抑制作用

目的研究金雀异黄素（genistein，Gen）与5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）对人胃癌细胞SGC-7901的抑制作用。方法采用MTT法检测Gen和5-FU对SGC-7901细胞的抑制作用，流式细胞术检测细胞周期分布，并在透射电镜下观察细胞超微结构改变。结果Gen和5-Fu单用或联合应用对胃癌SGC-7901细胞的生长均有显著的增殖抑制作用，且呈剂量和时间依赖性。两药联合应用时，当药物效应在0．2～0．8时，具有协同或相加作用（CI≤1）；18．8btmol／L的Gen作用后，62．97％的SGC-7901细胞阻滞在G2／M期；8．84μmol／L的5-FU作用后，63．76％的SGC-7901细胞阻滞在s期；3．06μmol／L的Gen与7．96μmol／L的5-Fu联合应用后，67．46％的SGC-7901细胞阻滞在G0／G1期。Gen和5-FU均可诱导SGC-7901细胞凋亡。结论Gen与5-FU通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制胃癌细胞的生长，对胃癌细胞的增殖抑制具有协同作用。     

改良超滤对体外循环后血浆可溶性细胞间黏附分子与肿瘤坏死因子α浓度变化的影响

目的探讨改良超滤在减轻体外循环（CPB）后炎症反应及内皮细胞损伤中的作用。方法将40例在CPB下行心脏直视手术的患者随机分为两组，超滤组（n=20）：在CPB后行改良超滤；对照组（n=20）：不进行改良超滤。两组患者分别于术前、CPB结束、术后4h和术后24h取静脉血，用酶联免疫吸附法测定血浆可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）和放射免疫法测定肿瘤坏死因子α（TNF—α）浓度，并进行比较。结果对照组患者术后4h和24h血浆sICAM-1浓度明显高于术前（P〈0．01）。术前和CPB结束时超滤组sICAM-1与对照组比较差异无统计学意义，术后4h和24h则明显低于对照组（269．6±33．8／μg／Lvs．409．6±37．3／μg／L，245．9±32．2／μg／Lvs．379．3±35．7μg／L；P〈0．01）。CPB结束时和术后4h超滤组TNF—α浓度明显高于术前（P〈0．01），但术后24h基本恢复至术前水平（0．177±0．024μg／Lvs．0．172±0．030μg／L；P〉0．05）。对照组CPB结束时TNF—α浓度明显高于术前（P〈0．01），术后4h和24h浓度有所下降，但仍较术前高（0．264±0．045μg／Lvs．0．174±0．033μg／L，0．218±0．028μg／Lvs．0．174±0．033μg／L；P〈0．05）。结论CPB可诱导炎症反应致内皮细胞损伤或激活，而改良超滤可明显减轻这些不良反应，有利于患者术后的恢复。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡和炎性反应相关基因表达的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对结肠癌细胞凋亡和炎性反应相关基因表达的影响。方法HCT-116细胞经10μg／L和100μg／L重组人类TRAIL蛋白处理后,应用荧光实时定量PCR和试剂盒测定凋亡相关基因（Bcl-2、Bad、caspase-3和-8）和炎性反应相关基因（TNF—α,IL-1β,COX-2）的表达水平。结果经10μg几和100μg／L重组人类TRAIL蛋白孵育处理24h后．HCT-116细胞的凋亡率分别为27．4％和45．9％。同时抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Bad以及凋亡指示基因caspase-3和caspase-8的表达均显著上调。且100μg／L组的上调幅度均高于10μg／L组（P〈0．05）。TRAIL蛋白处理后,炎性反应相关基因TNF-α,IL-1β,COX-2的表达亦显著上升．且100μg／L处理组的上升幅度均高于10μg／L组（P〈0．05）。结论TRAIL重组蛋白能够诱导结肠癌细胞凋亡以及炎性反应的发生。     

靶向沉默SPHK1基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨用小干扰核酸（SmallinterferingRNA,siRNA）靶向沉默神经鞘氨酸激酶1（sDhingosinekinasel,SPHKl）基因敲除后对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法人工化学合成SPHKlsiRNA和对照siRNA,分别转染胃癌SGC-7901细胞。Westernblot法检测SPHKl、Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞术（FlowCytometry,FCM）检测细胞凋亡的变化。结果SPHKlsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,SPHKl蛋白表达明显下调;与对照组相比,SPHKlsiRNA转染组Bcl一2蛋白表达下调了55％（P〈0．01）,Bax蛋白表达差异无统计学意义,Bcl-2／Bax比值下调54％（P〈0．05）;SPHKlsiRNA转染组早期凋亡细胞明显增多（P〈0．01）,晚期凋亡细胞无明显变化。结论SPHKl特异性siRNA可阻断SGC-7901细胞SPHKl蛋白的表达,并通过影响Bcl-2通路诱导细胞凋亡。     

表皮生长因子对肿瘤坏死因子α致HaCaT细胞凋亡的抑制作用

目的了解肿瘤坏死因子α（TNF-α）导致HaCaT细胞凋亡过程中过氧化物酶体增殖物激活受体B（PPAR[3）的表达情况，探讨表皮生长因子（EGF）对HaCaT细胞的保护机制。方法将培养的HaCaT细胞分为正常对照组（不作任何处理）、TNF—α小剂量组（10ng／ml TNF-α处理）、TNF—α大剂量组（20ng／mlTNF-α处理）、EGF＋TNF—α小剂量组、EGF＋TNF—α大剂量组，后2组先用20ng／mlEGF培养4h后，再分别予以10、20ng／ml TNF—α处理。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（easpase．3）荧光检测试剂盒测定caspase-3的活性，噻唑蓝比色法检测细胞存活率。以5、10、20、40ng／ml的EGF处理HaCaT细胞，采用反转录．PCR和蛋白质印迹法检测PPAR[3mRNA及其蛋白的表达。结果与TNF-α小剂量组[（32±6）％]、TNF-ct大剂量组[（57±6）％]比较，EGF＋TNF—α小剂量组、EGF＋TNF-α大剂量组细胞凋亡率[（20±3）％、（28±4）％]明显下降（P〈0．01），caspase-3活性降低、存活率上升（P〈0．01）。20ng／mlEGF处理细胞时，PPAR[3mRNA及其蛋白表达最强。结论EGF在抑制TNF-α导致的HaCaT细胞凋亡的同时，亦增强细胞中PPARβ的表达。     

马钱子对三种软骨细胞凋亡模型的影响

目的：观察中药马钱子对三种软骨细胞凋亡模型的影响。方法：在兔软骨细胞培养体系中分别加入2mmol／L硝普钠（SNP）、2mmol／LSNP＋马钱子、10mol／L全反式维甲酸（ATRA）、10mold／L ATRA＋马钱子；在人胚胎软骨细胞培养体系中加入30ng／L肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、TNF—α＋马钱子，各组培养24h后，采用Annexin V／PI双参数法对软骨细胞凋亡进行定量检测。结果：软骨细胞在加入SNP、ATRA、TNF—α发生凋亡时，加入马钱子能降低SNP、ATRA诱导的软骨细胞凋亡率（P〈0．01，P〈0．05），但对TNF—α诱导的软骨细胞凋亡，无明显抑制作用（P〉0．05）。结论：中药马钱子对部分软骨细胞凋亡有一定抑制作用。     

BH3-only在奥沙利铂诱导结肠癌细胞凋亡中的作用

目的研究BH3-only基因表达在奥沙利铂诱导人结肠癌细胞株凋亡中的作用及其机制。方法采用不同浓度（0．3、0．6、1．25、2,5、5、10和20mg／L）奥沙利铂处理人结肠癌细胞株SW480及HT29,应用MTT检测细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测凋亡情况;荧光定量PCR检测BH3-only基Bim和PUMA表达。结果不同浓度奥沙利铂分别作用于结肠癌细胞SW480后,出现不同程度的细胞生长抑制作用,呈剂量依赖性。5mg／L和10mg／L浓度的奥沙利铂作用于SW480细胞24h后,细胞凋亡率分别为（4．87±0．55）％和（12．10±1．04）％,作用48h后分别为（11．47±0．85）％和（30．07±2．01）％,作用72h后分别为（28．99±2．12）％和（38．32±3．15）％,均显著高于相应时间点对照组细胞的凋亡率[（0．30±0．10）％、（0．40±0．10）％和（0．50±0．20）％,均P〈0．01]。同时Bim和PUMAmRNA表达水平也显著高于对照组（P〈0．05）。而同样处理的HT29细胞其生长抑制率、细胞凋亡率及Bim和PUMAmRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论奥沙利铂具有抑制结肠癌细胞株SW480生长并诱导其凋亡的作用,其机制可能与促凋亡相关基因BH3-only（Bim和PUMA）表达增强有关。     

异丙酚对肿瘤坏死因子-α诱导小鼠脊髓神经元凋亡的影响

目的研究异丙酚对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导小鼠脊髓神经元凋亡的影响。方法脊髓神经元取自孕14d胎龄小鼠的胎鼠，于含B27的神经细胞培养基中培养7d后，随机分为6组：对照组（Con组）；50μmol／L异丙酚组（P50组）；TNF-α组（TNF-α组）；25μmol／L异丙酚＋TNF-α组（P25＋TNF-α组）；50μmol／L异丙酚＋TNF-α组（P50＋TNF-α组）；100μmol／L异丙酚＋TNF-α组（P100＋TNF-α组），各组中加入相应终浓度的异丙酚孵育30min，再加入TNF-α至终末浓度为2000U／ml，培养24h后，采用碘化丙锭／Hoechst 33342双染法检测细胞凋亡，计算细胞凋亡率，采用免疫细胞化学方法测定Bcl-2表达。结果与Con组比较，TNF-α组神经元凋亡率升高，Bcl-2表达降低（P〈0．01），不同浓度异丙酚预先给药可减弱TNF-α诱导的上述改变（P〈0．05）。结论异丙酚可抑制TNF-α诱导小鼠脊髓神经元的凋亡，其机制与上调Bcl-2表达有关。     

RNA干扰和洛拉曲克对结直肠癌LOVO细胞胸苷酸合成酶表达及细胞增殖的影响

目的探讨下调胸苷酸合成酶（Ts）基因以及化疗药洛拉曲克对人结直肠癌LOVO细胞胸苷酸合成酶表达水平以及对细胞生长、凋亡的影响。方法构建针对人Ts基因的小分子干扰RNA（siRNA）和阴性对照,转染至LOVO细胞,利用RT—PCR和Westernblot技术观察沉默TS基因后其基因和蛋白表达水平的变化,MTF法检测细胞增殖情况;另联合洛拉曲克作用于LOVO细胞,观察两者对LOVO细胞的TS蛋白表达和细胞生长的影响。结果转染TSsiRNA后,LOVO细胞TSmRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组,细胞增殖速度亦低于对照组（均P〈0．05）。TSsiRNA联合洛拉曲克组细胞IC50值为（1．46±0．25）μm01／L,而阴性对照组和单用洛拉曲克组的IC50值分别为（6．81±0．31）μmol／L和（6．47±0．43）μmol／L。TSsiRNA联合洛拉曲克作用于细胞36h后。细胞凋亡指数为（62．12±0．89）％,高于单用TSsiRNA和洛拉曲克[（21．56±0．67）％和（40．51±0．83）％．均P〈0．05]。结论TSsiRNA可以下调人LOVO细胞中TS基因和蛋白的表达,使细胞生长速度减慢,凋亡增加,并可以增强洛拉曲克的药物敏感性。     

基质细胞衍生因子-1α对人前列腺癌PC-3细胞系失巢凋亡的影响

目的：探讨基质细胞衍生因子-lα（stromal cell-derived factor-lα,SDF-lα）对人前列腺癌PC-3细胞失巢凋亡的影响。方法：悬浮培养诱导细胞失巢凋亡,使用0μg／L、50μg／L、100μg／L的SDF-1α作用于悬浮培养的PC-3细胞;天后,采用CCK8法检测PC-3细胞增殖活性变化;Western-blot方法检测促凋亡蛋白Bmf及抗凋亡蛋白Bcl-xl表达变化。结果：PC-3细胞悬浮培养3天后,细胞存活率为（25．19±0．43）％,提示大部分悬浮培养的细胞发生失巢凋亡;50μg／L、100μg／L的SDF-α处理后,与对照组相比,细胞存活率提高,分别为（37．60±6．24）％（P〈0．05）和（33．66±5．51）％（P〉0．05）;悬浮培养的PC-3细胞经SDF-lα处理后,其促凋亡蛋白Bmf表达减低;抗凋亡蛋白Bcl-xl表达增高。结论：SDF-lα可抑制人前列腺癌PC-3细胞发生失巢凋亡,其机制可能与下调Bmf和上调Bcl-xl蛋白表达相关。     

尾型同源盒基因2过表达对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的影响

目的探讨尾型同源盒基因2（Cdx2）过表达对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP的多药耐药性的影响。方法将SGC7901／DDP细胞分为实验组[Cdx2过表达重组慢病毒载体（pCMA-Cdx2-HA）处理]、空载体组[慢病毒载体（pCMA-HA）处理]、对照组（不做处理）3组。MTT法检测各组SGC7901／DDP细胞对化疗药物的敏感性;流式细胞仪检测各组SGC7901／DDP细胞阿霉素的泵出蓄积量、细胞周期分布及凋亡情况;Westernblot技术进一步检测Cdx2蛋白和多药耐药基因1（MDRl）的蛋白表达水平。组间比较采用方差分析。结果SGC7901／DDP细胞感染慢病毒载体72h后,转染效率达90％以上。实验组Cdx2蛋白的相对表达量为0．374-0．06,较空载体组的0．12±0．02和对照组的0．11±0．03明显升高,3组比较,差异有统计学意义（F=82．37,P〈0．05）。实验组SGC7901／DDP细胞对阿霉素、5．氟尿嘧啶和顺铂的半数凋亡浓度分别为（1．10±0．08）mg／L、（4．81±0．12）mg／L、（3．81±0．15）mg／L,均高于空载体组的（0．59±0．05）mg／L、（3．71±0．14）mg／L、（2．20±0．15）mg／L和对照组的（0．63±0．04）mg／L、（3．92±0．15）mg／L、（2．92-4-0．11）mg／L,3组比较,差异有统计学意义（F=158．75,98．06,188．78,P〈0．05）。实验组阿霉素的泵出率为18．20％±0．12％,高于空载体组的7．22％±0．09％和对照组的8．79％4-0．11％,3组比较,差异有统计学意义（F=146．31,P〈0．05）。实验组G．期细胞的比例为52．2％±4．4％,明显低于空载体组的62．0％±5．O％和对照组的67．8％±3．3％;实验组S期的细胞比例为40．4％±1．5％,明显高于空载体组的25．6％±2．O％和对照组的21．8％±1．3％,3组细胞G．期和S期比较,差异均有统计学意义（F=17．08,236．83,P〈0．05）。实验组细胞凋亡率为7．6％±1．3％,明显低于空载体组的11．1％±1．1％和对照组的10．8％±1．0％,3组比较,差异有统计学意义（F=16．29,P〈0．05）。实验组中MDRl蛋白的表达量为1．854-0．18,高于空载体组的1．124-0．08和对照组的1．024-0．09,3组比较,差异有统计学意义（F=76．22,P〈0．05）。结论Cdx2基因的过表达可降低胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对化疗药物的敏感性,降低化疗药物在胃癌细胞内的蓄积浓度,增强胃癌多药耐药细胞的耐药性。     

核因子κB抑制剂对缺血再灌注皮瓣TNF-α和ICAM-1表达的影响

目的观察缺血再灌注（I／R）期间，皮瓣肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（1CAM-1）表达及核因子κB（NF—κB）活性抑制剂的影响。方法雄性Wistar大鼠27只，随机分为对照组（A组）、I／R组（B组）及吡咯烷二硫氨基甲酸酯（PDTC）处理组（C组）。制备右下腹岛状皮瓣I／R模型。C组于再灌注前及早期，各静脉注射PDTC 300mg／kg。逆转录-聚合酶链式反应法检测皮瓣再灌注2、6h TNFα、ICAM-1 mRNA表达。测定再灌注12h皮瓣髓过氧化物酶活性（MPO）并行组织学观察。结果B组再灌注2、6h TNF—α、ICAM-1表达较A组明显增加（P〈0．01）。C组再灌注2、6hTNF—α、ICAM-1表达明显低于B组（P〈0．01，P〈0．05）；再灌注12h，组织MPO活性及中性粒细胞浸润、水肿情况明显减轻。结论再灌注早期炎症介质表达增加在皮瓣I／R损伤中起重要作用。NF—κB抑制剂可下调TNF—α和ICAM-1转录表达，明显减轻皮瓣I／R损伤。     

二甲双胍对胃癌细胞株增生及CyclinD1表达的影响

目的观察二甲双胍在体外对人胃癌细胞株SGC-7901生长的作用,并初步探讨其作用机制。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,MTT法测二甲双胍在不同浓度和不同作用时间对胃癌细胞增生的影响;Westernblot法检测二甲双胍对胃癌细胞CyclinD1表达的影响。结果MTT法结果显示：用不同浓度（50mmol／L、100mmol／L）的二甲双胍处理胃癌细胞SGC-7901在24h、48h、72h后,50mmol／L二甲双胍对于胃癌细胞生长抑制率分别为32．93％、48．64％和61．40％,100mmol／L二甲双胍对于胃癌细胞生长抑制率分别为35．34％、75．4J4％和88．30％,不同浓度的二甲双胍对于胃癌细胞生长抑制率与对照组相比具有显著性差异（P〈0．05）,100mmol／L二甲双胍对于胃癌细胞生长抑制与50mmol／L二甲双胍对于胃癌细胞生长抑制率相比具有显著性差异（P〈0．05）二甲双胍呈时间、浓度依赖性抑制胃癌细胞的增生。胃癌细胞高表达CyclinD1,Westernblot检测表明二甲双胍能显著降低CyclinD1蛋白的表达,且呈一定时间、剂量依赖性。结论二甲双胍可以下调胃癌细胞株SGC-7901CyclinD1的表达,抑制胃癌细胞的增生。     

NS-398和DHA联合抑制β-eatenin、c-mye对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的研究选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂NS-398和二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）联合对胆管癌细胞QBC939凋亡的影响及机制。方法体外培养胆管癌QBC939细胞,设立NS-398组、DHA组、联合组和空白组,将0,25,50,100,150,200μmol／L的NS-398和0,15,30,45,60,75μg／ml的DHA分别联合作用于QBC939细胞;应用CCK8法检测QBC939细胞的生长抑制率：采用流式细胞术检测细胞凋亡：应用实时荧光定量PCR、Western blot和ELISA检测细胞中β-catenin和c-myc的表达。结果NS-398和DHA在体外均能抑制QBC939细胞生长,NS-398为100pomol／L联合DHA为45μg／ml作用后,细胞生长抑制率达90％（F=5．85,P〈0．05）,二者联合能明显促进QBC939细胞凋亡（F=8．16,P〈0．01）。实时荧光定量PCR、Western blot和ELISA实验均显示联合能明显抑制β-catenin（F=7．61,P〈0．01）、（F=7．75,P〈0．01）、（F=8．17,P〈0．01）和c-myc（F=7．92,P〈0．01）、（F=8．76,P〈0．01）、（F=8．12,P〈0．01）表达。结论NS-398和DHA联合能明显抑制QBC939细胞生长,促进早期凋亡,二者联合对QBC939细胞生长的抑制作用可能是通过抑制β-catenin和c-myc的表达,促进细胞早期凋亡。     

交感神经递质NE对内毒素诱导大鼠kupffer细胞TNF-α/IL-1β表达的影响

目的探讨交感神经递质去甲肾上腺素对体外培养大鼠kupffer细胞TNF-α、IL-1β炎症相关细胞因子表达的影响。方法分离大鼠kupffer细胞体外分三组培养,经体外培养48h后,给予外源性内毒素（LPS10μg／m1）刺激,同时给予不同浓度的去甲。肾上腺素（0．1μmol／L～10μmol／L）分别作用12h,运用定量逆转录多聚酶链反应检测各处理组TNF-α和IL-1β mRNA的表达,ELISA检测细胞培养上清TNF-α IL-1β蛋白的表达。结果同时给予LPS（10μg/ml）刺激和去甲肾上腺素（1μmol／L及10μmol／L）作用后,kupffer细胞培养上清TNF-α和IL-1β蛋白较LPS组显著增高（P〈0．05）;TNF-α mRNA表达分别较LPS组增加50．9％（P〈0．05）和59．1％（P〈0．05）;IL-1β mRNA较LPS组表达增加53．7％（P〈0．05）和57．8％（P〈0．05）。结论应激浓度的去甲肾上腺素能增加内毒素诱导大鼠kupffer细胞TNF-α、IL-1β表达,具有促炎效应。     

复方苦参注射液诱导胃癌细胞凋亡的机制

目的探讨复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养胃癌细胞系SGC-7901，四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定药物对SGC-7901细胞生长的抑制作用；透射电镜下观察肿瘤细胞的超微结构变化；应用流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡情况和Fas、FasL蛋白的表达；分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3活性的变化。结果不同浓度复方苦参注射液对SGC-7901细胞生长均有一定的抑制作用。0．5g／L、1．0g／L和1．5g／L复方苦参注射液组SGC-7901细胞凋亡率分别为39．80％、58．11％和79．00％，呈明显的量效关系；复方苦参注射液组以早期凋亡细胞为主，氟尿嘧啶对照组以晚期凋亡细胞为主。Fas蛋白表达及FasL蛋白表达与凋亡均呈显著正相关：Fas蛋白表达及FasL蛋白表达之间呈显著正相关。复方苦参注射液组caspase．3酶活性随着药物浓度而升高，且酶活性变化与细胞凋亡率变化呈正相关。结论复方苦参注射液可有效诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡，其机制可能与上调Fas／FasL蛋白表达、激活caspase-3酶有关。     

p38蛋白激酶在小肠移植后肠黏膜上皮细胞凋亡机理中的作用

目的 探讨p38蛋白激酶（p38 MAPK）在小肠移植早期排斥反应中肠黏膜上皮细胞凋亡机理中的作用。方法 选用近交系SD和Wistar大鼠进行节段性小肠移植,实验分3组：同基因移植组（Wistar→Wistar组）、异基因移植组（SD→Wistar组）和异基因移植加环孢素A组（SD→Wistar＋CsA组）。分别于移植术后1、3、5及7d采集移植肠管行病理学检查排斥反应,TUNEL法检测凋亡细胞,并行Western—blotting测定p38MAPK表达;同时,ELIsA法测定血清TNF—α活性。结果 SD→Wistar组肠黏膜上皮细胞发生轻、中、重度排斥反应中存在细胞凋亡,凋亡细胞数随排斥反应的加重而增加（P〈0．01）;Wistar→Wistar组排斥反应轻微,凋亡细胞数无明显变化（P〉0．05）;SD→Wistar＋CsA组随着CsA的应用,排斥反应逐渐得到控制,且凋亡细胞数也随着减少。SD→Wistar组及sD→Wistar＋CsA组的血清TNF-α随移植肠管上皮细胞凋亡的轻重而发生相应的变化（P〈0．01）。p38 MAPK在SD→Wistar组随凋亡细胞数增加而表达加强（P〈0．01）,Wistar→Wistar组p38 MAPK表达无明显变化（P〉0．05）,在SD→wistar＋CsA组随凋亡细胞数而发生相应的变化（P〈0．01）。小肠移植早期排斥反应中肠黏膜上皮细胞凋亡现象与p38MAPK呈正相关（r=0．875,P〈0．01）,血清TNF-α与移植肠上皮细胞凋亡呈正相关（r=0．837,P〈0．01）,血清TNF-α与p38 MAPK亦呈正相关（r=0．826,P〈0．01）。结论 大鼠小肠移植排斥反应中存在肠黏膜上皮细胞凋亡现象,p38 MAPK参与细胞凋亡信号转导过程并起重要作用。     

核转录因子抑制剂对重症急性胰腺炎的影响

目的 探讨核转录因子（NF-κB）抑制剂对重症急性胰腺炎（SAP）的影响。方法 将72只Wistar大鼠随机均分为6组：sham组、SAP组、吡咯烷二硫氨基甲酸酯（PDTC）I组（100mg／kg体重）、PDTCⅡ组（25mg／kg体重）、PDTCⅢ组（10mg／kg体重）和丹参干预组。各组于造模6h后，测定血清淀粉酶、脂肪酶、TNF-α和IL-10含量；检测胰腺细胞NF-κB激活水平及凋亡情况；对胰腺组织进行病理学评分。结果 与SAP组比较。PDTC干预各组和丹参组内的血清淀粉酶、脂肪酶和TNF-α含量、胰腺组织NF-κB活性水平和病理学评分明显降低（P〈0．05），胰腺细胞凋亡指数显著升高（P〈0．05），血清IL-10含量无显著性变化；PDTC各组和丹参组组间相互比较，各项指标差异无统计学意义。结论 应用NF-κB抑制剂可有效降低SAP血清中TNF-α的水平，而不影响IL-10含量；减少胰酶及炎症因子的持续释放；促进胰腺细胞凋亡；改善SAP病情。