嗅鞘细胞对神经干细胞增殖与分化的影响

观察嗅鞘细胞(OECs)对神经干细胞(NSCs)增殖与分化的影响。取孕14d的SD胚鼠嗅球和腹侧中脑组织,分为OECs+NSCs共培养组和NSCs单独培养组进行培养。用p75免疫组化法,p75、BrdU/nestin、GFAP、NF(神经原纤维)和p75/nestin免疫荧光法分别鉴定OECs和NSCs并观察其增殖与分化。在培养7d时,绝大多数OECs呈梭形且发出2~3个突起,少量呈扁平椭圆形,两者均呈p75阳性。在7d时,单独培养的NSCs表现为典型的神经球悬浮生长,呈BrdU/nestin阳性;14d后偶见神经球贴壁分化,球中的少数细胞呈绿色荧光标记的NF阳性,大部分呈GFAP阳性。在5d时,OECs+NSCs共培养组形成神经球;10d时球体积不断增大,球心透亮度良好;12d后神经球的体积不再增大,开始贴附在OECs上生长,可见神经球向四周伸出突起并开始分化;14d时NSCs紧贴OECs生长并同OECs广泛交织在一起,可见NSCs和OECs分别呈nestin和p75阳性,NSCs中的大部分呈NF阳性,小部分为GFAP阳性。NSCs单独培养组和OECs+NSCs共培养组中NF阳性细胞率分别为47.2%和69.5%,前者明显少于后者(P<0.05)。以上研究结果提示OECs有促进NSCs增殖和诱导其分化的作用。     

两种不同纯度的嗅鞘细胞在体外存活与生长的比较

比较80%和50%两种纯度的嗅鞘细胞在体外培养条件下的存活与生长,为嗅鞘细胞体内移植选用最佳纯度提供依据。分离、培养并纯化成年SD大鼠嗅鞘细胞,将纯化的嗅鞘细胞和收集到的贴壁成纤维细胞进行约80%和50%的比例混合后接种,继续培养1d或3d。所有细胞于不同时间点行P75免疫细胞化学荧光染色,以鉴定嗅鞘细胞的初始及其后培养过程中数量和纯度的变化。观察细胞状态,计数细胞总数和P75免疫阳性细胞数目,求得各组嗅鞘细胞数量和纯度并行统计学分析。结果显示:两种不同纯度嗅鞘细胞在培养1d时形态正常,3d时纯度为50%的嗅鞘细胞胞体依然饱满,突起更加纤长,数量和纯度亦无明显下降。而纯度为80%的嗅鞘细胞在培养3d时已出现胞体萎缩和突起变短,数量从1d时每一观察区域内的35±13显著下降为23±5(P=0.02),但纯度未发生明显变化。结果表明50%纯度嗅鞘细胞的存活及生长状态优于80%者,提示细胞体内移植时应考虑选取50%纯度的嗅鞘细胞。     

植物雌激素α-玉米赤霉醇对内皮祖细胞的促增殖效应

目的:观察植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)对内皮祖细胞(EPCs)增殖能力的影响并探讨其机制。方法:密度梯度离心法获取大鼠外周血单个核细胞,加用内皮细胞培养基EGM-2培养,免疫荧光染色和流式细胞术等进行EPCs鉴定,培养2～3代后用于实验。分别用10-5mol/LH2O2和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)及下游靶蛋白Akt(PI3K/Akt)抑制剂LY294002处理细胞,并加用10-6和10-7mol/Lα-ZAL进行干预。检测EPCs上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性以反映细胞损伤情况,用MTT法、EPCs克隆数及细胞总数计数反映EPCs增殖情况,Westernbloting法检测Akt及磷酸化Akt(phosphor-Akt)蛋白表达。结果:经鉴定培养细胞为EPCs;10-5mol/LH2O2及PI3K/Akt抑制剂LY294002可明显降低EPCs存活率(P<0.05),减少细胞克隆,增加LDH活性(P<0.01);而加入10-6和10-7mol/Lα-ZAL干预后能减轻以上作用(P<0.05),同时10-6mol/Lα-ZAL能减少LY294002抑制EPCsAkt的表达和磷酸化。结论:α-ZAL能促进EPCs的体外增殖能力,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

嗅鞘细胞促进神经干细胞增殖的实验研究

目的 探索体外嗅鞘细胞对神经干细胞增殖的影响及其机制.方法 体外培养神经干细胞和嗅鞘细胞,分别采用共培养及共培养液培养,观察嗅鞘细胞对神经干细胞增殖的影响.用免疫组织化学和RT-PCR检测嗅鞘细胞表达的细胞因子及其受体的情况.结果 共培养及共培养液培养4d后,神经干细胞细胞数量明显增多并有部分细胞分化,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).RT-PCR结果显示,嗅鞘细胞表达β-NGF、BDNF、NT-3、PDGF-B、trkA和trkB的mRNA,而不表达NT-4.免疫组织化学嗅鞘细胞呈NGF、BDNF和p75染色阳性.结论 嗅鞘细胞表达或分泌大量细胞因子,如NGF、BDNF、NT-3和PDGF,并可能通过旁分泌或靶源性模式作用于神经干细胞,促进其增殖.     

微小RNA-186-5p对肾癌细胞增殖与侵袭能力的影响

目的 观察微小RNA-186-5p（MiR-186-5p）对肾癌细胞侵袭和增殖的影响并探讨可能存在的机制。方法 培养正常肾小管上皮细胞系HK-2、原代及转染MiR-186-5p的肾癌细胞（Caki-2细胞）,Real-time PCR检测MiR-186-5p的水平,细胞计数试剂盒8（CCK-8）法评估各组细胞的存活率,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blotting检测磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）水平。结果 肾小管上皮细胞系Hk-2和转染了MiR186-5p的Caki-2细胞的MiR186-5p水平均显著高于Caki-2细胞（P<0.05）。HK-2细胞和Caki-2细胞的存活率接近100%,而转染了MiR-186-5p的Caki-2细胞的存活率显著降低至72.86%（P<0.05）。 与HK-2细胞的迁移数目相比,Caki-2细胞迁移较多（P<0-05）;转染MiR-186-5p的Caki-2细胞迁移较少（P<0.05）。与HK-2细胞内Akt和mTOR分子磷酸化水平相比,Caki-2细胞内Akt和mTOR分子磷酸化水平显著增加（P<0.05）;而转染了MiR-186-5p的Caki-2细胞内Akt和mTOR分子的磷酸化水平有所下降（P<0.05）。结论 MiR-186-5p能够有效抑制肾癌细胞的侵袭与增殖,可能与其抑制Akt/mTOR信号通路的激活相关。     

Survival-enhancing of spiral ganglion cells under influence of olfactory ensheathing cells by direct cellular contact

The efficacy of cochlear implantation is primarily associated with the quantity and health of the remaining spiral ganglion cells (SGCs). Olfactory ensheathing cells (OECs) are capable of expressing a variety of growth factors and adhesion molecules, playing an important role in enhancing cellular survival. To investigate the effect of OECs on the survival of SGCs, co-cultures of OECs and SGCs were developed in this study. In addition, OECs conditioned medium (OEC-CM) was employed to culture SGCs in contrast with the co-cultures. OECs were identified immunocytochemically by low-affinity nerve growth factor receptor p75 (P75NTR) and glial fibrillary acidic protein (GFAP), while SGCs were stained with neuron-specific markerβIII-tubulin. SGCs survival was assessed in different conditions. To explore the underlying mechanism, growth factors, adhesion molecules and their receptors were investigate using RT-PCR. Our results indicate that the co-cultures of OECs and SGCs can be successfully established and that both OECs and OEC-CM promote SGCs survival in vitro. SGCs survival was most enhanced when co-cultured with OECs. Both Olfactory bulb (OB) and OECs were proved to express BMP-4 and NCAM while BMPR-1A and a7 integrin were also detected in cochlea and SGCs. In conclusion, our results suggest that enhancement in co-cultures is in part due to direct cellular contact. Transplantation of OECs may be a cell-based therapy for the application of neurotrophic factors to the inner ear.     

嗅鞘细胞和神经干细胞联合移植阿尔茨海默病大鼠脑内的增殖和定向分化

背景：阿尔茨海默病大鼠脑内神经元减少,神经干细胞移植后增殖和向神经元分化能力有限。 目的：观察联合移植嗅鞘细胞和神经干细胞在阿尔茨海默病大鼠脑内,嗅鞘细胞对神经干细胞的增殖和向胆碱能神经元分化的影响。 方法：体外培养嗅鞘细胞和神经干细胞,移植前用5-溴脱氧尿嘧啶核苷标记神经干细胞。将生理盐水,神经干细胞和神经干细胞+嗅鞘细胞分别移植入阿尔茨海默病模型大鼠海马。移植7,14,21,28 d后,进行大鼠脑组织切片免疫组织化学染色检测BrdU和ChAT阳性表达。 结果与结论：联合移植组神经干细胞的增殖和分化情况明显优于其他两组,联合移植组BrdU阳性细胞数和ChAT阳性细胞数明显高于神经干细胞移植组和生理盐水组(P < 0.01)。提示嗅鞘细胞能促进移植的神经干细胞在阿尔茨海默病大鼠脑内增殖和向胆碱能神经元的分化。     

嗅鞘细胞联合神经干细胞脑内移植改善Parkinson病大鼠行为的观察

为了观察嗅鞘细胞(OECs)联合神经干细胞(NSCs)脑内移植对Parkinson病(PD)的治疗作用,首先将6-OHDA注射至左侧黑质致密部和腹侧被盖区制备PD大鼠。将成功制备的PD大鼠随机分为5组,即0.9%生理盐水对照组、单纯移植NSCs或OECs组、OECs+NSCs共移植组和PD模型对照组。将培养并传至第3代的NSCs、OECs和OECs+NSCs分别移植到PD大鼠的纹状体内,于移植后7、14、30、60d检测PD大鼠旋转行为变化后处死,取脑做冰冻切片,行BrdU、酪氨酸羟化酶(TH)、p75免疫荧光和TH免疫组织化学检测。移植后21d以内,各组大鼠的旋转行为无明显变化;30d和60d时,单纯移植NSCs或OECs组和OECs+NSCs共移植组与生理盐水和模型对照组相比,旋转行为有较明显的改善(P<0.05),其中OECs+NSCs共移植组的旋转行为改善更为显著。在移植后30d和60d,单纯移植NSCs或OECs组在移植区可见少数TH阳性神经元,而OECs+NSCs共移植组的TH阳性神经元明显多于单纯移植NSCs或OECs组(P<0.05)。上述结果表明:OECs能促进胚鼠中脑来源的NSCs向TH阳性神经元分化;单纯移植NSCs或OECs和OECs+NSCs共移植,均能不同程度地改善PD大鼠的旋转行为,但联合移植优于单纯移植。     

脊髓损伤模型大鼠星形胶质化形成与Akt/mTOR/p70S6K信号通路的激活

背景：既往研究集中于如何促进大鼠脊髓损伤后的神经再生,但对于如何抑制脊髓损伤后星形胶质细胞过度增殖反应的因素、从而改善神经再生的环境研究尚少。 目的：观察Akt/mTOR/p70S6K蛋白激酶信号转导通路对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质化形成的影响,从而为改善脊髓损伤后神经再生环境、修复脊髓损伤提供分子学机制依据。   方法：建立SD大鼠轻型脊髓损伤模型,分为4组：实验组造模后行ATP治疗7 d;对照组造模后行等量生理盐水治疗7 d;干预组造模后行等量的ATP联合雷帕霉素治疗7 d;假手术组椎板切除后行等量生理盐水治疗7 d。分别于造模后1,3,7,14 d采用免疫组化、Western blot法检测Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K、胶质纤维酸性蛋白表达变化,并采用 BBB 运动功能评分评价大鼠脊髓损伤后经不同方法治疗后运动功能的恢复情况。  结果与结论：假手术组大鼠脊髓中Akt/mTOR/p70S6K信号通路分子呈低水平表达,在脊髓损伤后其表达增加。外源性ATP可显著增强大鼠受损脊髓中Akt/mTOR/ p70S6K信号分子的表达,而雷帕霉素可明显抑制ATP诱导的表达上调。激活的Akt/mTOR/p70S6K信号通路可显著减弱受损脊髓组织中胶质纤维酸性蛋白的表达、抑制脊髓损伤后过度的星形胶质细胞增生反应,促进脊髓损伤后BBB运动功能评分增加,而雷帕霉素阻碍了由ATP诱导的上述效应。结果证实,ATP通过诱导Akt/mTOR/p70S6K信号通路激活抑制大鼠脊髓损伤后星形胶质瘢痕的形成,具有改善脊髓损伤后神经再生环境、促进脊髓损伤修复和改善神经功能的潜能,此信号通路是治疗脊髓损伤的重要干预环节。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

Regulation of DNA synthesis in mouse embryonic stem cells by transforming growth factor-alpha: involvement of the PI3-K/Akt and Notch/Wnt signaling pathways

This study examined the mechanisms by which transforming growth factor (TGF)-alpha regulates proliferation of mouse embryonic stem (ES) cells. TGF-alpha increased [3H] thymidine and BrdU incorporation in a time- (0-72 h) and dose-dependent (0-10 ng/ml) manner. TGF-alpha stimulated the phosphorylation of Akt, mammalian target of rapamycin (mTOR), p70S6K1 and p44/42 mitogen-activated protein kinases (MAPKs). TGF-alpha also increased the protein levels of Notch, Notch intracellular domain, Hes-1 and Wnt1. However, TGF-alpha-induced DNA synthesis was blocked by inhibition of Akt, mTOR, p44/42 MAPKs and Notch. TGF-alpha increased the gene expression of c-jun, c-myc and c-fos. Moreover, TGF-alpha increased cyclin D/CDK 4 and cyclin E/CDK 2 levels, while decreasing p21cip1/waf1 and p27kip1, which were blocked by the inhibition of Akt, mTOR and Notch. In conclusion, TGF-alpha regulated DNA synthesis of mouse ES cells via PI3-K/Akt, p44/42 MAPKs and Notch/Wnt pathways.     

Fibrin improves beta (INS-1) cell function,proliferation and survival through integrin αvβ3

Extracellular matrix (ECM)–integrin stimulation can promote beta cell differentiation, proliferation and function. However, beta cells lose their insulin secretion function in response to glucose stimulation, and senesce when cultured with ECM proteins for a long time. Fibrin is a provisional ECM protein that is capable of maintaining beta cell function, yet the mechanisms by which this occurs is unknown. The present study examined how fibrin interacts with integrin receptors to promote beta cell cluster formation, proliferation and function. The rat insulinoma cell line, INS-1, was cultured on tissue-culture polystyrene, or with 2-D or 3-D fibrin gels for up to 4 weeks. Cells cultured with fibrin formed islet-like clusters and showed direct contacts with fibrin determined by scanning electron microscopy. Fibrin-cultured INS-1 cells also had significantly increased glucose-stimulated insulin secretion. A significant increase in integrin αvβ3 protein and phosphorylated FAK, Erk1/2 and Akt levels was observed in fibrin-cultured INS-1 cells, which was associated with significantly increased cell proliferation and decreased cell apoptosis. Integrin αvβ3 blockade affected INS-1 cell spreading on fibrin gels, and resulted in significantly decreased FAK phosphorylation and increased cleaved caspase-3 levels. These results show that fibrin promotes beta cell function, proliferation and survival via integrin αvβ3 interactions.     

成年大鼠嗅粘膜细胞原代培养及形态学研究

为了探讨大鼠嗅粘膜嗅鞘细胞(OECs)的分离与纯化培养方法并对其形态学进行研究,我们自鼻腔嗅粘膜取材后采用差速贴壁、机械刮除和阿糖胞苷(Arac)抑制相结合的纯化培养方法培养嗅粘膜细胞,并分不同阶段进行镜下观察及p75NGFR和GFAP免疫组化染色鉴定。结果显示,自嗅粘膜组织可以培养出四种细胞:梭形细胞、双极细胞、窝形细胞和大细胞。其中大部分梭形和双极细胞呈p75NGFR或GFAP免疫反应阳性,属于OECs。结果提示本文介绍的培养方法可以培养出嗅粘膜OECs;差速贴壁、机械刮除和Arac抑制相结合方法可纯化OECs。     

Activation of the PI3K/Akt/mTOR pathway correlates with tumour progression and reduced survival in patients with urothelial carcinoma of the urinary bladder

Sun C‐H, Chang Y‐H & Pan C‐C
(2011) Histopathology 58 , 1054–1063
Activation of the PI3K/Akt/mTOR pathway correlates with tumour progression and reduced survival in patients with urothelial carcinoma of the urinary bladder Aims: Phosphatidylinositol3‐kinase (PI3K)/Akt/mammalian target of rapamycin (mTOR) pathway dysregulation has been implicated in the development of urothelial carcinoma. However, its clinical relevance has not been substantially validated in human samples. The aim of this study was to assess the expression of the pathway in a large cohort of bladder cancers using the tissue microarray technique. Methods and results: Immunohistochemical stains for phosphatase and tensin homologue (PTEN), phosphorylated Akt, mTOR, S6 and 4E‐BP1 were performed for 887 cases, and the results were correlated with clinicopathological characteristics. The high expression of p‐S6 and p‐Akt corresponded significantly with high‐grade and advanced‐stage, while losses of PTEN and p‐4E‐BP1 were observed more often in high‐grade and high‐stage tumours. High expression of p‐Akt and p‐S6 predicted progression and cancer‐specific mortality for non‐muscle‐invasive cancers treated by transurethral resection, and p‐Akt was an independent factor in multivariate analysis. High expression of p‐mTOR and p‐Akt correlated with higher cumulative incidence of cancer‐specific mortality for muscle‐invasive cancer, and p‐mTOR was an independent prognostic factor. Conclusions: We have demonstrated the impact of PI3K/Akt/mTOR alteration on the biological behaviour of bladder tumours. Proper immunohistochemical examination of the PI3K/Akt/mTOR pathway can provide useful prognostic information, and the findings may represent an additional therapeutic avenue in the treatment of bladder cancers.     

NGF和GDNF对大鼠嗅鞘细胞体外增殖和分化的影响

本研究旨在比较神经生长因子(NGF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠嗅鞘细胞(OECs)体外增殖和分化的影响。在体外分离培养大鼠OECs的培养液中不加神经营养因子(对照组)或加入不同的神经营养因子(NGF组和GDNF组),倒置显微镜下进行观察,并通过S-100免疫荧光组织化学染色检测各组大鼠OECs体外增殖和分化情况。结果显示:NGF组和GDNF组OECs增殖和分化明显好于对照组(P<0.01),NGF组又明显好于GDNF组(P<0.01)。这些结果提示NGF能促进大鼠OECs体外增殖和分化。     

嗅鞘细胞移植联合督脉电针治疗大鼠前脊髓综合征

背景：电针在脊髓损伤的康复过程中有其一定的临床作用,同时以嗅鞘细胞为代表的细胞治疗在部分患者的康复过程中亦起到了一定的作用,两者是否具有协同应用尚不清楚。 目的：观察督脉电针联合嗅鞘细胞移植对前脊髓综合征大鼠神经营养因子3水平及P75NTR表达的影响。 方法：将40只成年大鼠随机分为对照组、督脉电针组、嗅鞘细胞移植组、督脉电针+嗅鞘细胞移植组,经嗅鞘细胞移植和督脉电针治疗2周后 ELISA法检测脊髓组织神经营养因子3水平,免疫组化检测P75NTR的表达。 结果与结论：督脉电针+嗅鞘细胞移植组神经营养因子3水平较对照组及其他实验组高(P < 0.05);嗅鞘细胞移植组和督脉电针+嗅鞘细胞移植组的脊髓损伤部位以及相邻的组织内均有P75NTR表达,且督脉电针+嗅鞘细胞移植组阳性表达明显较嗅鞘细胞移植组多。实验证实督脉电针联合嗅鞘细胞移植能够明显增高大鼠前脊髓综合征邻近组织的神经营养因子3水平;督脉电针可以有效促进移植的嗅鞘细胞在宿主内存活。     

PTEN/Akt/mTOR通路增加K562/ADM细胞化疗敏感性

目的 探讨K562/ADM细胞系中PTEN/Akt/mTOR信号通路对不同化疗药物敏感性的影响.方法 K562/ADM细胞分为未转染组、转染野生型PTEN组(Ad-PTEN-GFP)、转染空载体组(Ad-GFP),并与不同浓度雷帕霉素或三氧化二砷( As2 03)联合作用.通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR检测PTEN、mTOR、BCL-2及BAXmRNA水平,Western blot检测PTEN及Akt、p-Akt蛋白水平.结果 野生型PTEN对K562/ADM细胞最大增殖抑制率为32.3％,与未转染组及Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP组mTOR mRNA和p-Akt蛋白明显减低;雷帕霉素与As2 03联合应用后细胞增殖明显受抑,凋亡率(28.61％±1.46％)明显高于单药作用组(P＜0.05),BCL-2 mRNA表达降低,BAX mRNA表达增加,以联合干预组最为明显.结论 PTEN/Akt/mTOR信号传导通路能够增加K562/ADM细胞对雷帕霉素及As2 03的敏感性.     

通心络通过PI-3K/Akt/HIF信号通路改善血管内皮细胞缺氧损伤

目的: 观察通心络对缺氧血管内皮细胞中缺氧诱导因子(HIF)及其上游信号转导通路PI-3K/Akt的影响,探讨PI-3K/Akt/HIF信号通路在通心络改善血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用。方法: 将体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分为常氧对照组、通心络组、缺氧组和缺氧+通心络组。采用CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性,Western blotting 检测HIF-1α、Bcl-2、Mcl-1、Bax表达变化及Akt的磷酸化情况。利用HIF-1α的显性负性突变体(DN-HIF)瞬时转染HUVECs,流式细胞仪分析细胞的凋亡情况。利用PI-3K和Akt的显性负性突变体瞬时转染HUVECs,探讨PI-3K/Akt信号通路在通心络改善血管内皮细胞抗缺氧损伤中的作用。结果: 与常氧条件下比较,通心络对缺氧内皮细胞虽有明显的促增殖作用,但程度明显减弱。通心络可显著上调HIF-1α、Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平及Akt磷酸化水平,且下调Bax的表达。利用DN-HIF抑制HIF-1α的活化后,通心络提高缺氧HUVECs活性的程度明显下降,但仍可一定程度上降低细胞凋亡百分率。进一步利用PI-3K显性负性突变体(Δp85)和Akt显性负性突变体(DN-Akt)阻断HIF-1α上游信号通路PI-3K/Akt后,通心络上调缺氧HUVECs HIF-1α蛋白表达的作用明显减弱,促进Akt磷酸化的作用基本消失。结论: 在缺氧条件下,通心络上调HUVECs HIF-1α蛋白表达水平,促进抗凋亡因子同时抑制促凋亡因子的表达,降低细胞凋亡率,从而提高缺氧细胞的增殖率,这些作用在一定程度上依赖于PI-3K/Akt/HIF通路的活性。     

IL-1β通过PI3K/Akt/mTOR途径促进神经元活化

目的:观察白细胞介素-1β(IL-1β)刺激对神经元活化的影响。方法:利用IL-1β刺激体外培养的原代神经元,运用慢病毒转染shRNA使PI3K的p85亚基(PI3K-p85)沉默、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)抑制剂雷帕霉素预处理阻断m TOR、酪氨酸激酶家族抑制剂PP2抑制p85向IL-1受体I型(IL-1RI)募集等方式预处理神经元,检测PI3K-p85、与IL-1RI结合的PI3K-p85、p-Akt、p-p70S6K以及微管相关蛋白2(MAP2)在神经元内的变化及相互作用;利用FM4-64染色观察各组神经元突触胞吞情况。结果:利用IL-1β刺激体外培养的海马神经元可增加细胞内PI3K-p85、p-Akt、p-p70S6K、MAP2以及与IL-1RI结合的PI3K-p85的水平(P0.05),并且神经元突触的胞吞作用明显加剧(P0.05);抑制PI3K-p85可以下调IL-1β所致的p-Akt、pp70S6k和MAP2水平增加(P0.05),神经元突触的胞吞作用减弱(P0.05);抑制m TOR也能下调IL-1β所致的PI3K-p85、p-Akt、p-p70S6K和MAP2水平增加(P0.05),神经元突触的胞吞作用减弱(P0.05);抑制p85亚基与IL-1RI的结合也可以下调IL-1β所致的p-Akt、p-p70S6K和MAP2水平增加(P0.05)。结论:促炎因子IL-1β通过IL-1RI与PI3K-p85结合使PI3K-p85活化,进而磷酸化Akt和m TOR下游物质p70S6K,促进神经元突触增生及活化,这可能是内侧颞叶癫痫向慢性化进展的机制之一。     

成年大鼠嗅神经鞘细胞纯化培养的研究

嗅神经鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)是目前用于神经再生研究较为理想的移植细胞,为了建立一种可以有效获得高纯度、高均一性的OECs培养方法,本实验采用2. 5月的大鼠嗅球为实验材料进行OECs培养,同时结合OECs的生物学特点在培养8d后,通过用硝酸纤维素膜吸附p75抗体,再对培养的OECs进行免疫亲和吸附和对成纤维细胞进行补体杀伤来纯化OECs, 在纯化后分别对培养2、4、6、8d的OECs进行p75免疫组化染色和纯度鉴定。实验结果发现,本研究采用的OECs纯化培养方法所获得OECs纯度在4个不同培养时间点都达到98%以上,说明此方法是一种高效率的纯化培养OECs的方法。     

嗅鞘细胞的培养纯化及形态学特征

目的　建立体外培养纯化嗅鞘细胞 (Olfactoryensheathingcells,OECs)的模型 ,观察OECs生长状态和形态学变化 ,为研究神经再生获得丰富OECs来源奠定基础。方法　以原代培养的方法分离、培养成年大鼠嗅球OECs,再用阿糖胞苷抑制 ,P75抗体吸附方法纯化及Forskolin和牛垂体提取液 (bovinepituitaryextract,BPE)营养物质综合作用。根据P75免疫组化学染色结果统计所得OECs的纯度 ,同时对不同培养时期的OECs的形态进行观察。结果　 (1)此纯化方法所得的OECs纯度可达 95 %以上 ,细胞增殖速度较快 ,且细胞纯度不因培养时间的延长而明显下降。 (2 )未纯化前细胞形态多变 ,主要为巨噬细胞状、双极和多极状 ;纯化后 2～ 4天 ,OECs多呈双极或多极状 ;突起短小 ;4天后 ,OECs以突起细长的双极和三极为主 ,细胞走向一致 ,呈平行排列。结论　P75抗体吸附方法纯化效率高 ,Forskolin和BPE能够促进细胞的增殖 ,并影响细胞的形态及排布