当归补血汤含药血清对TNF-α诱导HFLS-RA细胞增殖的影响

目的 观察当归补血汤含药血清对TNF-α诱导人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)增殖的影响.方法 体外培养HFLS-RA细胞,采用TNF-α及不同浓度含药血清对细胞的生长进行干预,通过MTT法检测含药血清对TNF-α诱导HFLS-RA增殖的影响,ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-10、IL-17、...     

当归拈痛汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞自噬与凋亡的影响

目的:研究当归拈痛汤对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞自噬与凋亡的影响,进一步探讨当归拈痛汤防治RA的相关机制.方法:收集临床RA患者的滑膜组织,分离出成纤维样滑膜细胞(FLS)并进行培养,将RA-FLS细胞分为4组,分别为空白血清组、当归拈痛汤含药血清低、中、高剂量组.通过划痕实验,transwell侵袭实验检测...     

中药及其有效成分影响类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡的研究进展

成纤维样滑膜细胞是类风湿关节炎滑膜组织中最主要的细胞,在类风湿关节炎发病中起关键作用,是进行类风湿关节炎病理机制及治疗药物的相关药理研究的主要载体之一。近年来,针对中药及其有效成分对成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡的影响开展了大量研究,部分研究并对抑制增殖和诱导凋亡的相关作用机制进行了探讨。通过综述近年研究的成果,以期为类风湿关节炎的基础研究、新药开发及临床治疗提供思路和借鉴。     

金乌健骨胶囊对类风湿关节炎滑膜细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:探讨金乌健骨胶囊对类风湿关节炎成纤维样滑膜(RA-FLS)细胞增殖、迁移及凋亡的影响.方法:采用组织块贴壁法分离培养RA-FLS细胞,HE染色和免疫化学法鉴定细胞.根据含药血清比例将细胞分为空白对照组,兔血清对照组,金乌健骨胶囊含药血清高、中、低剂量组和来氟米特对照组.CCK-8法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁...     

痹清饮对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的干预作用

目的:探讨痹清饮对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖分化的影响。方法:分离培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞,不同浓度痹清饮作用后,与白芍总苷对照,MTT法测定细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞周期。结果:痹清饮能显著抑制成纤维滑膜细胞增殖分化,并且抑制作用呈明显的量效关系。结论:痹清饮可抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖,促进凋亡。     

补肾利湿法中药复方含药血清对痛风性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞NALP6信号转导通路调控作用机制的研究

目的 从细胞水平探讨补肾利湿法中药复方含药血清对痛风性关节炎（GA）大鼠成纤维样滑膜细胞中嗜中性白细胞碱性磷酸酶6(NALP6)信号转导通路的调控作用。方法 在大鼠成纤维样滑膜细胞培养基中加入尿酸钠微晶体刺激建立痛风性关节炎模型,将筛选出的最适合大鼠滑膜细胞生存的含药血清加入培养基中进行细胞实验。大鼠成纤维样滑膜细胞共分为空白组（正常滑膜细胞）、模型组（滑膜细胞+尿酸钠）和治疗组（滑膜细胞+尿酸钠+含药血清）3组,各组进行相应的干预。采用RT-PCR法检测滑膜细胞中NALP6 mRNA表达,Western blot法检测滑膜细胞中NALP6蛋白、核因子κB(NF-κB)蛋白、核因子κB抑制蛋白（IκB）表达,比色法检测滑膜细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)活性,ELISA法检测各组滑膜细胞中白介素-1β(IL-1β)含量的变化。结果 与空白组比较,模型组中NALP6 mRNA的表达上调,NALP6、NF-κB蛋白表达上调,IκB蛋白表达下调,Caspase-1活性提高,IL-1β含量升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较,治疗组大鼠成纤维样...     

通痹灵总碱对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响

目的：探讨通痹灵总旃对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响。方法：分离培养类风关患者滑膜成纤维样细胞，IL—ID刺激，不同浓度通痹灵总碱作用后，MTT法测定细胞增殖率。结果：通痹灵总碱能显著抑制滑膜成纤维样细胞增殖，并且抑制作用呈明显的量效关系。结论：通痹灵总碱可抑制类风关滑膜成纤维样细胞增殖。     

通痹灵总碱对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响

目的：探讨通痹灵总旗对类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞增殖的影响。方法：分离培养类风关患者滑膜成纤维样细胞，IL-1D刺激，不同浓度通痹灵总碱作用后，MTT法测定细胞增殖率。结果：通痹灵总碱能显著抑制滑膜成纤维样细胞增殖，并且抑制作用呈明显的量效关系。结论：通痹灵总碱可抑制类风关滑膜成纤维样细胞增殖。     

海藻多糖对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响及机制研究

目的 探讨海藻多糖对体外培养的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synovialcytes,FLS)凋亡的影响及机制。     

苗族药金乌健骨汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞NF-κB p65,IKK-α及IKK-β表达的影响

目的:探讨苗族药金乌健骨汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞核转录因子-κB p65(NF-κB-p65),IκB激酶-α(IKK-α)及IκB激酶-β(IKK-β)表达水平的影响,并探讨其作用机制。方法:通过细胞培养,在体外构建类风湿关节炎滑膜成纤维细胞模型,将3~5代细胞随机分为6组,分别是空白组、苗族药金乌健骨汤含药血清冻干粉高、中、低剂量(28.8,9.6,3.2 g·kg~(-1))组、雷公藤多苷(3 mg·kg~(-1))组和泼尼松(1.5 mg·kg~(-1))组,用各药物含药血清冻干粉对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞进行干预24 h后,观察类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的形态学改变,采用流式细胞仪检测各组类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中NF-κB p65,IKK-α及IKK-β蛋白表达水平。结果:与空白组比较,类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡随着金乌健骨汤浓度的升高,凋亡率明显升高(P0.05),类风湿关节炎滑膜成纤维细胞中IKK-α,IKK-β及NF-κB p65的表达水平明显下调(P0.05)。结论:苗药金乌健骨汤能够诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡,下调NF-κB p65,IKK-α及IKK-β的表达水平。     

青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及基质金属蛋白酶-3表达的影响

目的观察青藤碱对体外培养类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖以及基质金属蛋白酶-3（MMP-3）mRNA含量的影响。方法培养人成纤维样滑膜细胞，分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组，经青藤碱干预后，用四甲基偶氮唑蓝法测定细胞增殖情况，用半定量RT-PCR方法检测成纤维细胞中MMP-3mRNA的表达。结果经青藤碱干预后的人成纤维样滑膜细胞的增殖率受到显著抑制（P〈0．05），其中高剂量组的改变差异尤为显著（P〈0．01）。MMP-3的mRNA表达水平较之空白对照组有显著下降（P〈0．05），且高剂量纽的差异尤为显著（P〈0．01）。结论青藤碱可以抑制类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞的增殖并下调MMP-3的表达，推断这可能是青藤碱治疗类风湿关节炎的一种机理。     

补肾方、柔肝方与化痰方对膝骨关节炎滑膜细胞增殖及COMP表达的影响

目的：探讨补肾方、柔肝方和化痰方对膝骨关节炎滑膜细胞增殖及COMP表达的影响。方法：补肾方、柔肝方和化痰方含药血清培养早期和晚期滑膜细胞，MTS／PMS法测定OD值，hCOMP定量试剂盒测定COMP含量。结果：通过MTS／PMS法观察确定补肾方、柔肝方和化痰方含药血清培养滑膜细胞观察点在第5～7天；三方培养滑膜细胞OD值低于正常血清对照组（P≤0．05）。结论：补肾方、柔肝方与化痰方可以抑制体外培养早期和晚期膝骨关节炎患者滑膜细胞增殖，柔肝方可以降低体外培养滑膜细胞分泌液中COMP的浓度。     

清络通痹颗粒对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及RANKL表达的影响

目的 观察清络通痹颗粒(QLT)含药血清对类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖及核因子κB受体活化子配体(RANKL)表达的影响.方法 取3～5代FLS,MTT比色法检测含药血清对FLS增殖的影响,RTPCR检测含药血清对FLS RANKL表达的影响.结果 QLT大剂量含药血清作用72 h,RA患者FLS增殖受到抑制,对RANKL表达有抑制作用.结论 QLT大剂量含药血清可抑制RA患者FLS的异常增殖,并下调RANKL的表达,这可能是清络通痹颗粒治疗RA的重要机制之一.     

中药血清药理学研究中含药血清添加量问题的商榷

中药复方血清药理学体外实验研究中，含药血清添加量是实验中不可忽略的问题，在文献报道中含药血清的添加量是多样的，此实验中同样看到高浓度血清对细胞毒性作用，并就体外实验含药血清添加量的确立进行讨论。     

清络通痹颗粒对类风湿关节炎患者RANKL表达的影响

目的:观察清络通痹颗粒(QLT)含药血清对类风湿关节炎(RA)患者核因子κB受体活化子配体(RANKL)表达的影响。方法:原代培养RA患者成纤维样滑膜细胞(FLS),取3-5代FLS分组加药,收集上清及细胞;分离RA患者外周血淋巴细胞(PBL),分组加药,收集上清及细胞。运用ELISA法检测上清中RANKL的表达及运用实时定量RT-PCR检测细胞RANKL的表达。结果:ELISA检测结果表明QLT含药血清作用后,淋巴细胞及滑膜细胞上清中RANKL含量降低。实时定量RT-PCR结果表明QLT含药血清作用后,淋巴细胞及滑膜细胞RANKL表达降低。结论:QLT含药血清可抑制RA患者RANKL的表达,并减少RANKL的分泌,这可能是清络通痹颗粒治疗RA的重要机制之一。     

密骨颗粒对成骨样细胞增殖及IGF-I活性影响的实验研究

依据中医"肾主骨"的理论,通过运用中药血清药理学和建立成骨样细胞(UMR106)体外培养模型,采用MTT法和EIA法,检测补肾中药密骨颗粒含药血清对成骨样细胞增殖和IGF-I的活性,阐明补肾中药对肾虚骨质疏松症的防治机理.结果表明密骨颗粒含药血清组的成骨样细胞数目和IGF-I的活性明显高于正常组(P均＜0.05);密骨颗粒与骨疏康颗粒含药血清之间IGF-I活性无明显差别(P＞0.05);密骨颗粒与骨疏康颗粒含药血清都有促进体外培养成骨样细胞的增殖和IGF-I的活性的作用,而且呈剂量依赖性.从而为"肾主骨"、"气能生精"的理论提示出客观化、科学化依据;密骨颗粒含药血清可以促进成骨样细胞的增殖和IGF-I的活性,而达到防治肾虚骨质疏松症的目的.     

中药血清药理学实验方法研究进展

中药血清药理学是研究和探索中药药效作用的一种体外实验方法 ,对成分复杂的中药及粗提物制剂的药理实验提供了正确性、真实性和可靠性的保证 ,引起了医药界人士的广泛关注。由于含药血清与机体内环境相一致 ,从而排除了体内各种因素对中药及其制剂有效成分的影响 ,其科学性、可行性使中药药理研究易于深入到细胞分子水平 ,可对成分不明或复方中药制剂进行药效学和药动学研究。目前血清药理研究的成果及水平呈直线上升的趋势 ,实验报道越来越多。血清药理学实验的步骤很多 ,在许多重要环节上如处理不当 ,可使实验结果表现出假阳性或假阴性 ,…     

最佳中药含药血清浓度的筛选方法研究现状

基于血清药理学为理论基础的体外细胞实验是研究中药药效机制的一种常见的研究方式，实验过程中筛选中药含药血清最佳干预浓度是整个实验的关键步骤。中药含药血清若稀释太过，或浓度太大，均可能导致出现假阴性或假阳性结果，最佳中药含药血清体积分数也可以减少后续实验分组数量，减少操作失误，因此筛选最佳干预血清体积分数对于研究中药药效机制的体外细胞实验具有重要意义。但筛选方法目前尚无统一的标准，查阅近20年国内外文献，从中药灌胃剂量、采血时间、血清稀释程度3个方面进行整理及分析，进而总结出最佳含药血清体积分数的筛选方法，为中药药效机理研究提供指导方向。筛选方法主要有“同剂量灌胃，同采血时间，不同体积分数”“不同剂量灌胃，同采血时间，同体积分数”“同剂量灌胃，不同采血时间，同体积分数”“不同剂量灌胃，不同采血时间，不同体积分数”“血清冻干粉干预法”“血清模拟西药体积分数梯度法”“纯血清干预法”。前2种筛选方法是目前相关实验研究较为常用的方式，以上筛选方法各有利弊，研究者应该根据实验的具体需求及实际情况进行合理选择。     

竹节参总皂苷对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖抑制作用的研究

目的研究竹节参总皂苷（TSPJ）对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞增殖的影响。方法酶消化法进行胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞的原代培养，MTT法检测TSPJ对滑膜细胞增殖的影响，流式细胞仪检测TSPJ对滑膜细胞凋亡率的影响。结果TSPJ可明显抑制体外培养的CIA大鼠滑膜细胞的增殖，TSPJ可诱导滑膜细胞凋亡。结论TSH可有效抑制体外培养的胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖，这可能是其治疗类风湿关节炎的机制。     

滑膜细胞凋亡在佐剂性关节炎大鼠关节炎症中的作用

目的：探讨成纤维样滑膜细胞凋亡在佐剂性关节炎（AA）大鼠关节炎症中的作用。方法：采用大鼠尾部皮内注射完全福氏佐剂（CFA）建立AA模型，注射CFA后第14日起，每隔7d记录关节炎指数（AI），并每隔7d引颈处死1组大鼠，组织块培养法分离培养AA大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞，流式细胞仪检测成纤维样滑膜细胞凋亡；分析成纤维样滑膜细胞凋亡的改变与AI的相关性。结果：AI在疾病早期逐渐增加，后期明显下降。流式细胞分析显示随AA病程延长S期滑膜细胞比例逐渐增加。在AA早期成纤维样滑膜细胞凋亡明显抑制，后期则凋亡抑制逐渐减弱，凋亡抑制与AI显著相关。结论：在AA发病机制中，成纤维样滑膜细胞凋亡抑制可能在急性滑膜炎中起有一定作用。